燈盞花乙素調(diào)節(jié)cGAS/STING 信號通路對創(chuàng)傷性腦損傷大鼠神經(jīng)炎癥的影響Δ

宋 宇 ，宋明明 ，魏志玄 ，王海均 （.南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，河南 南陽 47000；.南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第三附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，河南 南陽 47007；.華中科技大學(xué)協(xié)和醫(yī)院神經(jīng)外科，武漢 400）

創(chuàng)傷性腦損傷（traumatic brain injury，TBI）作為一種由外部機械力引起的獲得性腦損傷，可導(dǎo)致神經(jīng)損傷、行為改變和認知功能下降，嚴重影響患者生活質(zhì)量，且由于其高發(fā)病率和長期后遺癥，給患者家庭和社會帶來了沉重的醫(yī)療和經(jīng)濟負擔(dān)[1]。盡管TBI引發(fā)的暫時性或永久性損傷的治療策略已取得了一定進展，但目前TBI 的有效治療仍面臨巨大挑戰(zhàn)[2]，仍需探索其發(fā)生發(fā)展的分子機制，從而開發(fā)更有效的治療方案。研究顯示，TBI后會發(fā)生急性、強烈的炎癥級聯(lián)反應(yīng)，其特征是小膠質(zhì)細胞激活、外周免疫細胞遷移和募集、炎癥介質(zhì)釋放等，且這些炎癥介質(zhì)會誘導(dǎo)繼發(fā)性細胞死亡并阻礙神經(jīng)功能恢復(fù)，故控制TBI后炎癥反應(yīng)被認為是一種很有前途的治療方法[3—4]。

環(huán)鳥苷酸-腺苷酸合成酶（cyclic guanylate-adenylate synthase，cGAS）/干擾素基因刺激蛋白（stimulator of interferon genes，STING）信號通路是先天免疫系統(tǒng)中重要的模式識別及效應(yīng)通路之一，能夠識別存在于細胞質(zhì)的異常DNA 分子，進而誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素（interferon typeⅠ，IFN-Ⅰ）和其他炎癥因子表達[5]。據(jù)報道，cGAS/STING信號通路作為IFN-Ⅰ反應(yīng)的關(guān)鍵誘導(dǎo)因素，與多種神經(jīng)退行性疾病中的神經(jīng)炎癥密切相關(guān)，且該通路激活后還會參與TBI后神經(jīng)細胞死亡和功能障礙[6—7]。

燈盞花乙素（scutellarin，Scu）是一種從黃芩、燈盞花和半枝蓮中提取的黃酮類化合物，具有抗炎、抗氧化和神經(jīng)保護等多種藥理作用[8—9]。已有研究表明，Scu通過抑制絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）/核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）通路抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，從而減輕腦缺血/再灌注大鼠的腦損傷[10]。但Scu對TBI后神經(jīng)炎癥的影響及其機制尚不清楚。據(jù)此，本研究構(gòu)建了TBI 大鼠模型，著重觀察了Scu 對TBI 大鼠神經(jīng)炎癥的影響以及cGAS/STING信號通路在此過程中的變化，以期為TBI治療方法及相關(guān)機制的闡明提供新思路。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有：SA-100型大鼠腦立體定位儀（上海玉研科學(xué)儀器有限公司）、DM IL LED型熒光顯微鏡（德國Leica公司）、SpectraMax iD3型多功能酶標(biāo)儀[美谷分子儀器（上海）有限公司]。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用的主要藥品與試劑有：Scu 對照品、cGAS抑制劑RU.521（美國MedChemExpress公司，批號分別為HY-N0751、HY-114180，純度均不低于98.56%）；蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，批號20196537）；原位末端標(biāo)記（TdT-mediated dUTP nick-end labeling，TUNEL）細胞凋亡檢測試劑盒（上海弗元生物科技有限公司，批號19273185）；β 干擾素（interferon-β，IFN-β）、CXC 趨化因子配體10（CXC chemokine ligand-10，CXCL10）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）酶聯(lián)免疫吸附檢測（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（上海酶研生物科技有限公司，批號分別為21071196、22551682、22670618、21348216）；cGAS兔多克隆抗體（美國Invitrogen 公司，批號PA5-121188）；STING、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）兔單克隆抗體及辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗（英國Abcam公司，批號分別為ab227704、ab181602、ab205718）。

