康派特組織粘合膠粘合巴馬小型豬皮膚切口的有效性

卜文，劉文謙，李彥，劉超，叢源，沈連忠（通信作者）

山東欣博藥物研究有限公司 （山東 臨邑 251500）

α-氰基丙烯酸正丁酯是一種具有抑菌作用的醫(yī)用粘合劑，可在血液、組織液中陰離子的作用下快速聚合固化成膜，產(chǎn)生一層具有高抗拉強(qiáng)度的彈性薄膠膜[1-2]。該膠膜約5～10 d 后可隨角化皮膚逐步脫落[3]?？蹬商亟M織粘合膠的主要成分為α-氰基丙烯酸正丁酯，并添加了少量著色劑和穩(wěn)定劑，適用于接近皮膚表面的封閉，不可用于皮膚亞表層的閉合[4-5]。作為一種新型醫(yī)用膠，康派特組織粘合膠在皮膚上使用的安全性和有效性需要進(jìn)一步觀察。目前臨床上評(píng)價(jià)粘合劑安全性、有效性的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常規(guī)采用大鼠、家兔和犬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物[6-17]，關(guān)于小型豬的研究較少。小型豬被覆的毛發(fā)緊附于皮下組織，其體表毛發(fā)的疏密、皮膚脂肪層的形態(tài)學(xué)和增生動(dòng)力學(xué)、皮膚的血液供給、切口的修復(fù)機(jī)制等均與人類(lèi)相似[18]。因此，相對(duì)于大鼠、家兔和犬，小型豬的皮膚更適合用于藥物和醫(yī)療器械的有效性、安全性評(píng)價(jià)[19]?；诖耍狙芯刻接懣蹬商亟M織粘合膠粘合巴馬小型豬皮膚切口的有效性，并與Histoacryl 醫(yī)用組織膠水[15-17]進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)環(huán)境

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：購(gòu)于北京實(shí)創(chuàng)世紀(jì)小型豬養(yǎng)殖基地[動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2013-0008]的巴馬小型豬（普通級(jí)）8 只，雌雄各半，8～9 月齡，體重15.23～21.06 kg。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)：No.111014000000097。

飼養(yǎng)環(huán)境：山東欣博藥物研究有限公司，山東欣博藥物安全評(píng)價(jià)研究中心，普通級(jí)大動(dòng)物室（環(huán)境控制：溫度16～26 ℃，濕度40～70%，換氣次數(shù)≥8 次/h，照明時(shí)間12 h/12 h 明暗交替）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（魯）2016-0011。設(shè)施使用許可證號(hào)：H20150050。飼料購(gòu)于北京實(shí)創(chuàng)世紀(jì)小型豬養(yǎng)殖基地，飼料批號(hào)：15111803。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)前禁飼12 h。

本研究已通過(guò)本單位實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查。

1.1.2 供試品

康派特組織粘合膠：北京康派特醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)，國(guó)械注準(zhǔn)20173023182，批號(hào)160415；型號(hào)：涂抹LT 型；規(guī)格：0.4 ml/支；性狀：藍(lán)色透明液體。

1.1.3 上市對(duì)照品

Histoacryl 醫(yī)用組織膠水（Histoacryl Tissue Adhesive）：貝朗醫(yī)療西班牙股份公司生產(chǎn)，國(guó)械注進(jìn)20173026756，批號(hào)215272N2；商品名：藍(lán)靈；型號(hào)：1050044；規(guī)格：0.5 ml/支；性狀：藍(lán)色透明液體。

1.1.4 麻醉藥品

戊巴比妥鈉：德國(guó)莫克公司生產(chǎn)，商品編號(hào)NO.6902100，批號(hào)150408，含量99.4%，規(guī)格25 g/瓶。

