仔豬大腸桿菌引發(fā)的黃痢的診治研究

高艷梅

（延安市寶塔區(qū)柳林鎮(zhèn)獸醫(yī)站，陜西 延安 716000）

1 前言

本次試驗(yàn)主要是對延安市寶塔地區(qū)的仔豬大腸桿菌病的致病性大腸桿菌進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，和根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果對患病豬進(jìn)行治療研究。

仔豬大腸桿菌病是豬場的常見病，許多學(xué)者都對此病進(jìn)行過研究。國內(nèi)外研究主要是針對不同血清型的大腸桿菌。大腸桿菌病的流行凝血研究中應(yīng)用血清型分類法以來已經(jīng)積累了大量的資料。不同年齡階段的仔豬患病主要由不同血清型的大腸桿菌引起，致病性大腸桿菌主要是O型，其致病力與O抗原有關(guān)。此種血清型大腸桿菌主要侵入動物血液組織中。仔豬大腸桿菌病主要一類為腸道致病性大腸桿菌病，主要是仔豬黃痢。近年來在治療預(yù)防方面還研究通過疫苗即人工免疫的方式進(jìn)行預(yù)防治療，但是由于致病性大腸桿菌的血清型很多，而且他們各自還有不同的K抗原，在疾病的發(fā)展過程中，現(xiàn)在又不斷有新的致病性O(shè)和K抗原型的出現(xiàn)。一種致病性大腸桿菌的產(chǎn)毒素質(zhì)粒還可以轉(zhuǎn)移給其他血清型的大腸桿菌等，這些使人工免疫變得十分復(fù)雜。

仔豬大腸桿菌病在延安市寶塔地區(qū)發(fā)病的形式主要以仔豬黃痢、仔豬白痢兩種出現(xiàn)，這兩種病的主要臨床癥狀是腹瀉，病理特征為消化道損傷[1]。仔豬黃在當(dāng)?shù)匕l(fā)病率十分高，且發(fā)病后治愈率十分低。因此通過對仔豬大腸桿菌病的診治研究，幫助我們正確地認(rèn)識疾病，引導(dǎo)養(yǎng)殖戶在治療過程中正確的用藥。

2 材料與方法

2.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動物：豬，主要為寶塔地區(qū)常見的三元雜交豬?；甲胸i黃痢的豬3頭；未患病1～40d的健康仔豬20頭。

實(shí)驗(yàn)室解剖器械：手術(shù)刀、手術(shù)剪、手術(shù)臺等。

培養(yǎng)基：培養(yǎng)大腸桿菌的液體培養(yǎng)基、瓊脂培養(yǎng)基，各種生化培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、37℃恒溫箱培養(yǎng)（中國艾測有限公司生產(chǎn)，型號DZX180DZX250DZX320）等。

藥物：針對仔豬黃痢的藥物：母仔內(nèi)源康由（撫州市大華動物藥業(yè)有限公司，獸藥字（2005）140011506）、慶大霉素（撫州市大華動物藥業(yè)有限公司獸藥字（2005）140011616）、仔豬痢寶（撫州市大華動物藥業(yè)有限公司，獸藥字（2005）140011638）、保育靈（撫州市大華動物藥業(yè)有限公司，獸藥字（2005）140012074）、普痢美（撫州市大華動物藥業(yè)有限公司，獸藥字（2005）140011052）等；

其他材料：6mm打孔器、濾紙、一次性注射器。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 人工接種未患病的仔豬

首先進(jìn)行致病性大腸桿菌的培養(yǎng)與提取。提取主要從患病豬中提取大腸桿菌，用瓊脂培養(yǎng)基做劃線培養(yǎng)。得到單個的菌落。然后在肉湯培養(yǎng)基中進(jìn)行增菌培養(yǎng)：在瓊脂培養(yǎng)基中挑取單個的菌落，再接種在肉湯培養(yǎng)基中。通過生化培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌鑒定培養(yǎng)，主要鑒定是否得到的是大腸桿菌菌液。提取好的純大腸桿菌菌液在2～6℃環(huán)境中保存?zhèn)溆肹2]。用分離培養(yǎng)得到的純大腸桿菌菌液通過人工接種未患病的健康豬群，人工感染。感染途徑主要通過飲水對仔豬進(jìn)行感染。