1.3 動物

本研究所用動物為SPF級健康雄性SD大鼠，共124只，7～8周齡，體重240～280 g，購自湖北省實驗動物研究中心，動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（鄂）2020-0018。所有大鼠均在溫度23～24 ℃、光照12 h/黑暗12 h、相對濕度50%～60%的環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后開展后續(xù)實驗，飼養(yǎng)期間自由進食和飲水。本研究動物實驗符合《實驗動物護理和使用指南》中相關(guān)要求，并通過了南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（倫理審查批號2022-6-7-2）。

2 方法

2.1 TBI動物模型構(gòu)建、分組與給藥

造模前大鼠禁食不禁水12 h。隨機抽取24 只大鼠作為假手術(shù)組，其余100 只均采用改良Feeney 法構(gòu)建TBI模型[11]：腹腔注射2%戊巴比妥鈉（50 mg/kg）麻醉大鼠，將其呈俯臥位固定于腦立體定位儀上，以75%乙醇消毒頭皮后沿腦正中線左側(cè)切開，暴露左頂骨，于冠狀縫后3 mm、矢狀縫左3 mm處開一直徑約5 mm的骨窗，并注意保持硬腦膜完整性；20 g 重錘從25 cm 高度自由落下，撞擊硬腦膜，致大鼠左側(cè)頂葉大腦皮質(zhì)局灶性損傷，止血后以碘伏清洗，縫合頭皮。假手術(shù)組大鼠僅開骨窗，不進行撞擊，其余操作同造模大鼠。若大鼠出現(xiàn)短暫的呼吸暫停、四肢抽搐且昏迷2 h以上，則視為TBI模型構(gòu)建成功[12]。選取造模成功的大鼠96只，采用隨機數(shù)字表法分為TBI 組，Scu 低、高劑量組，cGAS 抑制劑組，每組24只。分組完成后，Scu低、高劑量組大鼠立即分別腹腔注射40、80 mg/kg Scu[以二甲基亞砜（DMSO）溶解后再以生理鹽水稀釋][10]，并鼻內(nèi)滴注等量的DMSO和生理鹽水；cGAS 抑制劑組大鼠鼻內(nèi)滴注450 μg/kg RU.521（以DMSO溶解后再以生理鹽水稀釋）[13]，并腹腔注射等量DMSO和生理鹽水；假手術(shù)組和TBI組大鼠均分別腹腔注射和鼻內(nèi)滴注等量DMSO和生理鹽水；每隔24 h給藥1次，共給藥4次（包括造模當(dāng)天的給藥）。

2.2 大鼠神經(jīng)功能評估

采用改良神經(jīng)功能缺損評分（modified neurological severity scores，mNSS）法進行評估。在第2、3 次和末次給藥2 h 后（即給藥1、2、3 d），采用mNSS 法評估所有大鼠的神經(jīng)功能（包括運動、反射、感覺和平衡功能4個項目），0、1～6、7～12、13～18 分分別表示無、輕度、中度、重度神經(jīng)功能障礙[14]。

2.3 大鼠腦含水量測定

采用干/濕比重法測定。末次mNSS 評分結(jié)束后每組隨機抽取6只大鼠，麻醉后斷頭取腦，使用電子分析天平立即稱定腦組織重量（即濕重），隨后放入100 ℃烤箱中烘烤72 h，在此期間多次稱重，直至恒重（即干重）。計算腦含水量：腦含水量（%）＝（濕重－干重）/濕重×100%。

