三種類型血液樣本維生素AE檢測(cè)結(jié)果一致性評(píng)價(jià)

賈永娟,劉杏立,劉春冉,倪君君(北京和合醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)股份有限公司研究院,北京 100011)

維生素AE是人體必需的微量營(yíng)養(yǎng)元素,在機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育過程中發(fā)揮著重要作用[1]。研究表明,維生素AE水平與機(jī)體免疫狀態(tài)密切相關(guān),維生素AE缺乏會(huì)導(dǎo)致兒童免疫功能下降,增加疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[2-4]。因此,進(jìn)行維生素AE水平測(cè)定,對(duì)于指導(dǎo)兒童合理補(bǔ)充維生素具有現(xiàn)實(shí)意義。目前臨床實(shí)驗(yàn)室常使用液相色譜、質(zhì)譜檢測(cè)外周血中維生素AE水平,主要基質(zhì)類型為血清或血漿,然而關(guān)于創(chuàng)傷性更小的指尖血的研究較少[5-6]。本研究探討靜脈血清、靜脈血漿與指尖血3種不同類型基質(zhì)維生素AE測(cè)定結(jié)果的一致性,旨在為臨床取樣提供參考。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象 征集43名健康志愿者,男性20例,女性23例,年齡在24～56周歲之間,隔夜禁食至少8 h后,分別采集指尖血,EDTA-K2抗凝,離心獲取血漿50 μL;采集時(shí)靜脈血,分別用EDTA-K2抗凝和不抗凝,離心分別獲得血漿和血清各1 mL,室溫避光放置,2 h內(nèi)完成樣本處理。全部志愿者均對(duì)本次研究?jī)?nèi)容知情同意。所有樣本由北京和合醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)公司中心實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一檢測(cè)。

1.2儀器與試劑 島津LC-20A高效液相色譜,RF-20A熒光檢測(cè)器(日本島津公司);多管渦旋混合器(北京踏錦公司);離心機(jī)(德國(guó)Sigma公司);氮?dú)獯祾邇x(杭州奧盛公司)。維生素A標(biāo)準(zhǔn)品(100 mg/L)、維生素E標(biāo)準(zhǔn)品(1 000 mg/L)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,蒸餾水,無水乙醇(色譜純,天津光復(fù)公司),正己烷(色譜純,法國(guó)Cleman公司),甲醇(色譜純,德國(guó)默克公司)。

2 結(jié)果

2.1不同基質(zhì)維生素AE水平 三種基質(zhì)中維生素AE的檢測(cè)結(jié)果見表1。單因素方差分析結(jié)果顯示,三種基質(zhì)中維生素AE檢測(cè)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 三種基質(zhì)中維生素AE的檢測(cè)結(jié)果

三種基質(zhì)中維生素AE檢測(cè)結(jié)果的偏差見表2。各組偏差均值、中位數(shù)及第25百分位數(shù)與第75百分位數(shù)均在15%允許誤差內(nèi),表明三種基質(zhì)中維生素AE檢測(cè)結(jié)果具有一致性。

表2 三種基質(zhì)檢測(cè)維生素AE結(jié)果的偏差(%)

3 討論

維生素是機(jī)體維持生命活動(dòng)所必需的微量營(yíng)養(yǎng)元素。維生素A在維持視覺系統(tǒng)正常功能、保持上皮細(xì)胞及黏膜結(jié)構(gòu)的完整性、參與鐵代謝、促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育和增強(qiáng)免疫功能中都占據(jù)重要地位[2,8]。維生素E能消除體內(nèi)自由基,具有抗氧化、維持生育和調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等諸多生物學(xué)功能[9]。維生素AE不能在體內(nèi)合成,需經(jīng)膳食攝取,兒童如存在偏食、挑食等飲食結(jié)構(gòu)問題,易出現(xiàn)維生素AE缺乏[10]。研究表明,全球約有1.9億學(xué)齡前兒童存在維生素A缺乏[11]。維生素AE水平與機(jī)體的免疫狀態(tài)有密切關(guān)系,其缺乏可導(dǎo)致兒童的免疫力下降,引發(fā)貧血、反復(fù)呼吸道感染等疾病[12-13]。因此,進(jìn)行人體維生素AE檢測(cè),能夠?qū)ζ渚S生素營(yíng)養(yǎng)狀況進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估,指導(dǎo)兒童合理膳食、優(yōu)化營(yíng)養(yǎng)攝入,對(duì)于預(yù)防兒童營(yíng)養(yǎng)缺乏及相關(guān)疾病的發(fā)生具有重要作用。

