血清DCLK1、sTim-3對前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的評估價值

黃敏玉 吳軍 覃天資 周威 蘇立澤 邱榮 黃璐

右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科（廣西百色 533000）

前列腺癌是在男性泌尿生殖系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤，患者早期癥狀表現(xiàn)為尿頻、尿急以及尿潴留等，嚴(yán)重威脅患者的生活質(zhì)量［1-2］。隨著老齡化進(jìn)程加劇，發(fā)病率不斷上升［3-4］，目前臨床治療前列腺癌多以前列腺癌根治術(shù)為主，還包括放射治療，內(nèi)分泌治療等，切除前列腺以及精囊腺，重建排尿通路，從而達(dá)到治療的目的，但也會有部分患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)甚至死亡［5］，前列腺特異性抗原（prostate-specific antigen，PSA）是前列腺癌常用的篩查指標(biāo)之一，但會因為藥物使用情況等影響測定PSA 的水平，對預(yù)測腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的敏感度以及特異度有限［6］。因此，尋找可以預(yù)測前列腺癌患者預(yù)后和生存情況的生物標(biāo)記物尤為重要。雙皮質(zhì)素樣激酶1（dicorticotin-like kinase 1，DCLK1）是神經(jīng)細(xì)胞有絲分裂的微管激酶，會介導(dǎo)神經(jīng)元的形成和遷移，還可以誘導(dǎo)上皮細(xì)胞中正常絨毛結(jié)構(gòu)的消失，從而發(fā)揮原癌基因的作用［7］?？扇苄訲 細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（soluble T cell immunoglobulin mucin molecule3，sTim-3）作為免疫抑制因子，在癌癥發(fā)展中發(fā)揮重要作用，可以參與癌的發(fā)生發(fā)展，其還可以促進(jìn)腫瘤生長并抑制T細(xì)胞增殖［8-9］。基于此，推測二者可能與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，且目前關(guān)于DCLK1、sTim-3 在前列腺癌中的研究鮮有報道，因此，本研究主要探討血清DCLK1、sTim-3 水平對前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的評估價值，為臨床評估前列腺癌術(shù)后預(yù)后提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究選取2016年6月至2019年6 月在右江民族醫(yī)學(xué)附屬醫(yī)院行前列腺癌根治術(shù)的80 例患者作為研究組，年齡36 ～ 75 歲，平均（60.35 ± 7.24）歲，另選取同期80 例健康體檢者作為對照組，年齡35 ～ 76 歲，平均（60.15 ± 6.89）歲，兩組年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞ 0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《中國前列腺癌早期診斷專家共識》中前列腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)［10］；（2）入院患者均行前列腺癌根治術(shù)治療；（3）臨床資料完整；（4）患者及家屬自愿簽署承諾書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并免疫系統(tǒng)疾病者；（2）肝臟等重要臟器損傷者；（3）合并其他惡性腫瘤；（4）合并其他泌尿系統(tǒng)疾病者。本院倫理委員會批準(zhǔn)本研究，批準(zhǔn)號為：YYFY-LL-2023-102。

1.2 血清DCLK1、sTim-3 的檢測 采集體檢時對照組空腹外周靜脈血5 mL，采集研究組入組當(dāng)天空腹外周靜脈血5 mL，3 000 r/min 10 min 離心，抽取上層清液之后迅速轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱保存待測。以酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測血清DCLK1、sTim-3 水平，采用對應(yīng)的ELISA 試劑盒（貨號分別為EK-H11579 和1534124660，分別購自上海酶研公司和上海江萊公司）按照配套說明書進(jìn)行檢測。

