pH 脅迫對菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum)耗氧率、排氨率、免疫和抗氧化酶活性以及組織形態(tài)的影響*

陳 強 林 毅 黎中寶 黃張帆 孔魯閩 周思順 龍中英

(1.集美大學水產(chǎn)學院 福建廈門 361021; 2.福建省海洋漁業(yè)資源與生態(tài)環(huán)境重點實驗室 福建廈門 361021)

自工業(yè)革命后, CO2急劇增長的排放量已經(jīng)大幅度超過了海洋碳循環(huán)的自我平衡調(diào)節(jié)能力(Sabineet al,2004), 空氣中近50%的CO2被海洋吸收, 嚴重破壞了海洋中的碳酸鹽體系, 造成海洋酸化(Doneyet al,2009)。政府間氣候變化專門委員會(Intergovernmental Panel on Climate Change, IPCC)預測在20 世紀末海水pH 由原本的8.1 下降到7.8, 如果未控制CO2排放量,到2300 年pH 可能持續(xù)下降0.8～0.9, 到2500 年pH可能會下降到6.4～6.5 (Caldeiraet al, 2003), 將嚴重影響海洋生態(tài)系統(tǒng)的平衡。為了控制CO2的增加, 國際上正在開展 CO2封存技術(shù)(Carbon Capture and Storage, CCS) (Regueraet al, 2009), 而因為技術(shù)的發(fā)展不同, 在運輸或封存過程中會導致CO2的泄漏, 這將會使周圍海域的pH 降低。有模擬實驗表明CO2的泄漏會使海水pH 急劇降低到5.6 左右, 恢復過程中會在pH 6.4 保持很長一段時間(Widdicombeet al,2007)。近幾年已經(jīng)有較多海洋生物受到海洋酸化的影響: 如海水pH 的降低使生物的耗氧率、排氨率降低(楊杰青等, 2016; 陸莉莉等, 2022), 海水酸化能通過干擾雙殼動物的能量代謝途徑來影響免疫功能(Bibbyet al, 2008; Lanniget al, 2010), 海水酸化還是一種促氧化的脅迫源, 會影響海洋生物機體的氧化作用(Ricevutoet al, 2016; Nardiet al, 2017; Munariet al, 2018)。海水酸化已經(jīng)嚴重影響到海洋生物的生活和生存環(huán)境, 也影響到了海洋經(jīng)濟發(fā)展。

隨著主題暢銷書的出現(xiàn)，主題出版的經(jīng)濟效益凸顯。在市場經(jīng)濟條件下，特別是在出版單位完成轉(zhuǎn)企改制后，實現(xiàn)社會效益與經(jīng)濟效益的雙贏是出版單位追求的終極目標。黨的十九大召開后，十九大文件及學習輔導讀物持續(xù)熱銷，發(fā)行總量突破7000萬冊。人民出版社出版的黨的十九大報告單行本《決勝全面建成小康社會 奪取新時代中國特色社會主義偉大勝利》發(fā)行量已突破2000萬冊，《黨的十九大報告輔導讀本》發(fā)行量達到493萬冊。[3]可見，只要主題出版的選題有特色、內(nèi)容質(zhì)量好且宣傳到位，就能產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟效益。

高級醇是一類含有三個碳原子以上的一元醇類物質(zhì)，在獼猴桃果酒中可以起到呈香、呈味的作用，適度含量的高級醇可以支撐獼猴桃果酒的口感、豐富酒體的香氣[35]。但過量的高級醇會造成飲酒后“上頭”反應(yīng)，也會導致飲酒后不適[36]。文獻報道，某些酒中異丁醇、異戊醇是主要的高級醇，超過總含量的70%[37]。因此，本研究僅測定了異丁醇和異戊醇的變化。

