從CaM-MLCK信號(hào)通路探究不同頻率摩腹對(duì)脾虛家兔的手法效應(yīng)

蔡偉藍(lán)，王繼紅，許嘉英，張強(qiáng)，任雪晗，黃志凱

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東廣州 510405）

摩法為推拿基礎(chǔ)手法之一，《禮記·內(nèi)則》曰：“濯手以摩之，去其皽?！薄端貑?wèn)·病能》曰：“摩之切之?！蹦Ω棺鳛槟Ψㄖ委熎⑽覆∽兊闹匾址ㄖ?，通過(guò)摩法和腹部穴位結(jié)合，可調(diào)理脾胃功能，達(dá)到健脾的作用[1]。正如《理瀹·駢文》所言：“后天之本在脾，調(diào)中者摩腹?！逼⑻撟C是中醫(yī)學(xué)常見(jiàn)的證型，主要表現(xiàn)為胃納差、脘腹脹滿、大便稀溏等消化系統(tǒng)功能低下?tīng)顟B(tài)，與胃腸動(dòng)力障礙有密切聯(lián)系[2-3]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究[4]表明，胃腸動(dòng)力障礙與胃腸平滑肌收縮、舒張有關(guān)，而鈣調(diào)蛋白（CaM）-肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）信號(hào)通路是典型的胃腸道平滑肌信號(hào)通路。本課題組前期研究[5]表明，摩腹可以治療脾虛家兔，改善脾虛癥狀。為進(jìn)一步分析摩腹的手法效應(yīng)，探討摩腹改善脾虛家兔胃腸動(dòng)力機(jī)制，本研究從CaM-MLCK 信號(hào)通路切入，觀察不同頻率摩腹干預(yù)對(duì)通路中關(guān)鍵蛋白CaM、MLCK 的影響，以期為摩腹臨床治療脾虛證提供參考，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物SPF級(jí)成年新西蘭SD家兔72只，體質(zhì)量（2.0±0.5）kg，雌雄各半，購(gòu)自山東省康大生物科技有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（魯）20160002。飼養(yǎng)于廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技園普通級(jí)家兔實(shí)驗(yàn)室，在溫度24 ℃、相對(duì)濕度50%～70%的環(huán)境中進(jìn)行為期1周的適應(yīng)性喂養(yǎng)，期間家兔正常攝食、飲水、自由活動(dòng)。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案已通過(guò)廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技產(chǎn)業(yè)園動(dòng)物倫理委員會(huì)審批通過(guò)（批號(hào)：PZ21027）。適應(yīng)性喂養(yǎng)結(jié)束后，隨機(jī)分為空白組、模型組、低頻摩腹組、高頻摩腹組、低頻摩腹+抑制劑組、高頻摩腹+抑制劑組，每組12只，雌雄各半。

1.2 儀器與試劑調(diào)制器、校對(duì)器、動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)采集器、Tekscan 研制的多點(diǎn)薄膜壓力測(cè)試系統(tǒng)（MFF）壓力傳感器（上海邑成測(cè)試設(shè)備有限公司）；人工智能機(jī)械臂（疆越科技研制730C 型）；SMA4000 超微量分光光度計(jì)（北京Merinton 公司）；ABI7500 熒光定量PCR 儀（美國(guó)Life Technology 公司）。ML-9 試劑（為MLCK 選擇性強(qiáng)效抑制劑，北京生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：YZM002844）；GAPDH 抗體（兔源）、CaM 抗體（兔源）、MLCK 抗體（兔源）（華安生物公司）；山羊抗兔IgG（H+L）抗體（DL800）（美國(guó)Proteintech 公司）；BestarTMqPCR RT KitBestar?、SYBR Green qPCR mastermix（德國(guó)DBI公司）。

