VITROS XT 3400生化分析系統(tǒng)測(cè)定8種新型復(fù)合干片項(xiàng)目的性能驗(yàn)證*

于正麟,王扣瓊,王蓓麗,2,潘柏申,2,郭瑋,2(.復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗(yàn)科,上海 200032;2.復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院廈門醫(yī)院檢驗(yàn)科,福建廈門 3605)

干式生化分析儀具有運(yùn)行穩(wěn)定、檢測(cè)高效、標(biāo)本用量少、低需保養(yǎng)和無需供排水等優(yōu)點(diǎn),是各大醫(yī)院急診檢驗(yàn)常用的生化檢測(cè)設(shè)備。目前,美國Ortho公司推出了新一代VITROS XT 3400全自動(dòng)干式生化分析儀(以下簡(jiǎn)稱“VITROS XT 3400”),其配置了全新LED光源、數(shù)字反射光度計(jì),并且系統(tǒng)采用了創(chuàng)新的復(fù)合干片技術(shù),通過將兩種生化檢測(cè)試劑固化在一張干片上,在保留傳統(tǒng)干式生化分析儀優(yōu)點(diǎn)的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步提升檢測(cè)效率。但是,至今未有關(guān)于VITROS XT 3400的臨床性能和應(yīng)用評(píng)估報(bào)道。本研究根據(jù)國家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì)(China National Accreditation Service for Conformity Assessment,CNAS)和美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(The Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)的文件要求[1-7],首次對(duì)該系統(tǒng)的復(fù)合干片項(xiàng)目進(jìn)行正確度、精密度、線性范圍、參考區(qū)間、抗干擾及方法學(xué)比對(duì)性能驗(yàn)證,旨在進(jìn)一步滿足急診檢驗(yàn)“快準(zhǔn)穩(wěn)”的臨床需求并為VITROS XT 3400全面質(zhì)量管理提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1標(biāo)本來源 選取復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院急診科和體檢中心就診的患者及體檢健康者標(biāo)本共76例,其中16例標(biāo)本用于線性范圍驗(yàn)證,40例標(biāo)本用于參考區(qū)間驗(yàn)證和抗干擾實(shí)驗(yàn),20例標(biāo)本用于方法學(xué)比對(duì)。使用含促凝劑的惰性分離膠真空采血管采集靜脈血5 mL,靜置30 min后4 ℃ 1 500×g離心10 min上機(jī)檢測(cè)。所有檢測(cè)標(biāo)本均為無溶血、黃疸、脂血的臨床剩余血清。

正確度測(cè)定樣品為國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心(National Center for Clinical Laboratories,NCCL)5個(gè)水平的2022年第1次室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(external quality assessment,EQA)樣品。精密度測(cè)定樣品為高、低兩個(gè)水平的廠商質(zhì)控品(批號(hào)D5955、C8811)。測(cè)定前均分裝凍存。抗干擾實(shí)驗(yàn)使用日本希森美康公司干擾檢查A試劑盒,批號(hào)為ZR1504,試劑盒中包括結(jié)合膽紅素(膽紅素-C)、未結(jié)合膽紅素(膽紅素-F)、乳糜和血紅蛋白4種干擾物質(zhì)。

1.2儀器與試劑 Ortho VITROS XT 3400、Ortho VITROS 4600全自動(dòng)生化分析儀(以下簡(jiǎn)稱“VITROS 4600”);VITROS XT 3400使用復(fù)合干片清蛋白(Alb)-總蛋白(TP)(批號(hào)691600116321)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)-丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)(批號(hào)661300114405)、肌酐(Cr)-尿素(Urea)(批號(hào)721300096401)、三酰甘油(TG)-總膽固醇(TC)(批號(hào)681300094645)及配套質(zhì)控品。VITROS 4600使用普通干片Alb(批號(hào)093433823124)、TP(批號(hào)061232802142)、AST(批號(hào)732834065271)、ALT(批號(hào)560632314254)、Cr(批號(hào)153935141551)、Urea(批號(hào)013134492035)及配套質(zhì)控品。

1.3方法

1.3.4參考區(qū)間驗(yàn)證 參考CLSI C28-A3c[5]文件,隨機(jī)選取本院體檢中心18～65歲、男女例數(shù)大致相等、無基礎(chǔ)疾病且表觀健康的體檢健康者血液標(biāo)本20例,20例標(biāo)本中不超過2例(10%)的檢測(cè)值在預(yù)設(shè)的參考區(qū)間之外,判定為合格。

