乳及乳制品中黃曲霉毒素檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

楊 帆，黃建輝，陳 琛，關(guān)書會(huì)，劉廣鵬，張 巖*

（河北省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（特殊食品監(jiān)管技術(shù)），特殊食品安全與健康河北省工程研究中心，河北省食品檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊 050227）

黃曲霉毒素是一種來源于自然界中霉菌的毒素，已經(jīng)被證明可導(dǎo)致人類癌癥。近年來，健康飲食觀念隨著生活水平的提高逐漸深入人心，乳及乳制品由于富含維生素、鈣、鉀以及蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分成為人民青睞的健康食品，但部分存在黃曲霉毒素污染問題，這對(duì)國(guó)民健康構(gòu)成極大威脅，因此加強(qiáng)黃曲霉毒素殘留的檢測(cè)對(duì)于把控乳及乳制品質(zhì)量安全具有十分重要的意義。目前常用的測(cè)定黃曲霉毒素殘留方法有薄層色譜（thin layer chromatography，TLC）法、液相色譜-質(zhì)譜（liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）法、光譜法、電化學(xué)法、快速檢測(cè)試紙條法等。本文就黃曲霉毒素來源及危害、國(guó)內(nèi)外限量標(biāo)準(zhǔn)、檢測(cè)方法等方面進(jìn)行綜述，為進(jìn)一步開展乳及乳制品中黃曲霉毒素檢測(cè)技術(shù)發(fā)展提供思路。

1 黃曲霉毒素的來源與對(duì)人體的危害

黃曲霉毒素是黃曲霉菌和寄生曲霉等某些菌株產(chǎn)生的雙呋喃環(huán)類毒素，是Ⅰ類致癌化學(xué)物質(zhì)[1]。1960年，英國(guó)10 萬只火雞死于一種不為人知的疾病，經(jīng)過研究證實(shí)當(dāng)時(shí)用作火雞飼料的花生餅在其種植、貯藏、加工或運(yùn)輸環(huán)節(jié)可能被黃曲霉菌污染，其產(chǎn)生的“黃曲霉毒素”造成火雞的死亡，自此，黃曲霉毒素受到科學(xué)家的特別關(guān)注[2]。

黃曲霉毒素基本結(jié)構(gòu)為二呋喃環(huán)和香豆素，物理化學(xué)性質(zhì)相當(dāng)穩(wěn)定，難溶于水，對(duì)光和弱酸穩(wěn)定，強(qiáng)堿或270 ℃高溫下才會(huì)發(fā)生分解[3]。黃曲霉毒素在濕熱環(huán)境中最為常見，易存在于土壤和動(dòng)植物中，尤其是富含脂肪酸的稻谷、玉米、豆類、堅(jiān)果、牛乳及乳制品、食用植物油制品等。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了20多種黃曲霉素素，一般分為B族（黃曲霉毒素B1（aflatoxin，AFB1）、AFB2）、M族（AFM1、AFM2）和G族（AFG1、AFG2），其中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2在農(nóng)產(chǎn)品中較為常見，它們的分子結(jié)構(gòu)相似，可根據(jù)自身熒光顏色分類，B代表藍(lán)色，因?yàn)楸┞队谧贤饩€時(shí)會(huì)發(fā)出藍(lán)色熒光；G代表綠色，因其在紫外光下發(fā)出黃綠色熒光而得名[4]；M的意思即是“牛乳”，貯存條件不當(dāng)?shù)娘暳献钜妆稽S曲霉毒素破壞，奶牛在長(zhǎng)期攝食污染黃曲霉毒素的飼料后，極易出現(xiàn)抵抗力降低和營(yíng)養(yǎng)不良的現(xiàn)象，給奶農(nóng)造成嚴(yán)重?fù)p失[5]，少部分會(huì)分別轉(zhuǎn)化為AFM1和AFM2進(jìn)入乳汁。