1.3 手法頻率與壓力值校對(duì)本次實(shí)驗(yàn)選取10名測(cè)試者，行10 次測(cè)試，再將測(cè)試者的壓力平均值作為機(jī)械臂操作的壓力標(biāo)準(zhǔn)操作值。將數(shù)據(jù)采集器、調(diào)制器、傳感器、智能機(jī)械臂有序連接，將機(jī)械臂置于家兔腹部操作手法，并控制頻率在101～ 150 次/min、201～ 250 次/min 兩個(gè)頻率，維持同等力量值操作1 min，觀察壓力曲線變化，建立力-電壓之間的擬合函數(shù)模型y=a+bx，然后通過(guò)校對(duì)器得出曲線的標(biāo)準(zhǔn)力量值和頻率值。技術(shù)人員提前在電腦Dobot Studio 系統(tǒng)上設(shè)置，操作智能機(jī)械臂在多點(diǎn)薄膜壓力測(cè)試系統(tǒng)（MFF）下進(jìn)行手法操作，手法壓力值以觀察實(shí)時(shí)采集數(shù)據(jù)為度量標(biāo)準(zhǔn)，其均值應(yīng)控制在以上標(biāo)準(zhǔn)操作值上下不超過(guò)5%[5]。

1.4 造?？瞻捉M家兔繼續(xù)給予常規(guī)飼養(yǎng)，其余組采用苦寒瀉下法聯(lián)合饑飽失常法構(gòu)建脾虛模型[6-7]。方法：將190 g 大黃放入900 mL 水中浸泡20 min，大火煎至沸騰后改小火再煎10 min，加水增至1 140 mL，紗布過(guò)濾；再將190 g番瀉葉加入1 140 mL沸水中攪拌浸泡5 min，過(guò)濾；將大黃液和番瀉葉液各1 140 mL 混合，溶化152 g 芒硝，最終濃度為6 mL 藥液含大黃2 g、番瀉葉1 g、芒硝0.4 g（大黃∶番瀉葉∶芒硝=5∶2.5∶1）[5]。除空白組外，其他各組家兔按照24 mL/kg 劑量連續(xù)灌胃1周，每日1次。期間飼料量減半，飲水不限制，全程詳細(xì)記錄各家兔體質(zhì)量、進(jìn)食量、行為學(xué)表現(xiàn)及大便變化情況。家兔出現(xiàn)便溏后改灌胃量為18 mL/kg。造模后出現(xiàn)精神萎靡，反應(yīng)明顯遲鈍，甚至出現(xiàn)膽怯易驚，體質(zhì)量減輕，食量變小，毛發(fā)色澤黯淡、無(wú)光澤，大便干硬或稀溏、難以成形等脾虛癥狀，則表明造模成功[2]。

1.5 干預(yù)方法

1.5.1 穴位定位 本實(shí)驗(yàn)選取中脘穴、雙側(cè)天樞穴。按《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[8]定位：中脘穴，位于家兔腹中線上，臍與劍狀軟骨連線中點(diǎn)處；天樞穴，位于家兔臍旁開3 cm處。

1.5.2 手法操作 將家兔固定在操作臺(tái)上，呈仰臥位，2 名助手固定住家兔前后肢，剃除腹部毛發(fā)以充分暴露穴位，并用標(biāo)記筆標(biāo)識(shí)，將傳感器固定在穴位上。在電腦上運(yùn)行Dobot Studio 軟件，輸入測(cè)試時(shí)求出的機(jī)械臂力值參數(shù)，操作機(jī)械臂遠(yuǎn)端人體拇指模型于家兔腹部的中脘穴、天樞穴（雙）上行摩腹，全程保證拇指模型與家兔腹部皮膚表面垂直，同時(shí)為保證手法力度與波形穩(wěn)定，需時(shí)刻留意手法的壓力曲線變化。