1.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器

TCS-150 電子臺(tái)秤（常州牛頓力稱(chēng)重系統(tǒng)有限公司），CWT7-3 電子天平（常州牛頓力稱(chēng)重系統(tǒng)有限公司），Tissue-TekTECTM5 組織包埋機(jī)（日本櫻花檢驗(yàn)儀器株式會(huì)社），Tissue-TekVIP6 全封閉組織脫水機(jī)（日本櫻花檢驗(yàn)儀器株式會(huì)社），JLX-A 型蠟塊修復(fù)儀（天津市久圣醫(yī)療電子儀器有限公司），TK-218 型恒溫?cái)偲酒瑱C(jī)（湖北泰維科技實(shí)業(yè)有限公司），BX53 雙目顯微鏡（日本奧林巴斯株式會(huì)社）。

1.2 方法

1.2.1 分組

選用8 只巴馬小型豬，用TOXSTAT 2006 軟件按性別和體重隨機(jī)分為A、B 兩組，每組4 只，雌雄各半。A 組術(shù)后1 周剖檢，B 組術(shù)后4 周剖檢。

1.2.2 手術(shù)方法

采用同體左右側(cè)自身對(duì)比法。為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肌內(nèi)注射3% 戊巴比妥鈉30 mg/kg 進(jìn)行麻醉，腹部朝下置于手術(shù)臺(tái)上。剃除背部手術(shù)部位毛發(fā)，范圍約15 cm×15 cm。先用75% 乙醇擦拭手術(shù)部位，再用聚維酮碘消毒手術(shù)部位，然后鋪洞巾。用手術(shù)刀在背中線(xiàn)兩側(cè)旁開(kāi)3 cm 處各劃開(kāi)3 個(gè)長(zhǎng)3 cm、深1 cm 的切口，切口間距約4 cm，方向與背部中線(xiàn)垂直。左側(cè)1、2、3 切口用康派特組織粘合膠粘合，右側(cè)1、2、3 切口用Histoacryl 醫(yī)用組織膠水粘合。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）臨床癥狀：于籠旁觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，記錄其臨床表現(xiàn)和特點(diǎn)，包括外觀、體征、行為活動(dòng)、飲食、對(duì)刺激的反應(yīng)、腺體分泌、呼吸、分泌物、糞便性質(zhì)、死亡情況，以及切口是否有開(kāi)裂、滲出和感染等不良反應(yīng)，2 次/d。（2）體重：用TCS-150 電子臺(tái)秤的“預(yù)去皮”功能去除稱(chēng)重籠具的重量后，稱(chēng)量實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重，1 次/周。（3）攝食量：實(shí)驗(yàn)期間，每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物每日上、下午各喂食（350±5）g 飼料，次日上午記錄飼料剩余量（按照剩余0%、25%、50%、75%、100% 4 擋記錄），1 次/d。（4）切口局部癥狀：每日肉眼觀察切口局部膠體是否可見(jiàn)（膠體明顯可見(jiàn)記“++”，膠體不清楚記“+”，未見(jiàn)明顯膠體記“-”）及切口局部刺激反應(yīng)（切口的刺激評(píng)分方法見(jiàn)表1，每組動(dòng)物每側(cè)12 個(gè)切口的平均評(píng)分對(duì)應(yīng)的反應(yīng)類(lèi)型見(jiàn)表2），1 次/d。（5）剖檢：每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肌內(nèi)注射3%戊巴比妥鈉30 mg/kg 麻醉后，采用頸動(dòng)脈放血方式安樂(lè)死，剖檢動(dòng)物，大體觀察動(dòng)物各臟器組織和切口部位有無(wú)異常病變，然后取切口局部皮膚和異常臟器組織，用4%甲醛固定，行常規(guī)組織切片鏡檢，并對(duì)供試品側(cè)和上市對(duì)照品側(cè)進(jìn)行刺激性評(píng)價(jià)，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表3～4。同時(shí)，對(duì)切口的纖維組織增生情況進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分越高表明恢復(fù)越好，其評(píng)分不計(jì)入刺激指數(shù)。

表1 皮膚反應(yīng)積分系統(tǒng)