貝類作為海洋碳循環(huán)的重要參與者, 對海洋環(huán)境的變化具有較強的適應(yīng)性, 目前貝類是研究海洋和海岸生態(tài)系統(tǒng)的重要“模式生物”(Jiet al, 2006)(高山等, 2017; 王婷等, 2022), 能夠作為海洋指示生物來反映海洋酸化的影響。菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum)亦稱馬尼拉蛤仔、花蛤, 常棲息于潮間帶或潮下帶泥沙底部(莊啟謙, 2001), 為我國四大養(yǎng)殖貝類之一, 是重要的經(jīng)濟物種之一。目前關(guān)于酸化對菲律賓蛤仔生理生化影響的研究較少, 本研究選擇菲律賓蛤仔作為受試生物, 通過使用HCl調(diào)節(jié)海水pH (pH 6.4、7.1 和7.7)探究菲律賓蛤仔生理生化的變化情況, 明確菲律賓蛤仔對海洋酸化的反應(yīng), 期望為菲律賓蛤仔的養(yǎng)殖管理提供可靠的數(shù)據(jù), 為未來研究海洋酸化對海洋生物的影響提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum)購自廈門市高崎水產(chǎn)批發(fā)市場, 取活潑無損傷個體, 體型規(guī)格為: 殼長(3.3±0.2) cm, 殼寬(2.1±0.1) cm, 殼高(1.8±0.2) cm, 體重(8.5±0.5) g。試驗開始前蛤仔均在水箱中暫養(yǎng)1 周, 暫養(yǎng)期間保持連續(xù)充氣, 每日投喂足量小球藻(Chlorellasp.), 投喂1 h 后100%換水1 次,暫養(yǎng)溫度(25±1) °C, 鹽度31±2, pH 8.0±0.1 (正常海水pH)。試驗期間所用海水均為海水晶配置海水, 海水晶均購買自浙江藍海星鹽制品有限公司, 是以天然海鹽經(jīng)過添加少量Mg、K、Ca、Zn、Se、Mo 等微量元素研制而成。

1.2 試驗設(shè)計

1.2.1 生理試驗設(shè)計 試驗采用靜水密封的方法,設(shè)置pH 為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0 共5 個梯度, 每個梯度設(shè)3 個重復, 1 個空白對照, 以pH 8.0 組為對照組; 通過滴加NaOH 和HCl 調(diào)節(jié)海水pH, 穩(wěn)定后挑選90 個健康、規(guī)格一致的蛤仔, 隨機放置到1.1 L的PE 廣口塑料瓶中, 待蛤仔伸出水管6 h 后測量水體溶解氧和氨氮濃度。

1.2.2 生化試驗設(shè)計 本試驗設(shè)置4 個pH 梯度,對照組(pH 8.0±0.1), 6.4 組(pH 6.4±0.1), 7.1 組(pH 7.1±0.1), 7.7 組(pH 7.7±0.1), 每組3 個重復; 酸化組通過滴加1 mol/L HCl 降低水體pH。菲律賓蛤仔暫養(yǎng)馴化一周后挑選600 個健康無損害, 規(guī)格一致個體,隨機放置到12 個水缸中, 每缸蛤仔數(shù)量為50, 實驗共進行42 d, 每天投喂足量小球藻, 投喂1 h 后吸污換水1/3, 試驗在第14、28 和42 天采樣。

1.2.3 采樣與樣品制備 用已滅菌剪刀和鑷子在冰盒中快速取每個菲律賓蛤仔的內(nèi)臟團和鰓組織,用預冷的生理鹽水(0.9%)沖洗, 濾紙吸干水分, 每組重復分別取6 個菲律賓蛤仔組織, 每個組織用分析天平稱重0.2～1.0 g 分裝到2 個離心管中, 每個離心管中含有3 個蛤仔的相同組織(進行混樣), 加入9倍體積的 0.9%生理鹽水, 用組織研磨器低溫下研磨。低溫高速離心機4 °C 下3 000 r/min, 離心10 min取上清液測酶活性。此外, 每組重復取3 個蛤仔的鰓組織放置于4%多聚甲醛溶液中固定, 用于組織形態(tài)觀察分析。

1.3 計算方法

式中, OR 為單位菲律賓蛤仔干重耗氧率[單位:mg/(g·h)], DO0、DOt分別為實驗開始和實驗結(jié)束時實驗水體中溶解氧含量(單位: mg/L),V為實驗PE 廣口塑料瓶中所用水的體積(單位: L),W為實驗蛤仔軟組織干重(單位: g),t為實驗持續(xù)的時間(單位: h)。

酸性磷酸酶(ACP)活性趨勢各組不相同; 第14 天6.4 組顯著高于其他組(P<0.05), 7.1 組顯著低于7.7 組和對照組(P<0.05), 7.7 組顯著低于對照組(P<0.05);第28 天6.4 與7.1 組無差異性, 皆顯著低于7.7 和對照組(P<0.05), 7.7 組顯著低于對照組(P<0.05); 第42天6.4 組顯著低于其他組(P<0.05), 7.1 與7.7 組無差異性, 皆顯著低于對照組(P<0.05)。

