• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    綠豆C3H和NBS轉(zhuǎn)錄因子家族成員鑒定及鹽脅迫響應(yīng)分析

    2023-09-19 07:54:13劉金洋林云陳景斌閆強薛晨晨吳然然陳新袁星星
    江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報 2023年5期
    關(guān)鍵詞:共線性基序耐鹽

    劉金洋 林云 陳景斌 閆強 薛晨晨 吳然然 陳新 袁星星

    摘要:NBS和C3H是植物體內(nèi)2個重要的轉(zhuǎn)錄因子家族,在調(diào)控植物抗病與耐鹽方面不可或缺。本研究通過轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析、qRT-PCR分析,分別鑒定出30個和289個綠豆C3H和NBS家族成員,2個基因家族各有13個基因受到純化選擇,并且C3H和NBS基因家族種內(nèi)共線性關(guān)系均為片段重復(fù)。耐鹽材料的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明,VrC3H5、VrC3H7、VrC3H10和VrC3H13等4個基因的表達量在鹽脅迫后發(fā)生顯著改變。VrC3H5,VrC3H7和VrC3H13 3個基因?qū)γ撀渌幔ˋBA)處理、氯化鈉(NaCl)處理、干旱脅迫都有不同程度的響應(yīng),VrC3H5在ABA處理后基因表達量上調(diào)超過了10倍。在NBS基因中,有85個基因在鹽脅迫10 d和15 d后出現(xiàn)顯著差異表達,其中9個NBS基因表達變化值|log2FC|(FC為表達倍數(shù)變化)大于2。VrNBS20轉(zhuǎn)錄因子通過調(diào)控EVM0022385參與綠豆的耐鹽功能,VrNBS20可能是綠豆抗病與耐鹽調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的交叉點。本研究結(jié)果為綠豆耐鹽與抗病研究提供了豐富的基因資源。

    關(guān)鍵詞:綠豆;NBS基因家族;C3H基因家族;鹽脅迫;VrNBS20轉(zhuǎn)錄因子

    中圖分類號:Q786文獻標(biāo)識碼:A文章編號:1000-4440(2023)05-1097-13

    Identification and salt stress response analysis of mungbean C3H and NBS transcription factor family membersLIU Jin-yang,LIN Yun,CHEN Jing-bin,YAN Qiang,XUE Chen-chen,WU Ran-ran,CHEN Xin,YUAN Xing-xing

    (Institute of Industrial Crops, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences/Jiangsu Key Laboratory of Efficient Horticultural Crop Genetic Improvement, Nanjing 210014, China)

    Abstract:NBS and C3H are two important transcription factor families in plants, which are indispensable in regulating plant disease resistance and salt tolerance. In this study, through transcriptome data analysis and qRT-PCR analysis, 30 and 289 mungbean C3H and NBS family members were identified, respectively. Thirteen C3H and 13 NBS genes were purified and selected, and the intraspecific collinearity analysis of C3H and NBS gene families was fragment duplication. The transcriptome data analysis of salt-tolerant materials showed that the expression levels of VrC3H5, VrC3H7, VrC3H10 and VrC3H13 were significantly changed after salt stress. VrC3H5, VrC3H7 and VrC3H13 had different degrees of response to abscisic acid (ABA) treatment, sodium chloride (NaCl) treatment and drought stress. The expression of VrC3H5 was up-regulated by more than 10 times after ABA treatment. A total of 85 NBS genes were significantly differentially expressed after 10 days and 15 days of salt stress, of which nine NBS genes had a change in expression value |log2FC| (FC was the expression fold change) greater than two. VrNBS20 was involved in the salt tolerance function of mung bean by regulating EVM0022385, and VrNBS20 may be the intersection point in the disease resistance and salt tolerance regulatory network of mungbean. The results of this study provide abundant genetic resources for the study of salt tolerance and disease resistance of mungbean.

    Key words:mungbean;NBS gene family;C3H gene family;salt stress;VrNBS20 transcription factor

    綠豆 (Vigna radiata L.),屬于豆科豇豆屬,含有22條染色體[1]。作為功能性食品原料,綠豆籽粒富含蛋白質(zhì)、多種人體必需氨基酸、碳水化合物、膳食纖維及生物活性物質(zhì)。隨著人們生活水平的提高和對健康飲食的需求,綠豆的高營養(yǎng)價值開始被人們重視,綠豆的需求量逐漸增大[2]。然而,鹽脅迫與病害嚴(yán)重制約著溫帶、亞熱帶及熱帶地區(qū)綠豆的生產(chǎn),尤其以印度、中國、泰國、緬甸和菲律賓等國家為代表。挖掘抗性基因并應(yīng)用于抗性育種已成為主要農(nóng)作物抗性育種的主要方法之一。目前,在挖掘綠豆抗性基因方面的研究還不是很深入,有關(guān)綠豆耐鹽相關(guān)的全基因組關(guān)聯(lián)分析和遺傳定位的研究還很少。轉(zhuǎn)錄因子作為植物的內(nèi)在調(diào)控因子,在植物應(yīng)對非生物與生物脅迫中具有重要的調(diào)控作用。因此,利用比較基因組學(xué)挖掘、鑒定綠豆抗病與鹽脅迫響應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子對綠豆的遺傳改良至關(guān)重要。

    NBS(Nucleotide binding site)和C3H(CCCH)是植物體內(nèi)2個重要的轉(zhuǎn)錄因子家族,具有獨特的功能和結(jié)構(gòu),在調(diào)控植物的抗病與耐鹽信號轉(zhuǎn)導(dǎo)方面起重要作用[3-5]。NBS轉(zhuǎn)錄因子家族是植物中大轉(zhuǎn)錄因子家族之一,含有TIR、NBS和 LRR等結(jié)構(gòu)域。NBS結(jié)構(gòu)域主要介導(dǎo)下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[6],LRR結(jié)構(gòu)域主要介導(dǎo)蛋白質(zhì)之間的互作。根據(jù)轉(zhuǎn)錄因子N端是否含有TIR結(jié)構(gòu)域?qū)⑵浞譃閮蓚€亞類[7]。一類為含有TIR-NBS-LRR結(jié)構(gòu)域的TNL型;另一類R基因編碼的蛋白質(zhì)通常被CC(Coiled-Coil)替代,又稱CC-NBS-LRR(CNL)型[8]。植物體內(nèi)NBS基因的數(shù)量從幾十個到上千個不等[8-10]。同時,NBS基因組成的不同會導(dǎo)致植物對病原體抗性形成差異[11]。NBS基因通常包含各種類型的重復(fù),這些重復(fù)對NBS基因的功能有著重要影響[12]。NBS轉(zhuǎn)錄因子基因已被證明在花生青枯病、大豆花葉病、番茄菟絲子、葡萄霜霉病抗性調(diào)控中起著重要作用[13-17]。NBS轉(zhuǎn)錄因子基因在植物非生物脅迫中的研究還較少,挖掘具有抗逆和抗病作用的多功能轉(zhuǎn)錄因子基因?qū)G豆的抗病和耐逆育種至關(guān)重要。