1.3.5抗干擾實(shí)驗(yàn) 參考CLSI EP7-A2[6]文件,混勻2.7 mL健康體檢者的新鮮標(biāo)本和試劑盒空白/干擾物質(zhì)0.3 mL作為樣品A/B,按以下比例混合:4B,3B+1A,2B+2A,B+3A,4A。每份混合樣品測(cè)定5次取均值,記錄結(jié)果,計(jì)算混合樣品與樣品A的相對(duì)差值(%)并進(jìn)行點(diǎn)對(duì)點(diǎn)線段擬合,參考既往研究[8]及廠商標(biāo)準(zhǔn),以10%相對(duì)偏差為臨床有意義臨界點(diǎn)。

1.3.6方法學(xué)比對(duì) 參考CNAS-GL047[7]文件,選取盡量覆蓋比較項(xiàng)目范圍的標(biāo)本20例且標(biāo)本范圍需涵蓋所比對(duì)項(xiàng)目的醫(yī)學(xué)決定水平,結(jié)果正常標(biāo)本占40%～60%,結(jié)果異常標(biāo)本占40%～60%。測(cè)定2次取均值,計(jì)算兩種不同方法的檢測(cè)偏倚。要求20例樣本中,至少90%樣本測(cè)量的偏差小于TEa。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。數(shù)據(jù)處理過程中不對(duì)中間結(jié)果做修約處理。

2 結(jié)果

2.1正確度驗(yàn)證 正確度驗(yàn)證結(jié)果見表1,Alb水平Ⅳ、TP水平Ⅲ和水平Ⅴ、AST水平Ⅳ、Cr水平Ⅲ和水平Ⅴ、TC水平Ⅱ、TG 5個(gè)水平的檢測(cè)均值均在VI的范圍內(nèi),其余檢測(cè)結(jié)果的偏差均≤1/2TEa,正確度驗(yàn)證符合要求。

表1 VITROS XT 3400正確度驗(yàn)證結(jié)果

2.2精密度驗(yàn)證 精密度驗(yàn)證結(jié)果見表2, 8種復(fù)合干片檢測(cè)項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)均在1.66%以下,符合實(shí)驗(yàn)室允許的精密度質(zhì)量要求。

表2 VITROS XT 3400精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.3線性范圍驗(yàn)證 8種復(fù)合干片項(xiàng)目線性范圍驗(yàn)證結(jié)果如表3所示,所有項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果的線性偏差90%CI均與1/2TEa相交,證明項(xiàng)目在廠商聲明的范圍內(nèi)線性良好。

表3 VITROS XT 3400線性范圍驗(yàn)證結(jié)果

2.4參考區(qū)間驗(yàn)證 8種復(fù)合干片檢測(cè)項(xiàng)目的參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果如表4所示,所有項(xiàng)目符合率均大于90%,參考區(qū)間驗(yàn)證通過。

表4 VITROS XT 3400參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

表5 VITROS XT 3400和VITROS 4600結(jié)果比對(duì)

2.5抗干擾實(shí)驗(yàn) 結(jié)果見圖1,以10%檢測(cè)偏差作為有臨床意義的標(biāo)準(zhǔn)[8],擬合得到Alb和TP添加的血紅蛋白濃度為286.76 mg/dL和207.84 mg/dL。說明書聲明血紅蛋白在200 mg/dL時(shí),Alb和TP的相對(duì)偏差分別為13%和9%,與廠商聲明相符合。ALT和AST易受溶血干擾,在臨床檢測(cè)中應(yīng)避免使用溶血標(biāo)本。乳糜不計(jì)入對(duì)TG干擾。其余干擾物質(zhì)對(duì)復(fù)合干片造成的相對(duì)偏差均在10%內(nèi)。

圖1 VITROS XT 3400抗干擾試驗(yàn)結(jié)果

2.6方法學(xué)比對(duì) 相關(guān)性分析顯示,裝載在VITROS XT 3400上的復(fù)合干片與裝載于VITROS 4600的干片的相關(guān)性良好,20例標(biāo)本中100%的結(jié)果都在TEa范圍內(nèi),兩系統(tǒng)之間的偏倚可接受。