1.5.3 分組干預(yù) 造模結(jié)束后，空白組、模型組不進(jìn)行任何手法干預(yù)；低頻摩腹組、低頻摩腹+抑制劑組利用人工智能機(jī)械臂進(jìn)行低頻率（101～150 次/分）摩腹干預(yù)；高頻摩腹組、高頻摩腹+抑制劑組利用人工智能機(jī)械臂進(jìn)行高頻率（201～250 次/分）摩腹干預(yù)；低頻摩腹+抑制劑組、高頻摩腹+抑制劑組每次手法干預(yù)前行腹腔注射ML-9（2 mg/kg）[9]。每穴操作5 min，3 穴共15 min，每日1次，連續(xù)10 d。

1.6 觀察指標(biāo)與方法

1.6.1 脾虛觀察指標(biāo) 記錄所有家兔每日的精神狀態(tài)、毛色、體質(zhì)量、進(jìn)食量、二便等情況。

1.6.2 蘇木素-伊紅（HE）染色法觀察胃黏膜病理變化 取胃小彎組織，固定，石蠟包埋。將石蠟切片脫蠟至水后，入蘇木素染3～ 8 min，自來(lái)水洗；1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來(lái)水沖洗；0.6%氨水返藍(lán)，流水沖洗；入伊紅染液中染色1～3 min。脫水封片。光鏡下觀察胃黏膜病理變化。

1.6.3 qPCR 法檢測(cè)胃小彎組織CaM、MLCK 的mRNA 表達(dá) 提取胃小彎組織總RNA，運(yùn)用紫外分光光度法檢測(cè)其純度和濃度，將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。進(jìn)行PCR 反應(yīng)，反應(yīng)程序：95 ℃2 min預(yù)變性；95 ℃10 s 變性，60 ℃15 s 退火，72 ℃30 s 延伸，45 個(gè)循環(huán)；總延伸為95 ℃10 s，60 ℃3 s，98 ℃10 s。重復(fù)操作3次，通過(guò)PCR 儀運(yùn)行ASA-9600 系統(tǒng)軟件得出數(shù)據(jù)，采用2-ΔΔCT法計(jì)算目標(biāo)蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。GAPDH（為內(nèi)參）、CaM 和MLCK 引物由Life Technology 公司合成，引物見(jiàn)表1。引物的擴(kuò)增長(zhǎng)度均為20 bp。

表1 PCR引物序列信息Table 1 PCR primer sequences information

1.6.4 Western Blot 法檢測(cè)胃小彎組織CaM、MLCK 的蛋白表達(dá) 取胃小彎組織，加入蛋白裂解液和蛋白酶抑制劑后勻漿、離心，取上清液（即為所要提取的總蛋白）。利用二喹啉甲酸（BCA）法測(cè)定蛋白總濃度并調(diào)整濃度后上樣、煮沸變性、制膠、電泳、轉(zhuǎn)膜、5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，加入CaM、MLCK、GAPDH 一抗（1∶1 000）4 ℃孵育過(guò)夜、山羊抗兔IgG（H+L）二抗（1∶4 000）室溫孵育1 h，顯色，顯影成像，拍照。運(yùn)用ImageJ 軟件測(cè)定條帶灰度值，計(jì)算目的蛋白灰度值與內(nèi)參蛋白GAPDH灰度值的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法運(yùn)用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組家兔脾虛指標(biāo)比較造模前，各組家兔精神狀態(tài)佳，動(dòng)作靈活，毛發(fā)順滑有光澤，飲食正常，大便正常，糞便成形。造模后，家兔表現(xiàn)為精神狀態(tài)差，精神萎靡，反應(yīng)明顯遲鈍，甚至膽怯易驚，毛發(fā)黯淡無(wú)光澤，體質(zhì)量減輕，進(jìn)食減少，大便干硬或稀溏，表明造模成功；給予摩腹干預(yù)后，低頻摩腹組、低頻摩腹+抑制劑組、高頻摩腹+抑制劑組家兔反應(yīng)較治療前敏捷，毛發(fā)逐漸恢復(fù)光澤，體質(zhì)量、飲食較治療前改善，大便性狀逐漸恢復(fù)正常，而高頻摩腹組各項(xiàng)指標(biāo)較治療前均變差，脾虛癥狀加重。