    C3H家族轉(zhuǎn)錄因子屬于鋅指蛋白,包含1~6個CCCH結(jié)構(gòu),主要含有3個半胱氨酸和1個組氨酸殘基[18-19]。含有C-X7-8-C-X5-C-X3-H基序的C3H蛋白是最大的一類C3H轉(zhuǎn)錄因子[20-21]。C3H基因家族參與植物發(fā)育和逆境適應(yīng)等過程,在激素調(diào)節(jié)下對植物的生長起重要作用。在水稻中,OsDOS(C3H基因)參與茉莉酸(JA)代謝,過表達該基因能顯著延緩葉片衰老[22]。在擬南芥中,C3H14和C3H15基因能夠調(diào)節(jié)花藥發(fā)育和雄性育性[23]。此外,一些C3H鋅指蛋白還參與植物的非生物脅迫反應(yīng)。ZFP1通過維持細(xì)胞中離子平衡來調(diào)節(jié)滲透脅迫,提高植物的耐鹽性。C3H型鋅指蛋白基因AtSZF1和AtSZF2能夠正向調(diào)控擬南芥的耐鹽性[24]。過表達C3H18后,甘薯對干旱和高鹽環(huán)境的抗性顯著增強[25]。在水稻中,zfp5突變體在鹽脅迫和滲透脅迫下,萌發(fā)率、主根長、脯氨酸含量、葉綠素含量及活性氧清除酶的活性顯著小于野生型,而ZFP5基因過表達株系在鹽脅迫和滲透脅迫下,萌發(fā)率、主根長、脯氨酸含量、葉綠素含量及活性氧清除酶的活性顯著大于野生型[26]。

    轉(zhuǎn)錄因子在非生物脅迫調(diào)控中具有重要作用, WRKY、MYB、C3H和HDzip型轉(zhuǎn)錄因子含有相應(yīng)的順式作用元件可以介導(dǎo)ABA響應(yīng)基因的表達,他們在多種植物鹽脅迫逆境下被誘導(dǎo)[27]。此外,水稻ERF1轉(zhuǎn)錄因子能夠與ABA信號通路下游OsABI5基因啟動子結(jié)合,抑制其表達,增強水稻種子在鹽脅迫下的萌發(fā)率[28]。上述研究結(jié)果表明包括轉(zhuǎn)錄因子在內(nèi)的ABA合成表達調(diào)控基因在植物非生物逆境的響應(yīng)與適應(yīng)方面發(fā)揮了重要的作用。

    目前,有關(guān)綠豆NBS和C3H基因家族成員組成、序列及進化特征,與鹽脅迫響應(yīng)相關(guān)的NBS和C3H候選基因還缺乏研究。本研究以江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟作物研究所保存的蘇綠1號為材料,鑒定綠豆NBS和C3H基因家族成員,分析NBS和C3H基因家族成員堿基序列及進化特征,并挖掘鹽脅迫響應(yīng)相關(guān)的NBS和C3H候選基因,為綠豆的抗病與耐鹽育種提供基因資源。

    1材料與方法

    1.1植物材料和處理

    本研究使用的綠豆品種為江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟作物研究所保存的蘇綠1號,將其種植于28 ℃恒溫溫室,16 h光期、8 h暗期培養(yǎng)7 d后分別用20%的PEG6000、100 μmol/L的脫落酸(ABA)和100 mmol/L的鹽(NaCl)溶液對幼苗進行脅迫處理,以無脅迫為對照,在處理0 h、4 h、12 h、24 h、48 h后隨機選取不同處理幼苗5株,取根部組織約0.1 g,進行qRT-PCR分析。

    選取2個耐鹽材料A1和A3及2個不耐鹽材料C1和C2[29],幼苗出芽后第10 d,分別用100 mmol/L鹽溶液處理,鹽處理后10 d與15 d取上述材料的葉片用以轉(zhuǎn)錄組分析,分析NBS和C3H家族基因在鹽脅迫下表達變化。

    1.2綠豆NBS和C3H基因家族成員篩選、保守基序和進化樹分析首先,從網(wǎng)站https://www.arabidopsis.org 和https://www.researchgate.net/publication/347076195_high-quality_genome_assembly_annotation_and_evolutionary_ analysis_of_the_mungbean_Vigna_radiata_genome下載擬南芥NBS和C3H蛋白氨基酸序列和綠豆基因組編碼的蛋白質(zhì)序列,利用NCBI blast軟件進行序列比對,設(shè)置E-value為1×10-100,篩選得到綠豆NBS和C3H候選基因。其次,利用pfam網(wǎng)站(http://pfam-legacy.xfam.org)分析上述候選基因編碼蛋白質(zhì)的保守結(jié)構(gòu)域,去除編碼蛋白質(zhì)中不含C-X7-8-C-X5-C-X3-H和TIR、NBS、LRR結(jié)構(gòu)域的候選基因。隨后利用MEME軟件(https://meme-suite.org/meme/tools/meme)和MEGA7軟件,采用Neighbor-Joining法,迭代1 000次,對NBS和C3H家族基因進行進化樹分析,再利用TBtools軟件對NBS和C3H家族基因進行保守基序的聚類分析[30]。

    1.3NBS和C3H家族基因染色體定位、啟動子和共線性分析利用TBtools軟件的GFF3/GTF Gene Position(Info.) Parse模塊獲取上述候選基因在染色體上的位置。利用PlantCARE網(wǎng)站分析C3H基因家族成員上游啟動元件(5′上游選2 000 bp),篩選與植物逆境響應(yīng)相關(guān)的元件,并進行可視化作圖。根據(jù)擬南芥與綠豆NBS和C3H基因家族成員的序列,分析NBS和C3H家族物種間共線性特點。同時,采用TBtools軟件對綠豆NBS和C3H家族物種內(nèi)共線性特點進行分析,并估算共線性基因的非同義替換率(Ka)和同義替換率(Ks),以Ka/Ks值估測基因家族在進化過程中受到的選擇壓力。

