塞內(nèi)卡病毒病及其防控

文│金雪蕾（山東省博興縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心）

高凱（山東省博興縣龐家鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站）

A型塞內(nèi)卡病毒是2002年培養(yǎng)腺病毒5型載體時(shí)偶然發(fā)現(xiàn)的，當(dāng)時(shí)被命名為Seneca Valley病毒001。病毒名字來源于Seneca Creek州立公園，靠近發(fā)現(xiàn)病毒的實(shí)驗(yàn)室Neotropix，Inc.?？赡苁峭ㄟ^胎牛血清或豬胰蛋白酶引入細(xì)胞培養(yǎng)的，后者被認(rèn)為更有可能。對Seneca Valley病毒001的主要研究是將其作為一種溶瘤病毒用于治療不同類型的人類癌癥，Seneca Valley病毒001在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域被稱為NTX-010。

豬特發(fā)性水皰?。╬orcine idiopathic vesicular disease）被用來指代罕見的病例，豬的皮膚、鼻子、口腔和冠狀動(dòng)脈帶上出現(xiàn)侵蝕和水皰，病因不明。這種病例已在全世界被廣泛報(bào)道，包括美國、澳大利亞、新西蘭和意大利等。經(jīng)調(diào)查，排除了常見水皰性疾病，如口蹄疫、水皰性口腔炎和水皰性皮疹等。來自加拿大和美國的研究表明，塞內(nèi)卡病可能與豬特發(fā)性水皰病有關(guān)。感染塞內(nèi)卡病毒的母豬和育肥豬主要在鼻子和冠狀動(dòng)脈帶上出現(xiàn)皮膚囊泡病變。

一、分子特征

塞內(nèi)卡病毒具有Picornaviridae科病毒共有的一些特征，病毒粒子直徑約為25～30納米，呈二十面體對稱的無包膜衣殼，基因大小約為7.3kb，為線性單鏈RNA基因組。塞內(nèi)卡病毒基因組在5’UTR部分有666個(gè)核苷酸，在3’UTR部分有71個(gè)核苷酸，還有一個(gè)poly（A）尾。塞內(nèi)卡病毒基因組有一個(gè)大的單一開放閱讀框，編碼約2180個(gè)氨基酸的蛋白。多蛋白遵循Picornaviridae科病毒基因組標(biāo)準(zhǔn)的L-4-3-4布局，并通過病毒編碼的蛋白酶加工成成熟的蛋白。塞內(nèi)卡病毒基因組由前導(dǎo)蛋白（L肽）和3個(gè)主要蛋白區(qū)組成，被命名為P1區(qū)、P2區(qū)和P3區(qū)。與同樣含有L肽的Cardiovirus、Apothovirus、Erbovirus、Kobuvirus、Teschovirus和Sapelovirus屬病毒不同，塞內(nèi)卡病毒的L肽可能具有獨(dú)特的功能，尚待確定。P1區(qū)被切割成結(jié)構(gòu)多肽VP0、VP3和VP1，它們構(gòu)成病毒衣殼；位于VP0內(nèi)的成熟位點(diǎn)產(chǎn)生VP2和VP4多肽；VP1、VP2和VP3分別在病毒衣殼的外表面表達(dá)，而VP4位于其內(nèi)表面。P2和P3基因組區(qū)編碼參與蛋白質(zhì)加工的非結(jié)構(gòu)多肽（2Apro、3Cpro和3CDpro）與病毒復(fù)制有關(guān)的非結(jié)構(gòu)多肽（2B、2C、3AB、3BVPg、3CDpro和3Dpol）。P2區(qū)包括2A、2B和2C，2A蛋白是一種由9個(gè)氨基酸組成的短肽；2B蛋白的一級(jí)序列與所有其他已知的Picornaviridae科病毒不同，可能在增強(qiáng)膜通透性方面發(fā)揮作用，其作用類似于病毒通道蛋白；2C蛋白是一種參與RNA合成的解旋酶樣多肽。P3區(qū)包括3A、3B、3C和3D多肽，3A的功能尚不清楚，3B區(qū)編碼蛋白的作用類似于病毒RNA合成的引物，3C是一種蛋白酶，3D多肽是RNA依賴性RNA聚合酶的主要成分。