1.4 指標測定

堿性磷酸酶(AKP)活性趨勢各組不相同; 第14天6.4 組顯著高于其他酸化組(P<0.05), 與對照組無差異性, 7.1 與7.7 組無差異性, 皆顯著低于對照組(P<0.05); 第28 天6.4、7.1 和對照組無差異性, 皆顯著低于7.7 組(P<0.05); 第42 天6.4 組顯著高于7.1和對照組(P<0.05), 顯著低于7.7 組(P<0.05), 7.1 組顯著高于對照組且顯著低于7.7 組(P<0.05), 7.7 組顯著高于對照組(P<0.05)。

AKP 活性變化趨勢為持續(xù)下降; 第14、28 天6.4組與7.1 組無差異性, 顯著低于7.7 組(P<0.05), 顯著高于對照組(P<0.05), 7.7 組顯著高于對照組(P<0.05);第42 天各組間無差異性。

2016年、2017年2年秋播均用新育成的不育系9171A作母本，與恢復系699C作父本開展小面積試驗，制種行比按1∶3，育苗移栽，移栽密度8 000株/667m2。于每年收獲前按5點抽樣法每點取樣10株考查母本的結(jié)實情況。結(jié)果表明(表2)，2016年平均結(jié)實率為93.7%，平均每角粒數(shù)為21.63，千粒重為4.19 g；2017年平均結(jié)實率為91.8%，平均每角粒數(shù)為22.30，千粒重為4.27 g。2年的制種產(chǎn)量分別為203.5 kg/667m2和198 kg/667m2。鑒定其種子不育株率分別為2.3%和2.7%，不育株均為異源花粉串粉結(jié)實(并非不育系微量花粉自交結(jié)實)。

2.1.1 pH 對菲律賓蛤仔耗氧率的影響 pH 對菲律賓蛤仔耗氧率的影響見圖1。由圖1 可知, pH 5.0～8.0 時耗氧率呈上升趨勢, pH 8.0～9.0 時耗氧率呈下降趨勢, 在pH 8.0 時達到頂峰為0.34 mg/(g·h), 顯著高于pH 5.0、6.0、7.0、9.0 (P<0.05)。

過氧化氫酶(CAT)活性通過南京建成試劑盒(鉬酸銨法)檢測。利用鉬酸銨與H2O2產(chǎn)生黃色絡(luò)合物,使用分光光度計測出的吸光度值計算出過氧化氫酶活性。

超氧化物歧化酶(SOD)活性通過南京建成試劑盒(WST-1 法)檢測, 丙二醛(MDA)含量通過南京建成試劑盒(TBA 法)檢測。

2.1.2 pH 對菲律賓蛤仔排氨率的影響 pH 對菲律賓蛤仔排氨率的影響見圖2。由圖2 可知, pH 5.0～8.0 時耗氧率呈上升趨勢, pH 8.0～9.0 時耗氧率呈下降趨勢, 當 pH 為 8.0 時, 排氨率達到峰值為0.071 mg/(g·h), 顯著高于pH 5.0、6.0、7.0、9.0 (P<0.05)。

1.5 切片制作

將取好的組織樣品迅速裁成規(guī)定大小后放入多聚甲苯中, 固定24 h; 用水和70%的乙醇將固定液洗去, 水洗后將上述組織依次浸入75%乙醇/1 h, 95%乙醇/30 min, 100%乙醇/30 min, 進行脫水; 脫水后將組織浸蠟和包埋, 室溫冷卻后進行切片后使用蘇木精伊紅染色。

認為群眾路線教育實踐活動與毛澤東時代的做法有相似之處，是“中國共產(chǎn)黨正在更深入地鉆研已故領(lǐng)導人毛澤東的遺產(chǎn)，以尋求清理黨員隊伍的靈感”［1］的有效方法，是國外媒體看待此次群眾路線活動的一個重要觀點。當然，從這一角度出發(fā)認識“群眾路線”活動，顯然帶有強烈的表面化和片面化傾向，因此需要我們認真甄別。

