基于“藥性變化論”的訶子煨后固腸止瀉炮制原理研究

劉婧,王巍,王一帆,王月南,鄭舒意,張強

(遼寧中醫(yī)藥大學藥學院,遼寧 大連 116600)

訶子為使君子科植物訶子(TerminaliachebulaRetz.)或絨毛訶子(T.chebulaRetz. var.tomentellaKur.)的干燥成熟果實。其性平味苦酸澀,歸肺、大腸經(jīng);具有澀腸止瀉、斂肺止咳和降火利咽的功效[1];臨床常用于治療久瀉久痢、便血脫肛、肺虛咳喘、久咳不止和咽痛音啞等[2]。當用于澀腸止瀉時常“煨熟”使用。明李中梓在《本草通玄》中首次將訶子的使用方法歸納為“生用則能清金行氣,煨熟則能溫胃固腸”[3]。目前,藥性研究已成為中藥領域的熱點。機體組織細胞內(nèi)兩種環(huán)核苷酸(環(huán)磷酸腺苷cAMP與環(huán)磷酸鳥苷cGMP)被認為是祖國醫(yī)學陰陽學說的物質(zhì)基礎,其在機體內(nèi)通過相互拮抗作用維持著一定的平衡狀態(tài),在調(diào)節(jié)人體生物功能方面發(fā)揮重要的作用,因此將中藥對內(nèi)臟組織中環(huán)核苷酸水平的選擇性調(diào)節(jié)作用看作中藥歸經(jīng)的物質(zhì)基礎;升降沉浮常常表現(xiàn)出與病位相同的趨勢,而與病勢表現(xiàn)相反的趨勢,研究者常常以胃排空及小腸推進為指標評價升降沉浮的改變[4-7]。

基于以上分析,本研究將從炮制影響訶子的歸經(jīng)和升降浮沉屬性入手,以cAMP和cGMP在肺與大腸組織的含量變化分析訶子炮制對歸經(jīng)的影響;以胃排空和小腸推進率來考察炮制對訶子升降浮沉的影響。從藥性變化的角度來探討訶子煨后固腸止瀉作用增強的原理,為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 試藥訶子[產(chǎn)地:云南,經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學翟延君教授鑒定,為使君子科植物訶子(TerminaliachebulaRetz.)的干燥成熟果實];番瀉葉(天津智匯康杰醫(yī)藥科技有限公司,批號:170901,經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定,為豆科植物狹葉番瀉(CassiaangustifoliaVahl)的干燥小葉;蒙脫石散(杭州康恩貝制藥有限公司,批號:03201102)。cAMP試劑盒(BPE20860)及cGMP試劑盒(BPE20448)均購自上海朗頓生物科技有限公司。

1.2 動物SPF級昆明小鼠,雄性[遼寧長生生物技術(shù)有限公司,動物許可證號為:SCXK(遼)2020-0001],體質(zhì)量(20±2)g。全部動物實驗經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學動物倫理委員會批準(許可證號:2020059),符合要求。

1.3 儀器Multiskan-MK3型酶標儀(美國賽默飛世爾科技有限公司);Z 300K型Fresco臺式高速冷凍離心機(德國Heraeus公司);FA1004B型分析天平(上海精密科學儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 訶子炮制品的制備取凈訶子,投入預熱至260 ℃的干凈河砂中,不斷翻動,炒制約6 min,取出,篩去河砂,放涼備用[8]。

2.2 給藥液制備取訶子生品及炮制品適量,粉碎,過200目篩,加適量水制成濃度為0.065 g·mL-1的混懸液,備用;取番瀉葉適量,分別加5倍量、4倍量水回流提取兩次,每次1 h,合并濾液,濃縮至濃度1 g·mL-1,備用[9];取蒙脫石散適量,加適量水制成濃度為0.06 g·mL-1的混懸液,備用[10]。所有給藥液給藥前均搖勻。

2.3 動物分組、造模與給藥按隨機對照原則將小鼠分為5組,即空白組、模型組、蒙脫石散組、訶子生品組及炮制品組,每組10只。除空白組外,其余4組每天灌胃番瀉葉水提液0.4 mL/20 g,空白組灌胃同等劑量蒸餾水,連續(xù)造模8 d。每天造模12 h后,訶子生品組灌胃訶子生品混懸液0.4 mL/20 g,訶子制品組灌胃訶子炮制品混懸液0.4 mL/20 g,蒙脫石散組灌胃蒙脫石散混懸液0.4 mL/20 g,模型組和空白組灌胃同等劑量蒸餾水,連續(xù)給藥7 d。

