1例犬子宮蓄膿的診治及病原菌的耐藥性分析

王超，劉正偉，高鋒，王心竹，郝春暉，劉琪，趙福慶

（ 遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧 營口 115009 ）

寵物犬子宮蓄膿是臨床中發(fā)病率較高的疾病之一，年齡越大發(fā)病率越高[1]。子宮蓄膿是由于子宮膿液聚集以及條件性致病菌感染加重為特征的疾病[2]。研究表明，該病發(fā)病原因復(fù)雜，與機(jī)體內(nèi)生殖激素、致病菌的毒力以及犬的年齡和品種有關(guān)[3]。子宮蓄膿分為兩種類型：一種為開放型子宮蓄膿，主要表現(xiàn)為陰門處流出膿性分泌物；另一種為閉合型子宮蓄膿，陰門潔凈，無分泌物流出[4]。臨床中，兩種類型發(fā)病嚴(yán)重時(shí)常表現(xiàn)為功能紊亂伴發(fā)的嘔吐、腹瀉、電解質(zhì)失衡等情況，嚴(yán)重時(shí)可發(fā)生休克、黃疸及膿毒血癥[5]。在整個(gè)疾病發(fā)展過程中，致病菌起到主要作用，因此，明確致病菌種類以及找到治療效果良好的抗生素是治療本病的關(guān)鍵。本文對(duì)1例犬子宮蓄膿的病例進(jìn)行了細(xì)菌分離鑒定，并對(duì)分離細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)研究，以期為該病的診斷、治療及預(yù)防提供參考。

1 病例資料

患犬雌性，7歲，體重8.6 kg，免疫齊全，未交配。主訴近1 w患犬陰道口流出黏性棕色分泌物，有腥臭味；食欲減退，飲水量少，精神萎靡，呼吸較從前急促，無其他病史。

2 檢查結(jié)果

2.1 患犬臨床檢查結(jié)果

患犬有舔舐生殖器現(xiàn)象，體溫升高（39.7 ℃），呼吸急促（37 次/min），收縮壓108 mmHg，舒張壓58 mmHg，心率110 次/min，黏膜潮紅，皮膚輕度脫水。觸診腹部膨大，陰門處有分泌物流出。建議進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查和影像學(xué)檢查。

2.2 患犬實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果

2.2.1 患犬陰道分泌物檢查結(jié)果

無菌棉簽蘸取患犬陰道分泌物，涂片染色，鏡檢觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鏡檢可見分泌物中有大量的桿狀細(xì)菌和炎性細(xì)胞，未發(fā)現(xiàn)霉菌和滴蟲感染。

2.2.2 患犬血常規(guī)檢查結(jié)果（見表1）

表1 患犬血常規(guī)檢測結(jié)果Tab.1 Routine blood test results of sick dog

患犬外側(cè)小隱靜脈采血約0.5 mL，放入含有EDTA試管中混勻，利用愛德氏血液分析儀進(jìn)行檢測。

由表1可知，患犬白細(xì)胞數(shù)為59.15×109/L，中性粒細(xì)胞數(shù)為51.62×109/L，單核細(xì)胞數(shù)為4.56×109/L，數(shù)值偏高。血小板數(shù)為73×109/L，數(shù)值偏低。結(jié)果提示，患犬體內(nèi)存在嚴(yán)重感染。

2.2.3 患犬血清生化檢查結(jié)果（見表2）

表2 患犬血清生化檢查結(jié)果Tab.2 Serum biochemical test results of sick dog

患犬外側(cè)小隱靜脈采血約1 mL，放入無抗凝劑的試管中，利用血液生化分析儀進(jìn)行檢測。由表2可知，患犬血液球蛋白含量為51 g/L，C反應(yīng)蛋白含量為97.5 mg/L，提示患犬體內(nèi)存在顯著的全身炎癥。

2.3 患犬影像學(xué)檢查結(jié)果

2.3.1 患犬X射線檢查結(jié)果（見圖1、圖2）

圖1 患犬X射線檢查結(jié)果（腹背位）Fig.1 X-ray results of sick dog (ventral dorsal position)

圖2 患犬X射線檢查結(jié)果（右側(cè)位）Fig.2 X-ray results of sick dog (right lateral position)