2.4 大鼠腦組織病理學(xué)變化觀察

采用HE染色法進行觀察。每組另隨機抽取6只大鼠，麻醉后斷頭取腦，將左側(cè)損傷部位腦組織使用4%多聚甲醛固定24 h后脫水、透明、石蠟包埋和常規(guī)切片（厚度4 μm）。切片脫蠟至水后依次進行蘇木素、伊紅染色，脫水、透明、封片后使用光學(xué)顯微鏡觀察腦組織病理學(xué)變化并拍照。

2.5 大鼠腦組織細胞凋亡觀察

采用TUNEL染色法進行觀察。取“2.4”項下腦組織石蠟切片，參照TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒說明書，依次采用TUNEL 反應(yīng)混合液、DAPI 染色，封片后使用熒光顯微鏡觀察并拍照。TUNEL 染色陽性細胞（即凋亡細胞）的核呈綠色熒光。每張切片中隨機取6個視野，使用Image J 圖像分析軟件計數(shù)凋亡細胞和總細胞（結(jié)果取平均值），并計算腦組織細胞凋亡率：腦組織細胞凋亡率（%）＝凋亡細胞數(shù)/總細胞數(shù)×100%。

2.6 大鼠腦組織中炎癥因子含量測定

每組另隨機抽取6 只大鼠，麻醉后斷頭取腦，采用ELISA法檢測大鼠腦組織中炎癥因子（IFN-β、CXCL10、TNF-α、IL-6）含量，具體操作參照相應(yīng)試劑盒說明書進行。檢測儀器為酶標(biāo)儀（波長450 nm）。

2.7 大鼠腦組織中cGAS、STING蛋白表達測定

采用Western blot 法進行檢測。將每組剩余的6 只大鼠麻醉后斷頭取腦，將左側(cè)損傷部位腦組織使用RIPA裂解液裂解，提取組織中總蛋白，測定蛋白濃度后進行變性，然后通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳進行分離，接著將分離的蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上，以5%脫脂奶粉室溫封閉1 h；加入cGAS、STING、GAPDH（內(nèi)參）一抗（稀釋比例分別為1∶1 000、1∶400、1∶10 000），4 ℃孵育過夜；次日洗滌后加入HRP 標(biāo)記的山羊抗兔IgG 二抗（稀釋比例為1∶20 000），室溫孵育1.5 h；化學(xué)發(fā)光試劑（ECL）顯色。掃描圖像后用Image J1.8.0 軟件分析蛋白條帶灰度，以目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參（GAPDH）蛋白條帶灰度值的比值表示目的蛋白的相對表達水平。

2.8 統(tǒng)計學(xué)方法

實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 25.0軟件進行統(tǒng)計分析。符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用SNK-q檢驗。檢驗水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 大鼠神經(jīng)功能評估結(jié)果

給藥1、2、3 d 時，與假手術(shù)組比較，TBI 組大鼠mNSS 顯著升高（P＜0.05）；與TBI 組比較，Scu 低、高劑量組和cGAS 抑制劑組大鼠mNSS 均顯著降低（P＜0.05）；與Scu 低劑量組比較，Scu 高劑量組和cGAS 抑制劑組大鼠mNSS 均顯著降低（P＜0.05）；Scu 高劑量組和cGAS 抑制劑組大鼠mNSS 比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

表1 給藥不同時間后各組大鼠的mNSS 結(jié)果（±s，n＝24，分）

表1 給藥不同時間后各組大鼠的mNSS 結(jié)果（±s，n＝24，分）

a：與假手術(shù)組比較，P＜0.05；b：與TBI組比較，P＜0.05；c：與Scu低劑量組比較，P＜0.05。

給藥3 d 0 10.92±0.75a 8.50±0.54b 5.33±0.40bc 5.63±0.35bc 1 768.784＜0.001組別假手術(shù)組TBI組Scu低劑量組Scu高劑量組cGAS抑制劑組F P給藥1 d 0 12.75±0.84a 10.29±0.76b 7.08±0.58bc 7.54±0.62bc 1 373.795＜0.001給藥2 d 0 11.83±0.84a 9.38±0.68b 6.25±0.58bc 6.58±0.54bc 1 312.047＜0.001

