高爾基體蛋白73在非酒精性脂肪性肝病中的應(yīng)用價值*

陳騰千，姜麗華，張生君，蔣義貴，羅 佳，胡永敏，尤麗財

福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明第一醫(yī)院消化內(nèi)科，福建 三明 365000

非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）是無明確肝損害因素，以肝脂肪變性且可纖維化進展的代謝應(yīng)激性肝病。近年來，隨著現(xiàn)代化的飲食結(jié)構(gòu)及工作生活方式的改變，NAFLD發(fā)病率在我國逐年上升，且趨于年輕化，引起嚴重的健康問題。NAFLD在過去很長的一段時間被認為是可以逆轉(zhuǎn)的，但目前研究發(fā)現(xiàn)，單純性脂肪肝、脂肪肝炎等NAFLD早期可逆性病變可隨診疾病逐漸纖維化進展至肝硬化直至原發(fā)性肝癌［1］。目前，國內(nèi)外常用超聲、CT 及肝臟穿刺活檢等診斷NAFLD。但超聲或CT 對早期的NAFLD診斷率較低，且受檢查者的水平影響較大，而肝臟穿刺活檢存在穿刺相關(guān)并發(fā)癥，患者較難接受，這種診斷方法存在局限性，當前著重于尋找一種安全有效的診斷方法。高爾基體蛋白73（GP73）是一種跨膜蛋白。近年來有研究［2-3］發(fā)現(xiàn)，GP73 在多種肝臟慢性疾病中出現(xiàn)明顯升高，且與損傷程度存在關(guān)聯(lián)，目前在診斷慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌等慢性肝臟疾病的應(yīng)用價值得到廣泛的認可，但GP73 在NAFLD 診斷中的應(yīng)用研究資料較少。本研究通過檢測NAFLD 患者及正常人群中的GP73，觀察GP73是否與NAFLD存在關(guān)聯(lián)，為GP73在NAFLD中的診斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月—8 月在福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明第一醫(yī)院消化內(nèi)科住院患者進行NAFLD 診斷標準及排除條件評估后入選的430 例患者作為研究對象，其中對照組280例（無脂肪肝患者），研究組150 例（NAFLD 患者）。研究組依據(jù)彩超脂肪程度分為中重度組（28例）和輕度組（122例）。對照組：男137例，女143例；年齡19～70歲，平均年齡（50.2±11.8）歲。研究組：男76 例，女74 例；年齡20～69 歲，平均年齡（50.4±11.2）歲。納入標準：根據(jù)《非酒精例性脂肪性肝病診療指南》［6］的NAFLD 診斷標準。（1）無明確脂肪肝病因。（2）無過量飲酒史（折合酒精量男性少于30 g/d，女性少于20 g/d）。（3）存在易患因素如女性及代謝相關(guān)性疾病（2 型糖尿病、體重超標等）。（4）可有轉(zhuǎn)氨酶升高，且升高以谷丙轉(zhuǎn)氨酶為主，可伴尿酸、r-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶和鐵蛋白等升高。（5）影像學(xué)檢查符合NAFLD 表現(xiàn)。排除標準：（1）存在重要臟器功能不全者。（2）年齡＞70周歲或＜18周歲。（3）有肝惡性腫瘤及全身其他惡性腫瘤、巨大肝囊腫或肝血管瘤等良性病變、肝葉手術(shù)切除。（4）有膽道梗阻或感染、全身其他嚴重感染。（5）哺乳或妊娠期。患者對本研究知情同意并簽署同意書，經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會審批通過。兩組患者一般資料具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法

觀察項目：比較對照組和研究組及輕度組和中重度組的BMI 和血清GP73、甘油三酯、膽固醇、空腹血糖水平及各組合并2 型糖尿病例數(shù)的差異。標本采集：采用真空白管收集研究對象靜脈血，1 h 內(nèi)運用離心機離心出血清，當天完成檢測。檢測方法：采用ROCHE P800 全自動生化分析儀及試劑測定血清甘油三酯、膽固醇、空腹血糖水平；采用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）法測定血清GP73水平。上海佰曄生物科技中心提供GP73 試劑盒，根據(jù)步驟檢測GP73。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗。計數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對照組患者BMI、血清GP73、甘油三酯、膽固醇、空腹血糖水平情況

研究組患者BMI、血清GP73、甘油三酯、膽固醇、空腹血糖水平高于對照組患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 研究組和對照組患者BMI、血清GP73、甘油三酯、膽固醇、空腹血糖水平情況（±s）

表1 研究組和對照組患者BMI、血清GP73、甘油三酯、膽固醇、空腹血糖水平情況（±s）

組別對照組（n=280）研究組（n=150）t值P值BMI（kg/m2）21.94±2.56 25.58±2.83 13.506＜0.05血清GP73（ng/mL）35.91±23.22 69.17±41.66 9.053＜0.05甘油三酯（mmol/L）1.30±0.76 2.03±1.42 5.860＜0.05膽固醇（mmol/L）4.48±0.95 4.76±1.00 2.872＜0.05空腹血糖（mmol/L）5.12±1.44 5.78±1.83 3.839＜0.05

2.2 輕度組和中重度組患者的BMI、血清GP73、甘油三酯、膽固醇、空腹血糖水平情況

輕度組和中重度組患者比較，中重度組的患者血清GP73 水平明顯高于輕度組患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 輕度組和中重度組患者的BMI、血清GP73、甘油三酯、膽固醇、空腹血糖水平情況（±s）