進(jìn)一步比較各組家兔造模前后體質(zhì)量、進(jìn)食量2 個(gè)指標(biāo)。表2、表3 結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組、低頻摩腹組、高頻摩腹組、低頻摩腹+抑制劑組、高頻摩腹+抑制劑組家兔體質(zhì)量、進(jìn)食量均減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，低頻摩腹組、高頻摩腹組、低頻摩腹+抑制劑組、高頻摩腹+抑制劑組的體質(zhì)量、進(jìn)食量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。結(jié)果進(jìn)一步證明造模成功。

表2 各組家兔造模前后體質(zhì)量比較Table 2 Comparison of body mass among each group of rabbits before and after modeling（）

表2 各組家兔造模前后體質(zhì)量比較Table 2 Comparison of body mass among each group of rabbits before and after modeling（）

注：①P＜0.05，與空白組比較

表3 各組家兔造模前后進(jìn)食量比較Table 3 Comparison of the amount of food intake among each group of rabbits before and after modeling （）

表3 各組家兔造模前后進(jìn)食量比較Table 3 Comparison of the amount of food intake among each group of rabbits before and after modeling （）

注：①P＜0.05，與空白組比較

2.2 各組家兔干預(yù)后胃黏膜病理變化比較空白組：胃黏膜上皮細(xì)胞排列規(guī)則，隱窩及腺體結(jié)構(gòu)清晰；模型組：胃黏膜上皮細(xì)胞排列規(guī)則，部分見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；低頻摩腹組：胃黏膜上皮細(xì)胞排列規(guī)則，黏膜稍微疏松水腫；低頻摩腹+抑制劑組：胃黏膜上皮細(xì)胞排列規(guī)則，黏膜結(jié)構(gòu)明顯疏松水腫；高頻摩腹+抑制劑組：胃黏膜上皮細(xì)胞排列規(guī)則，部分可見(jiàn)柱狀上皮破壞；高頻摩腹組：胃黏膜上皮細(xì)胞大部分柱狀上皮破壞，部分淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組比較，低頻摩腹組、低頻摩腹+抑制劑組、高頻摩腹+抑制劑組家兔胃小彎組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)均有恢復(fù)，而高頻摩腹組家兔胃小彎組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)損傷均有所加重。見(jiàn)圖1。

圖1 各組家兔干預(yù)后胃黏膜病理變化比較（HE染色法，×400）Figure 1 Comparison of histopathological changes in the gastric mucosa among each group of rabbits after intervention（HE staining，×400）

2.3 各組家兔胃小彎組織CaM、MLCK mRNA表達(dá)水平比較表4結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組家兔胃小彎組織CaM、MLCK mRNA 表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，低頻摩腹組家兔胃小彎組織CaM、MLCK mRNA 表達(dá)水平上調(diào)（P＜0.05），高頻摩腹組CaM、MLCK mRNA 表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），低頻摩腹+抑制劑組、高頻摩腹+抑制劑組CaM、MLCK mRNA 表達(dá)水平亦顯著降低（P＜0.05）；與低頻摩腹組比較，高頻摩腹組家兔MLCK 的mRNA 表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05）。

表4 各組家兔胃小彎組織CaM、MLCK mRNA表達(dá)水平比較Table 4 Comparison of mRNA expression levels of CaM and MLCK in the tissue of the stomach lesser curvature among each group of rabbits（）

表4 各組家兔胃小彎組織CaM、MLCK mRNA表達(dá)水平比較Table 4 Comparison of mRNA expression levels of CaM and MLCK in the tissue of the stomach lesser curvature among each group of rabbits（）

