一起疑似肉鴨坦布蘇病毒與沙門氏菌混合感染診療體會(huì)

魏雨欣

（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，山東 泰安 271018）

鴨坦布蘇病毒病又稱黃病毒病，是肉鴨常見疾病，10～20 日齡雛鴨多發(fā)，產(chǎn)蛋鴨也常見發(fā)病，一年四季均可發(fā)病，夏秋季多發(fā)。以突然發(fā)病，精神沉郁，口鼻充滿分泌物，采食量和產(chǎn)蛋量大幅下降為主要特征，發(fā)病后期會(huì)導(dǎo)致共濟(jì)失調(diào)和癱瘓，但該病致死率不高[1]。鴨流感是由A型流感病毒引發(fā)的病毒病，主要特征為張口呼吸、咳嗽等呼吸道癥狀，也可見鼻腔內(nèi)有粘性或卡他性鼻液。高致病性禽流感表現(xiàn)神經(jīng)癥狀并發(fā)生急性死亡。鴨腺病毒病是近幾年雛鴨常發(fā)疾病，易與坦布蘇病毒病、流感發(fā)生混淆或存在混合感染。鴨從1～40 日齡均可發(fā)病，且4 周齡為發(fā)病高峰。感染病禽死亡率低，但生長發(fā)育不良，且終身帶毒。

三種疾病臨床特征相似，且易繼發(fā)大腸桿菌、里莫氏桿菌、沙門氏菌等細(xì)菌感染，對山東省肉鴨業(yè)造成了嚴(yán)重危害。筆者對一例13 日齡肉鴨的發(fā)病情況、臨床癥狀、病理剖檢病變進(jìn)行分析，結(jié)合進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)室分子生物學(xué)診斷及細(xì)菌培養(yǎng)鑒定，病鴨確診為鴨坦布蘇病毒與沙門氏菌混合感染。

1 病例介紹

2022 年11 月，山東某肉鴨養(yǎng)殖場突然發(fā)病，其中以2 周齡雛鴨較為嚴(yán)重。病鴨主要表現(xiàn)為精神萎靡，羽毛松散，腹瀉，共濟(jì)失調(diào)，眼鼻周圍有粘稠分泌物，采食量大幅下降，并有肉鴨死亡。養(yǎng)殖場懷疑鴨群發(fā)生禽流感、腺病毒病、鴨坦布蘇病毒病或沙門氏菌病，緊急送檢，要求對上述疾病進(jìn)行檢測[2]。11 月19 日收錄該養(yǎng)殖場病鴨，13 日齡，編號H221118D1。

2 診斷

2.1 病理剖檢病變

剖檢一只13 日齡肉鴨后，發(fā)現(xiàn)雛鴨肝臟腫大發(fā)黃，表面有大量出血點(diǎn)、出血斑和針尖樣灰白色壞死灶，心內(nèi)膜條紋狀出血且伴隨輕微水腫，脾臟腫大變硬。肉鴨鼻腔黏膜上有少量出血點(diǎn)，鼻腔內(nèi)凝結(jié)大量淡黃色粘稠分泌物，少部分析出鼻腔形成結(jié)晶，腸道黏膜附有大量粘液且腸黏膜腫脹充血，腸道內(nèi)有黃綠色內(nèi)容物，味腥臭。

2.2 坦布蘇病毒RT-PCR 檢測

取病鴨氣管分泌物、肝、脾等組織病料保存?zhèn)溆?。將采集病料加入生理鹽水后放入高通量組織研磨儀中充分研磨后，置于臺式高速冷凍離心機(jī)中離心處理，取上清液用以提取核酸。使用FineMag 快速磁珠法病毒DNA/RNA 共提取試劑盒，第二孔加入200 μL 上清液以及20 μL 蛋白酶K，啟動(dòng)核酸提取儀程序 Gf-Y503-G16-VIR，25 min 后從最后一孔中取核酸。配置對應(yīng)PCR體系后，將體系分為三份，分別加入樣品核酸、陰性及陽性對照，通過RT-PCR/PCR 儀擴(kuò)增，產(chǎn)物通過1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠成像儀照相。結(jié)果顯示，坦布蘇病毒（DTMUV）檢測結(jié)果判定為陽性，片段大小483 bp，確診感染坦布蘇病毒。

2.3 腺病毒和禽流感qPCR 檢測

與坦布蘇病毒核酸提取方法相同，利用快速磁珠法病毒DNA/RNA 共提取試劑盒，加入對應(yīng)熒光PCR 試劑，通過light cycle 96 型熒光定量PCR 儀擴(kuò)增，檢測CT 值及S 形曲線。結(jié)果顯示，AIV-H9 及FADV-4 檢測結(jié)果為陰性，CT 值＞40，且無典型增值曲線。

2.4 細(xì)菌分離與培養(yǎng)

無菌條件下，用接種環(huán)取病料肝臟組織研磨液，使用三Z 法將接種環(huán)涂抹于DHI 培養(yǎng)基上。將培養(yǎng)基放置于37.5 ℃ 恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫培養(yǎng)24～36 h，觀察是否生長黑色菌落[3]。

圖1 結(jié)果初步表明此肉鴨感染沙門氏菌。取細(xì)菌在膽鹽硫乳瓊脂平皿培養(yǎng)24 h 后，生長出光滑針尖樣大小黑色菌落，符合沙門氏菌特點(diǎn)。取黑色菌落接種于沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基上，混合色素分別與沙門氏菌和大腸菌群所對應(yīng)的酶發(fā)生特異性反應(yīng)，水解底物，釋放出顯色基團(tuán)，在淡黃色平板上沙門氏菌產(chǎn)生品紅色的菌落，進(jìn)一步確定為沙門氏菌感染。