由圖1、圖2可知，患犬腹腔子宮部位出現(xiàn)密度均勻的液體成像，提示患犬子宮內(nèi)可能存在積液或蓄膿。

2.3.2 患犬B超檢查結(jié)果

患犬保定，對(duì)腹部超聲部位剃毛，涂抹耦合劑，利用探頭在患犬恥骨前端先縱向掃查，再橫向掃查以確定膀胱位置，再利用探頭從患犬子宮頸向上掃查，子宮超聲掃查結(jié)果見圖3。

圖3 患犬B超檢查結(jié)果Fig.3 Result of B-ultrasonic examination of sick dog

由圖3可知，患犬子宮壁增厚，伴有積液，提示患犬患有子宮蓄膿、子宮內(nèi)膜炎、子宮壁囊腫。

2.4 患犬診斷結(jié)果

根據(jù)臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室檢查、影像學(xué)檢查結(jié)果，患犬確診為子宮蓄膿。經(jīng)與寵主溝通后決定進(jìn)行子宮摘除術(shù)。

3 治療

3.1 術(shù)前準(zhǔn)備

患犬禁食12 h，禁水4 h，術(shù)前補(bǔ)液以糾正機(jī)體電解質(zhì)平衡。手術(shù)器械包消毒烘干。麻醉前患犬注射止血敏（酚磺乙胺）、美洛昔康注射液，仰臥保定后進(jìn)行術(shù)部剃毛，丙泊酚誘導(dǎo)麻醉，氣管插管連接呼吸麻醉機(jī)，異氟烷維持術(shù)中麻醉。術(shù)部碘伏消毒，鋪設(shè)創(chuàng)巾。

3.2 手術(shù)過程

患犬臍后方3 cm處切開約5 cm的切口，剪除多余的脂肪組織以防止術(shù)后結(jié)節(jié)產(chǎn)生。子宮鉤進(jìn)入患犬腹腔將腸管拉到一側(cè)，暴露子宮后將子宮角緩慢拉出，找到卵巢和輸卵管，并鈍性分離出卵巢，利用三鉗法分別結(jié)扎兩側(cè)卵巢血管。分離周圍的子宮韌帶，將兩邊的動(dòng)、靜脈結(jié)扎完全，利用三鉗法將子宮體夾緊貫穿結(jié)扎，切斷子宮體?；既淖訉m和卵巢見圖4。

圖4 患犬摘除的子宮和卵巢Fig.4 Uterus and ovaries removed from sick dog

荷包縫合患犬子宮殘端，先用溫?zé)岬?.9%生理鹽水沖洗，再使用溫?zé)岬募紫踹驔_洗腹腔，縫合腹壁肌肉層、皮下組織，最后常規(guī)結(jié)節(jié)縫合患犬皮膚，腹部傷口消毒上藥、貼敷料貼?；既K醒后佩戴伊麗莎白圈，防止舔咬傷口。

3.3 術(shù)后護(hù)理

術(shù)后患犬精神沉郁，沒有食欲、不愿意活動(dòng)，8 h后少量喂食喂水，觀察患犬無異常后再少量喂食高能量易消化食物。觀察患犬狀態(tài)，無異常后再慢慢過渡到正常的飲食結(jié)構(gòu)。整個(gè)護(hù)理過程中，應(yīng)保證環(huán)境安靜整潔。

3.4 病原菌的分離與鑒定

手術(shù)取出子宮后，2 mL無菌注射器抽取約1 mL子宮內(nèi)液體，放入1.5 mL無菌離心管中，置于4 ℃溫箱保存后將樣品轉(zhuǎn)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原菌分離鑒定。

3.4.1 病原菌培養(yǎng)及染色鏡檢結(jié)果

樣本經(jīng)劃線法涂布接種于培養(yǎng)皿，37 ℃培養(yǎng)12 h后，可觀察到培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)單一，呈灰白色、圓形、光滑、濕潤、不透明、菌落較大，無嗜血現(xiàn)象。

挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色，顯微鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)單一，呈短桿狀，為革蘭氏陰性菌（紅色），菌株編號(hào)命名為W201101。革蘭氏染色鏡檢結(jié)果見圖5。