2.2.2 臨床癥狀及病理解剖觀察

首先對豬群分別觀察患病仔豬的臨床癥狀，并記錄。主要觀察患病豬糞便的顏色，氣味，患病豬精神狀況，皮毛的色澤，食欲，呼吸。觀察完患病豬的臨床癥狀后解剖患病豬，觀察其病理特征，并記錄。觀察各個器官的病理變化并與健康的豬的各器官作對比[3]。

根據(jù)仔豬大腸桿菌病的臨床癥狀和病理癥狀，挑選感染后具有典型臨床癥狀的發(fā)病豬，進(jìn)行治療實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)。

2.2.3 藥敏實(shí)驗(yàn)

首先進(jìn)行藥物選擇：寶塔地區(qū)的獸藥很多，此次實(shí)驗(yàn)選取的藥物主要為當(dāng)?shù)爻Ｒ姷囊恍┧幬?，這些藥物主要是針對不同類型的大腸桿菌病，包括當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶常用的單方藥與復(fù)方藥，中藥以及西藥?？梢赃M(jìn)行實(shí)驗(yàn)的藥物有：1針對仔豬黃痢的藥物有母仔內(nèi)源康（拌料用藥）、普痢美（拌料用藥）、慶大霉素、仔豬痢寶等、保育靈。然后進(jìn)行藥敏片的制備：選用質(zhì)量較好的濾紙片（定量濾紙），用打孔器打成直徑為6mm的圓片，每l00片放入一小瓶中，160℃干熱滅菌1～2h或高壓滅菌后，在60℃條件下烘干備用。計(jì)算抗菌用藥的藥物濃度并配置藥液。計(jì)算方法：1.計(jì)算最小濃度值按藥物使用說明上的配料或飲水比例換算成一個基本單位藥量（以能準(zhǔn)確稱量藥品的最小值為宜，如0.5g、lg、2g等），而需要配多少料或飲多少水，則相當(dāng)于配制浸泡藥片的藥品濃度時所加蒸餾水的ml數(shù)。例如，藥品使用說明上標(biāo)明5g本品可拌50kg飼料，其換算方法為lg本品可拌10kg飼料，也就是1g本品拌l0000g飼料，相當(dāng)于藥品濃度為lg本品加l0000ml蒸餾水。2.濃度配制準(zhǔn)確稱取上述基本單位藥量（片劑要研磨成粉末后再行稱量），在無菌條件下，按下列分列項(xiàng)用蒸餾水進(jìn)行倍比稀釋。根據(jù)以上換算lg本品加10000ml蒸餾水，即lg本品加10×l0×10×l0ml蒸餾水。如出現(xiàn)lg本品拌320g飼料等情況，可改成1g本品拌320g飼料，即加l0×4×8ml蒸餾水。這樣改動易形成分列項(xiàng)，并不影響實(shí)際效果。因?yàn)樵谂淞蠒r可按紙片濃度lg本品拌320g飼料進(jìn)行拌料。如果所加蒸餾水量較少或現(xiàn)場蒸餾水充足，可不按上述倍比稀釋法稀釋，而直接按配料或飲水比例一次稀釋而成[4]。制作好藥物液體后進(jìn)行藥敏紙片的浸泡。取50ml已配制好的藥液注入已經(jīng)滅菌的干凈平皿中，取30到50個藥敏紙片，放入已經(jīng)加入藥液的平皿中。放入的紙片要單個分離，不能粘連在一起，這樣能使每張紙片上的藥物均勻。紙片放入后，把平皿放入冰箱，并且每隔30min翻動紙片一次，這樣做保證紙片兩面的藥物均勻。3h后拿出藥片，并在37℃的溫箱中烘干。烘干后放入干凈的滅菌瓶中，并再放入冰箱中冷凍保存。當(dāng)藥敏片制備好后進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。用微量移液器移取200ux大腸桿菌24h營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物，滴于普通瓊脂培養(yǎng)基上，使用滅菌L型棒涂布均勻，蓋好平皿靜置2～3min后，待培養(yǎng)基表面干燥后用無菌鑷子取含有不同藥物的藥敏紙片貼在瓊脂表面上，中藥藥敏紙片和西藥藥敏紙片分為兩組，分別貼于不同的培養(yǎng)板，每組培養(yǎng)基的藥敏片數(shù)量為4個。37℃培養(yǎng)24h后取出，測量抑菌環(huán)直徑[5]。