圖1 沙門氏菌在DHI 培養(yǎng)基上培養(yǎng)結(jié)果

2.5 藥敏試驗(yàn)

接種單菌落于生理鹽水中混勻，吸取100 μL接種于普通培養(yǎng)基上，用涂布棒涂抹均勻，用K-B 紙片法進(jìn)行試驗(yàn)[4]，選取氟氧沙星、恩諾沙星、氯霉素、新霉素、頭孢喹肟、林可霉素、四環(huán)菌素、鏈霉素八種常用抗生素做藥敏試驗(yàn)，測定抑菌環(huán)直徑。

測定結(jié)顯示，氟氧沙星抑菌環(huán)直徑21 mm、恩諾沙星 15 mm、氯霉素 12 mm、新霉素13 mm、頭孢喹肟20 mm、林可霉素12 mm、四環(huán)菌素3 mm、鏈霉素2 mm，表明分離細(xì)菌對氟苯尼考和頭孢喹肟高度敏感，對恩諾沙星、氯霉素、新霉素、林可霉素四種抗生素中度敏感，對四環(huán)菌素、鏈霉素不敏感。

3 分析與防治

3.1 病因分析

根據(jù)檢測結(jié)果，診斷該病例確診為鴨坦布蘇病毒和沙門氏菌混合感染[5]，分析該病發(fā)生原因，主要是雛鴨早期未進(jìn)行鴨坦布蘇病毒疫苗免疫，同時(shí)秋季氣溫驟降，導(dǎo)致雛鴨抵抗力下降。除此之外，養(yǎng)殖場進(jìn)一步檢測后發(fā)現(xiàn)，雛鴨存在沙門氏菌垂直感染。

3.2 加強(qiáng)管理

鴨坦布蘇病毒病發(fā)病具有明顯的季節(jié)特征，6～8 月的夏季發(fā)病較少，9～11 月的秋季發(fā)病較多。主要原因是鴨坦布蘇病毒靠節(jié)肢動(dòng)物（蚊子、蜱）傳播，秋天正是蚊子和蜱繁殖生長的高峰期，鴨坦布蘇病毒喜冷，病毒繁殖力增強(qiáng)，以致病原多、傳播能力強(qiáng)[7]。為預(yù)防秋季禽類發(fā)病，各地應(yīng)加強(qiáng)保暖措施，及時(shí)通風(fēng)，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理以增強(qiáng)動(dòng)物抵抗力，同時(shí)嚴(yán)格進(jìn)行消毒，殺滅養(yǎng)殖場周圍蚊蟲及野鳥野鼠，防止野生動(dòng)物將病毒傳染給鴨群。針對發(fā)病養(yǎng)殖場，建議采用鴨坦布蘇病毒滅活疫苗或活疫苗緊急免疫，對發(fā)病鴨群隔離，及時(shí)淘汰病殘鴨、重癥鴨，并進(jìn)行無害化處理。加強(qiáng)衛(wèi)生消毒，可以采用0.025%的百毒殺、0.3%的過氧乙酸、0.1%的新潔兒滅或0.1%～0.2%的聚維酮碘帶禽消毒。

3.3 藥物治療

對未感染及輕度病癥的鴨進(jìn)行緊急免疫，雛鴨接種病毒后能快速產(chǎn)生中和抗體以抵抗感染并迅速清除病毒。同時(shí)在飼料或飲水中添加敏感抗生素和黃芪多糖治療[6]，抗生素建議使用氧氟沙星和頭孢喹肟。5 d 后回訪得知，養(yǎng)殖場及時(shí)對病殘鴨進(jìn)行無害化處理并隔離，使用氟氧沙星治療輕、中度癥狀鴨群。經(jīng)過緊急免疫，鴨群病情已明顯好轉(zhuǎn)，未造成重大損失。

4 體會(huì)

近年來，鴨坦布蘇病毒在我國東南沿海地區(qū)呈現(xiàn)發(fā)展蔓延趨勢，應(yīng)引起高度重視。研究結(jié)果表明，坦布蘇病毒對雛鴨危害很大，雛鴨感染病毒后食欲明顯下降，腹瀉，排黃白色稀糞，第5天時(shí)出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，部分雛鴨急性死亡，死亡率高達(dá)22.5%[8]。除此之外，鴨坦布蘇病毒也對蛋鴨行業(yè)產(chǎn)生巨大沖擊。據(jù)統(tǒng)計(jì)，感染鴨坦布蘇病毒的高產(chǎn)蛋鴨平均產(chǎn)蛋量下降至原產(chǎn)蛋量的20%～30%[9]，經(jīng)過治療也難以達(dá)到之前水平，給養(yǎng)殖戶造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此對于規(guī)模化養(yǎng)殖場，建議早期進(jìn)行免疫，做好免疫預(yù)防工作。同時(shí)建立完善監(jiān)測體系，盡早發(fā)現(xiàn)，盡早采取措施，以防止疾病導(dǎo)致鴨群免疫力大幅下降，從而繼發(fā)感染其他病菌。

對已經(jīng)繼發(fā)感染其他病菌的群體，一定要結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，選擇敏感藥物治療并定期更換藥物，以防產(chǎn)生耐藥性。藥物防治只能減少發(fā)病情況，無法清除病原，存在垂直感染的鴨場應(yīng)盡量選擇全群淘汰，減少后續(xù)損失。對病禽及其糞便進(jìn)行無害化處理后，需要對禽舍噴淋消毒；淘汰畜禽時(shí)使用的轉(zhuǎn)運(yùn)車、轉(zhuǎn)運(yùn)筐等也要清洗后徹底消毒或廢棄，以防病原傳播造成傳染病暴發(fā)。