    1.4綠豆NBS和C3H基因家族成員在鹽脅迫下表達變化分析使用FlaPure Plant Total RNA Extraction Kit試劑盒(北京金沙生物科技有限公司產(chǎn)品)提取綠豆根部總RNA。使用UnionScript First-strand cDNA Synthesis Mix for qPCR with dsDNase (北京金沙生物科技有限公司產(chǎn)品) 反轉(zhuǎn)錄合成綠豆cDNA。使用ChamQ SYBR qPCR Master Mix 試劑(南京諾唯贊生物股份有限公司產(chǎn)品)及ABI prism 7500 real-time PCR System (Thermo Fisher公司產(chǎn)品,美國)進行qRT-PCR分析。PCR擴增程序為:95 ℃ 預(yù)變性30 s;95 ℃變性10 s,60 ℃退火10 s,40個循環(huán)?;蛱禺愋砸镌O(shè)計采用 Primer 5 軟件,使用的內(nèi)參基因為VrACTIN3 (Vradi03g00210)[29],具體引物信息見表1。每個基因表達量檢測設(shè)置3個重復(fù)。

    綠豆NBS和C3H基因家族候選基因相對表達量分析采用 2-△△Ct計算方法,采用FPKM(Fragments Per Kilobase per Million)計算方法分析轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)[31]。使用SPSS軟件中的t檢驗法對基因表達水平進行差異顯著性分析。

    1.5差異轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控基因的預(yù)測

    將差異表達顯著的C3H和NBS轉(zhuǎn)錄因子氨基酸序列上傳至網(wǎng)站https://www.string-db.org進行轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控基因預(yù)測,設(shè)置顯著作用值為0.40,分析轉(zhuǎn)錄因子顯著調(diào)控的基因,利用cytoscape軟件對結(jié)果進行可視化作圖。

    2結(jié)果與分析

    2.1綠豆C3H和NBS基因家族成員分布

    通過NCBI blast比對及MEME、pfam網(wǎng)站保守基序分析,在綠豆全基因組共篩選得到30個C3H基因(表2),289個NBS基因。30個C3H基因主要分布在1號、3號、5號、6號、8號染色體上,10號染色體沒有C3H基因,9號染色體僅有1個C3H基因EVM0029904.1,1號、3號和8號染色體上分別有5個C3H基因(圖1a)。289個NBS基因主要分布在1號、7號、8號、9號和10號染色體上,4號和6號染色體分別有7個和5個NBS基因(圖1b),另有14個NBS基因分布在重疊群上。

    2.2C3H和NBS基因家族進化樹及保守結(jié)構(gòu)分析

    C3H和NBS基因家族進化樹分析結(jié)果顯示,C3H家族分為3個分支(圖2a),位于同一分支的基因具有較高的同源性和保守型。C3H基因家族不同分支保守基序差異性較大,分支Ⅰ9個基因,含有2種保守基序(基序1和基序2);分支Ⅱ7個基因,含有保守基序4;分支Ⅲ 14個基因,含有保守基序3(圖2b、圖2c)。NBS基因家族分為兩個分支,分支Ⅰ含有成員數(shù)為155;分支Ⅱ含有成員數(shù)為134(圖3)。兩分支保守基序差異性較小。雖然NBS基因家族所含的保守結(jié)構(gòu)相似,但是這些基因的堿基序列長度差異性較大。在位于11條染色體上的275個基因中,分支Ⅰ基因的平均長度為3 381.5 bp,分支Ⅱ基因的平均長度為4 070.9 bp,分支Ⅰ和分支Ⅱ成員在基因堿基序列長度方面差異較大,說明NBS基因家族的功能多樣性。

    C3H基因家族成員上游2 000 bp堿基序列除了具有光響應(yīng)、逆境和無氧響應(yīng)元件外,還具有多種植物激素(茉莉酸甲酯、赤霉素、水楊酸及ABA等)響應(yīng)元件(圖2d)。其中有12個C3H基因的啟動子區(qū)域存在ABA響應(yīng)元件,14個C3H基因啟動子區(qū)域存在茉莉酸甲酯響應(yīng)元件,12個C3H基因的啟動子區(qū)域存在赤霉素響應(yīng)元件,14個C3H基因啟動子區(qū)域存在干旱脅迫響應(yīng)元件[MBS(CAACTG)]。這些結(jié)果說明C3H基因家族與植物的生長發(fā)育以及響應(yīng)逆境有關(guān),這種特征在其他植物中亦有體現(xiàn)[24]。

    2.3綠豆和擬南芥C3H與NBS基因家族之間共線性分析綠豆和擬南芥C3H、NBS基因家族共線性分析結(jié)果顯示,綠豆C3H基因家族和NBS基因家族分別有18個基因和7個基因與擬南芥基因具有共線性(圖4a、圖4b)。這說明C3H基因家族在基因序列上具有較高的保守性,而NBS基因家族在基因序列上差異性較大,表明其功能可能具有多樣性。

    基因組內(nèi)的共線性分析結(jié)果表明,分別有13個C3H基因和13個NBS基因存在共線性(圖4c、圖4d)。C3H共線性基因占所有成員的43.3%;NBS共線性基因僅占所有成員的4.5%,即NBS基因組內(nèi)部共線性較差。上述的共線性關(guān)系均為片段重復(fù)(表3),并且這些基因共線性關(guān)系的Ka/Ks值(非同義替換率/同義替換率)均小于1,說明他們均受到純化選擇。

    2.4C3H和NBS家族基因鹽脅迫下表達特性分析

    有85個NBS基因在鹽處理10 d后存在顯著差異表達,占總家族成員的29.41%;141個NBS基因在鹽處理15 d后存在顯著差異表達,占總家族成員的48.79%;有85個基因在鹽處理10 d和15 d后均出現(xiàn)顯著差異表達。在這85個差異表達基因中,有59個基因 的|log2FC|值(FC為差異倍數(shù))大于0.5(圖5A),其中46個基因的表達上調(diào),13個基因的表達下調(diào)。此外,VrNBS20(EVM0031127.1)、VrNBS134(EVM0032953.1)、VrNBS135(EVM0022303.1)、VrNBS196(EVM0032738.1)、VrNBS167(EVM0033726.1)、VrNBS173(EVM0033029.1)、VrNBS213(EVM0000182.1),VrNBS208(EVM0007891.1)和VrNBS223(EVM0033901.1)等9個基因表達變化幅度較大(|log2FC|>2)。C3H基因家族中有4個C3H基因在鹽處理10 d后存在顯著差異表達,占總家族成員的13.33%。9個C3H基因在鹽處理15 d后存在顯著差異表達 (圖5B),占總家族成員的40.00%。其中,VrC3H5(EVM0017299.1)、VrC3H7(EVM0019299.1)、VrC3H10(EVM0018432.1)和VrC3H13(EVM0024653.1)4個基因表達水平變化幅度較大。