黃曲霉毒素具有致突變性，由于本身不能引起突變，必須在機(jī)體內(nèi)經(jīng)過代謝活化后才具有致突變作用，稱為間接致突變物，能使人成纖維細(xì)胞發(fā)生程序外DNA合成，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可見染色體畸變、斷裂和缺失[3]。

黃曲霉毒素是一種劇毒的致肝癌物質(zhì)，毒性遠(yuǎn)高于氰化物、砷化物和有機(jī)農(nóng)藥，有很強(qiáng)的急性毒性，也有顯著的慢性毒性[6]，其中AFB1在污染食品中含量最高，毒性和致癌性也最強(qiáng)，對(duì)人體健康危害最大，可引起細(xì)胞錯(cuò)誤修復(fù)DNA，導(dǎo)致嚴(yán)重的DNA誘變，還可抑制DNA和RNA的合成，從而抑制蛋白質(zhì)的合成[7]。人攝入大劑量的黃曲霉毒素后可出現(xiàn)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞壞死、膽管上皮細(xì)胞增生、肝脂肪浸潤(rùn)及肝出血等急性病變，前期癥狀為發(fā)燒、嘔吐、厭食、黃疸，繼而出現(xiàn)腹水，下肢浮腫并很快死亡[6]。慢性中毒表現(xiàn)為生長(zhǎng)障礙。肝臟出現(xiàn)亞急性或慢性損傷，體質(zhì)量減輕，誘發(fā)肝癌[8]。AFM1會(huì)以含有AFB1新陳代謝物的方式加入生乳和乳制品中，而AFB1效應(yīng)的重要靶臟器為肝臟，是引起肝癌最重要的原因之一[9]。2017年10月27日，世界衛(wèi)生組織國(guó)際醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)發(fā)布的致癌物清單開始匯總使用，黃曲霉毒素首次被列入致癌物清單。

2 黃曲霉毒素國(guó)內(nèi)外限量標(biāo)準(zhǔn)研究

在食品安全越來越被重視的當(dāng)下，黃曲霉毒素限量的安全性也引起國(guó)內(nèi)外高度關(guān)注，各個(gè)國(guó)家和地區(qū)對(duì)于乳與乳制品中黃曲霉毒素的限量都有明確法律規(guī)定（表1）。

表1 部分國(guó)家或地區(qū)黃曲霉毒素限量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比Table 1 Aflatoxin limit standards in some countries and regions

通過我國(guó)與歐盟、日本、美國(guó)等其他國(guó)家的限量標(biāo)準(zhǔn)比較可以看出，歐盟是制定標(biāo)準(zhǔn)最為嚴(yán)苛的地區(qū)[10]。我國(guó)黃曲霉毒素限量標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)產(chǎn)品類別不同設(shè)置各自的限量數(shù)據(jù)，此種做法更為嚴(yán)謹(jǐn)，也更符合我國(guó)居民食物消費(fèi)量和健康保護(hù)水平。并且我國(guó)黃曲霉毒素的限量水平是以保護(hù)消費(fèi)者健康作為首要目標(biāo)，與國(guó)際食品法典委員會(huì)和美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)水平保持一致，尤其是嬰幼兒食品和乳制品[10]。

近年來黃曲霉毒素越來越被重視，各個(gè)國(guó)家和地區(qū)對(duì)其標(biāo)準(zhǔn)要求趨于嚴(yán)格，更應(yīng)關(guān)注限量變化動(dòng)態(tài)，及時(shí)跟進(jìn)與評(píng)估。

3 黃曲霉毒素檢測(cè)方法研究

黃曲霉毒素的分析方法已被廣泛開發(fā)應(yīng)用，主要分析方法有以下幾種：TLC、LC-MS、光譜法、電化學(xué)法、快速檢測(cè)試紙條法等，尋找高特異性和強(qiáng)實(shí)用性的檢測(cè)方法是未來的發(fā)展方向。不同方法適用于各自特定情況，因此需要綜合考慮測(cè)定目的、條件和要求再選擇合適的方法：例如，黃曲霉毒素的天然或誘導(dǎo)熒光有助于其檢測(cè)，在TLC法中會(huì)與掃描儀器結(jié)合，根據(jù)熒光光斑強(qiáng)弱測(cè)定黃曲霉毒素含量；HPLC與MS或其他技術(shù)結(jié)合的方法，是實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用的測(cè)定方法；快速檢測(cè)試紙條法通常使用黃曲霉毒素的特異性抗體，在現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)領(lǐng)域有著十分重要的應(yīng)用。