3.2 大鼠腦含水量測定結(jié)果

與假手術(shù)組比較，TBI 組大鼠腦含水量顯著升高（P＜0.05）；與TBI組比較，Scu低、高劑量組和cGAS抑制劑組大鼠腦含水量顯著降低（P＜0.05）；與Scu低劑量組比較，Scu 高劑量組和cGAS 抑制劑組大鼠腦含水量顯著降低（P＜0.05）；Scu高劑量組和cGAS抑制劑組大鼠腦含水量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠腦含水量和腦組織細胞凋亡率測定結(jié)果（±s，n＝6，%）

表2 各組大鼠腦含水量和腦組織細胞凋亡率測定結(jié)果（±s，n＝6，%）

a：與假手術(shù)組比較，P＜0.05；b：與TBI組比較，P＜0.05；c：與Scu低劑量組比較，P＜0.05。

腦組織細胞凋亡率7.64±0.52 22.48±1.35a 18.57±0.94b 12.96±0.87bc 13.45±0.95bc 209.388＜0.001組別假手術(shù)組TBI組Scu低劑量組Scu高劑量組cGAS抑制劑組F P腦含水量73.85±0.84 81.94±1.06a 79.32±0.92b 75.16±0.95bc 75.73±0.97bc 73.866＜0.001

3.3 大鼠腦組織病理學(xué)變化觀察結(jié)果

假手術(shù)組大鼠腦組織無明顯異常。與假手術(shù)組比較，TBI組大鼠腦組織存在病理學(xué)損傷，具體表現(xiàn)為：大量炎癥細胞（包括淋巴細胞、嗜中性粒細胞等）浸潤，間質(zhì)水腫，明顯出血，細胞排列不規(guī)則、結(jié)構(gòu)模糊且出現(xiàn)核固縮和核裂解。與TBI 組比較，Scu 低、高劑量組和cGAS抑制劑組大鼠上述組織病理學(xué)損傷均有不同程度改善，且以Scu 高劑量組和cGAS 抑制劑組大鼠改善更明顯。結(jié)果見圖1。

圖1 各組大鼠腦組織病理學(xué)變化的HE染色圖

3.4 大鼠腦組織細胞凋亡情況測定結(jié)果

與假手術(shù)組比較，TBI 組大鼠腦組織細胞凋亡率顯著升高（P＜0.05）；與TBI 組比較，Scu 低、高劑量組和cGAS抑制劑組大鼠腦組織細胞凋亡率均顯著降低（P＜0.05）；與Scu 低劑量組比較，Scu 高劑量組和cGAS 抑制劑組大鼠腦組織細胞凋亡率均顯著降低（P＜0.05）；Scu高劑量組和cGAS 抑制劑組大鼠腦組織細胞凋亡率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見圖2、表2。

圖2 各組大鼠腦組織細胞凋亡的TUNEL染色圖

3.5 大鼠腦組織中炎癥因子含量測定結(jié)果

與假手術(shù)組比較，TBI 組大鼠腦組織中IFN-β、CXCL10、TNF-α、IL-6 含量均顯著升高（P＜0.05）；與TBI 組比較，Scu 低、高劑量組和cGAS 抑制劑組大鼠腦組織中上述指標(biāo)含量均顯著降低（P＜0.05）；與Scu低劑量組比較，Scu 高劑量組和cGAS 抑制劑組大鼠腦組織中上述指標(biāo)含量均顯著降低（P＜0.05）；Scu高劑量組和cGAS 抑制劑組大鼠上述指標(biāo)含量比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠腦組織中炎癥因子含量測定結(jié)果（±s，n＝6，pg/mg）