二、發(fā)病表現(xiàn)和宿主免疫反應(yīng)

研究人員分別在9周齡和4個(gè)月齡的豬身上使用A型塞內(nèi)卡病毒株進(jìn)行實(shí)驗(yàn)感染，結(jié)果顯示了塞內(nèi)卡病毒與豬水皰病存在明確關(guān)聯(lián)。在這兩項(xiàng)研究中，A型塞內(nèi)卡病毒的潛伏期為4～5天，扁桃體被認(rèn)為是感染急性期塞內(nèi)卡病毒復(fù)制的主要部位之一。病毒血癥期短，持續(xù)約7天，在接種后第三天血清中塞內(nèi)卡病毒載量達(dá)到峰值。接種病毒的豬在鼻子、嘴唇、舌頭和蹄，特別是在冠狀動(dòng)脈帶和趾間間隙出現(xiàn)水皰樣病變，其他臨床表現(xiàn)包括發(fā)熱、嗜睡、跛行和厭食。水皰性病變最初表現(xiàn)為變白的腫脹區(qū)域，后來發(fā)展為囊泡，囊泡迅速破裂，形成潰瘍，潰瘍可能被血清纖維蛋白滲出物覆蓋。與其他水皰性疾病一樣，潰瘍一般在7天內(nèi)開始修復(fù)，上皮細(xì)胞的再生通常在2周內(nèi)完成。短暫的厭食、發(fā)熱和跛行一般出現(xiàn)在水皰性病變之前。

實(shí)驗(yàn)感染豬的組織剖驗(yàn)后可見扁桃體、脾、淋巴結(jié)和肺部病變，包括淋巴組織中的輕度至中度淋巴增生，偶爾伴有彌漫性充血，肺部有淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的多灶性輕微血管周圍積聚。在疾病的急性期，在肺、縱隔和腸系膜淋巴結(jié)、肝、脾、小腸和大腸以及扁桃體中廣泛存在病毒RNA和感染性顆粒。除肺、心臟和肝外，康復(fù)豬的不同器官中的塞內(nèi)卡病毒核酸檢測均呈陽性，但在感染后期沒有從這些組織中分離出活的病毒。

塞內(nèi)卡病毒感染后可通過豬的口腔和鼻腔分泌物、糞便和尿液等排泄物進(jìn)行傳播，既可以通過同一豬舍中動(dòng)物之間的接觸直接傳播，也可以通過污染環(huán)境設(shè)施等進(jìn)行間接傳播。

在臨床上以及在實(shí)驗(yàn)室攻毒的育肥豬中，塞內(nèi)卡病毒A感染誘導(dǎo)早期免疫反應(yīng)?？贵w滴度的增加與疾病嚴(yán)重程度、組織中病毒載量、病毒血癥和病毒脫落同時(shí)發(fā)生。塞內(nèi)卡病毒A特異性免疫球蛋白（IgM）的最大濃度可持續(xù)約10天，特異性IgG反應(yīng)較晚，21天后才出現(xiàn)強(qiáng)烈的陽性反應(yīng)。

三、診斷

目前有多種檢測技術(shù)可用于診斷塞內(nèi)卡病毒感染。分子檢測技術(shù)尤其是qRT-PCR，是水皰病診斷的黃金標(biāo)準(zhǔn)，快速、敏感和特異，可從不同的生物樣本中檢測塞內(nèi)卡病毒基因組。通過分子檢測技術(shù)診斷的缺點(diǎn)是由于病毒感染的進(jìn)展不同而導(dǎo)致檢測結(jié)果不一致，不同生物樣品中的病毒載量存在差異。因此在實(shí)際檢測中，應(yīng)收集多種組織樣品，包括血清、扁桃體、糞便、口腔和膀胱液，通過分子檢測技術(shù)進(jìn)行塞內(nèi)卡病的篩查。A型塞內(nèi)卡病毒對上皮細(xì)胞有很強(qiáng)的嗜性，但也可以在其他組織中檢測到，包括心肌和腦干。

