基于TGF-β1/Smad信號(hào)通路探討健脾化瘀湯抗肝硬化的療效和作用機(jī)制

張杭洲,朱巖潔,王菲,婁靜,徐嬌嬌,侯留法,趙雷

[河南省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院(河南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院) 肝膽脾胃科,河南 鄭州 450004]

乙肝肝硬化主要是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染所致,大部分進(jìn)展為肝硬化或終末期肝病[1]。乙肝肝硬化形成與肝細(xì)胞損傷有關(guān),纖維瘢痕組織增多,進(jìn)而造成肝臟彌漫性纖維化、再生結(jié)節(jié)形成[2]。臨床治療乙肝肝硬化主要以抗病毒、保肝及肝移植等為主,福富馬酸替諾福韋二吡呋酯是抗病毒藥物,可用于治療慢性乙肝,有效阻礙HBV逆轉(zhuǎn)錄過程,從而發(fā)揮抗病毒作用[3]。中醫(yī)認(rèn)為乙肝肝硬化與肝失疏泄、肝氣凝結(jié)、肝腎虧虛等有關(guān),治療當(dāng)以活血祛瘀、疏肝健脾為準(zhǔn)則,而健脾化瘀湯藥是經(jīng)典名方,治療該病效果確切。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor- β1,TGF-β1)/Smad信號(hào)通路與抗纖維化密切相關(guān),且中藥干預(yù)TGF-β1/Smad信號(hào)通路治療肝纖維化效果明確[4]。本研究基于TGF-β1/Smad信號(hào)通路探討健脾化瘀湯抗肝硬化的臨床療效。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2021年12月至2022年10月在河南省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院診治80例的乙肝肝硬化患者作為研究對(duì)象,按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和治療組,各40例。對(duì)照組:男25例,女15例;年齡25～68(49.44±7.84)歲;病程1～7(4.11±1.12)a。治療組:男29例,女11例;年齡 25～39(47.57±7.38)歲;病程1～7(4.34±1.01)a。兩組一般資料均衡可比(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

(1)納入標(biāo)準(zhǔn):西醫(yī)符合《慢性乙型肝炎防治指南(2019年版)》[5]診斷標(biāo)準(zhǔn);中醫(yī)符合《病毒性肝炎中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)》[6]診斷標(biāo)準(zhǔn);血清乙型肝炎表面抗原陽性或既往乙型肝炎表面抗原陽性>6個(gè)月;經(jīng)肝活檢病理確診存在肝硬化;處于代償期;無嚴(yán)重并發(fā)癥;患者及家屬對(duì)研究?jī)?nèi)容知情,簽署知情同意書。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):合并惡性腫瘤;酒精性或非酒精性肝炎、丙型肝炎、自身免疫性肝病、藥源性肝病等其他原因所致的肝硬化;有精神疾病;造血系統(tǒng)疾病;心、肝、腎功能障礙;近6個(gè)月內(nèi)接受免疫調(diào)節(jié)劑。

1.3 治療方法

(1)對(duì)照組接受常規(guī)保肝、降酶、退黃等基礎(chǔ)治療。口服富馬酸替諾福韋二吡呋酯膠囊(福建廣生堂藥業(yè),國(guó)藥準(zhǔn)字H20170005),每次0.3 g,每日1次,晚餐后服用。(2)治療組在對(duì)照組的基礎(chǔ)上接受健脾化瘀湯治療。湯藥組成:生白芍、生牡蠣各30 g,生麥芽、丹參、黨參、鱉甲各15 g,柴胡、雞內(nèi)金、枳殼、生白術(shù)、莪術(shù)、桃仁、土元各10 g,炙甘草6 g,水(1劑)煎煮為200 mL,分2次服用,每日1劑。治療6個(gè)月。

1.4 觀察指標(biāo)

(1)臨床療效[7]。顯效為臨床體征和癥狀消失,肝功能基本恢復(fù)正常,肝纖維化改善>50%;有效為體征與癥狀改善明顯,肝功能、肝纖維化有改善;無效為未達(dá)到以上標(biāo)準(zhǔn)。(2)中醫(yī)證候積分。食欲不振、倦怠乏力、胃脘脹滿、脅肋疼痛,分別計(jì)3分(重)、2分(中)、1分(輕)、0分(無)。(3)肝功能指標(biāo)。收集患者空腹靜脈血5 mL,使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)白蛋白(albumin,ALB)、總膽紅素(total bilirubin,TBIL)、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)。(4)肝纖維化指標(biāo)。兩組空腹靜脈血經(jīng)離心后,采用放射免疫法檢測(cè)Ⅲ型前膠原(procollagen type Ⅲ,PCⅢ)、Ⅳ膠原蛋白(Ⅳ type collagen,Ⅳ-C)、透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)。(5)肝硬度。采用肝臟瞬時(shí)彈性檢測(cè)儀檢測(cè)。(6)TGF-β1/Smad信號(hào)通路相關(guān)mRNA。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè),使用TRIzo試劑盒提取各組血清總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,使用SYBR Green PCR Master Mix試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),以2-△△Ct法計(jì)算TGF-β1、Smad3、Smad5 mRNA水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 臨床療效