表3 各組大鼠腦組織中炎癥因子含量測定結(jié)果（±s，n＝6，pg/mg）

a：與假手術(shù)組比較，P＜0.05；b：與TBI組比較，P＜0.05；c：與Scu低劑量組比較，P＜0.05。

IL-6 3.85±0.46 17.69±0.92a 12.45±1.48b 5.73±0.76bc 6.58±0.83bc 216.205＜0.001組別假手術(shù)組TBI組Scu低劑量組Scu高劑量組cGAS抑制劑組F P IFN-β 0.34±0.06 2.96±0.21a 2.01±0.18b 0.87±0.09bc 0.96±0.12bc 321.629＜0.001 CXCL10 5.21±0.68 38.49±3.32a 26.17±2.85b 13.64±1.46bc 15.05±1.87bc 197.110＜0.001 TNF-α 2.96±0.31 13.14±1.20a 9.73±1.05b 4.28±0.59bc 4.85±0.64bc 162.297＜0.001

3.6 大鼠腦組織中cGAS、STING蛋白表達測定結(jié)果

與假手術(shù)組比較，TBI 組大鼠腦組織中cGAS、STING蛋白的相對表達水平顯著升高（P＜0.05）；與TBI組比較，Scu低、高劑量組和cGAS抑制劑組大鼠腦組織中上述蛋白的相對表達水平均顯著降低（P＜0.05）；與Scu低劑量組比較，Scu高劑量組和cGAS抑制劑組大鼠腦組織中上述蛋白的相對表達水平均顯著降低（P＜0.05）；Scu 高劑量組和cGAS 抑制劑組大鼠上述蛋白的相對表達水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見圖3、表4。

圖3 各組大鼠腦組織中cGAS、STING 蛋白的免疫印跡圖

表4 各組大鼠腦組織中cGAS、STING 蛋白相對表達水平測定結(jié)果（±s，n＝6）

表4 各組大鼠腦組織中cGAS、STING 蛋白相對表達水平測定結(jié)果（±s，n＝6）

a：與假手術(shù)組比較，P＜0.05；b：與TBI組比較，P＜0.05；c：與Scu低劑量組比較，P＜0.05。

STING/GAPDH 0.28±0.04 0.87±0.06a 0.68±0.06b 0.41±0.05bc 0.39±0.05bc 127.457＜0.001組別假手術(shù)組TBI組Scu低劑量組Scu高劑量組cGAS抑制劑組F P cGAS/GAPDH 0.23±0.05 0.79±0.07a 0.62±0.06b 0.38±0.05bc 0.34±0.06bc 91.000＜0.001

4 討論

目前，TBI 仍是全世界殘疾和死亡的最常見原因之一，TBI繼發(fā)性損傷在預(yù)后中的影響越來越受到關(guān)注，尤其是繼發(fā)性損傷中的神經(jīng)炎癥反應(yīng)[15]。鑒于神經(jīng)炎癥反應(yīng)在TBI發(fā)生和病情進展中的重要作用，神經(jīng)炎癥相關(guān)分子靶點也一直是藥物等治療方式的主要研究方向[16]。本研究通過改良Feeney 法構(gòu)建TBI 大鼠模型，結(jié)果顯示，相比于假手術(shù)組大鼠，TBI 組大鼠的mNSS、腦含水量以及腦組織細胞凋亡率均升高，且腦組織存在大量炎癥細胞浸潤、間質(zhì)水腫、明顯出血等病理學(xué)損傷，表明TBI 大鼠出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損、腦水腫和腦組織損傷，這符合TBI臨床癥狀，提示TBI大鼠模型制備成功，可用于藥物治療及相關(guān)機制研究。