3.1 TLC

TLC是黃曲霉毒素分析中最廣泛使用的檢測(cè)方法之一，高效薄層色譜法（high performance thin layer chromatography，HPTLC）是最有效和精確的檢測(cè)方法之一，二者在國(guó)標(biāo)方法中都有使用。TLC的原理是將經(jīng)過前處理的樣品在薄層分離后，再根據(jù)其自身受光照后熒光的強(qiáng)弱來測(cè)定其含量。

Hamed等[11]利用高效液相色譜-熒光檢測(cè)（high performance liquid chromatography-fluorescence detection，HPLC-FLD）開發(fā)了同時(shí)測(cè)定乳與乳制品中8 種黃曲霉毒素的方法，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該方法在優(yōu)化條件下對(duì)AFB1、AFB2、AFG1和AFG2均取得良好的定性及定量效果，方法回收率為82%～104%。Shuib等[12]利用免疫親和柱去除樣品中的AFB1、AFB2、AFG1和AFG2，隨后又使用Hypersi gold C18柱分離AFM1，結(jié)果表明，當(dāng)甲醇作為流動(dòng)相后，AFM1的峰面積增加67%，當(dāng)采用柱后光化學(xué)衍生法測(cè)定AFM1時(shí)，檢出限由0.013 μg/L降到0.002 μg/L，線性范圍為0.004～0.500 μg/L。隨后Shuib等[13]又建立了一種同時(shí)測(cè)定AFB1、AFB2、AFM1、AFM2的方法，該法使用Hypersil gold C18色譜柱在40 ℃環(huán)境下對(duì)黃曲霉毒素進(jìn)行分離，4 種黃曲霉毒素可在35 min內(nèi)完全分離，檢出限分別為0.005、0.003、0.004、0.004 ng/mL，回收率為73.0%～109.6%。

TLC法的優(yōu)點(diǎn)是可以在單個(gè)測(cè)試樣品中同時(shí)檢測(cè)幾種類型的黃曲霉毒素，但檢驗(yàn)過程對(duì)技術(shù)人員的操作熟練程度有要求，同時(shí)檢測(cè)設(shè)備昂貴、測(cè)定時(shí)間過長(zhǎng)、復(fù)雜樣品預(yù)處理繁瑣、低濃度峰形不好等都限制了TLC法在實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用，同樣也不適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

3.2 LC-MS

LC-MS法檢測(cè)精度高、靈敏度高、再現(xiàn)性好，是實(shí)驗(yàn)室測(cè)定黃曲霉毒素的常規(guī)定量方法。GB 5009.24—2016《食物中黃曲霉毒素M族的測(cè)定方法》和GB 5009.22—2016《食物中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定方法》都使用了LC-MS檢測(cè)黃曲霉毒素。LC-MS借助黃曲霉毒素的同位素內(nèi)標(biāo)物實(shí)現(xiàn)對(duì)黃曲霉毒素的精準(zhǔn)分析，合適的前處理方法和提取劑可以提高精準(zhǔn)度。

