自制異常值血脂復(fù)合質(zhì)控品

吳薇,劉波,王慧娟(.中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊第904醫(yī)院檢驗科,江蘇無錫4000;.連云港市第一人民醫(yī)院檢驗科,江蘇連云港00;.江蘇闊樂生物科技有限公司研發(fā)部,南京000)

血脂檢測在高脂血癥診斷、療效判斷以及心腦血管病危險因素預(yù)測等方面發(fā)揮重要作用。開展室內(nèi)質(zhì)控,質(zhì)控品的選擇尤其重要。目前,商業(yè)化的血脂質(zhì)控品已經(jīng)有多個品牌,但多數(shù)在脂蛋白(a)[lipoprotein(a),Lp(a)]數(shù)值上達(dá)不到異常值要求,國內(nèi)關(guān)于自制血脂質(zhì)控品的報道較少。本研究用體檢健康者混合血清通過聚乙二醇(PEG)沉淀脂蛋白方法[1]制備異常值質(zhì)控品,取得較為滿意結(jié)果,報道如下。

1 材料和方法

1.1主要儀器和試劑 邁瑞B(yǎng)S450全自動生化分析儀及配套高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、載脂蛋白A1(apoA1)、載脂蛋白B(apoB)、Lp(a)試劑盒購自深圳邁瑞公司。聚乙二醇6000(PEG6000)、海藻糖(羅恩試劑公司),0.2 mol/L pH 7.38磷酸鹽緩沖液,牛血清清蛋白(新西蘭Prollat公司),葡萄糖(成都科隆化學(xué)品公司),Proclin 300防腐劑(美國Sigma公司)。

1.2材料來源 收集中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊第904醫(yī)院醫(yī)院健康體檢中心體檢健康者血清標(biāo)本,混勻,人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體、丙型肝炎病毒(HCV)抗體、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)均陰性。

1.3制備方法 (1)混合血清400 mL中加PEG6000 32 g,充分溶解混勻后4 ℃放置24 h,800×g離心30 min,棄上清液,向沉淀中加入生理鹽水40 mL,震蕩混勻使沉淀溶解,即成濃縮質(zhì)控液。(2)依據(jù)濃縮質(zhì)控液中濃度與健康人血清混合而成水平2作為異常值質(zhì)控品,水平1質(zhì)控為健康人混合血清。向配制好的質(zhì)控液中加入5%～10%海藻糖、質(zhì)控液體積1/10的0.2 mol/L pH 7.38磷酸鹽緩沖液、0.01% Proclin 300,分裝后于-20 ℃低溫保存。

1.4評價方法 參考文獻(xiàn)[2]評價瓶間均勻性、復(fù)融開瓶穩(wěn)定性、長期保存穩(wěn)定性等質(zhì)控品性能指標(biāo)。

2 實驗與結(jié)果

2.1混合血清經(jīng)PEG沉淀前、后血脂檢測結(jié)果 PEG處理前的原混合血清可以用于水平1質(zhì)控,濃縮血清與原混合血清1∶1混合,加入適量甘油得到異常值質(zhì)控(水平2),結(jié)果見表1。

表1 混合血清經(jīng)PEG沉淀處理前后結(jié)果

表2 復(fù)融開瓶穩(wěn)定性

2.4長期保存穩(wěn)定性 分別于第2、4、6、8、10、11、12個月隨機(jī)抽取1瓶放置-20 ℃保存的質(zhì)控品,復(fù)融后分別測定各項目3次,經(jīng)F檢驗,F值均<1.0,P值均大于0.05,長期保存的質(zhì)控品變化趨勢差異無統(tǒng)計學(xué)意義,穩(wěn)定性滿足要求。

3 討論

目前國內(nèi)實驗室開展血脂質(zhì)控大多使用商品化質(zhì)控品,但在眾多商品化質(zhì)控品中,多個品牌異常水平值達(dá)不到要求,尤其Lp(a),大多<300 mg/L,達(dá)不到異常值要求。國內(nèi)關(guān)于自制血脂質(zhì)控品的報道較少,唐立萍等[3]報道了自制血脂復(fù)合質(zhì)控品的方法,其制備的過程是向健康人血清中加入apoA1、apoB、HDL-C、LDL-C、TC、TG,此法雖然簡單,但加入的成分價格昂貴,且此質(zhì)控品中不含Lp(a)。制作異常血脂質(zhì)控品最好的方法是通過超速離心分離脂蛋白,然后再將其加入健康人血清中,但該法需要昂貴的超速離心機(jī)設(shè)備,在大多數(shù)醫(yī)院很難完成。本研究依據(jù)PEG分離沉淀脂蛋白的原理[1],利用實驗室體檢健康者混合血清制備異常值血脂復(fù)合質(zhì)控品,不需要特殊儀器設(shè)備即可以獲得各項血脂指標(biāo)異常值,但由于是利用PEG沉淀脂蛋白,由此得到的TG結(jié)果通常在2.0～3.0 mmol/L之間,為了得到較高的TG結(jié)果,本研究在異常值質(zhì)控中加入適量甘油,測定TG的試劑盒通常分為去甘油和不去甘油法,但目前國內(nèi)使用試劑盒大多為不去甘油法,需要注意的是對于去甘油檢測試劑盒,測定結(jié)果通常會在異常值的臨界點,也是可以滿足質(zhì)控品要求的。

質(zhì)控品的質(zhì)量性能評價指標(biāo)主要有瓶間均勻性、開瓶穩(wěn)定性和長期儲存穩(wěn)定性,應(yīng)用《生化分析儀用質(zhì)控物》國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[2]對自制血脂復(fù)合質(zhì)控品相關(guān)性能指標(biāo)進(jìn)行評價,結(jié)果表明,瓶間均勻性完全滿足技術(shù)指標(biāo)要求,開瓶復(fù)融后放置4～8 ℃保存,各成分至少穩(wěn)定14 d,長期穩(wěn)定性驗證結(jié)果表明,自制質(zhì)控品放置-20 ℃冰凍保存可以穩(wěn)定12個月。

利用臨床血清標(biāo)本制備血脂復(fù)合質(zhì)控品,標(biāo)本易得、方法簡單、成本低廉,各項性能指標(biāo)完全滿足要求,不僅為臨床自制血脂質(zhì)控品提供一個新的方法,同時也為質(zhì)控品研發(fā)、生產(chǎn)提供一個新的思路。

本研究的主要目的是制備可以滿足自身實驗室開展室內(nèi)質(zhì)控的質(zhì)控品,存在的不足之處是未進(jìn)行不同檢測系統(tǒng)的結(jié)果進(jìn)行比較,通過此法制備的異常值質(zhì)控品是否存在基質(zhì)效應(yīng)問題有待今后做進(jìn)一步研究評價。