Scu作為一種天然黃酮類活性成分，其抗炎、神經(jīng)保護等特性已在多篇文獻中報道。例如，Scu 可通過調(diào)節(jié)腸道菌群和抑制小膠質(zhì)細胞中環(huán)磷酸腺苷/蛋白激酶A/環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白/組蛋白去乙酰化酶3 信號通路激活并逆轉(zhuǎn)阿爾茨海默病β 淀粉樣蛋白前體-早老蛋白-1小鼠的神經(jīng)炎癥和認知障礙[17]；可通過抑制磷酸化氨基末端蛋白激酶和磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶下調(diào)小膠質(zhì)細胞/腦巨噬細胞中促炎介質(zhì)的表達，發(fā)揮抗炎和神經(jīng)保護作用[18]；可靶向作用于醛糖還原酶-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶軸發(fā)揮抗氧化作用，改善腦缺血/再灌注損傷小鼠的神經(jīng)功能缺損和神經(jīng)元損傷，縮小腦梗死面積[19]。但是，Scu 對TBI 的治療作用及機制尚有待闡明。本研究中，40、80 mg/kg的Scu給藥后均可降低TBI 大鼠mNSS、腦含水量以及腦組織細胞凋亡率，同時改善其腦組織病理學(xué)損傷。該結(jié)果表明，Scu可減輕TBI大鼠損傷腦組織的細胞凋亡和腦水腫，促進神經(jīng)功能恢復(fù)。此外，本研究結(jié)果顯示，TBI大鼠腦組織中促炎因子TNF-α、IL-6含量與行假手術(shù)的大鼠相比明顯升高，這與腦組織病理結(jié)果中炎癥細胞浸潤情況相一致；而Scu治療后可降低TBI大鼠腦組織中TNF-α、IL-6含量，減少其炎癥細胞浸潤。這表明Scu 可能通過抑制神經(jīng)炎癥緩解TBI。Lu 等[20]研究亦表明，Scu 可改善脂多糖誘導(dǎo)的TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子升高，抑制海馬神經(jīng)炎癥并減輕小鼠抑郁樣行為，與本研究結(jié)果類似。

cGAS/STING信號通路作為一條與免疫炎癥密切相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，可介導(dǎo)IFN-Ⅰ反應(yīng)，誘導(dǎo)IFN-β、CXCL10、TNF-α等細胞因子產(chǎn)生，近年該通路與神經(jīng)炎癥和腦損傷的關(guān)系備受關(guān)注[21—22]。研究顯示，激活cGAS/STING 信號通路可誘導(dǎo)小膠質(zhì)細胞活化，促進腦部炎癥[23]，而抑制該通路激活可減弱缺血/再灌注誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥和腦損傷[24]。本研究中，TBI 大鼠腦組織中IFN-β、CXCL10 含量及cGAS、STING 蛋白相對表達水平與行假手術(shù)的大鼠相比均顯著升高，這提示TBI發(fā)生后cGAS/STING信號通路被激活，可能進而引發(fā)神經(jīng)炎癥。而經(jīng)Scu 治療后，TBI 大鼠腦組織中IFN-β、CXCL10 含量及cGAS、STING 蛋白相對表達水平均顯著降低，表明Scu 減輕TBI 大鼠神經(jīng)炎癥的分子機制可能與抑制cGAS/STING 信號通路激活有關(guān)。為了更充分地驗證cGAS/STING信號通路在TBI后神經(jīng)炎癥中的作用，本研究采用cGAS 選擇性抑制劑RU.521 治療TBI大鼠，結(jié)果顯示，RU.521 除抑制cGAS/STING 信號通路激活外，同樣可減輕TBI 大鼠神經(jīng)炎癥、損傷腦組織細胞凋亡和腦水腫，促進神經(jīng)功能恢復(fù)，且作用效果與80 mg/kg Scu 幾乎相當(dāng)。這進一步證實了Scu 可能通過抑制cGAS/STING信號通路激活來減輕神經(jīng)炎癥，進而對TBI 大鼠發(fā)揮神經(jīng)保護作用。Ding 等[25]研究亦表明，RU.521 可減輕腦靜脈竇血栓形成小鼠的炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)，減少小膠質(zhì)細胞和嗜中性粒細胞數(shù)量，同時改善神經(jīng)細胞凋亡和變性以及神經(jīng)功能缺損。

綜上所述，Scu 可能通過抑制cGAS/STING 信號通路激活來減輕TBI大鼠神經(jīng)炎癥，減少其腦組織損傷及細胞凋亡，促進其神經(jīng)功能恢復(fù)。但后續(xù)仍有待通過體外實驗觀察小膠質(zhì)細胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在Scu緩解TBI中的作用及機制等，從而為Scu 應(yīng)用于TBI 治療增加說服力。