目前可用的其他診斷技術(shù)包括免疫組織化學(xué)和原位雜交，分別鑒定組織樣本中特定病毒抗原和核酸的檢測方法，這兩種技術(shù)都已被成功應(yīng)用。盡管單純的組織病理學(xué)評估對于塞內(nèi)卡病毒感染的診斷并不是最終的，但該技術(shù)的發(fā)現(xiàn)可以指導(dǎo)組織和器官樣本的選擇，再用于免疫組織化學(xué)和原位雜交確診。

可用于豬中塞內(nèi)卡病毒篩查的抗體檢測方法是間接和競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、免疫熒光法檢測和間接免疫熒光抗體試驗(yàn)?？贵w檢測方法的主要優(yōu)勢是能夠在大規(guī)模診斷計(jì)劃、流行病學(xué)研究和流行病學(xué)監(jiān)測中處理大批量樣本。

無論診斷方法如何，豬的塞內(nèi)卡病在臨床上與病毒性水皰感染，特別是和口蹄疫難以區(qū)。但總體而言，塞內(nèi)卡病毒感染的臨床表現(xiàn)比口蹄疫輕，很少觀察到發(fā)燒和跛行。

四、防控措施

目前還沒有針對塞內(nèi)卡病毒感染的疫苗或特效治療方法。因此，應(yīng)采取嚴(yán)格的生物安全措施避免將病原體引入豬群以及已確定感染的豬群，以避免不同病毒毒株在豬群中混合傳播。嚴(yán)格控制車輛、設(shè)備、人員、動(dòng)物和食物進(jìn)入生豬生產(chǎn)單位。在引入動(dòng)物的情況下，應(yīng)從沒有傳染源的地區(qū)和農(nóng)場購買豬，并在入群之前進(jìn)行隔離。其他措施包括控制老鼠和家蠅，并限制其他動(dòng)物進(jìn)入養(yǎng)殖區(qū)。

由A型塞內(nèi)卡病毒感染引起的臨床癥狀與口蹄疫癥狀非常相似，因此應(yīng)采取控制口蹄疫病毒傳播的控制措施和消毒方案。包括使用2%氫氧化鈉、2%乙酸、3%次氯酸鈉、酚類衍生物（4%對叔芳基氨基苯酚、10%鄰芐基對氯苯酚、12%鄰苯基苯酚）和季銨醛化合物（26%烷基二甲基芐基氯化銨、7%戊二醛）等。過氧化氫已被證明為廣譜消毒劑，可對抗細(xì)菌、真菌和病毒，對牛病毒性腹瀉病毒等Picornaviridae科病毒有良好的殺病毒活性，也被證明對口蹄疫病毒和塞內(nèi)卡病毒有效。

五、流行病學(xué)

塞內(nèi)卡病毒感染引起的疾病的發(fā)病率和死亡率與豬種類而異。在斷奶仔豬中的發(fā)病率約為0.5%～5%，在育肥豬和育種豬中的患病率約為5%～30%，在母豬的發(fā)病率明顯較高，但死亡率非常低（約為0.2%），豬在臨床癥狀緩解后很快就恢復(fù)了。新生豬的發(fā)病率和死亡率要高得多，尤其是1～4日齡的仔豬，發(fā)病率可達(dá)70%，死亡率在15%～30%之間。

當(dāng)豬群免疫力下降時(shí)，可能會(huì)在以前發(fā)病已恢復(fù)的豬群中引發(fā)新的疫情。充滿液體的囊泡和囊泡破裂的動(dòng)物與易感個(gè)體之間的直接接觸可能是病毒最重要的傳播途徑之一。人員進(jìn)出、用于運(yùn)送動(dòng)物尸體和飼料輸送的車輛、器具和設(shè)備，包括用于屠宰的裝備，被認(rèn)為是豬群感染塞內(nèi)卡病毒的途徑。從1～2日齡新生仔豬的不同組織和器官樣本中檢測到塞內(nèi)卡病毒，說明該病毒有垂直傳播的可能性，還需要進(jìn)一步的研究來證實(shí)這種傳播途徑。