    4個表達水平差異較大的C3H基因VrC3H5、VrC3H7、VrC3H10和VrC3H13在ABA、NaCl、PEG6000處理后的相對表達量變化如圖5C所示。VrC3H5、VrC3H7和VrC3H13 3個基因?qū)BA、NaCl、PEG6000處理有不同程度的響應(yīng)。VrC3H5對ABA響應(yīng)較為明顯,處理4 h后達到最高值,其表達量變化超過10倍,之后出現(xiàn)下降。VrC3H7在ABA處理后4 h表達量達到最高值,之后出現(xiàn)下降;在NaCl、PEG6000處理后VrC3H7表達量下降顯著。VrC3H13在ABA處理后的4 h表達量達到最高值,之后大幅下降,48 h后表達量恢復(fù)正常。

    2.5差異轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控基因及其互作

    在顯著作用值>0.4時,有2個C3H差異轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控基因。其中,VrC3H5調(diào)控EVM0001847、EVM0020938和EVM0032843基因,且EVM0001847、EVM0020938和EVM0032843這3個基因之間存在顯著互作關(guān)系(圖6A);VrC3H7調(diào)控EVM0019967、EVM0006240、EVM0021757和EVM0031747基因,其中EVM0031747與EVM0021757、EVM0019967與EVM0006240存在顯著互作關(guān)系(圖6B);NBS家族中僅有VrNBS20調(diào)控EVM0022385基因,而EVM0022385與另外9個基因存在顯著互作關(guān)系(圖6C)。

    在C3H轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控的7個基因中,EVM0001847、EVM0032843和EVM0021757在鹽處理后出現(xiàn)顯著差異表達(圖6D)。其中,EVM0001847基因表達量極顯著上調(diào)。NBS轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控的基因僅EVM0022385,但有5個基因在鹽處理后與EVM0022385一樣出現(xiàn)顯著差異表達。其中EVM0009188基因表達量極顯著上調(diào)(圖6D)。

    3討論與結(jié)論

    3.1VrC3H5、VrC3H7和VrC3H10基因參與干旱脅迫的響應(yīng)從低等植物萊茵衣藻到高等植物擬南芥、水稻、玉米等都普遍存在C3H基因[32-34]。C3H型鋅指蛋白在調(diào)節(jié)植物發(fā)育和脅迫響應(yīng)中起著重要作用。過表達水稻OsC3H38基因能顯著提高轉(zhuǎn)基因水稻的耐鹽性,改善水稻的生理指標(biāo)[32];鹽脅迫會引起擬南芥AtZFP1的表達量上調(diào),過表達AtZFP1基因能顯著提高NaCl處理下擬南芥的發(fā)芽率和出苗率[24]。在植物應(yīng)對鹽脅迫的代謝過程中,C3H等轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)功能[35],挖掘綠豆耐鹽相關(guān)的C3H基因?qū)G豆的耐鹽遺傳改良至關(guān)重要。植物主要通過ABA信號途徑應(yīng)對外界鹽脅迫[36-38],例如,在擬南芥中發(fā)現(xiàn)鹽脅迫誘導(dǎo)的類胡蘿卜素合成,能夠提供豐富的ABA前體以確保ABA合成,增強植株的耐鹽性[35]。水稻細(xì)胞壁纖維素合酶類蛋白OsCSLD4可以增強水稻ABA合成基因的表達,提高水稻耐鹽性[39]。

    本研究通過序列比對和系統(tǒng)發(fā)育樹分析,發(fā)現(xiàn)30個C3H家族成員可劃分成3個亞家族,同一亞家族的基序分布模式基本一致,如I亞家族都具有相同的3個基序,不同亞家族之間基序數(shù)量差異較大。這3個亞家族基因在進化過程中均存在片段復(fù)制現(xiàn)象,并且均受到純化選擇。C3H家族成員啟動子區(qū)域均存在干旱脅迫響應(yīng)元件。

    在耐鹽轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析中,發(fā)現(xiàn)VrC3H5、VrC3H7、VrC3H10和VrC3H13 4個基因變化幅度較大,同時在鹽處理15 d后仍存在顯著差異表達。這4個基因?qū)}處理較敏感,可能是與鹽脅迫響應(yīng)相關(guān)的候選基因。

    在候選基因的qRT-PCR分析中,VrC3H5在ABA處理后的4 h后表達量達到最高值,表達量變化超過10倍。VrC3H7在ABA處理后的4 h后表達量達到最高值,是對照組的3倍。VrC3H10在ABA處理后的24 h后表達量達到最高值,是對照組的11倍,之后出現(xiàn)下降。在PEG6000和NaCl處理后VrC3H5、VrC3H7和VrC3H13 3個基因的表達量均出現(xiàn)下降,而VrC3H10基因的相對表達量沒有顯著變化。

    轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控基因分析結(jié)果表明VrC3H5和VrC3H7參與了耐鹽調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。VrC3H5、VrC3H7和VrC3H10基因?qū)}脅迫的響應(yīng)情況和轉(zhuǎn)錄組分析的結(jié)果較為一致,表明鹽脅迫影響了這些基因的表達。

    3.2綠豆VrNBS20可能同時具有抗病和耐鹽功能

    NBS基因家族在大豆花葉病、葡萄霜霉病、小麥葉銹病等植物病害的抗性調(diào)控中具有重要作用[40]。NBS基因是否還參與耐鹽調(diào)控值得探索。

    為了挖掘鹽脅迫響應(yīng)的NBS基因,研究發(fā)現(xiàn)有85個NBS基因在鹽處理10 d和15 d后均出現(xiàn)顯著差異表達。在這85個差異表達基因中,有59個基因鹽處理后15 d表達變化值|log2FC|>0.5;9個NBS基因鹽處理后15 d表達變化值|log2FC|>2.0。對這些基因的抗病性能還需要進一步分析。