2.4 指標測定

2.4.1 DAI評分每天觀察并記錄各組小鼠體重及腹瀉情況的變化,記錄并進行疾病活動指數(shù)(disease activity index,DAI)評分,評分標準見表1。DAI評分=體重變化情況×50%+腹瀉程度×50%[11]。

表1 DAI評分標準

2.4.2 胃排空率及小腸推進率的測定各組小鼠末次給藥后禁食不禁水12 h,進行末次造模給藥,再于4 h后灌胃半固體狀物(5%羧甲基纖維素鈉,5%碳粉),0.8 mL/只,15 min后處死,剝離肺、胃、大腸及小腸,生理鹽水沖洗干凈后,稱重,大腸和肺加10倍量生理鹽水勻漿,3 500 r·min-1離心15 min,取上清-20 ℃保存,備用。胃稱重后洗去殘留碳粉,稱量胃凈重,計算胃殘留率。小腸測量碳粉推進率。

2.4.3 肺腸組織中cAMP及cGMP表達水平的測定取肺和大腸組織勻漿上清,按cAMP、cGMP ELISA試劑盒說明操作,測定cAMP、cGMP表達水平,并計算cAMP/cGMP值。

2.6 結(jié)果

2.6.1 DAI評分結(jié)果各組小鼠實驗前體重無顯著性差異,均無腹瀉情況。造模后,除空白組外各組小鼠體重顯著下降,并出現(xiàn)毛色晦暗伴有炸毛、聚堆現(xiàn)象,腹瀉明顯。給藥后,各給藥組體重顯著升高,聚堆、炸毛及腹瀉現(xiàn)象好轉(zhuǎn)。對各組小鼠實驗最后一天的DAI評分見表2。

表2 各組小鼠DAI評分、胃殘留率及小腸推進率結(jié)果

2.6.2 胃殘留率及小腸推進率結(jié)果與空白組比較,模型組小鼠胃殘留率顯著下降(P<0.01),小腸推進率顯著升高(P<0.01);與模型組比較,各給藥組均有改善,且訶子制品組優(yōu)于訶子生品組,結(jié)果見表2。

2.6.3 cAMP及cGMP表達水平結(jié)果與空白組比較,模型組小鼠肺與大腸cAMP均顯著升高(P<0.01),cGMP則顯著下降(P<0.01),cAMP/cGMP值顯著升高(P<0.01);與模型組比較,各給藥組均有改善,同時,訶子生品組肺cAMP/cGMP值低于大腸,訶子制品組則相反,結(jié)果見表3～4。

表3 各組小鼠肺及大腸cAMP、cGMP含量

表4 各組小鼠肺及大腸cAMP/cGMP值

3 討論

3.1 炮制對藥性的影響炮制可以增強藥物作用,減輕毒性,還能改變成分、功效、藥性等屬性。藥性始于神農(nóng),炮制盛于雷斅。藥性者寒熱溫涼,苦酸甘辛咸,歸經(jīng),補瀉,有毒無毒是也。藥以治病,因性為能。寒不及則無以清熱,熱不足則無以祛寒。酸不足無以收斂固澀,苦不及無以燥濕清泄,辛不足無以發(fā)散行氣,甘不及無以補虛和中,咸不足無以軟堅散結(jié)[10]。不同炮制方法對中藥藥性有很大的影響,適宜的炮制可以使中藥的某一個或某些藥性占主導地位,從而發(fā)揮其特殊治療功效。在傳統(tǒng)炮制理論中有生升熟降,是說有些藥物生品使用其作用趨勢趨上,而制熟之后其作用趨勢趨下。訶子“生用清金行氣,煨熟溫胃固腸”就是生升熟降的表現(xiàn)。

3.2 炮制對訶子升降浮沉的影響升降浮沉是中藥特點之一,與人體機體內(nèi)的不同趨向性有關(guān)。味辛甘,性溫熱的中藥主要具有升浮功效,味苦酸咸,性寒涼的中藥則主要具有沉降功效。但是在通過一定的炮制后,其升降功效也會出現(xiàn)變化[13]。本研究中訶子生品及炮制品對小鼠腹瀉情況均有改善,其中炮制品組DAI評分、小腸推進率及胃內(nèi)殘留率優(yōu)于生品組,說明訶子制熟之后,其止瀉作用增強,作用趨勢變?yōu)橼呄?降氣澀腸。

3.3 炮制對訶子歸經(jīng)的影響中藥在經(jīng)過炮制后歸經(jīng)會發(fā)生變化,藥效也會隨之改變。同時對于一種中藥而言,其歸經(jīng)往往并不是單一的,而是會分為幾種,而經(jīng)過炮制之后,能夠增強其中某一種歸經(jīng)的效果,讓其對該部位疾病的療效更加確切[13]。根據(jù)本實驗cAMP/cGMP值的變化可以推斷出炮制影響了訶子的歸經(jīng)偏性,原本訶子歸肺與大腸經(jīng),制熟之后偏于歸大腸經(jīng)而止瀉。

4 結(jié)論

訶子煨后固腸止瀉作用增強,根據(jù)本實驗結(jié)果,其炮制原理從藥性變化角度看是訶子炮制后作用趨勢趨下,偏于歸大腸經(jīng)。但具體機理還需從分子生物層面深入研究以解析訶子的炮制原理。