活動(dòng)期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血漿肝素結(jié)合蛋白水平變化及診斷效能

宋波，黃猛，徐冬，豐新倩，李慶

1 淄博市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東淄博255200；2 淄博市分子免疫檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；3 青島大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科；4 淄博市第一醫(yī)院風(fēng)濕免疫科

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）以進(jìn)行性關(guān)節(jié)損傷和關(guān)節(jié)外表現(xiàn)為特征，可導(dǎo)致永久性殘疾，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。近年來(lái)RA的診療取得一定進(jìn)展，但早期診斷不及時(shí)仍會(huì)影響治療效果。DAS28是基于RA患者壓痛關(guān)節(jié)數(shù)（TJC）、腫脹關(guān)節(jié)數(shù)（SJC）、紅細(xì)胞沉降率（ESR）、疼痛視覺(jué)模擬評(píng)分（VAS）評(píng)估疾病活動(dòng)度，是目前臨床評(píng)估RA疾病活動(dòng)度最常用的指標(biāo)。但DAS28在臨床應(yīng)用中存在一定的局限性，如ESR受到貧血、紅細(xì)胞壓積、生理因素等影響［1］；在關(guān)節(jié)的輕微腫脹評(píng)估方面，主要依靠臨床體格檢查，帶有主觀性和局限性。ESR、C反應(yīng)蛋白（CRP）可以在一定程度上反應(yīng)RA疾病活動(dòng)程度，但ESR、CRP都是炎癥的非特異性標(biāo)志物，易受到年齡、貧血和免疫球蛋白、類風(fēng)濕因子等影響，導(dǎo)致其敏感度和特異度不佳。因此迫切需要更準(zhǔn)確的RA疾病活動(dòng)度評(píng)價(jià)指標(biāo)。肝素結(jié)合蛋白（HBP）是一種儲(chǔ)存在嗜天青顆粒和中性粒細(xì)胞分泌小泡中的糖蛋白，在全身炎癥反應(yīng)早期中性粒細(xì)胞活化時(shí)釋放［2］。HBP可以激活單核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和T細(xì)胞，并通過(guò)刺激腫瘤壞死因子α（TNF-α）生成來(lái)增強(qiáng)炎癥反應(yīng)［3］。同時(shí)HBP可增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的滲透性，引起炎性疾病中的血管功能障礙和血漿滲漏，導(dǎo)致組織水腫［4-5］。研究發(fā)現(xiàn)，HBP在自身免疫性疾病中表達(dá)增加，HBP水平升高與自身炎癥性疾病相關(guān)［6-7］。然而HBP在RA患者中的變化及意義鮮有報(bào)道。本研究通過(guò)檢測(cè)活動(dòng)期RA患者血漿HBP水平，探討HBP對(duì)RA疾病活動(dòng)度的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2021年7月—2022年12月淄博市第一醫(yī)院收治的215例RA患者（RA組），男31例、女184例，年齡18～83（58.3 ± 10.7）歲，病程0.1～40（6.2 ± 6.8）年。RA的診斷根據(jù)美國(guó)風(fēng)濕學(xué)會(huì)（ACR）和歐洲抗風(fēng)濕聯(lián)盟（EULAR）2010修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)［8］。采用DAS28評(píng)分評(píng)價(jià)疾病活動(dòng)度，緩解期RA 100例，活動(dòng)期RA 115例（輕度16例、中度65例、重度34例）。排除感染、良惡性腫瘤、器官衰竭、其他免疫疾病、病例資料不全、妊娠患者。另選擇同期健康體檢者60例作為對(duì)照組，男15例、女45例，年齡31～72（59.1 ± 7.3）歲。兩組性別、年齡具有可比性。本研究通過(guò)淄博市第一醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（批號(hào)：YXLL2021072269），獲得研究對(duì)象或其代理人知情同意。

1.3 血漿HBP檢測(cè) 采集受試者空腹靜脈血3 mL，EDTA-K2抗凝，2 000 r/min離心10 min，分離血漿，-80 ℃冷凍保存。使用全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特）、透射比濁法檢測(cè)血漿HBP。

1.4 RA患者炎癥指標(biāo)檢測(cè) 采集受試者空腹靜脈血3 mL，置于促凝管中，離心分離血清，使用全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特）、透射比濁法檢測(cè)CRP，全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀（蘇州立禾）、化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)TNF-α。采集受試者空腹靜脈血1.6 mL，枸櫞酸鹽抗凝，魏氏法檢測(cè)ESR。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用Shapiro-Wilk法進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)均不符合正態(tài)分布，以M（P25，P75）表示。多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，兩變量間的相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman相關(guān)分析法，受試者工作特征（ROC）曲線分析HBP對(duì)RA疾病活動(dòng)度的診斷價(jià)值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血漿HBP水平比較 RA組活動(dòng)期、緩解期及對(duì)照組的血漿HBP水平分別為18.05（14.73，22.25）、8.80（7.40，11.62）、7.40（5.63，8.80）ng/mL，活動(dòng)期RA高于緩解期RA和對(duì)照組（P均＜0.05），緩解期RA與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-0.706，P＞0.05）?；顒?dòng)期RA患者中，輕、中、重度患者的血漿HBP水平分別為13.70（12.60，14.68）、17.20（14.80，22.30）、21.25（19.08，30.23）ng/mL，重度患者高于中度和輕度患者，中度患者高于輕度患者（P均＜0.05）。