    在候選基因的互作網(wǎng)絡(luò)分析中僅發(fā)現(xiàn)1個NBS轉(zhuǎn)錄因子(VrNBS20)調(diào)控EVM0022385基因。同時,VrNBS20的功能注釋為抗煙草花葉病毒蛋白N,而與其同源的擬南芥AT5G17680基因編碼的蛋白質(zhì)對flg22病原菌具有免疫應(yīng)答作用[41]。與EVM0022385互作的10個基因中有5個基因在鹽處理后出現(xiàn)顯著差異表達。這5個基因中EVM0009188的表達量在鹽處理后出現(xiàn)顯著上調(diào),其他4個基因表達量顯著下調(diào)。說明,VrNBS20可能不僅具有抗病的活性,同時還參與綠豆的耐鹽調(diào)控。

    參考文獻:

    [1]KANG Y J, KIM S K, KIM M Y, et al. Genome sequence of mungbean and insights into evolution within Vigna species [J]. Nat Commun, 2014, 11(5): 5443-5452.

    [2]李瑞國,郭少英,王懷遠. 綠豆萌發(fā)期蛋白質(zhì)和維生素C含量及營養(yǎng)價值[J]. 食品研究與開發(fā), 2012, 33(4):4-12.

    [3]王天一,王應(yīng)祥,尤辰江. 植物PHD結(jié)構(gòu)域蛋白的結(jié)構(gòu)與功能特性[J]. 遺傳,2021,43(4):323-339.

    [4]TAMELING W I, ELZINGA S D, DARMIN P S, et al. The tomato R gene products I-2 and MI-1 are functional ATP binding proteins with ATPase activity [J]. Plant Cell, 2002, 14(11): 2929-2939.

    [5]REBOLEDO G, AGORIO A, PONCE DE LEON I. Moss transcription factors regulating development and defense responses to stress [J]. J Exp Bot, 2022, 73(13): 4546-4561.

    [6]ZHNAG Y M, CHEN M, SUN L, et al. Genome-wide identification and evolutionary analysis of NBS-LRR genes from dioscorea rotundata[J]. Frontiers in Genetics, 2020, 11:484-495.

    [7]EITAS T K, DANGL J L. NB-LRR proteins: pairs, pieces, perception, partners, and pathways [J]. Curr Opin Plant Biol, 2010, 13(4): 472-477.

    [8]汪結(jié)明,江海洋,趙陽,等. 玉米自交系B73全基因組NBS類型抗病基因分析[J]. 作物學(xué)報, 2009, 35(3): 5-10.

    [9]劉云飛,萬紅建,李志邈,等. 植物NBS-LRR抗病基因的結(jié)構(gòu)、功能、進化起源及其應(yīng)用[J]. 分子植物育種, 2014, 12(2):377-389.

    [10]ANDERSEN E J, LINDSEY L E, NEPAL M P. Genome-wide identification of disease resistance genes (R Genes) in wheat[J/OR]. Cold Spring Harbor Laboratory, 2020. Doi:10.401/2020.07.18.210286.

    [11]JUPE F. The potato NB LRR gene family. Determination, characterisation and utilisation for rapid identification of novel disease resistance genes[D]. Norwich, England: University of East Anglia, 2012.

    [12]LEISTER D. Tandem and segmental gene duplication and recombination in the evolution of plant disease resistance gene[J]. Trends in Genetics Tig, 2004, 20(3):116-122.

    [13]ZHANG C, CHEN H, CAI T, et al. Overexpression of a novel peanut NBS-LRR gene AhRRS5 enhances disease resistance to Ralstonia solanacearum in tobacco [J]. Plant Biotechnol J, 2017, 15(1): 39-55.

    [14]DIAO P, SUN H, BAO Z, et al. Expression of an antiviral gene GmRUN1 from soybean is regulated via Intron-mediated enhancement (IME) [J]. Viruses, 2021, 13(10):2032-2046

    [15]JHU M Y, FARHI M, WANG L, et al. Heinz-resistant tomato cultivars exhibit a lignin-based resistance to field dodder (Cuscuta campestris) parasitism [J]. Plant Physiology, 2022, 189(1): 129-151.

    [16]QU J, DRY I, LIU L, et al. Transcriptional profiling reveals multiple defense responses in downy mildew-resistant transgenic grapevine expressing a TIR-NBS-LRR gene located at the MrRUN1/MrRPV1 locus [J]. Horticulture Research, 2021, 8(1): 161-173.

    [17]TENTE E, EREFUL N, RODRIGUEZ A C, et al. Reprogramming of the wheat transcriptome in response to infection with claviceps purpurea, the causal agent of ergot [J]. BMC Plant Biology, 2021, 21(1): 316-336.

    [18]WANG D, GUO Y, WU C, et al. Genome-wide analysis of CCCH zinc finger family in Arabidopsis and rice [J]. BMC Genomics, 2008, 9(1): 44-64.

    [19]DANIELS B R, PERKINS E M, DOBROWSKY T M, et al. Asymmetric enrichment of PIE-1 in the Caenorhabditis elegans zygote mediated by binary counterdiffusion [J]. Journal of Cell Biology, 2009, 184(4): 473-479.

    [20]皮博藝,阮穎,黃勇. 植物串聯(lián)CCCH鋅指蛋白RR-TZF家族研究進展及生物信息學(xué)分析[J]. 分子植物育種, 2019, 17(7):2171-2177.

    [21]蔣明,劉青娥,章燕如,等. 青花菜C3H型鋅指蛋白基因BoCCCH2的克隆與表達[J]. 浙江大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版), 2016,42(2):143-149.

    [22]KONG Z, LI M, YANG W, et al. A novel nuclear-localized CCCH-type zinc finger protein, OsDOS, is involved in delaying leaf senescence in rice[J]. Plant Physiology, 2006, 141(4):1376-1388.

    [23]CHAI G H, KONG Y Z, ZHU M, et al. Arabidopsis C3H14 and C3H15 have overlapping roles in the regulation of secondary wall thickening and anther development.[J]. Journal of Experimental Botany, 2015, 66(9):2595-2609.

    [24]SUN J, JIANG H, XU Y, et al. The CCCH-type zinc finger proteins AtSZF1 and AtSZF2 regulate salt stress responses in Arabidopsis[J]. Plant and Cell Physiology, 2007, 48(8): 1148-1158.