3 討論

干化學(xué)技術(shù)的原理是將檢測(cè)所需的試劑固化于特定的固相載體上,以待檢樣品中的液體作為反應(yīng)介質(zhì)與載體上的試劑進(jìn)行反應(yīng)。當(dāng)干片的厚度、光吸收系數(shù)和散射系數(shù)不變時(shí),光源照射在反應(yīng)區(qū)的反射率與待測(cè)物的濃度成正比,從而可以通過檢測(cè)反射率的大小計(jì)算出待測(cè)物的濃度。傳統(tǒng)的生化檢測(cè)儀主要以鹵素?zé)艉碗療魹橹?當(dāng)其使用時(shí)間接近或達(dá)到預(yù)期使用壽命時(shí),發(fā)出的光強(qiáng)會(huì)發(fā)生能量衰減,進(jìn)而影響到儀器檢測(cè)結(jié)果。而急診檢驗(yàn)報(bào)告能及時(shí)提示臨床患者的病情變化,檢驗(yàn)質(zhì)量和效率顯得尤為重要。VITROS XT 3400配置了LED光源,使用壽命在6～10萬小時(shí),高于傳統(tǒng)光源的7 000小時(shí),且具有穩(wěn)定、低功耗、維護(hù)成本低、安全性高的優(yōu)點(diǎn),穩(wěn)定的光強(qiáng)能大幅減少光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)帶來的系統(tǒng)誤差,提高整個(gè)儀器測(cè)量的正確度和精密度。

本研究參考國家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、CLSI和CNAS系列指南文件[1-6]對(duì)VITROS XT 3400及配套復(fù)合干片試劑Alb-TP、AST-ALT、Cr-Urea和TG-TC進(jìn)行性能驗(yàn)證。本研究使用EQA樣品驗(yàn)證正確度,結(jié)果顯示,檢測(cè)均值均在VI的范圍內(nèi)或檢測(cè)偏差小于等于1/2TEa,檢測(cè)正確度良好。精密度驗(yàn)證結(jié)果顯示,8種復(fù)合干片實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)均符合實(shí)驗(yàn)室要求,相比于VITROS 4600,精密度有所提升[9]。所有項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果的線性偏差90%CI均與1/2TEa相交,線性范圍驗(yàn)證通過。參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果顯示,Alb、TP、TG和TC各20例表觀健康者,AST、ALT、Cr和Urea男女各20例表觀健康者,所有項(xiàng)目均有90%以上的檢測(cè)結(jié)果位于廠家說明書提供的參考區(qū)間內(nèi),表明可以沿用廠家聲明的參考區(qū)間。

由于干化學(xué)與濕化學(xué)方法之間的檢測(cè)原理不同:濕化學(xué)遵循朗伯比爾定律,采用透射光度法,濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線為直線;干化學(xué)采用的是反射光度法,濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線為對(duì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線[10]。此外,同一檢測(cè)項(xiàng)目干濕方法溯源到的參考方法和參考物質(zhì)也不盡相同?；谝陨蟽牲c(diǎn),本研究的方法學(xué)比對(duì)試驗(yàn)選用了同為干化學(xué)檢測(cè)方法的VITROS 4600和VITROS XT 3400,而沒有選擇傳統(tǒng)的濕化學(xué)生化檢測(cè)儀。結(jié)果顯示,兩臺(tái)儀器之間的相關(guān)性良好,20例標(biāo)本中,所有檢測(cè)結(jié)果都在允許的偏差范圍內(nèi)。臨床標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果與VITROS 4600一致性較好,證明VITROS XT 3400可在日常臨床工作中使用。

多層涂膜結(jié)構(gòu)的高分子膜結(jié)構(gòu)具有優(yōu)秀的抗干擾能力,能將溶血、脂血、黃疸和異常蛋白的影響降至更低[11]。此外,VITROS XT 3400還增加了數(shù)字反射光度計(jì),能進(jìn)一步降低異常物質(zhì)的干擾。本研究顯示,以10%檢測(cè)偏差作為有臨床意義的標(biāo)準(zhǔn)[7],不計(jì)乳糜對(duì)TG的影響,TG、TC、Cr和Urea添加干擾物后偏差較小,均在10%的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)。TP和Alb添加血紅蛋白干擾物的偏差與說明書聲明范圍相符合。ALT、AST項(xiàng)目易受溶血干擾,臨床上應(yīng)避免使用溶血標(biāo)本檢測(cè)或提示臨床結(jié)果受溶血影響[12]。需要注意的是,本研究具有一定的局限性,試驗(yàn)中添加的是外源性干擾物質(zhì),在臨床應(yīng)用中還要與實(shí)際情況結(jié)合,判斷檢測(cè)結(jié)果是否受血清內(nèi)源性干擾物質(zhì)影響。