研究顯示,不同基質(zhì)類型與采血條件會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生一定的影響[14]。為確保檢驗(yàn)質(zhì)量,選擇合適的采血方式非常關(guān)鍵。目前,臨床檢測(cè)多采用肘部靜脈采血,使用真空密封采血管,可避免發(fā)生污染,但其采血量相對(duì)較大,對(duì)采血技術(shù)要求較高,嬰幼兒及兒童在采血過程中配合度較差,且嬰幼兒及兒童靜脈血管較細(xì),易發(fā)生穿刺失敗[15]。指尖血的采集方便快捷,對(duì)某些特殊人群,如嬰幼兒等,是更為適宜的采血方式[16]。但末梢采血易受到外界環(huán)境、擠壓等因素影響,臨床對(duì)于末梢采血的檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度仍存在一定爭(zhēng)議。

Colak等[17]與van der Vorm等[18]對(duì)血清與血漿中25羥基維生素D水平進(jìn)行了比較,結(jié)果均表明兩者之間沒有差異。此外,Nishiumi等[19]使用非靶向蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)方法比較靜脈和指尖血漿中的蛋白質(zhì)和代謝物發(fā)現(xiàn),可以使用指尖血漿來測(cè)量血漿蛋白和代謝物水平。Iwasawa等[20]研發(fā)了新型微量血液采集設(shè)備,并對(duì)指尖和靜脈血中的14項(xiàng)生化參數(shù)進(jìn)行了比較,在14個(gè)生化參數(shù)中普遍觀察到指尖血與常規(guī)靜脈血間良好的相關(guān)性。本研究采用高效液相色譜方法對(duì)靜脈血清、靜脈血漿、指尖血中的維生素AE水平進(jìn)行分析,結(jié)果顯示,3種類型基質(zhì)中維生素AE測(cè)定結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與之前的研究結(jié)果一致[17-20]。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)維生素AE時(shí),樣本類型可以選擇靜脈血清、靜脈血漿和指尖血中的任一樣本類型,均能獲得準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)結(jié)果。臨床上可根據(jù)患者需求以及實(shí)際情況選擇合適的血液樣本采集方式。

維生素AE的參考區(qū)間分別為0.3～0.7 mg/L與5～20 mg/L,低于參考區(qū)間標(biāo)準(zhǔn)判斷為維生素AE缺乏,高于參考區(qū)間標(biāo)準(zhǔn)判斷為維生素AE過量[21]。結(jié)果顯示不同水平維生素AE在不同基質(zhì)中的偏差均<15%,表明三種基質(zhì)中維生素AE檢測(cè)結(jié)果具有一致性。此外,結(jié)果顯示血漿和末梢血中維生素E結(jié)果平均偏差較小(1.3%),而血清結(jié)果高于血漿和末梢血,較血漿中高3.0%,較末梢血高4.2%,但結(jié)合臨床允許誤差與該檢測(cè)方法的正確度及精密度,認(rèn)為三種基質(zhì)中維生素E水平無明顯偏差。分析原因發(fā)現(xiàn),血清與血漿中維生素E檢測(cè)結(jié)果偏差為1.4%(0.6%,4.3%),血清與指尖血維生素E檢測(cè)結(jié)果偏差為0.3%(-0.4%,7.1%),偏差較小,但平均偏差稍高,可能原因是隨機(jī)誤差導(dǎo)致個(gè)別樣本間偏差較大,從而導(dǎo)致平均偏差增大。查看數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),43組血清與血漿樣品檢測(cè)結(jié)果中,有2組樣本偏差較大,在12.7%～13.6%之間,其余樣品的平均偏差為2.5%;而43組血清與末梢血樣品檢測(cè)結(jié)果中,有5組樣本偏差較大,在16.2%～23.6%之間,其余樣品的平均偏差為2.1%,表明平均偏差較大為個(gè)別樣本偏差較大導(dǎo)致。

本研究存在一定的局限性,研究采用的樣本為來自24～56歲健康人群,數(shù)量較少,結(jié)論可能會(huì)存在偏差,因此本研究的結(jié)論還需要更多樣本量,在不同人群中進(jìn)一步驗(yàn)證。此外,血液標(biāo)本采集影響因素較多,餐前餐后、采集后樣本的保存條件等,均可能會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響,在此方面仍需進(jìn)行深入研究,以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。