    [25]ZHANG H, GAO X, ZHI Y, et al. A non-tandem CCCH-type zinc-finger protein, IbC3H18, functions as a nuclear transcriptional activator and enhances abiotic stress tolerance in sweet potato[J]. New Phytologist, 2019, 223(4):1918-1936.

    [26]劉冬冬. 鋅指蛋白GIS和ZFP5響應(yīng)非生物脅迫的分子機理研究[D].杭州:浙江大學(xué), 2019.

    [27]HOANG X L T, NHI D N H, THU N B A, et al. Transcription factors and their roles in signal transduction in plants under abiotic stresses [J]. Current Genomics, 2017, 18(6): 483-497.

    [28]LI Y, ZHOU J, LI Z, et al. Salt and ABA response ERF1 improves seed germination and salt tolerance by repressing ABA signaling in rice [J]. Plant Physiology, 2022, 189(2): 1110-1127.

    [29]LIU? J, XUE C, LIN Y, et al. Genetic analysis and identification of VrFRO8, a salt tolerance-related gene in mungbean [J]. Gene, 2022, 836:146658-146670.

    [30]MORTAZAVI A, WILLIAMS B A, MCCUE K, et al. Mapping and quantifying mammalian transcriptomes by RNA-Seq[J]. Nat Methods,2008,5(7): 621-628.

    [31]LI S, LIU J, XUE C, et al. Identification and functional characterization of WRKY, PHD and MYB three salt stress responsive gene families in mungbean (Vigna radiata L.) [J]. Genes (Basel),2023, 14(2): 463-481.

    [32]潘曉雪,蔣曉英,胡明瑜,等. 水稻OsCCCH基因家族的組織表達譜及脅迫誘導(dǎo)表達特征研究[J]. 分子植物育種, 2016,14(9):2239-2249.

    [33]吳學(xué)闖,曹新有,陳明,等. 大豆C3HC4型RING鋅指蛋白基因GmRZFP1克隆與表達分析[J]. 植物遺傳資源學(xué)報, 2010, 11(3):343-348

    [34]郭棟,宋雅菲,張佳闊,等. 玉米CCCH基因家族鑒定及分析[J]. 中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報, 2019, 21(8): 19-27.

    [35]RUIZ-SOLA M A, ARBONA V, GOMEZ-CADENAS A, et al. A root specific induction of carotenoid biosynthesis contributes to ABA production upon salt stress in arabidopsis [J]. PLoS One, 2014, 9(3): e90765.

    [36]BARRERO J M, RODRIGUEZ P L, QUESADA V, et al. Both abscisic acid (ABA)-dependent and ABA-independent pathways govern the induction of NCED3, AAO3 and ABA1 in response to salt stress [J]. Plant, Cell and Environment, 2006, 29(10): 2000-2008.

    [37]NAKASHIMA K, SHINWARI Z K, SAKUMA Y, et al. Organization and expression of two Arabidopsis DREB2 genes encoding DRE-binding proteins involved in dehydration- and high-salinity-responsive gene expression [J]. Plant Molecular Biology, 2000, 42(4): 657-665.

    [38]GONG Z, XIONG L, SHI H, et al. Plant abiotic stress response and nutrient use efficiency [J]. Science China(Life Sciences),2020, 63(5): 635-674.

    [39]ZHAO H, LI Z, WANG Y, et al. Cellulose synthase-like protein OsCSLD4 plays an important role in the response of rice to salt stress by mediating abscisic acid biosynthesis to regulate osmotic stress tolerance [J]. Plant Biotechnol J, 2022, 20(3): 468-484.

    [40]蘭冬雪,湯麗影,李佳,等. 禾本科植物NBS-LRR類抗病基因結(jié)構(gòu),功能和進化研究進展[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報, 2019,35(15):124-127.

    [41]NAVARRO L, ZIPFEL C, ROWLAND O, et al. The transcriptional innate immune response to flg22. interplay and overlap with Avr gene-dependent defense responses and bacterial pathogenesis[J]. Plant Physiology, 2004, 135(2): 1113-1128.

    (責(zé)任編輯:石春林)