宗萬里等[14]研究了一種無需使用免疫親和柱的前處理方法，直接在牛乳中添加乙腈，直接將渦旋振蕩離心后的上清液用質(zhì)譜測(cè)定，該法簡(jiǎn)便、快速、成本低，應(yīng)用于大批量樣品中AFM1的快速測(cè)定。Zhang Yi等[15]開發(fā)了一種特異性好的誘導(dǎo)劑功能化的吸附劑，其與AFM1特異性結(jié)合，再經(jīng)過萃取和洗脫后便可質(zhì)譜檢測(cè)。華宇等[16]通過甲醇提取牛乳樣品上清液，并使用MycoSepTM226 AflaZon＋Multifunctional凈化柱，再通過同位素內(nèi)標(biāo)進(jìn)行基質(zhì)校準(zhǔn)，迅速完成凈化過程，大大提高檢測(cè)效率。Du Lijing等[17]將二氧化硅微粒和甲醇用作吸附劑和解吸溶劑來凈化、富集乳中的AFM1和AFB1，再通過質(zhì)譜對(duì)AFM1和AFB1含量加以測(cè)定，獲得了良好的效果。Mehta等[18]使用含有體積分?jǐn)?shù)2%甲酸的低溫乙腈來提取乳中黃曲霉毒素殘留，并對(duì)其進(jìn)行水浴、低溫冷藏、離心、干燥、復(fù)溶等步驟，再利用LC-MS測(cè)定殘留含量。曹葉中等[19]研究了一種快速、成本較低的前處理方案，首先使用含0.5%乙酸的乙腈溶液用作提取劑，再使用硫酸鎂和氯化鈉溶液來促使分層，最后用LC-MS測(cè)定殘留量。張俊等[20]將甲醇用作提取液，經(jīng)離心、稀釋后使用免疫親和柱凈化，最后將待測(cè)液洗脫優(yōu)化后測(cè)定，檢驗(yàn)結(jié)果滿足靈敏度要求。

此外，黃曲霉毒素還可采用間接方法進(jìn)行測(cè)定。Perez等[21]開發(fā)了一種基于間接生物素化抗體的免疫分析方法，當(dāng)牛乳中含有AFM1時(shí)，金納米顆粒就會(huì)游離出來被電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測(cè)，由此間接測(cè)定殘留含量。

上述各方法的指標(biāo)參數(shù)見表2。

表2 各檢測(cè)方法的線性范圍、檢出限和回收率Table 2 Linear ranges, detection limits and recoveries of LC-MS for AFTs

LC-MS的優(yōu)點(diǎn)是具有精確的檢測(cè)結(jié)果，但因?yàn)槠涫褂妹庖哂H和柱和黃曲霉毒素同位素內(nèi)標(biāo)物，成本昂貴，因此只適用于定量檢測(cè)，不適用于大批量樣品檢測(cè)。LC-MS未來發(fā)展方向應(yīng)該著重放在開發(fā)外標(biāo)方法及研究新的普通固相萃取柱或磁性吸附材料。

3.3 光譜法

目前有研究機(jī)構(gòu)正在利用光譜法測(cè)定食物中的黃曲霉毒素，包括熒光光譜法、紅外光譜法和其他光譜法，這些方法在測(cè)定牛乳中的黃曲霉毒素時(shí)取得了較好的效果。光譜法具有特異性高、檢測(cè)速度快等優(yōu)勢(shì)，但也因適配體傳感器制備過程復(fù)雜、必須使用DNA試劑等因素制約了自身的發(fā)展應(yīng)用。