1.6 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)于EXCEL 中進行初步處理統(tǒng)計, 之后使用SPSS 19.0 軟件進行方差分析。運用Duncan test對數(shù)據(jù)進行顯著性檢驗, 顯著性水平為0.05。試驗數(shù)據(jù)以平均值±標準誤表示。

2 結(jié)果

2.1 pH 對菲律賓蛤仔生理指標的影響

總抗氧化能力(T-AOC)通過南京建成試劑盒(ABTS 法)檢測, 利用ABTS 會被氧化劑氧化成顯色的ABTS+, 使用酶標儀測出ABTS+吸光度即可計算樣品抗氧化能力。

人的眼神有很多，不同的眼神可以表達出不同的情感，演員在表演的過程中要善于用自己的眼睛向觀眾傳達情感。[2]演員要讓自己的眼睛有神，通過看遠近高低不同的地方，與觀眾形成一種交流，通過眼神的變化，使觀眾從中察覺出其內(nèi)心的變化。這樣通過眼睛的表現(xiàn)，就把歌曲唱活了，唱出了真實的情感，也就抓住了觀眾的心。

圖1 pH 對菲律賓蛤仔耗氧率的影響Fig.1 Effect of pH on oxygen consumption rate of R.philippinarum

電子商務(wù)作為重要的新興產(chǎn)業(yè)，帶動了很多嘉興市中小型物流企業(yè)的發(fā)展。2017年嘉興電子商務(wù)交易額1454.25億元，在全省排名第4，同比增長30.7%。跨境電子商務(wù)網(wǎng)絡(luò)零售出口額7.44億元，網(wǎng)店4.94萬家。近年來，嘉興市委市政府在推進“電商換市”戰(zhàn)略中，“出政策、搭平臺、引人才、促發(fā)展”，使得嘉興電子商務(wù)成為全省網(wǎng)路零售增長幅度最明顯的三個城市之一。

圖2 pH 對菲律賓蛤仔排氨率的影響Fig.2 Effect of pH on ammonia excretion rate of R.philippinarum

2.2 pH 對菲律賓蛤仔鰓組織結(jié)構(gòu)的影響

經(jīng)過石蠟切片以及H.E 染色, 觀察經(jīng)過42 d pH脅迫菲律賓蛤仔的鰓組織的主要結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn): 對照組的鰓絲較為正常(圖3a, 箭頭所示); 7.7 組的鰓絲間距擴大, 鰓絲間的空腔變大(圖3b, 箭頭所示); 7.1 組相對對照組鰓絲間距擴大(圖3c, 箭頭所示); 6.4 組的鰓絲不規(guī)則變形, 間距更大, 鰓上皮細胞損傷, 鰓絲纖毛排列紊亂黏合(圖3d, 箭頭所示)。

圖3 pH 對菲律賓蛤仔鰓組織結(jié)構(gòu)的影響Fig.3 Effects of pH on the tissue structure of R. philippinarum

2.3 pH 對菲律賓蛤仔生化指標的影響

2.3.1 pH 對菲律賓蛤仔鰓免疫酶活性的影響 由圖4 可得, 鰓組織中的溶菌酶(LZM)活性趨勢為先升后降, 第14 天酸化組顯著低于對照組(P<0.05), 6.4 組顯著低于其他酸化組(P<0.05), 7.1 組顯著低于7.7 組(P<0.05); 第28、42 天6.4 組顯著低于其他組(P<0.05),7.1 與7.7 組間無差異性, 皆顯著低于對照組(P<0.05)。

圖4 pH 對菲律賓蛤仔鰓組織免疫酶活性的影響Fig.4 Effect of pH on immunoenzyme activity in gill of R.philippinarum

式中, NR 為單位蛤仔干重排氨率[單位: mg/(g·h)],Nt、N0為實驗結(jié)束時和實驗開始水中氨氮的濃度(單位:mg/L),V為實驗PE 廣口塑料瓶中所用水體積(單位:L),W為實驗蛤仔軟組織干重(單位: g),t為實驗持續(xù)的時間(單位: h)。