圖5 革蘭氏染色鏡檢結(jié)果Fig.5 Results of microscopic examination with Gram staining

3.4.2 病原菌PCR鑒定結(jié)果

挑取單個(gè)菌落加入1 mL滅菌水中制成菌液，100 ℃水浴加熱10 min，8 000 r/min離心3 min。取1 μL離心后的菌液作為PCR擴(kuò)增模板，利用16S rDNA通用引物27F、1492R作為引物，擴(kuò)增片段長度為1 500 bp。

PCR反應(yīng)體系（20 μL）：2×Taq PCR MasterMix 10 μL、上下游引物各1 μL、DNA模板1 μL、滅菌水7 μL。

PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸2 min，共30個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸7 min，4 ℃保溫。

PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證后，由蘇州泓迅生物科技有限公司進(jìn)行測序，測序結(jié)果在NCBI核酸數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行BLASTN搜索。病原菌16S rDNA基因檢測結(jié)果見圖6，病原菌16S rDNA序列同源性比對(duì)結(jié)果見表3。

圖6 病原菌16S rDNA基因檢測結(jié)果Fig.6 16S rDNA gene results of isolated bacteria

表3 病原菌16S rDNA序列同源性比對(duì)結(jié)果Tab.3 Homology comparison results of bacterial 16S rDNA sequences

3.5 病原菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果（見表4）

表4 病原菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果Tab.4 Drug sensitivity test results of pathogenic bacteria

采用K-B瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，游標(biāo)卡尺量取抑菌圈直徑。

由表4可知，病原菌對(duì)慶大霉素、頭孢曲松、頭孢噻肟、阿米卡星、頭孢吡肟、左氟沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、氨曲南、復(fù)方新諾明、多黏菌素B敏感，對(duì)紅霉素、頭孢呋辛、頭孢唑啉耐藥，對(duì)頭孢他啶中介。

3.6 治療用藥方案

術(shù)后前5 d每天對(duì)患犬靜脈輸注營養(yǎng)液、消炎等對(duì)癥治療，輸液方案為：靜脈滴注0.9%氯化鈉注射液150 mL+頭孢曲松鈉200 mg，5%葡萄糖注射液150 mL+代謝強(qiáng)10 mL，0.9%氯化鈉注射液150 mL+谷胱甘肽540 mg，替硝唑注射液50 mL；皮下注射美昔注射液0.9 mL。

住院1 w后患犬出院，術(shù)后10 d復(fù)查，傷口愈合良好，遂拆線。拆線后佩戴伊麗莎白圈，3 d線道完全愈合，摘下伊麗莎白圈。

4 討論

犬子宮蓄膿是一種常見的子宮內(nèi)膜疾病。研究發(fā)現(xiàn)，犬子宮蓄膿在各個(gè)年齡段均可發(fā)生，最小發(fā)生子宮蓄膿的犬為6月齡，10歲前的母犬發(fā)病率在19%，未妊娠的母犬發(fā)病率相對(duì)較高[6-7]。發(fā)生這一現(xiàn)象的原因除垂體卵巢功能下降之外，還與免疫系統(tǒng)功能下降有關(guān)[8]。子宮蓄膿也與雌激素、孕酮的水平有關(guān)，雌激素水平較高可以提高外周血液中自然殺傷細(xì)胞的吞噬能力，而孕酮水平升高時(shí)，犬子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)異位性增生，子宮平滑肌的收縮能力降低，導(dǎo)致子宮腺體毒素積累和異常排泄。母犬發(fā)情期和發(fā)情后期，雌激素水平下降，孕酮水平升高，導(dǎo)致非特異性的免疫效率降低，發(fā)情期和發(fā)情早期Toll樣受體（TLR）的表達(dá)降低，使胚胎定植和發(fā)育。在此階段，致病菌進(jìn)入子宮內(nèi)并附著于子宮內(nèi)膜，刺激免疫反應(yīng)發(fā)生，促進(jìn)Toll樣受體2（TLR2）和Toll樣受體4（TLR4）的表達(dá)增加，從而刺激細(xì)胞因子、環(huán)氧合酶-2（COX-2）和前列腺素E2和F2α的分泌，引起炎癥反應(yīng)[9]。