表2 輕度組和中重度組患者的BMI、血清GP73、甘油三酯、膽固醇、空腹血糖水平情況（±s）

組別輕度組（n=122）中重度組（n=28）t值P值BMI（kg/m2）25.59±2.79 25.53±3.05 0.106＞0.05血清GP73（ng/mL）57.30±30.15 120.89±45.76 9.046＜0.05甘油三酯（mmol/L）1.93±1.34 2.46±1.65 1.789＞0.05膽固醇（mmol/L）4.73±1.01 4.92±0.94 0.919＞0.05空腹血糖（mmol/L）5.65±1.49 6.32±2.85 1.196＞0.05

2.3 研究組和對照組患者2型糖尿病病例數(shù)情況

研究組合并2 型糖尿病病例數(shù)較對照組明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 研究組和對照組患者2型糖尿病病例數(shù)情況 例（%）

2.4 輕度組和中重度組患者2型糖尿病病例數(shù)情況

輕度組和中重度組患者合并2 型糖尿病病例數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表4。

表4 輕度組和中重度組患者2型糖尿病病例數(shù)情況 例（%）

3 討論

NAFLD是無明顯肝損害病因（包括酒精、病毒、藥物等），肝細胞脂肪變性超過5%的一類疾病。近年來，NAFLD的發(fā)病率在全球逐年上升且趨于年輕化，尤其在我國，已經(jīng)取代病毒性肝炎成為危害人民健康的第一大慢性肝?。?］。近期研究發(fā)現(xiàn)，NAFLD 常合并心腦血管疾病、代謝性腎病、甲狀腺功能障礙、2 型糖尿病、肥胖、骨質(zhì)疏松癥、脂肪代謝紊亂等代謝相關(guān)性疾?。?-9］，故2020 年國際專家組建議改名為代謝相關(guān)脂肪性肝病。隨著研究的深入，當前有許多證據(jù)發(fā)現(xiàn)NAFLD 的肝外并發(fā)癥的危害遠超肝臟本身疾病，其中NAFLD 患者死亡的第一病因是心腦血管疾病，其包括動脈粥樣硬化性血脂異常、肥胖、高血壓、胰島素抵抗、高尿酸血癥、促凝血因素、炎性細胞因子等危險因素［10-12］；另一個重要病因是2 型糖尿?。?3］，因胰島素抵抗可以加劇肝細胞脂肪變性［14］，促進肝纖維化及肝硬化的持續(xù)進展，并可增加胰島素樣生長因子表達而抑制細胞凋亡、刺激細胞增殖使肝細胞癌變風(fēng)險增加。

NAFLD可隨著肝纖維化進展由早期可逆性病變（脂肪肝、脂肪性肝炎）逐漸進展至晚期不可逆的狀態(tài)（肝硬化、肝癌）。因此，對于NAFLD 早期診斷評估對于疾病的預(yù)后進展，避免肝硬化及肝癌的發(fā)生具有重要的臨床價值。目前NAFLD 診斷主要依靠超聲或CT、肝臟穿刺活檢等檢查，但各自都存在局限性。超聲和CT 是臨床最常應(yīng)用的無創(chuàng)性檢查技術(shù)，可以明確脂肪浸潤的程度，但無法準確判斷肝纖維化的程度，尤其是早期纖維化容易漏診，且診為肝惡性腫瘤的誤診率升高［15］。肝臟穿刺活檢雖然目前在肝臟疾病診斷中普及，為NAFLD 診斷提供最有利的病理診斷依據(jù)，但屬于有創(chuàng)的檢查，存在檢查相關(guān)并發(fā)癥，且可能因標本量少需多次穿刺活檢，較多患者不愿接受，依從性差［16］。因此，當前許多脂肪肝領(lǐng)域?qū)＜揖铝ふ乙环N血清標志物作為肝纖維化的有效診斷方法。

GP73 是在2000 年由美國學(xué)者Kladney 等［17］在對急性成人巨細胞肝炎患者研究中在第9 號人染色體發(fā)現(xiàn)的一個具有401個氨基酸的跨膜糖蛋白。早期研究發(fā)現(xiàn)，GP73在人體的多種組織細胞中存在表達，但高表達主要存在于上皮細胞，且各組織差異巨大。有研究［18-20］發(fā)現(xiàn)，GP73 在正常肝組織肝細胞內(nèi)不表達，當肝組織發(fā)生自身免疫性肝炎、酒精性肝病、慢性乙型病毒性肝炎、肝癌等肝臟疾病時，GP73 水平出現(xiàn)明顯升高。有研究［21-23］發(fā)現(xiàn)，隨著肝纖維化的進展，GP73 在肝組織中表達增強，血清GP73 水平亦升高，故GP73 可以用于評估肝纖維化、肝硬化的程度及進展。同時，豐江岳等［22］最新研究發(fā)現(xiàn)，GP73 高表現(xiàn)可引起細胞代謝活動有關(guān)的信號通路紊亂，可能誘發(fā)NAFLD、糖尿病等疾病。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常人群比較，GP73 水平在NAFLD 患者明顯升高，且中重度NAFLD患者較輕度NAFLD 患者升高明顯。同時研究還發(fā)現(xiàn)，NAFLD患者BMI和血清甘油三酯、膽固醇、空腹血糖水平及合并2 型糖尿病例數(shù)較正常人群明顯升高，進一步證實了2型糖尿病、體重超標、高血脂是NAFLD發(fā)病的高危因素。

綜上所述，2 型糖尿病、體重超標、高血脂是NAFLD發(fā)病的高危因素。GP73 在NAFLD 患者中明顯高于無脂肪肝正常人群，且與脂肪肝嚴重程度有關(guān)，對NAFLD 的診斷及評估病情進展具有臨床應(yīng)用價值。