7.雛雞7日齡第一次免疫后，一旦出現(xiàn)腸炎，雛雞拉水現(xiàn)象，可用速效腸毒清(恩諾沙星、頭孢等)，1 500只雞1袋，溶于40～50 kg水中自由飲用，在14～17日齡更換Ⅱ號料后出現(xiàn)的球蟲腸炎，可使用腸安康，按每瓶對水150～200 kg計算用藥量，21～24日齡前后的球蟲腸炎，輕微病例可單用腸毒克(地克珠利、胺丙啉、甲硝唑等)，按每袋對水150～200 kg計算用藥量，有明顯小腸球蟲時，可配合使用殺球威或球腸安(磺胺嘧啶)，40日齡到出欄前，可用痢停(地美硝唑、丁胺)。

酸性磷酸酶(ACP)和堿性磷酸酶(AKP)活性使用南京建成試劑盒(微量酶標法)檢測, 利用酚在堿性溶液中與4-氨基安替吡啉作用經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色醌衍生物的原理, 在酶標儀520 nm 測定吸光度后可計算酶活性。

2.3.2 pH 對菲律賓蛤仔內(nèi)臟團免疫酶活性的影響由圖5 可得, 內(nèi)臟團LZM 活性變化趨勢為先升后降;第14 天6.4 組顯著高于7.1 組(P<0.05), 顯著低于7.7和對照組(P<0.05), 7.1 組顯著低于 7.7 和對照組(P<0.05), 7.7 組顯著低于對照組(P<0.05); 第28 天6.4組顯著高于7.1 和對照組(P<0.05), 顯著低于7.7 組(P<0.05), 7.1 組顯著低于7.7 組(P<0.05), 顯著高于對照組(P<0.05), 7.7 組顯著高于對照組(P<0.05); 第42天6.4 組顯著低于其他酸化組(P<0.05), 與對照組無差異性, 7.1 與7.7 組無差異性。

ACP 活性變化趨勢為先升后降; 第14 天6.4 與7.1 組無差異性, 顯著高于7.7 組和對照組(P<0.05),7.7 與對照組無差異性; 第28 天6.4 組顯著高于其他組(P<0.05), 7.1 與7.7 組無差異性, 皆顯著高于對照組(P<0.05); 第42 天各組間無差異性。

溶菌酶(LZM)活性使用南京建成試劑盒(比濁法)檢測, 因為溶菌酶能水解細菌細胞壁上肽聚糖使細菌裂解而濃度降低, 透光度增強, 使用分光光度計透光度值計算溶菌酶活性。

2.3.3 pH 對菲律賓蛤仔鰓抗氧化酶活性的影響由圖6 可得, 超氧化物歧化酶(SOD)活性變化趨勢持續(xù)上升; 第14 天6.4 組與7.7 組無差異性, 顯著高于7.1 組(P<0.05), 顯著低于對照組(P<0.05), 7.1 組顯著低于對照組(P<0.05); 第28 天6.4 組顯著低于其他組(P<0.05), 7.1 組與對照組無差異性, 顯著低于7.7組(P<0.05); 第42 天6.4 組和7.1 組與對照組無差異性, 皆顯著低于7.7 組(P<0.05)。

圖6 pH 對菲律賓蛤仔鰓組織抗氧化酶活性的影響Fig.6 Effect of pH on antioxidant enzyme activity in gill of R. philippinarum

過氧化氫酶(CAT)活性變化趨勢各組不相同; 第14 天6.4 組顯著高于7.1 組(P<0.05), 顯著低于7.7 和對照組(P<0.05), 7.1 組顯著低于其他組(P<0.05), 7.7組顯著高于其他酸化組(P<0.05), 顯著低于對照組(P<0.05); 第28 天6.4 與7.1 組無差異性, 皆顯著低于7.7 和對照組(P<0.05), 7.7 與對照組間無差異性;第42 天6.4 與7.1 組無差異性, 皆顯著低于7.7 組(P<0.05), 顯著高于對照組(P<0.05), 7.7 組顯著高于對照組(P<0.05)。

總抗氧化能力(T-AOC)變化趨勢各組不相同; 第14 天6.4 組顯著低于其他組(P<0.05), 7.1 組顯著高于對照組(P<0.05), 顯著低于7.7 組(P<0.05), 7.7 組顯著高于對照組(P<0.05); 第28 天6.4 組顯著低于其他組(P<0.05), 7.1 與對照組無差異性, 皆顯著低于7.7 組(P<0.05); 第42 天6.4 與7.1 組無差異性, 皆顯著低于7.7 組(P<0.05), 顯著高于對照組(P<0.05), 7.7 組顯著高于對照組(P<0.05)。