表2 刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

表3 組織反應(yīng)顯微鏡計(jì)分系統(tǒng)評(píng)分

表4 刺激指數(shù)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用EXCEL 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，采用TOXSTAT 2006 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以±s 表示，采用t檢驗(yàn)。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床癥狀

實(shí)驗(yàn)期間，動(dòng)物切口部位均未見(jiàn)開(kāi)裂、滲出和感染癥狀，臨床癥狀觀察均未見(jiàn)明顯異常。

2.2 體重

B 組術(shù)后21 d 和28 d 的體重均高于術(shù)前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明動(dòng)物術(shù)后體重略有增長(zhǎng)，未見(jiàn)明顯并發(fā)癥，見(jiàn)表5。

表5 兩組體重比較（kg，±s）

表5 兩組體重比較（kg，±s）

注：與術(shù)前比較，aP<0.05

組別 只數(shù)術(shù)前術(shù)后7 d術(shù)后14 d術(shù)后21 d術(shù)后28 d A 組422.19±1.47 22.34±1.45 B 組422.06±0.39 22.29±0.37 22.70±0.42 23.31±0.42a 25.05±0.86a

2.3 攝食量

實(shí)驗(yàn)期間，動(dòng)物均未見(jiàn)剩余飼料。

2.4 切口局部癥狀

2.4.1 膠體狀態(tài)

術(shù)后1～4 d 兩側(cè)膠體均明顯可見(jiàn)，術(shù)后5 d 開(kāi)始兩側(cè)膠體均不清楚；術(shù)后21 d 后兩側(cè)均未見(jiàn)明顯膠體，見(jiàn)表6。

表6 兩組切口膠體狀態(tài)比較（個(gè)）

2.4.2 切口局部刺激反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)期間兩組手術(shù)當(dāng)天兩側(cè)切口局部可見(jiàn)輕度紅斑，刺激強(qiáng)度為輕度，術(shù)后1 d 開(kāi)始兩側(cè)切口局部均未見(jiàn)明顯刺激性反應(yīng)，刺激強(qiáng)度為極輕微，見(jiàn)表7。

表7 切口局部刺激反應(yīng)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)

2.5 病理學(xué)檢查

剖檢：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各組織臟器及手術(shù)部位均為未見(jiàn)明顯大體病理學(xué)改變。

組織病理學(xué)檢查結(jié)果提示，術(shù)后1 周兩側(cè)切口部位均可見(jiàn)極輕度或輕度的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、極輕度出血、輕度至中度的纖維組織增生等組織病理學(xué)改變，術(shù)后4 周可見(jiàn)不同程度組織修復(fù)（致密結(jié)締組織修復(fù)或完全修復(fù)），且未見(jiàn)其他明顯組織病理學(xué)改變。見(jiàn)圖1～6。

圖1 手術(shù)部位炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維組織增生（×100） （術(shù)后1周，動(dòng)物編號(hào)/組別：M001/ A 組 Histoacryl 醫(yī)用組織膠水）

圖2 手術(shù)部位炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維組織增生（×100） （術(shù)后1周，動(dòng)物編號(hào)/組別：F002/ A 組 康派特組織粘合膠）

圖3 手術(shù)部位組織修復(fù)（致密結(jié)締組織修復(fù)） （×100） （術(shù)后4周，動(dòng)物編號(hào)/組別：F004/ B 組 Histoacryl 醫(yī)用組織膠水）

圖4 手術(shù)部位組織修復(fù)（致密結(jié)締組織修復(fù)） （×100） （術(shù)后4周，動(dòng)物編號(hào)/組別：M003/ B 組 康派特組織粘合膠）

圖5 手術(shù)部位組織修復(fù)（完全修復(fù)）（×100）（術(shù)后4 周，動(dòng)物編號(hào)/組別：F003/ B 組 Histoacryl 醫(yī)用組織膠水）