3.3.1 熒光光譜法

Li Guangming等[22]利用水熱法制備出高發(fā)光率氮摻雜的碳點(diǎn)，將其與堿性磷酸酶聯(lián)合使用研制出一種基于碳點(diǎn)內(nèi)濾效應(yīng)的無標(biāo)記免疫傳感器，高量子產(chǎn)率的碳點(diǎn)大大提升了傳感器的靈敏度，牛乳中AFM1的檢出限低至0.018 6 ng/mL。郭婷等[23]將羥基熒光素修飾的適配體用作識(shí)別器，將具有猝滅性和磁分離性的Fe3O4納米材料用作熒光猝滅劑，適配體在遇到AFM1時(shí)會(huì)從Fe3O4表面脫附，熒光信號(hào)就會(huì)增強(qiáng)，以此測(cè)定樣品中的AFM1，檢出限為0.02 μg/L。Li Hui等[24]通過晶種生長(zhǎng)法制備了尺寸為33 nm的鈀納米顆粒，通過其與5-羧基熒光素間的熒光共振能量轉(zhuǎn)移建立新方法，優(yōu)化條件后的AFM1檢出限為1.5 pg/mL。Jia Yongmei等[25]使用季胺化四苯基乙烯鹽、氧化石墨烯和AFB1適配體制備一種無標(biāo)記的熒光適配體傳感器，此方法無需熒光素進(jìn)行標(biāo)記，簡(jiǎn)化流程，提升效率，測(cè)定AFB1的檢出限為0.25 ng/mL。Guo Xiaodong等[26]使用羥基熒光素標(biāo)記核酸適配體，再加入氧化石墨烯猝滅其熒光，同時(shí)氧化石墨烯還可保護(hù)適配體不被核酸酶裂解，當(dāng)適配體與AFM1結(jié)合后會(huì)從氧化石墨烯表面脫離，且在酶的作用下裂解，核酸適配體重新放光，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)AFM1的定量測(cè)定，檢出限為0.05 μg/kg。Niazi等[27]將時(shí)間分辨熒光納米顆粒用作信號(hào)針，將石墨相氮化碳納米片用作熒光猝滅劑，利用滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)實(shí)現(xiàn)樣品中AFM1測(cè)定，即便同時(shí)存在AFB1和AFB2，其結(jié)果也不會(huì)被干擾。Zhou Yaofeng等[28]將量子點(diǎn)珠用作競(jìng)爭(zhēng)抗原的載體，因?yàn)槌叽鐬?50 nm的量子點(diǎn)珠能夠降低競(jìng)爭(zhēng)抗原對(duì)抗體的親和力，熒光信號(hào)強(qiáng)度得以增強(qiáng)，在檢測(cè)時(shí)首先用AFB1-牛血清蛋白在量子點(diǎn)珠表面標(biāo)記，再結(jié)合酶聯(lián)免疫技術(shù)和熒光法測(cè)定乳及乳制品中AFM1含量。Qiao Qinqin等[29]使用羧基熒光素修飾的核酸適配體，并使用羧基四甲基羅丹明猝滅基團(tuán)修飾與適配體互補(bǔ)的DNAs，二者雜交后DNAs的猝滅基團(tuán)將導(dǎo)致核酸適配體熒光猝滅，當(dāng)樣品中含有AFM1時(shí)，AFM1優(yōu)先與核酸適配體結(jié)合導(dǎo)致熒光信號(hào)再現(xiàn)，最佳條件下檢出限為0.5 ng/mL。

3.3.2 紅外光譜法

紅外光譜法檢測(cè)黃曲霉毒素時(shí)只需將樣品制片，不需要復(fù)雜的前處理過程；與色譜儀和質(zhì)譜儀相比，紅外光譜儀成本更低。Jha等[30]首先使用傅里葉變換紅外分光光度計(jì)和化學(xué)計(jì)量學(xué)建立牛乳樣品中AFB1的定量檢測(cè)方法，然后使用同樣方法測(cè)定牛乳中的AFM1也取得了良好效果，在650～1 800 cm-1和3 499～3 689 cm-1波數(shù)范圍內(nèi)光譜圖峰形顯著，檢出限低至0.02 μg/L。

3.3.3 其他光譜法

Lerdsri等[31]基于局域表面等離子體共振原理，結(jié)合納米金顆粒（AuNPs）開發(fā)了一種無標(biāo)識(shí)的比色傳感器，氯化鈉的存在會(huì)促使該傳感器利用適配體與AFM1和AuNPs產(chǎn)生聚集效應(yīng)，由聚集AFM1的體系表面等離子體共振峰移導(dǎo)致溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樽仙踔辽钏{(lán)色，從而實(shí)現(xiàn)比色法測(cè)定AFM1含量。Jalalian等[32]將AuNPs和適配體分別用作比色劑和探針，將基于鏈霉親和素包裹的二氧化硅納米顆粒、AuNPs與適配體制備成互補(bǔ)鏈傳感器，當(dāng)被測(cè)樣品中AFM1濃度高時(shí)呈紅色，反之呈紫色。Tsounidi等[33]利用白光反射光譜研發(fā)了一種微型光學(xué)免疫傳感器，該傳感器由測(cè)量裝置和生物芯片構(gòu)成，測(cè)量裝置包括反射探針、光源和光譜儀，生物芯片是將AFM1-牛血清蛋白結(jié)合物固定在SiO2的硅芯片，該傳感器可測(cè)定各種品種乳中AFM1，并且樣品無需稀釋和處理。