丙二醛(MDA)含量變化趨勢各組不相同; 第14天各組間無差異性; 第28 天6.4 組顯著高于7.1 組(P<0.05), 顯著低于7.7 和對照組(P<0.05), 7.1 組顯著低于其他組(P<0.05), 7.7 與對照組無差異性; 第42 天酸化組間無差異性, 皆顯著低于對照組(P<0.05)。

谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性變化趨勢為持續(xù)上升; 第14 天6.4 組顯著高于7.1 組(P<0.05), 顯著低于7.7 和對照組(P<0.05), 7.1 組顯著低于其他組(P<0.05), 7.7 組與對照組無差異性; 第28、42 天6.4組顯著低于其他組(P<0.05), 7.1 組與對照組無差異性,皆顯著低于7.7 組(P<0.05)。

2.3.4 pH 對菲律賓蛤仔內(nèi)臟團抗氧化酶活性的影響 由圖7 可得, 內(nèi)臟團組織SOD 活性變化趨勢為持續(xù)下降; 第14、42 天6.4 組顯著高于其他組(P<0.05), 7.1 與7.7 組無差異性, 皆顯著高于對照組(P<0.05); 第28 天6.4 組顯著高于其他組(P<0.05),7.1、7.7 組和對照組無差異性。

綜上所述，在對心血管疾病患者進行臨床治療的同時，應(yīng)加強護理方面的工作，減慢其身體機能下降的速度，避免治療過程中出現(xiàn)護理風險事件的概率。長期臨床護理實踐表明，采用全程健康教育模式與風險護理聯(lián)合的護理方式，能夠有效避免護理風險的發(fā)生，提高護理工作的整體質(zhì)量，對心血管患者及醫(yī)護人員都具有非常重要的臨床價值。

圖7 pH 對菲律賓蛤仔內(nèi)臟團抗氧化酶活性的影響Fig.7 Effect of pH on antioxidant enzyme activity in visceral mass of R. philippinarum

CAT 活性變化趨勢呈下降趨勢; 第14 天6.4 組顯著高于其他組(P<0.05), 7.1 與7.7 組無差異性, 皆顯著高于對照組(P<0.05); 第28 天6.4 組顯著高于其他組(P<0.05), 7.1、 7.7 組和對照組無差異性; 第42天各組間無差異性。

4)底板未支護。76-2號專用回風巷原支護方案只考慮頂板和兩幫的支護，巷道底板無支護，導致底板在高應(yīng)力作用下碎碎，自由變形嚴重。

T-AOC 變化趨勢各組不相同; 第14 天酸化組間無差異性, 顯著高于對照組(P<0.05); 第28 天6.4 組顯著高于其他組(P<0.05), 7.1 組顯著高于7.7 與對照組(P<0.05), 7.7 與對照組間無差異性; 第42 天6.4 組顯著低于其他酸化組(P<0.05), 顯著高于對照組(P<0.05), 7.1 組顯著高于7.7 組(P<0.05), 7.7 組顯著高于對照組(P<0.05)。

海島是我國海洋國土的重要組成部分，也是海洋經(jīng)濟發(fā)展及國防建設(shè)的重要基點。海島工業(yè)污染源較少，生活垃圾和生活污水是海島的主要污染來源；隨著海島的開發(fā)和建設(shè)大力推進，生活垃圾和污水產(chǎn)量日益增加[1-3]。海島生活垃圾處理方式和設(shè)施的選擇，必須根據(jù)海島生活垃圾產(chǎn)生現(xiàn)狀和理化特征等基本資料和實際情況進行設(shè)計。國內(nèi)對生活污染源的研究主要集中于內(nèi)陸農(nóng)村地區(qū)，海島地區(qū)生活污染物排放規(guī)律、理化特性研究較少。我國海島大部分面積較小，多為村鎮(zhèn)級海島。筆者以廣東省2個村鎮(zhèn)級海島(外伶仃島、東澳島)為研究地點，對生活垃圾產(chǎn)生量、理化特性和生活污水排放系數(shù)、污染物濃度進行研究。