    猜你喜歡
    共線性基序耐鹽
    EPIYA 基序與幽門螺桿菌感染相關(guān)胃病關(guān)系的研究進展
    帶TRS基序突變的新型冠狀病毒威脅更大
    有了這種合成酶 水稻可以耐鹽了
    芥藍Aux/IAA家族基因生物信息學(xué)與表達分析
    銀行不良貸款額影響因素分析
    文氏圖在計量統(tǒng)計類課程教學(xué)中的應(yīng)用
    ——以多重共線性內(nèi)容為例
    不完全多重共線性定義存在的問題及其修正建議
    耐鹽保水劑的合成及其性能
    化工進展(2015年6期)2015-11-13 00:27:26
    耐鹽高降解蛋白菌株的分離鑒定及其降解條件的研究
    診斷復(fù)共線性的特征分析法及其在GEO定軌中的應(yīng)用
    丰满人妻一区二区三区视频av| 91麻豆av在线| av.在线天堂| 久久精品91蜜桃| 神马国产精品三级电影在线观看| 九色成人免费人妻av| 国产精品日韩av在线免费观看| 日本一二三区视频观看| 高清在线国产一区| 免费观看精品视频网站| 全区人妻精品视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产单亲对白刺激| 一个人观看的视频www高清免费观看| 少妇的逼好多水| 国产成人福利小说| 中文字幕熟女人妻在线| 久久精品综合一区二区三区| 国产av不卡久久| 精品午夜福利在线看| 久久精品影院6| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品久久久久久av不卡| 国产真实乱freesex| 在线播放国产精品三级| 欧美日韩综合久久久久久 | 国产私拍福利视频在线观看| 男女视频在线观看网站免费| 黄色丝袜av网址大全| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 色5月婷婷丁香| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 欧美黑人欧美精品刺激| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 99精品久久久久人妻精品| 99热这里只有是精品50| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产精品人妻久久久影院| 露出奶头的视频| 久久久久久久久中文| 精品国内亚洲2022精品成人| 精品无人区乱码1区二区| 国内精品久久久久久久电影| 国产精品久久久久久久久免| 老司机午夜福利在线观看视频| 三级毛片av免费| 一本一本综合久久| 精品欧美国产一区二区三| a在线观看视频网站| 久久国内精品自在自线图片| 天天躁日日操中文字幕| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产精品伦人一区二区| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产极品精品免费视频能看的| 美女黄网站色视频| 久久久久九九精品影院| 窝窝影院91人妻| 我的老师免费观看完整版| 国产91精品成人一区二区三区| 一区二区三区四区激情视频 | av女优亚洲男人天堂| 真实男女啪啪啪动态图| 欧美一区二区精品小视频在线| 十八禁网站免费在线| 最后的刺客免费高清国语| 在线播放国产精品三级| 国产一区二区三区视频了| 亚洲精品色激情综合| 国产一区二区激情短视频| 久久亚洲精品不卡| 亚洲男人的天堂狠狠| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 免费无遮挡裸体视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲精品久久国产高清桃花| 久久国产精品人妻蜜桃| 成人av一区二区三区在线看| 一级a爱片免费观看的视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产91精品成人一区二区三区| 午夜福利在线观看吧| 内地一区二区视频在线| h日本视频在线播放| 99热网站在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品一区二区免费欧美| 日韩一本色道免费dvd| 综合色av麻豆| 亚洲久久久久久中文字幕| 在线观看66精品国产| 久久中文看片网| 亚洲四区av| 一本精品99久久精品77| 男女啪啪激烈高潮av片| 深爱激情五月婷婷| 成熟少妇高潮喷水视频| 欧美区成人在线视频| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 日韩欧美国产在线观看| av在线蜜桃| 久久精品综合一区二区三区| x7x7x7水蜜桃| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日本 av在线| 成人二区视频| 国产精品1区2区在线观看.| 精品一区二区免费观看| 99在线视频只有这里精品首页| 久久久精品大字幕| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 一进一出抽搐动态| 国产免费男女视频| 99久久精品热视频| 能在线免费观看的黄片| 国产午夜精品论理片| 午夜a级毛片| 高清毛片免费观看视频网站| 免费人成在线观看视频色| 日韩欧美国产一区二区入口| 一个人观看的视频www高清免费观看| 中文在线观看免费www的网站| 成人特级黄色片久久久久久久| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 性欧美人与动物交配| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 深夜a级毛片| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲美女搞黄在线观看 | 久久久久久久久大av| 精品欧美国产一区二区三| 日韩欧美在线乱码| eeuss影院久久| 一边摸一边抽搐一进一小说| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲自拍偷在线| 久久6这里有精品| 午夜久久久久精精品| 精品一区二区三区人妻视频| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品久久久久久久久免| 国内精品美女久久久久久| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 久久久久久国产a免费观看| 国产视频内射| 黄色日韩在线| 听说在线观看完整版免费高清| 婷婷丁香在线五月| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美成人a在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 日本与韩国留学比较| 最近最新免费中文字幕在线| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲美女视频黄频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 国产色婷婷99| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 成人特级av手机在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 麻豆一二三区av精品| 精品久久久久久久久亚洲 | 久久热精品热| 男女边吃奶边做爰视频| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲av二区三区四区| 精品不卡国产一区二区三区| 22中文网久久字幕| 草草在线视频免费看| 床上黄色一级片| a在线观看视频网站| 热99re8久久精品国产| 观看免费一级毛片| 亚洲av二区三区四区| 少妇人妻一区二区三区视频| 日日撸夜夜添| 观看美女的网站| 三级毛片av免费| 国产成人a区在线观看| 国产毛片a区久久久久| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲av.av天堂| 最近中文字幕高清免费大全6 | 国产高清三级在线| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产成人aa在线观看| 伦理电影大哥的女人| 九色成人免费人妻av| 亚洲欧美精品综合久久99| av.在线天堂| av在线天堂中文字幕| 日本三级黄在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 99久久中文字幕三级久久日本| 床上黄色一级片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| av在线观看视频网站免费| 亚洲七黄色美女视频| 成人综合一区亚洲| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 精品人妻熟女av久视频| 国产高清不卡午夜福利| 超碰av人人做人人爽久久| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲综合色惰| 久久久久国内视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲最大成人av| 给我免费播放毛片高清在线观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 内地一区二区视频在线| 网址你懂的国产日韩在线| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 精品免费久久久久久久清纯| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲一区高清亚洲精品| a级一级毛片免费在线观看| 中文资源天堂在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| 极品教师在线免费播放| 免费看av在线观看网站| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 在线观看66精品国产| 动漫黄色视频在线观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 色精品久久人妻99蜜桃| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 午夜福利18| 国产中年淑女户外野战色| 又紧又爽又黄一区二区| 日韩av在线大香蕉| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 一区福利在线观看| 美女 人体艺术 gogo| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 哪里可以看免费的av片| 国产高清三级在线| 免费av毛片视频| 久久久国产成人精品二区| 我的老师免费观看完整版| 一个人观看的视频www高清免费观看| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 国产高清视频在线播放一区| 99riav亚洲国产免费| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产在视频线在精品| 国产一区二区三区av在线 | 亚洲av熟女| 成人精品一区二区免费| 少妇的逼好多水| 久久久久久久久久久丰满 | 人妻少妇偷人精品九色| 动漫黄色视频在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 日韩国内少妇激情av| 变态另类丝袜制服| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲av.av天堂| 久久草成人影院| 中文字幕av成人在线电影| 最后的刺客免费高清国语| 欧美精品啪啪一区二区三区| 淫秽高清视频在线观看| 99久久精品一区二区三区| 久久久久久伊人网av| 欧美成人免费av一区二区三区| 日韩欧美国产一区二区入口| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产老妇女一区| 搡老妇女老女人老熟妇| 尾随美女入室| 久久久久久大精品| 成人精品一区二区免费| 久久精品综合一区二区三区| 中文字幕久久专区| 亚洲av美国av| 乱码一卡2卡4卡精品| 精华霜和精华液先用哪个| 好男人在线观看高清免费视频| 午夜视频国产福利| 免费在线观看影片大全网站| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产老妇女一区| 18禁在线播放成人免费| 女人被狂操c到高潮| 婷婷亚洲欧美| 淫秽高清视频在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲综合色惰| 国产成人aa在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲国产色片| 午夜日韩欧美国产| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 乱系列少妇在线播放| 亚洲经典国产精华液单| 天堂√8在线中文| 国产精品久久久久久久久免| av.