3.4 電化學(xué)法

電化學(xué)法在檢測(cè)領(lǐng)域被廣泛使用，其優(yōu)點(diǎn)為成本低、測(cè)定迅速、靈敏度高。電化學(xué)法通常間接測(cè)定黃曲霉毒素含量，方法一是利用適配體與黃曲霉毒素結(jié)合產(chǎn)生的復(fù)合物阻礙電極表面電子傳遞，通過電化學(xué)傳感器的電阻變化來實(shí)現(xiàn)黃曲霉毒素的定量檢測(cè)[34]；方法二是黃曲霉毒素可將事先固定在電極表面的物質(zhì)置換出來，通過該物質(zhì)的氧化還原反應(yīng)來間接檢測(cè)黃曲霉毒素[35]。

Ahmadi等[36]在鉛筆芯電極表面固定還原氧化石墨烯和金納米顆粒，再將其浸泡在乙硫醇改性的適配體溶液1 h后得到特異性傳感器，因?yàn)锳FM1會(huì)使電化學(xué)傳感器電阻變大，便可通過電化學(xué)阻抗法間接測(cè)定AFM1。Smolko等[37]將玻碳電極放置在含中性紅、硝酸鉀和十羧基苯甲酸基柱芳烴溶液中掃描19.5 周，最后用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽/N-羥基琥珀酰亞胺（1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride/N-hydroxysuccinimide，EDC/NHS）技術(shù)將AFM1適配體固定在電極表面，制成一種特異性測(cè)定AFM1的電化學(xué)傳感器。Shadjou等[38]把石墨烯量子點(diǎn)、α-環(huán)糊精和銀納米微粒固定到玻碳電極表面，當(dāng)AFM1含量增加時(shí)，電流值也隨之上升，測(cè)定成效也令人滿意。Hamami等[39]在絲網(wǎng)印刷電極表層固定AuNPs，再固定二茂鐵四乙二醇配體，最后通過EDC/NHS對(duì)其修飾后，便可利用電化學(xué)阻抗法靈敏測(cè)定AFM1。Rahmani等[40]利用電沉積將AuNPs固定到由靜電紡絲碳納米纖維制作的新型襯底電極表面，再將單鏈DNA修飾到電極表面制得特異性傳感器。Aissa等[41]利用絲網(wǎng)印刷電極和二茂鐵和硅納米粒子構(gòu)成的適配體制備的電化學(xué)傳感器，在使用循環(huán)伏安法和電化學(xué)阻抗法測(cè)定乳中AFM1時(shí)靈敏性優(yōu)異。Karczmarczyk等[42]將巰基丙酸固定在覆金的絲網(wǎng)印刷電極表面，再通過EDC/NHS作用固定牛血清蛋白-AFM1結(jié)合物，最后將其浸泡在乙醇胺溶液中凈化，該傳感器在測(cè)定乳中AFM1時(shí)效果良好。

電化學(xué)法具有靈敏度高、線性范圍廣、檢出限低、損耗低等優(yōu)勢(shì)，但其在穩(wěn)定性和再現(xiàn)性上表現(xiàn)不佳，很難實(shí)現(xiàn)多種黃曲霉毒素的同時(shí)測(cè)定。