MDA 含量變化趨勢為持續(xù)下降; 第14 天6.4 組顯著低于 7.1 組(P<0.05), 顯著高于 7.7 和對照組(P<0.05), 7.7 與對照組無差異性; 第28 天酸化組間無差異性, 皆顯著高于對照組(P<0.05); 第42 天6.4 組顯著高于其他酸化組(P<0.05), 與對照組無差異性,7.1 組與7.7 組無差異性, 皆顯著低于對照組(P<0.05)。GSH-Px 活性變化趨勢為先升后降; 第14、42 天各組間無差異性; 第28 天6.4 組顯著高于其他組(P<0.05),7.1 與7.7 組無差異性, 皆顯著高于對照組(P<0.05)。

3 討論

耗氧率和排氨率是研究貝類基礎(chǔ)新陳代謝的重要內(nèi)容之一, 能夠為水產(chǎn)養(yǎng)殖和生態(tài)學研究提供基礎(chǔ)性的資料, 已知有多種環(huán)境因素能夠影響新陳代謝的過程。已有多項研究各種因素影響濾食性貝類耗氧率和排氨率的影響(胥賢等, 2015; 劉傲東等, 2016;王靜等, 2019; 盧王梯等, 2020; 江天棋等, 2020), 但是并未發(fā)現(xiàn)有關(guān)于pH 對菲律賓蛤仔耗氧率和排氨率影響的研究。pH 的升高或降低都有可能會導致蛤仔組織的損傷從而影響了生理代謝; 黑唇鮑(Haliotis rubra)(Harriset al, 1999)、長肋日月貝(Amusium pleuronectes)(嚴俊賢等, 2018)和東方小藤壺(Chthamalus challengeri)(曹善茂等, 2013)在低pH 時的耗氧率和排氨率低, 本文中當pH 低于8.0 時, 耗氧率和排氨率隨之降低, 說明低pH 不利于貝類的呼吸代謝; 本研究蛤仔的耗氧率和排氨率在pH 8.0 時達到頂峰, 一般貝類的耗氧率和排氨率在 8.0～8.5 時出現(xiàn)最大值, 如尖紫蛤(Soletellina acuta) (黃洋等, 2013)在pH 8.4 時達到最大值、合浦珠母貝(Pinctada fucata) (劉建業(yè)等, 2011)的最大值在pH 8.0 時出現(xiàn); 當pH 過高時, 貝類的生理活動也會受到影響, 當pH 9.0 時耗氧率和排氨率呈顯著下降的趨勢。說明貝類的生理活動與pH 的變化息息相關(guān)。

免疫防御和抗氧化防御系統(tǒng)是軟體動物防御系統(tǒng)的一部分。免疫防御分為細胞免疫和體液免疫(Lokeret al, 2004), 細胞免疫主要依賴血細胞的吞噬作用, 體液免疫主要依靠凝集素、溶血素、溶酶體酶和酚氧化酶等各種非特異性的酶和免疫因子的共同作用(劉志鴻等, 2003)。酸性磷酸酶和堿性磷酸酶是溶酶體的重要的組成部分, 在酸性環(huán)境下, ACP 進行水解作用, 把表面帶有磷酸酯的異物水解掉, 防止機體受到感染(Cheng, 1978); AKP 調(diào)節(jié)膜運輸, 參與轉(zhuǎn)磷酸作用, 促進體內(nèi)的鈣磷代謝, 維持體內(nèi)適宜的鈣磷比例(Beedham, 1958; 鄭藝杰, 2006)。在李曉梅等(2016)的研究中發(fā)現(xiàn)近江牡蠣(Crassostrea ariakensis)鰓組織中的LZM 活性會隨著pH 的降低而降低; 在梁健等(2017)的研究中發(fā)現(xiàn)青蛤(Cyclina sinensis)的LZM 活性隨著時間呈先升后降的趨勢。本研究中內(nèi)臟團中ACP 和AKP 活性相對高于鰓組織, 可以猜測內(nèi)臟團是機體防御免疫的主要場所; 在42 d 的脅迫中,免疫酶活性趨勢為先上升后下降, 推測可能是由于前期的脅迫導致蛤仔產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng), 從而產(chǎn)生大量的酶來抵御環(huán)境的變化; 第42 天免疫酶活性下降, 說明蛤仔對環(huán)境已經(jīng)趨于適應(yīng), 但在42 d 的pH 脅迫后蛤仔組織已經(jīng)損傷了, 酶活性不能恢復到原有水平。