圖6 手術(shù)部位組織修復(fù)（完全修復(fù)）（×100）（術(shù)后4 周，動(dòng)物編號(hào)/組別：F003/ B 組 康派特組織粘合膠）

根據(jù)組織病理學(xué)組織反應(yīng)評(píng)分統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，術(shù)后1 周實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均可見(jiàn)極輕度的皮膚刺激，但康派特組織粘合膠與Histoacryl 醫(yī)用組織膠水涂膠部位兩者差值為0（雄性）或0.3（雌性），刺激反應(yīng)程度均為無(wú)，表明兩者刺激強(qiáng)度無(wú)明顯差異，見(jiàn)表8；術(shù)后4 周所有動(dòng)物手術(shù)部位均未見(jiàn)有明顯皮膚刺激反應(yīng)。

表8 刺激評(píng)分結(jié)果（1 周雄性動(dòng)物）

表9 刺激評(píng)分結(jié)果（1 周雌性動(dòng)物）

表10 刺激評(píng)分結(jié)果（4 周雄性動(dòng)物）

表11 刺激評(píng)分結(jié)果（4 周雌性動(dòng)物）

3 討論

以往臨床常用的皮膚切口處理方式是縫合，但縫合前需要注射麻醉藥物，縫合后需及時(shí)換藥、拆線(xiàn)，操作煩瑣，還有可能增加疼痛和刺激，且切口愈合后會(huì)遺留明顯的瘢痕，影響美觀。近年來(lái)，隨著醫(yī)療需求多樣性逐漸增加，人們對(duì)切口處理方式提出了更高的要求，特別是女性和兒童患者不僅要求切口愈合快速有效、減少疼痛，還要求避免遺留瘢痕[20-22]。近年來(lái)出現(xiàn)的一次性使用無(wú)菌醫(yī)用敷料貼可在切口皮下縫合后外敷使用，有利于減少換藥步驟，且無(wú)須拆線(xiàn)，同時(shí)具有淡化瘢痕的作用。但該敷料貼使用前仍需進(jìn)行皮下縫合，使用后患者活動(dòng)受限，影響美觀，且需要防止敷料貼開(kāi)裂脫落?？蹬商亟M織粘合膠克服了傳統(tǒng)縫合法和一次性使用無(wú)菌醫(yī)用敷料貼的不足，傷痕較淺、切口邊緣對(duì)合良好的切口可在清創(chuàng)后直接使用（無(wú)須麻醉），且無(wú)須定期換藥，而手術(shù)切口可在皮內(nèi)縫合減輕張力后使用。同時(shí)，康派特組織粘合膠的主要化學(xué)成分α- 氰基丙烯酸正丁酯具有極強(qiáng)的粘合力，與組織液接觸后迅速發(fā)生聚合反應(yīng)，5～15 s 即由液體變?yōu)楣腆w，可迅速粘合切口兩側(cè)皮膚，并在切口表面形成一層防水保護(hù)膜，有效阻擋細(xì)菌，防止感染，且使用后無(wú)須覆蓋其他敷料。此外，康派特組織粘合膠膠體呈藍(lán)色，便于通過(guò)視覺(jué)控制用量，能有效防止組織膠水進(jìn)入切口。本研究采用巴馬小型豬皮膚切口模型評(píng)價(jià)康派特組織粘合膠產(chǎn)品的安全性和有效性，觀察其愈合過(guò)程中切口的恢復(fù)情況、粘合膠膠體變化、局部組織病理學(xué)變化等，并與同類(lèi)產(chǎn)品Histoacryl 醫(yī)用組織膠水進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)指標(biāo)客觀準(zhǔn)確，數(shù)據(jù)真實(shí)可靠，可以滿(mǎn)足對(duì)康派特組織粘合膠產(chǎn)品的非臨床評(píng)價(jià)要求。

綜上，本試驗(yàn)條件下，康派特組織粘合膠粘合巴馬小型豬皮膚切口安全有效，且與Histoacryl 醫(yī)用組織膠水比較未見(jiàn)明顯差異。