1.3 隨訪 對所有患者在術(shù)后進(jìn)行3 年隨訪，隨訪方式包括電話問詢和門診復(fù)查，第1 年每月隨訪1 次，之后兩年每一季隨訪1 次，記錄患者生存情況，分為預(yù)后生存組和預(yù)后死亡組，隨訪終止日期為患者死亡或2022 年6 月。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)分析采用SPSS 25.0 軟件完成。計量數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，以（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用例表示，采用χ2檢驗；采用Pearson 和Spearman 法分析血清DCLK1、sTim-3 與PSA 水平、Gleason 評分的相關(guān)性；采用Kaplan-Meier 生存曲線分析DCLK1、sTim-3 與前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的關(guān)系，采用log-rank 檢驗；采用Cox 回歸分析前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的影響因素；受試者工作特征（ROC）曲線來分析血清DCLK1、sTim-3 水平對前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的預(yù)測價值。P＜ 0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對照組血清DCLK1、sTim-3 水平的比較 由表1 可知，研究組血清DCLK1、sTim-3水平高于對照組（P＜ 0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 研究組和對照組血清DCLK1、sTim-3 水平的比較Tab.1 Comparison of serum DCLK1 and sTim-3 levels between the study group and the control group±s，ng/mL

表1 研究組和對照組血清DCLK1、sTim-3 水平的比較Tab.1 Comparison of serum DCLK1 and sTim-3 levels between the study group and the control group±s，ng/mL

組別研究組對照組t值P值例數(shù)80 80--DCLK1 5.34 ± 1.20 2.81 ± 0.51 17.355＜ 0.001 sTim-3 2.63 ± 0.54 1.58 ± 0.32 14.962＜ 0.001

2.2 前列腺癌患者血清DCLK1、sTim-3 水平與PSA 水平、Gleason 評分相關(guān)性分析 由表2 可知，根據(jù)Pearson 相關(guān)性分析，血清DCLK1、sTim-3水平呈正相關(guān)（P＜ 0.05）。根據(jù)Spearman 法得知，血清DCLK1、sTim-3 與PSA 水平、Gleason 評分均呈正相關(guān)（P＜ 0.05）。

表2 前列腺癌患者血清DCLK1、sTim-3 水平與PSA 水平、Gleason 評分相關(guān)性分析Tab.2 Correlation analysis of serum DCLK1 and sTim-3 levels，PSA levels and Gleason scores in prostate cancer patients

2.3 血清DCLK1、sTim-3 水平與前列腺癌患者臨床特征的關(guān)系 根據(jù)前列腺癌患者DCLK1 水平的平均數(shù)5.34 ng/mL，sTim-3水平平均數(shù)2.63 ng/mL 進(jìn)行分組。DCLK1 ＜ 5.34 ng/mL 為低表達(dá)組，≥5.34ng/mL 為高表達(dá)組；sTim-3 ＜ 2.63 ng/mL 為低表達(dá)組，≥ 2.63 ng/mL 為高表達(dá)組。由表3 可知，血清DCLK1、sTim-3 表達(dá)水平與PSA 水平、Gleason 評分以及TNM 分期有關(guān)（P＜ 0.05），而與年齡和腫瘤直徑無關(guān)（P＞0.05）。

表3 血清DCLK1、sTim-3 水平與前列腺癌患者臨床特征的關(guān)系Tab.3 Relationship between serum DCLK1 and sTim-3 levels and clinical features of prostate cancer patients 例（%）

2.4 不同預(yù)后前列腺癌根治術(shù)患者血清DCLK1、sTim-3水平的比較 由表4可知，預(yù)后死亡組血清DCLK1、sTim-3水平高于預(yù)后生存組（P＜ 0.05）。

表4 不同預(yù)后前列腺癌根治術(shù)患者血清DCLK1、sTim-3 水平的比較Tab.4 Comparison of serum DCLK1 and sTim-3 levels in patients undergoing radical prostatectomy for different prognosis±s，ng/mL

表4 不同預(yù)后前列腺癌根治術(shù)患者血清DCLK1、sTim-3 水平的比較Tab.4 Comparison of serum DCLK1 and sTim-3 levels in patients undergoing radical prostatectomy for different prognosis±s，ng/mL

組別預(yù)后生存組預(yù)后死亡組t值P值例數(shù)46 34--DCLK1 4.38 ± 1.10 6.64 ± 1.34 8.276＜ 0.001 sTim-3 2.12 ± 0.43 3.28 ± 0.69 9.240＜ 0.001