3.5 快速檢測(cè)試紙條法

快速檢測(cè)試紙條法具有操作簡(jiǎn)單、成本較低等優(yōu)勢(shì)，因此在現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)揮著極其重要的作用。試紙條法適用于現(xiàn)場(chǎng)大批量樣品快速檢測(cè)，一旦發(fā)現(xiàn)陽性樣本則取樣帶回，利用實(shí)驗(yàn)室定量檢測(cè)方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行核實(shí)，大大提高檢測(cè)效率，降低檢測(cè)成本。

Su Zixian等[43]利用可標(biāo)記AFM1單克隆抗體的材料制備免疫層析檢測(cè)試紙條，以此進(jìn)行牛乳中AFM1的測(cè)定，檢出限低至0.1 pg/mL，靈敏度較高。Han Miaomiao等[44]制備了獨(dú)特的單克隆抗體和受體，其與AuNPs結(jié)合形成8 對(duì)抗體-受體偶聯(lián)物和相應(yīng)半蛋白偶聯(lián)物的組合，從而實(shí)現(xiàn)1 支試紙條同時(shí)測(cè)定8 種黃曲霉毒素殘留，此方法AFM1的檢出限為0.016 ng/mL。此外還有Li Miao等[45]制備了時(shí)間分辨熒光微球免疫層析試紙條，蔡芬等[46]制備了膠體金單克隆抗體復(fù)合物試紙條，Kasoju等[47]利用微流控制分析裝置制備了免疫試紙條，以上檢測(cè)方法在最佳實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定牛乳中的AFM1時(shí)，檢出限最低為0.019 ng/mL。

試紙條法在檢測(cè)中不需專用儀器，不需復(fù)雜前處理，整體用時(shí)較短，操作簡(jiǎn)便易學(xué)，對(duì)檢測(cè)人員需求少、要求低，所以非常適用于大批量樣本的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。但試紙條法只適合于定性檢測(cè)，其檢測(cè)精度低，有效性差，再現(xiàn)性差，在定量檢測(cè)上性能明顯不足。

4 結(jié) 語

本文比較了國(guó)內(nèi)外各國(guó)黃曲霉毒素限量標(biāo)準(zhǔn)的差異，匯總了乳及乳制品中黃曲霉毒素的各項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)，闡述了近年來主要應(yīng)用的TLC、LC-MS、光譜法、電化學(xué)法、快速檢測(cè)試紙條法等檢測(cè)技術(shù)最新研究進(jìn)展，分析了各類檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)及其存在的問題，并對(duì)今后測(cè)定乳與乳制品中黃曲霉毒素檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展方向做出以下預(yù)測(cè)：1）特異性好、成本低廉的快速檢測(cè)試紙條法非常適宜用作大批量樣本快速篩查手段，配合讀數(shù)儀便可迅速獲得定性結(jié)果和含量數(shù)據(jù)，實(shí)現(xiàn)乳與乳制品中黃曲霉毒素的在線檢測(cè)，此種檢驗(yàn)方法將在生產(chǎn)企業(yè)原料驗(yàn)收或食品抽檢監(jiān)測(cè)等現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)時(shí)發(fā)揮重要作用；2）定量檢測(cè)的未來導(dǎo)向是開發(fā)簡(jiǎn)便、適宜的前處理方法，例如，不需要免疫親和柱的方法，無需復(fù)雜操作就可快速分離、富集樣本中的黃曲霉毒素，再配合使用自動(dòng)化程度較高的質(zhì)譜法或色譜法，就能夠?qū)崿F(xiàn)大批量樣本快速、簡(jiǎn)便、精準(zhǔn)的定量檢驗(yàn)；3）其他檢測(cè)方法的未來導(dǎo)向主要有以下兩方面：光譜法的發(fā)展方向是開發(fā)特異性強(qiáng)、性能穩(wěn)定、制備簡(jiǎn)便的適配體傳感器；電化學(xué)法的發(fā)展方向是開發(fā)各種高靈敏度修飾電極。這2 種檢測(cè)方法都能夠有效提升檢測(cè)效率，保證檢測(cè)穩(wěn)定性和靈敏度，同時(shí)明顯節(jié)約檢測(cè)成本。