注：①P＜0.05，與空白組比較；②P＜0.05，與模型組比較；③P＜0.05，與低頻摩腹組比較

2.4 各組家兔胃小彎組織CaM、MLCK 蛋白表達(dá)水平比較圖2、圖3 結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組家兔胃小彎組織CaM、MLCK 蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，低頻摩腹組家兔CaM、MLCK 蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05），高頻摩腹組CaM、MLCK 蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），低頻摩腹+抑制劑組、高頻摩腹+抑制劑組CaM、MLCK 蛋白表達(dá)水平亦顯著降低（P＜0.05）；與低頻摩腹組比較，高頻摩腹組家兔MLCK蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05）。

圖2 各組家兔CaM、MLCK、GADPH的蛋白電泳圖Figure 2 Protein electrophoresis of CaM，MLCK and GADPH

圖3 各組家兔胃小彎組織CaM、MLCK蛋白表達(dá)水平比較Figure 3 Comparison of protein expression levels of CaM and MLCK in the tissue of the stomach lesser curvature among each group of rabbits

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為，“脾”主運(yùn)化，若飲食失節(jié)、脾失健運(yùn)，則導(dǎo)致中焦氣機(jī)升降失常，脾氣上升受阻，胃氣下降異常而發(fā)病。脾虛是胃腸道疾病發(fā)病的基本病機(jī)。平滑肌的收縮與舒張是維持消化功能穩(wěn)定的基礎(chǔ)[10]。解剖學(xué)表明，從食管至肛門這一系列器官和組織組成的消化系統(tǒng)，均由平滑肌構(gòu)成。而CaM-MLCK 通路與胃腸道中維持消化功能的平滑肌收縮與舒張有關(guān)[11]，是調(diào)節(jié)平滑肌收縮的經(jīng)典信號(hào)通路[4]。在調(diào)節(jié)平滑肌收縮時(shí)，CaMMLCK 通路作為粗肌絲核心調(diào)節(jié)通路，在胃腸道上的平滑肌細(xì)胞接收刺激以及信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中起關(guān)鍵作用[12]。當(dāng)外部電信號(hào)刺激，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和胞外的Ca2+濃度發(fā)生變化，胞內(nèi)Ca2+濃度升高促使Ca2+向胞漿內(nèi)釋放，進(jìn)而與胞內(nèi)鈣調(diào)蛋白結(jié)合后形成Ca2+-CaM 復(fù)合物，此時(shí)廣泛分布于平滑肌等肌肉組織中的MLCK 被Ca2+-CaM 復(fù)合物激活，發(fā)生絲氨酸殘基磷酸化后激活平滑肌肌球蛋白ATP 水解酶水解ATP，將化學(xué)能轉(zhuǎn)換成機(jī)械能，釋放能量后使肌球蛋白能夠沿著肌動(dòng)蛋白絲滑動(dòng)，引起平滑肌收縮[13]。故本實(shí)驗(yàn)基于CaM-MLCK 通路探討摩腹手法效應(yīng)。

“補(bǔ)瀉”的合理運(yùn)用是中醫(yī)治療的基本原則之一，推拿手法治療疾病時(shí)須遵循這一原則，摩腹也不例外?！独逭茨σg(shù)》記載：“緩摩為補(bǔ)，急摩為瀉。”強(qiáng)調(diào)了手法治病注重“補(bǔ)瀉”原則，而手法的緩急補(bǔ)瀉原則往往體現(xiàn)在手法頻率的高低[14]。本課題組前期研究[15]指出，推拿手法治療疾病存在一定的頻率-效應(yīng)關(guān)系，其中關(guān)于摩法治療胃腸疾病時(shí)，101～ 150 次/分為最佳的治療頻率段，起到補(bǔ)的良性效應(yīng)，而頻率201～250 次/分則起到瀉的損益效應(yīng)。