2.2.4 藥物治療

藥物治療主要為用藥敏實(shí)驗(yàn)得到的敏感性藥物治療患病豬。分別設(shè)定實(shí)驗(yàn)組和對照組。對照組為未感染的健康豬群，根據(jù)患病類型設(shè)用不同日齡的健康仔豬分三個對照豬，分別為初生1～10d仔豬，7～20d仔豬以及斷奶后的仔豬。實(shí)驗(yàn)組分別設(shè)仔豬黃痢實(shí)驗(yàn)組、對照組。

給人工接種感染仔豬黃痢的發(fā)病豬分別用：給藥方法為每天按每公斤體重0.1ml分別注射慶大霉素、保育靈、仔豬痢寶，1d兩次連續(xù)用2d。母豬飼料中分別添加母仔內(nèi)源康、普痢美每1000kg中添加100g。連續(xù)用藥7d。

實(shí)驗(yàn)組和對照組（健康豬群）。7d后觀察治愈豬與健康豬的臨床表現(xiàn)與解剖特征。同時對比患病豬與治愈豬的臨床表示和解剖特點(diǎn)。通過對比健康豬與曾患病豬在臨床和解剖特征上的區(qū)別，得出每種藥物的治愈率。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 寶塔地區(qū)常用藥物藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果

仔豬大腸桿菌病引起的仔豬黃痢型其藥敏實(shí)驗(yàn)如表1。注：抑菌圈直徑大于15mm認(rèn)為高度敏感，在10～15mm之間認(rèn)為敏感，小于10mm認(rèn)為不敏感[6]。

表1 針對仔豬黃痢的藥物抑菌結(jié)果

表2 仔豬黃痢治愈率

表3 黃痢型患病豬，患病治愈豬和正常豬的臨床表現(xiàn)對比

通過不同藥物對引起仔豬黃痢的致病性大腸桿菌的抑菌圈大小可以看出，當(dāng)?shù)爻Ｒ姷闹委熕幬镏?，產(chǎn)生抑菌圈最大藥物為仔豬痢寶，抑菌圈最小的為阿米卡星。

3.2 人工接種健康豬后進(jìn)行藥物治療結(jié)果對比

實(shí)驗(yàn)主要是據(jù)仔豬大腸桿菌病的體外抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行。

通過給人工接種的患仔豬黃痢的豬進(jìn)行藥物治療實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)治療效果最好的藥物是仔豬痢寶。母仔內(nèi)源康和普痢美是通過給哺乳母豬喂藥，進(jìn)行仔豬的治療，其治療效果分別達(dá)到85.6%和87.1%。通過治療研究發(fā)現(xiàn)這些藥物對仔豬黃痢的治療率都超過80%。

3.3 治愈后對比患病豬，患病治愈豬和正常豬臨床特點(diǎn)，解剖特點(diǎn)

通過對患病豬，患病后治愈豬以及正常豬對比它們的臨床特點(diǎn)，解剖特點(diǎn)觀察藥物對患病豬的治療效果。

3.3.1 黃痢型患病豬，患病后治愈豬和正常的豬臨床和解剖特點(diǎn)對比

通過最仔豬黃痢患病豬和未患病豬以及患病后治愈豬的臨床特點(diǎn)，剖檢結(jié)果可以看出患病后用藥豬均恢復(fù)正常，且預(yù)后良好。這個結(jié)果能夠進(jìn)一步說明這些藥物對仔豬黃痢的治愈效果良好

4 結(jié)論

通過對延安市寶塔區(qū)的大腸桿菌病進(jìn)行病原的藥敏實(shí)驗(yàn)和治療實(shí)驗(yàn)找出當(dāng)?shù)爻Ｓ玫闹委熕幬镏?，對仔豬大腸桿菌有效的治療藥物有針對仔豬黃痢的藥物有母仔內(nèi)源康（拌料用藥）、普痢美（拌料用藥）、仔豬痢寶等、保育靈。因此在當(dāng)?shù)刂委熥胸i大腸桿菌病時推薦使用上述藥物。