抗氧化防御系統(tǒng)是應(yīng)對環(huán)境污染脅迫做出快速響應(yīng)的一類物質(zhì)總稱, 主要包括非酶類抗氧化劑和酶類抗氧化劑(蔣國萍, 2016)。在貝類的防御系統(tǒng)中,酶類抗氧化劑起著不斷清除活性氧以維持機體活性氧動態(tài)平衡的作用。環(huán)境因子的脅迫可能會導致機體組織器官受損產(chǎn)生大量的活性氧(譚志軍, 2006), 導致機體產(chǎn)生過氧反應(yīng), 嚴重可能會導致細胞壞死。在Wang 等(2016)的研究中發(fā)現(xiàn)經(jīng)過28 d 的酸化脅迫后酸化組鰓組織中的抗氧化酶活性低于對照組; 馬廣智等(2001)的研究中發(fā)現(xiàn)在草魚(Ctenopharyngodon idella)在酸化條件下SOD 的活性隨著酸化時間的延長而降低; 通過Matozzo 等(2013)的研究發(fā)現(xiàn)在低pH時雞簾蛤(Chamelea gallina)鰓組織中SOD 和CAT 的活性高于對照組; 但在本研究中第 14 天鰓組織中SOD 和CAT 活性均低于對照組。鰓組織的CAT 和SOD 的活性均為先降后升, 說明在前期酸化組所設(shè)pH 能夠抑制這兩種酶類的分泌, 但是在經(jīng)過長期的脅迫后組織可能出現(xiàn)了損傷導致這兩種酶活性的升高。在內(nèi)臟團中, 這兩種酶類的活性為下降趨勢, 說明pH 降低抑制內(nèi)臟團中這兩種酶的釋放。

谷胱甘肽過氧化物酶作為抗氧化系統(tǒng)中非酶類抗氧化劑的組成部分, 能夠清除動物機體內(nèi)過氧化產(chǎn)物, 保證細胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性(Wanget al,2008; Pacittiet al, 2013), 維持機體內(nèi)的正常氧化還原反應(yīng)(Hussainet al, 2004)。在彭玲等(2015)的研究中發(fā)現(xiàn), 厚殼貽貝(Mytilus coruscus)在不同濃度Cd 的脅迫下GSH-Px 的活性為先升后降的趨勢; 在鄧思平等(2012)和于慶云等(2013)的研究中也體現(xiàn)了尖紫蛤和菲律賓蛤仔在重金屬的脅迫下GSH-Px 的活性為先升后降的趨勢; 這都與本文的研究成果相似。說明在機體受到外界的脅迫時主要依靠GSH-Px 來清除體內(nèi)的自由基, 使機體內(nèi)環(huán)境保持平衡。

樹立人的尊嚴。并且,習總書記還強調(diào):“偉大斗爭,偉大工程,偉大事業(yè),偉大夢想,緊密聯(lián)系、相互貫通、相互作用,其中起決定性作用的是黨的建設(shè)新的偉大工程。確保黨……在堅持和發(fā)展中國特色社會主義的歷史進程中始終成為堅強領(lǐng)導核心?！盵6]這就更加說明在發(fā)展中國特色社會主義事業(yè)中黨的領(lǐng)導的重要性,因為只有代表著人民利益的無產(chǎn)階級政黨才能在物化的社會中“不忘初心,牢記使命”,才能堅定自己的“階級意識”,堅持馬克思主義理論在意識形態(tài)上的指導地位,堅定社會主義方向,堅持共產(chǎn)主義信仰,才能帶領(lǐng)人民走出一條以人為本、和諧發(fā)展的康莊大道。

4 結(jié)論

(1) pH 的變化對菲律賓蛤仔的生理活動有著較大影響, 蛤仔的排氨率和耗氧率隨著pH 升高先增后降, 均在pH 8.0 時達到最大值。

(2) 菲律賓蛤仔在經(jīng)過42 d 的pH 脅迫后, 其鰓組織在不同的酸化組中出現(xiàn)了不同程度的組織損傷,在6.4 酸化組中組織損傷得更加嚴重。

(3) 在鰓組織中低pH 對免疫和抗氧化酶活性有較為明顯的抑制作用; 而且隨著脅迫時間的增加, 原有的代謝水平被打破, 雖然蛤仔經(jīng)過較長時間的適應(yīng)后, 其酶活性水平有所回升, 但仍達不到原有的水平。另外, 長時間的酸化脅迫還可能使蛤仔的抗病力降低, 使其更容易死亡。