2.2 活動(dòng)期與緩解期RA患者炎癥因子水平比較與緩解期RA相比，活動(dòng)期RA患者血ESR、CRP、TNF-α水平升高（P均＜0.05）。在活動(dòng)期RA患者中，重度患者血ESR、TNF-α高于輕度和中度患者，中度患者高于輕度患者（P均＜0.05）；重度患者血CRP高于輕、中度患者（P均＜0.05），輕、中度患者之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 活動(dòng)期RA患者血漿HBP水平與炎癥因子的相關(guān)性 活動(dòng)期RA患者血漿HBP水平與血ESR、CRP、TNF-α均呈正相關(guān)（r分別為0.442、0.581、0.478，P均＜0.05）。

2.4 血漿HBP對(duì)RA疾病活動(dòng)期的診斷效能ROC曲線顯示，血漿HBP評(píng)估活動(dòng)期和緩解期RA的最佳診斷臨界值為12.7 ng/mL，其ROC曲線下面積0.969，診斷活動(dòng)期RA的敏感度為93.9%，特異度為84.0%。HBP評(píng)估活動(dòng)期和緩解期RA的AUC高于ESR、CRP（P均＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 血HBP、CRP、ESR對(duì)活動(dòng)期和緩解期RA的診斷效能

3 討論

HBP由中性粒細(xì)胞分泌，通過(guò)β2整合素介導(dǎo)中性粒細(xì)胞可被HBP激活，與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附因子結(jié)合，改變血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性，引起血管滲漏［9］；HBP釋放后首先作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，與內(nèi)皮細(xì)胞表面多糖受體結(jié)合，引起鈣離子活化和細(xì)胞骨架重排，通過(guò)增加內(nèi)皮細(xì)胞間隙改變細(xì)胞通透性，從而導(dǎo)致大分子滲漏和組織損傷［10］。血管翳是RA的病理基礎(chǔ)，其內(nèi)包含新生微血管，HBP可以誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的間隙增加和破壞，造成炎癥相關(guān)細(xì)胞外滲至關(guān)節(jié)腔中［11］。文獻(xiàn)報(bào)道，在關(guān)節(jié)滑液中存在中性粒細(xì)胞和TNF-α等細(xì)胞因子，可能導(dǎo)致骨侵蝕和軟骨退化［12-13］。HBP作為細(xì)菌感染性疾病常用的診斷及病情嚴(yán)重程度評(píng)估指標(biāo)，在早期識(shí)別膿毒癥及病情評(píng)估方面具有較好的靈敏度和特異度［14］。急性期關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)腔積液內(nèi)存在中性粒細(xì)胞和HBP［15］，HBP水平升高可能與其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)有關(guān)［16］。

本研究比較了115例活動(dòng)期RA患者、110例緩解期RA患者、60例健康對(duì)照組的HBP水平，結(jié)果顯示活動(dòng)期RA患者HBP水平顯著高于緩解期RA患者和健康對(duì)照組，提示RA作為一種自身免疫性炎癥，其活動(dòng)期白細(xì)胞釋放HBP增加。進(jìn)一步分析表明，HBP水平隨著RA疾病活動(dòng)度的升高而升高，重度患者高于中度和輕度患者，中度患者高于輕度患者。我們推測(cè)，HBP在RA活動(dòng)期可能參與血管滲漏和關(guān)節(jié)水腫的進(jìn)程，同時(shí)HBP在RA活動(dòng)期時(shí)激活單核細(xì)胞，增加TNF-α的釋放，擴(kuò)大炎癥反應(yīng)，參與RA炎癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程。因此，HBP可能是RA炎癥發(fā)生發(fā)展的重要介質(zhì)。

ESR、CRP是全身炎癥反應(yīng)指標(biāo)。ESR可反映RA疾病活動(dòng)程度，ESR加快的RA患者晨僵時(shí)間更長(zhǎng)，癥狀更重，但ESR容易受到生理因素（年齡、性別、女性生理周期等）影響［17］。CRP由肝臟合成，作為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白可在RA活動(dòng)期升高，但其特異度較低［18］。TNF-α是RA發(fā)生發(fā)展中的重要炎癥介質(zhì)，其可促進(jìn)軟骨損傷和骨質(zhì)破壞［19］。本研究結(jié)果顯示，與緩解期RA相比，活動(dòng)期RA患者血ESR、CRP、TNF-α水平均顯著升高，且隨著疾病活動(dòng)度加重而增加。進(jìn)一步進(jìn)行相關(guān)性分析顯示，活動(dòng)期RA患者血漿HBP水平與血ESR、CRP、TNF-α均呈正相關(guān)。這表明與其他炎癥指標(biāo)一樣，血漿HBP也可以反映RA疾病活動(dòng)狀態(tài)。進(jìn)一步采用ROC曲線分析血漿HBP對(duì)RA疾病活動(dòng)期的診斷價(jià)值，結(jié)果顯示，血漿HBP評(píng)估活動(dòng)期和緩解期RA的敏感度為93.9%，特異度為84%，敏感度和特異度均高于血ESR、CRP。表明血漿HBP對(duì)評(píng)估RA疾病活動(dòng)度具有一定價(jià)值。

綜上所述，活動(dòng)期RA患者血漿HBP水平升高；血漿HBP與疾病活動(dòng)度相關(guān)，對(duì)RA活動(dòng)度診斷有一定價(jià)值，可能成為活動(dòng)期RA的生物標(biāo)志物。