本研究結(jié)果顯示：與模型組比較，低頻摩腹組家兔胃黏膜上皮細(xì)胞排列規(guī)則，稍有水腫，胃小彎組織CaM、MLCK 的mRNA 及蛋白表達(dá)水平顯著升高，高頻摩腹組家兔胃黏膜上皮細(xì)胞大部分柱狀上皮破壞，部分淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，CaM、MLCK的mRNA 表達(dá)水平顯著降低，蛋白表達(dá)水平顯著降低。同時(shí)，與低頻摩腹組比較，高頻摩腹組家兔胃黏膜上皮細(xì)胞被破壞，部分淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，MLCK 的mRNA 和蛋白表達(dá)水平顯著降低。經(jīng)摩腹干預(yù)治療后，低頻摩腹組家兔反應(yīng)較治療前靈敏，毛發(fā)逐漸恢復(fù)光澤，體質(zhì)量、飲食較治療前好轉(zhuǎn)，大便成形，高頻摩腹組各項(xiàng)指標(biāo)較治療前均變差。表明低頻率（101～150 次/分）摩腹能促進(jìn)脾虛家兔消化功能恢復(fù)，具有補(bǔ)的良性效應(yīng)；而高頻率（201～250 次/分）無(wú)法促進(jìn)胃腸消化功能恢復(fù)，甚至有一定的破壞性，具有瀉的損益效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了“緩摩為補(bǔ)，急摩為瀉”的原理[16-18]，同時(shí)也體現(xiàn)了手法在治療過(guò)程中注重補(bǔ)瀉原則的意義。本研究采用高頻率的摩腹對(duì)脾虛家兔進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示，造模成功后的家兔處于脾虛狀態(tài)，給予高頻率摩腹干預(yù)后家兔胃腸消化功能未得到恢復(fù)，高頻率摩腹起到了瀉法的作用，甚至有一定的破壞性，驗(yàn)證了“補(bǔ)瀉反則病益篤”的中醫(yī)治療原則。

另外，本研究結(jié)果還顯示，與模型組比較，低頻摩腹+抑制劑組、高頻摩腹+抑制劑組家兔胃小彎組織CaM、MLCK 的mRNA 和蛋白表達(dá)水平顯著降低。理論上分析認(rèn)為，這2組家兔的胃腸道消化功能會(huì)比治療前變差，甚至加重，但實(shí)際上低頻摩腹+抑制劑組、高頻摩腹+抑制劑組家兔反應(yīng)較前靈敏，毛發(fā)逐漸恢復(fù)光澤，體質(zhì)量、飲食較前好轉(zhuǎn)，大便成形。ML-9 為MLCK 的特異性抑制劑，阻斷CaM-MLCK 信號(hào)通路的表達(dá)后，摩腹仍能改善脾虛家兔的胃腸道功能，這提示摩腹除了通過(guò)CaM-MLCK 信號(hào)通路可能作用在其他信號(hào)通路或靶點(diǎn)上促使胃腸平滑肌收縮。目前已知調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的途徑，還包括了KC、PAR-2[19]介導(dǎo)及c-kit/SCF 的信號(hào)通路，后續(xù)有待從以上信號(hào)通路研究摩腹在MLCK信號(hào)通路被抑制情況下仍能發(fā)揮調(diào)理胃腸、改善消化功能作用的機(jī)制，進(jìn)一步深究摩腹的作用機(jī)制。

綜上所述，摩腹治療脾虛家兔可通過(guò)促進(jìn)CaM-MLCK 信號(hào)通路上CaM、MLCK 的mRNA 和蛋白表達(dá)，引起胃腸平滑肌收縮，促進(jìn)胃腸動(dòng)力，進(jìn)而改善脾虛狀態(tài)。其中：低頻率（101～150次/min）摩腹具有補(bǔ)的效應(yīng)，可能與上調(diào)CaM、MLCK 的mRNA 和蛋白表達(dá)水平從而激活CaM-MLCK 信號(hào)通路有關(guān)；而高頻率（201～ 250 次/ min）摩腹起到瀉的效用，與下調(diào)CaM、MLCK 的mRNA 和蛋白表達(dá)水平從而抑制CaM-MLCK信號(hào)通路有關(guān)。