治療組臨床總有效率高于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組臨床療效比較(n,%)

2.2 中醫(yī)證候積分

兩組治療前中醫(yī)證候積分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);治療后,兩組治療食欲不振、胃脘脹滿、倦怠乏力、脅肋疼痛評(píng)分降低,治療組低于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組中醫(yī)證候積分比較分)

2.3 肝功能指標(biāo)

兩組治療前ALB、TBIL、GGT、GPT差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);兩組治療3、6個(gè)月TBIL、GGT、GPT降低,治療組低于對(duì)照組(P<0.05);兩組治療3、6個(gè)月ALB升高,治療組高于對(duì)照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組肝功能ALB、TBIL、GGT、GPT比較

2.4 肝纖維化指標(biāo)

兩組治療前PCⅢ、Ⅳ-C、HA差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);兩組治療3、6個(gè)月Ⅳ-C、PCⅢ、HA降低,治療組低于對(duì)照組(P<0.05)。見表4。

表4 兩組肝纖維化指標(biāo)PCⅢ、Ⅳ-C、HA比較

2.5 肝硬度

兩組治療前肝硬度值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);兩組治療3、6個(gè)月肝硬降低,治療組低于對(duì)照組(P<0.05)。見表5。

表5 兩組肝硬度值比較

2.6 TGF-β1/Smad信號(hào)通路相關(guān)mRNA水平

兩組治療前TGF-β1、Smad3、Smad5 mRNA差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與治療前比較,兩組治療3、6個(gè)月TGF-β1、Smad3、Smad5 mRNA降低,治療組低于對(duì)照組(P<0.05)。見表6。

表6 兩組TGF-β1/Smad信號(hào)通路相關(guān)mRNA水平比較

3 討論

HBV持續(xù)侵襲肝細(xì)胞造成組織變性壞死或微循環(huán)障礙,誘導(dǎo)炎癥反應(yīng),最終刺激肝纖維化進(jìn)展加劇[8-9]。富馬酸替諾福韋二吡呋酯膠囊可抑制HBV逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,達(dá)到治療目的[10],但單獨(dú)用藥療效有限,長(zhǎng)期用藥也可能出現(xiàn)副作用[11]。

中醫(yī)將肝硬化歸為“積聚”“脅痛”“癥瘕”范疇[12]。臨床上研究證實(shí),健脾化瘀湯可有效改善患者肝功能[13]。本研究結(jié)果顯示,治療組臨床總有效率高于對(duì)照組,中醫(yī)證候積分改善優(yōu)于對(duì)照組。分析原因:健脾化瘀湯方中柴胡可疏肝解郁、肝氣調(diào)達(dá),為君藥;白芍酸苦微寒,可養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、平肝止痛,為臣藥;生白術(shù)、黨參健脾,可氣血有源、運(yùn)化有權(quán);枳殼健脾理氣、行滯消脹;莪術(shù)、鱉甲、桃仁、丹參、生牡蠣可活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)、消積止痛,為佐藥;配合健胃消食雞內(nèi)金、生麥芽,可保肝益氣、健脾和胃,炙甘草可益氣補(bǔ)中、緩急止痛,全方共奏具有疏肝健脾、化瘀散結(jié)之效。

本研究結(jié)果顯示,治療組TBIL、GGT、GPT、PCⅢ、Ⅳ-C、HA低于對(duì)照組,ALB高于對(duì)照組,這與李紅閣等[14]研究結(jié)果一致。柴胡、黨參、丹參、莪術(shù)等具有抗病毒、抗炎、保肝、減輕肝損傷和肝纖維化等藥理活性[15]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究顯示,健脾化瘀湯可有效減少肝硬化大鼠肝纖維化組織形成,減輕肝組織氧化損傷[13]。此外,治療后兩組肝硬度降低,且治療組低于對(duì)照組,可能是因?yàn)榻∑⒒鰷街绪M甲可有效抑制結(jié)締組織異常增生,降低肝硬度,聯(lián)合富馬酸替諾福韋二吡呋酯膠囊治療可協(xié)同改善患者肝功能。

本研究結(jié)果顯示,治療組TGF-β1、Smad3、Smad5 mRNA低于對(duì)照組。TGF-β1通過調(diào)控相關(guān)受體激活下游Smad蛋白因子,介導(dǎo)參與多種生物學(xué)效應(yīng)[16],抑制TGF-β1/Smad信號(hào)通路激活可有效減輕肝組織纖維化。

4 結(jié)論

健脾化瘀湯可改善乙肝肝硬化患者肝功能及肝硬度,作用機(jī)制可能與抑制TGF-β1/Smad信號(hào)通路激活有關(guān)。但具體作用機(jī)制尚不清楚,下一步本研究通過建立肝硬化大鼠模型,以探究健脾化瘀湯可能通過調(diào)控TGF-β1/Smad信號(hào)通路對(duì)大鼠模型肝纖維化、肝功能的機(jī)制研究。