2.5 血清DCLK1、sTim-3 與前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的關(guān)系 對前列腺癌患者進(jìn)行3 年的隨訪后，根據(jù)Kaplan-Meier 曲線分析得知，前列腺癌DCLK1 高表達(dá)患者生存率（22/42，52.38%）低于低表達(dá)患者（24/38，63.16%）（χ2= 2.971，P＜ 0.05）；sTim-3 高表達(dá)患者生存率（21/41，51.22%）低于低表達(dá)患者（25/39，64.10%）（χ2= 3.925，P＜ 0.05）。見圖1、圖2。

圖1 血清DCLK1 與前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的關(guān)系Fig.1 Relationship between serum DCLK1 and prognosis in patients undergoing radical prostatectomy

圖2 血清sTim-3 與前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的關(guān)系Fig.2 Relationship between serum sTim-3 and prognosis in patients undergoing radical prostatectomy

2.6 Cox 回歸分析影響前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的危險因素 以患者3 年內(nèi)是否死亡為因變量（是=1，否=0），以DCLK1、sTim-3 為自變量進(jìn)行Cox 回歸分析，各變量賦值見表5。單因素Cox 回歸分析表明，DCLK1、sTim-3 是影響前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的危險因素（P＜ 0.05）；多因素Cox回歸分析表明，DCLK1、sTim-3 高表達(dá)是影響前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的危險因素（P＜ 0.05），見表6。

表5 各變量賦值方式Tab.5 Assignment methods of each variable

表6 Cox 回歸分析影響前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的危險因素Tab.6 Risk factors affecting the prognosis of patients undergoing radical prostatectomy for COX regression

2.7 血清DCLK1、sTim-3 水平對前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的預(yù)測價值 根據(jù)ROC 曲線得知，血清DCLK1 預(yù)測前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的AUC 為0.859（95%CI：0.779 ～ 0.940），截斷值為5.654 ng/mL，靈敏度為73.35%，特異度為88.52%。血清sTim-3預(yù)測前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的AUC 為0.898（95%CI：0.757 ～ 0.928），截斷值為2.987 ng/mL，靈敏度為77.91%，特異度為85.67%。二者聯(lián)合預(yù)測前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的AUC 為0.945（95%CI：0.896 ～ 0.992），靈敏度為84.56%，特異度為78.85%。二者聯(lián)合優(yōu)于DCLK1、sTim-3各自單獨預(yù)測（Z聯(lián)合vsDCLK1=2.580、Z聯(lián)合vssTim-3=2.754，P＜ 0.05），見圖3。

圖3 血清DCLK1、sTim-3 水平對前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的預(yù)測價值Fig.3 Predictive value of serum DCLK1 and sTim-3 levels in patients undergoing radical prostatectomy

3 討論

前列腺癌是中老年男性中較為常見的泌尿系統(tǒng)腫瘤，目前評估前列腺癌預(yù)后的生物標(biāo)志物大多有PTEN 基因（phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten，PTEN）、PSP 和P63 等，是在前列腺癌組織中進(jìn)行表達(dá)，從而參與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展［11-12］。DCLK1 具有兩個雙皮質(zhì)結(jié)構(gòu)域，主要包括絲氨酸/蘇氨酸激酶，由70 個氨基酸組成，其N 端與微管形成密切相關(guān)，C 端則與鈣調(diào)蛋白相關(guān)的蛋白激酶結(jié)構(gòu)相似，被認(rèn)為與神經(jīng)元遷移以及神經(jīng)元損傷修復(fù)密切相關(guān)［13-14］，有研究［15］證實DCLK1 與腫瘤侵襲有關(guān)，還在癌癥干細(xì)胞中表達(dá)，可以為癌細(xì)胞提供腫瘤起始能力，還會參與多種惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。DCLK1 過表達(dá)會誘導(dǎo)機體中的細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，使癌細(xì)胞易于穿透細(xì)胞外基質(zhì)，從而去侵犯周圍器官，并向遠(yuǎn)處進(jìn)行轉(zhuǎn)移［16］。有研究［17］發(fā)現(xiàn)DCLK1在非小細(xì)胞肺癌中顯著升高，還與其臨床分期有關(guān)。還有研究［18］發(fā)現(xiàn)DCLK1 在宮頸癌中升高，與宮頸癌的進(jìn)展和預(yù)后有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)研究組血清DCLK1 水平顯著高于對照組，與上述研究相似，其還與PSA 水平、Gleason 評分以及TNM 分期有關(guān)，且呈正相關(guān)，說明DCLK1 參與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展，其升高可能會增加前列腺癌細(xì)胞的增殖和遷移。