在线天堂| 最新中文字幕久久久久| 亚洲av免费高清在线观看| 在线国产一区二区在线| 热99在线观看视频| 午夜激情福利司机影院| 波多野结衣巨乳人妻| 99热只有精品国产| 99热这里只有精品一区| 欧美三级亚洲精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 成人二区视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 91av网一区二区| 午夜激情福利司机影院| 国产黄片美女视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 无人区码免费观看不卡| 伦理电影大哥的女人| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 熟女人妻精品中文字幕| 色综合色国产| 在线免费观看的www视频| bbb黄色大片| 国产成人一区二区在线| 国产精品三级大全| 九九爱精品视频在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产一区二区在线av高清观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 黄色日韩在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 婷婷丁香在线五月| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 欧美一区二区国产精品久久精品| 精品无人区乱码1区二区| 国产乱人伦免费视频| 国产精品人妻久久久影院| 成人二区视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 日韩欧美精品免费久久| 天堂影院成人在线观看| 国产乱人视频| 高清毛片免费观看视频网站| 中文资源天堂在线| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久这里只有精品中国| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 色综合色国产| 色哟哟·www| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| .国产精品久久| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 免费看日本二区| av在线蜜桃| av视频在线观看入口| 精品国内亚洲2022精品成人| 一a级毛片在线观看| 日本一二三区视频观看| 亚洲真实伦在线观看| 毛片女人毛片| 国产成人一区二区在线| 国产亚洲91精品色在线| 国内精品久久久久久久电影| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 免费大片18禁| 淫妇啪啪啪对白视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 身体一侧抽搐| 婷婷精品国产亚洲av在线| 免费人成视频x8x8入口观看| 日韩一区二区视频免费看| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲美女搞黄在线观看 | 久久久久久久久久成人| 九色成人免费人妻av| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲国产精品成人综合色| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 99热网站在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产高潮美女av| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久久久久久久久久丰满 | av视频在线观看入口| 人人妻人人看人人澡| 国产精品人妻久久久影院| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 欧美色欧美亚洲另类二区| av在线蜜桃| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 少妇人妻精品综合一区二区 | 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲av熟女| 免费av不卡在线播放| 亚洲五月天丁香| 成人特级黄色片久久久久久久| 麻豆国产av国片精品| 久久久久久九九精品二区国产| 国内精品久久久久久久电影| 3wmmmm亚洲av在线观看| 老女人水多毛片| 国产av不卡久久| 18+在线观看网站| 午夜亚洲福利在线播放| 在线a可以看的网站| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 欧美bdsm另类| 亚洲欧美日韩无卡精品| 男插女下体视频免费在线播放| 免费观看精品视频网站| 午夜a级毛片| 无人区码免费观看不卡| 天天一区二区日本电影三级| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产69精品久久久久777片| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | av专区在线播放| 日本五十路高清| 在现免费观看毛片| 黄色日韩在线| 日韩av在线大香蕉| 搞女人的毛片| or卡值多少钱| 看片在线看免费视频| 五月玫瑰六月丁香| 天堂影院成人在线观看| 少妇丰满av| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 啦啦啦啦在线视频资源| 国产精华一区二区三区| 国产黄片美女视频| 欧美zozozo另类| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品一及| 亚洲欧美激情综合另类| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 久久精品国产亚洲av涩爱 | 久久香蕉精品热| 色精品久久人妻99蜜桃| 黄色一级大片看看| 色综合站精品国产| 精品久久久噜噜| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 一级黄片播放器| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产高清有码在线观看视频| 十八禁国产超污无遮挡网站| www日本黄色视频网| 51国产日韩欧美| 日本黄色视频三级网站网址| 搡老妇女老女人老熟妇| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲av免费在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 香蕉av资源在线| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 最好的美女福利视频网| 精品一区二区三区视频在线| 一区二区三区激情视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 91狼人影院| 国产亚洲91精品色在线| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲真实伦在线观看| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲精品在线观看二区| 午夜精品在线福利| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲av熟女| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 亚洲av.av天堂| 日本三级黄在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 欧美一级a爱片免费观看看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 99热这里只有是精品在线观看| 国产三级在线视频| 国产日本99.免费观看| 波多野结衣高清无吗| 国产麻豆成人av免费视频| 999久久久精品免费观看国产| 久久国内精品自在自线图片| 欧美区成人在线视频| 亚洲精品影视一区二区三区av| h日本视频在线播放| 亚洲精华国产精华精| 在线观看66精品国产| 99riav亚洲国产免费| 久久香蕉精品热| 嫩草影院入口| 婷婷亚洲欧美| www.www免费av| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 韩国av在线不卡| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 人人妻人人看人人澡| 精品久久久久久久末码| 久久久午夜欧美精品| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲最大成人av| 又紧又爽又黄一区二区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久久久久伊人网av| 在线观看舔阴道视频| 亚洲欧美清纯卡通| 久久热精品热| 国产人妻一区二区三区在| 一进一出抽搐gif免费好疼| 乱系列少妇在线播放| 久久欧美精品欧美久久欧美| 免费看日本二区| www日本黄色视频网| 成人二区视频| 精品久久久久久久久亚洲 | 全区人妻精品视频| 亚洲av免费高清在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲人与动物交配视频| av中文乱码字幕在线| 国产精品伦人一区二区| 午夜福利欧美成人| 精品久久久久久久久久久久久| 波多野结衣高清作品| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 能在线免费观看的黄片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 黄色一级大片看看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 久久99热这里只有精品18| 日韩欧美国产在线观看| 国产av在哪里看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 别揉我奶头 嗯啊视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 99久久成人亚洲精品观看| 精品国产三级普通话版| 99热这里只有精品一区| 久久久久久伊人网av| 最近最新中文字幕大全电影3| 我的女老师完整版在线观看| 国产在视频线在精品| 亚州av有码| 国产色婷婷99| 国产精品三级大全| 亚洲午夜理论影院| 天美传媒精品一区二区| 一个人看的www免费观看视频| 桃红色精品国产亚洲av| 国产免费一级a男人的天堂| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲欧美日韩无卡精品| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产精品人妻久久久影院| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲av免费高清在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 久久久久久国产a免费观看| 日本成人三级电影网站| 在线免费观看不下载黄p国产 | 干丝袜人妻中文字幕| 日韩欧美精品v在线| 老司机午夜福利在线观看视频| 丰满的人妻完整版| 日日夜夜操网爽| 制服丝袜大香蕉在线| 免费看光身美女| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲精品一区av在线观看| 性欧美人与动物交配| 久久99热这里只有精品18| 精品久久久噜噜| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产伦一二天堂av在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 俄罗斯特黄特色一大片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 成人av在线播放网站| 五月伊人婷婷丁香| 久久久久久久久久久丰满 | 精品一区二区三区视频在线| 深夜a级毛片| 国产aⅴ精品一区二区三区波|