本病例中，患犬未受孕，年齡較大，表現(xiàn)生殖道流出膿性分泌物、體溫升高、精神萎靡、輕度脫水、腹部膨大等較明顯且典型的癥狀，因此初步判定為開放型子宮蓄膿。血常規(guī)檢查發(fā)現(xiàn)，患犬白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、單核細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)的數(shù)值均偏高，生化檢查球蛋白和C反應(yīng)蛋白數(shù)值偏高，表明患犬存在嚴(yán)重感染。超聲檢查顯示子宮增粗1.93 cm，子宮壁增厚，超聲和X射線檢查均顯示子宮內(nèi)有液體成像。上述檢查可以確診該犬患開放性子宮蓄膿。

子宮蓄膿除了影響犬生殖系統(tǒng)外，還會(huì)導(dǎo)致其他臟器發(fā)生病變[10]，分泌物及化膿菌滯留在子宮內(nèi)，產(chǎn)生的毒素被吸收至血液會(huì)引起肝腎損傷，導(dǎo)致肝腎功能下降[11]。本病例中，患犬肌酐、尿素以及轉(zhuǎn)氨酶等指標(biāo)均在參考范圍內(nèi)，表明肝腎未受到損傷。研究表明，與閉鎖型子宮蓄膿相比，開放型子宮蓄膿是中度炎癥。閉鎖型子宮蓄膿患犬外陰部沒有分泌物，通常難以得到及時(shí)治療，大量分泌物在子宮內(nèi)積聚使子宮腔擴(kuò)張；若病程在晚期，可使子宮內(nèi)膜萎縮，嚴(yán)重時(shí)可引發(fā)敗血癥，導(dǎo)致患犬死亡[12]。

犬子宮蓄膿常用的治療方案分為保守治療和手術(shù)治療。對(duì)于開放型子宮蓄膿，保守治療可采用注射前列腺素、孕酮拮抗劑阿來司酮、抗生素等藥物進(jìn)行治療，在發(fā)病早期治療效果較好；對(duì)于閉鎖型子宮蓄膿，保守治療存在一定的風(fēng)險(xiǎn)，因而通常采用手術(shù)治療[8,13]。本病例中，患犬年齡較大，不作為育種犬，與寵主溝通后決定采取手術(shù)治療。術(shù)前穩(wěn)定體液平衡糾正電解質(zhì)紊亂，術(shù)中注意麻醉風(fēng)險(xiǎn)，術(shù)后給予抗生素防止感染發(fā)生；為減少術(shù)后疼痛帶來的應(yīng)激反應(yīng)，應(yīng)給予鎮(zhèn)痛藥[14]。手術(shù)取出子宮后，利用無菌注射器抽取子宮內(nèi)液體，進(jìn)行病原菌分離，通過細(xì)菌培養(yǎng)、革蘭氏染色、16S rDNA測序最終確定該病原菌為大腸桿菌。為提高治療效率、節(jié)省治療費(fèi)用以及預(yù)防病原菌傳播，對(duì)分離出的病原菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)。選取15種常見抗生素進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示，該病原菌對(duì)除紅霉素、頭孢呋辛、頭孢唑啉外的其他12種抗生素均敏感。根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，患犬術(shù)后選用頭孢曲松鈉治療，效果良好。

手術(shù)治療犬子宮蓄膿效果良好，但降低了育種價(jià)值，且子宮、卵巢摘除后，發(fā)生癌癥、骨科疾病、肥胖癥和尿失禁等疾病的風(fēng)險(xiǎn)大大增加[15]。此外，與成年犬相比，老年犬的手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)較高，選擇治療方案時(shí)更應(yīng)慎重。本研究結(jié)果為犬子宮蓄膿的治療和預(yù)防提供了一定的理論依據(jù)。

5 結(jié)論

犬子宮蓄膿常發(fā)生于年齡較大且未妊娠的母犬中，犬的發(fā)病率大于貓，發(fā)病與激素水平、病原菌感染以及相關(guān)疾病的繼發(fā)感染相關(guān)。目前，臨床診斷子宮蓄膿的檢查方式以血常規(guī)、血液生化檢查、C反應(yīng)蛋白檢查、X射線檢查及超聲檢查為主。手術(shù)治療犬子宮蓄膿具有良好效果，但也存在增加其他疾病風(fēng)險(xiǎn)的弊端，因此建議采用早期保守治療配合抗生素使用的治療方法。