sTim-3 作為共抑制分子，也是一種在整合素作用下介導(dǎo)胞外域脫落釋放出細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞免疫逃逸因子，在人類免疫細(xì)胞中表達(dá)，在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)以及誘導(dǎo)機體免疫耐受方面發(fā)揮著重要作用［19-20］。sTim-3 升高會控制自然殺傷性T 淋巴細(xì)胞活性，從而使機體中結(jié)核桿菌的吞噬以及清除能力降低，使得細(xì)胞免疫功能不足［21］。sTim-3還參與多種癌癥發(fā)生發(fā)展，其在肝細(xì)胞癌患者血清中顯著升高，其水平可以預(yù)測肝細(xì)胞癌患者的長期生存預(yù)后［19，22］。有研究［23］發(fā)現(xiàn)sTim-3 在乳腺癌患者血清中上調(diào)，與臨床病理學(xué)特征有關(guān)。還有研究［24］發(fā)現(xiàn)sTim-3 在非小細(xì)胞肺癌中顯著升高，sTim-3 表達(dá)與病理臨床特征相關(guān)，sTim-3在肺腺癌和肺鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)均高于健康受試者。sTim-3 可通過NF-KB/STAT3 信號通路促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移，導(dǎo)致紫杉醇耐藥的產(chǎn)生，乳腺癌組織中Tim-3 的高表達(dá)提示預(yù)后不良［25］。本研究發(fā)現(xiàn)，研究組血清sTim-3 水平顯著升高，而且還與PSA 水平、Gleason 評分以及TNM 分期有關(guān)，與上述研究相似，且呈正相關(guān)，說明sTim-3 參與前列腺癌的生物學(xué)發(fā)展，當(dāng)其升高時會降低免疫系統(tǒng)的殺傷，使腫瘤細(xì)胞發(fā)生逃逸。根據(jù)Pearson 相關(guān)性分析，DCLK1、sTim-3 水平呈正相關(guān)，說明二者共同參與調(diào)節(jié)前列腺癌的發(fā)生發(fā)展。

預(yù)后死亡組血清DCLK1、sTim-3 水平顯著升高，說明DCLK1、sTim-3 與前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后有關(guān)，根據(jù)Kaplan-Meier 曲線分析得知，前列腺癌DCLK1 和sTim-3 高表達(dá)患者生存率低于低表達(dá)患者，說明高表達(dá)患者在術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險更高，可為臨床檢測提供參考。根據(jù)Cox 回歸分析表明，DCLK1、sTim-3 高表達(dá)是影響前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后的危險因素。再根據(jù)ROC 曲線得知，血清DCLK1 和sTim-3 二者聯(lián)合優(yōu)于各自單獨預(yù)測，說明二者聯(lián)合能更有效地預(yù)測前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后，能夠在術(shù)前對患者進(jìn)行評估，從而可以優(yōu)化治療方案并改善患者預(yù)后。

綜上所述，DCLK1、sTim-3 在前列腺癌患者血清中顯著升高，二者聯(lián)合可以更好對前列腺癌根治術(shù)患者預(yù)后進(jìn)行評估。本研究尚存在局限性，如未探究DCLK1、sTim-3 對前列腺癌的具體調(diào)控機制，樣本量不足等，后續(xù)將會增加動物實驗，擴大樣本量對本研究進(jìn)行驗證。

【Author contributions】HUANG Minyu performed the experiments and wrote the article.QIN Tianzi and ZHOU Wei performed the experiments.SU Lize，QIU Rong and HUANG Lu revised the article.WU Jun designed the study and reviewed the article.All authors read and approved the final manuscript as submitted.