• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    海洋寡糖酶法制備研究進(jìn)展

    2023-09-10 05:20:04楊子祥李金夢宋琨燕葛風(fēng)茹鄢烽黃冰冰張夢巖巫小丹劉玉環(huán)鄭洪立南昌大學(xué)食品學(xué)院江西南昌330047
    食品工業(yè)科技 2023年18期
    關(guān)鍵詞:糖醛酸褐藻黃原

    楊子祥,李金夢,宋琨燕,葛風(fēng)茹,鄢烽,黃冰冰,張夢巖,巫小丹,劉玉環(huán),鄭洪立(南昌大學(xué)食品學(xué)院,江西南昌 330047)

    海洋占地球總面積約71%,海洋占地球全部水資源的97%,海洋中生物資源豐富,種類繁多。海洋多糖是海洋生物資源中最主要的組成成分之一。由于海洋高鹽、高滲透壓、低溫、低光照、寡營養(yǎng)、氧脅迫的特殊環(huán)境,形成了結(jié)構(gòu)新穎和功能獨特的海洋多糖[1]。近年來,隨著人們對海洋資源的研究不斷深入,發(fā)現(xiàn)海洋多糖具有調(diào)節(jié)免疫、降血糖、抗病毒、抗腫瘤等多種生理活性,這使其越來越廣泛地應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域[2]。然而,由于海洋多糖分子量大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜,導(dǎo)致了海洋多糖溶解性能差,嚴(yán)重限制了其應(yīng)用[3]。

    海洋寡糖,也叫海洋低聚糖,是海洋多糖經(jīng)過各種方法(物理法、化學(xué)法、酶法等)降解得到的直鏈或支鏈低度聚合糖,通常由2~10 個單糖單元組成。較海洋多糖,海洋寡糖具有溶解性能好、生理活性高、更具多樣性等優(yōu)勢,是二十一世紀(jì)糖類研究的熱點。由于海洋寡糖原料海洋多糖結(jié)構(gòu)和組成的多樣性,外加海洋寡糖有不同的制備方法,故海洋寡糖結(jié)構(gòu)和生理活性更具多樣性[4]。海洋寡糖具有抑制腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等生理活性,安全無毒,溶解性能好,廣泛應(yīng)用于食品、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥等領(lǐng)域[5]。海洋寡糖具有糖醇類似的功能性甜味,且熱量較低,可用作食品甜味劑。此外,海洋寡糖難以被人體消化,可滿足糖尿病患者的需要。海洋寡糖是一種新型益生元,具有改善腸道微環(huán)境的作用[6]。海洋寡糖因具有促進(jìn)植物生長、增強植物抗逆性、防治病害等作用,被廣泛應(yīng)用到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。海洋寡糖可以通過刺激和激活宿主細(xì)胞的免疫功能,增強機體對腫瘤細(xì)胞生長的調(diào)控,從而實現(xiàn)抗腫瘤的作用[7]。

    海洋寡糖的生物活性主要與其分子結(jié)構(gòu)相關(guān),分子結(jié)構(gòu)主要受海洋多糖的種類、海洋寡糖制備方法、制備海洋寡糖的酶等因素影響,而制備結(jié)構(gòu)新穎、聚合度明確的海洋寡糖,對于海洋寡糖的應(yīng)用具有重要意義。本文綜述了海洋多糖、海洋多糖酶法制備海洋寡糖和酶的催化機制,介紹了褐藻膠、殼聚糖和黃原膠三種主要的海洋多糖及褐藻膠裂解酶、殼聚糖酶和黃原膠降解酶的作用機制,并指出其存在的問題及今后的研究重點,以期為海洋寡糖制備及其應(yīng)用提供理論依據(jù)。

    1 海洋多糖

    海洋多糖種類繁多(表1),包括海藻多糖、海洋動物多糖和海洋微生物多糖等[8]。海藻多糖是廣泛存在于海帶、馬尾藻、昆布等植物中的天然活性多糖,多具有高粘度或凝固能力。海洋動物多糖是指海洋動物(蝦、貝類、螃蟹、鯊魚、海參等)中的多聚糖及酸性粘多糖,主要包括殼聚糖、糖胺聚糖、硫酸軟骨素等。海洋微生物多糖是指海洋中的微生物代謝的多糖,分為胞外多糖、胞壁多糖和胞內(nèi)多糖。我國海洋多糖資源豐富,已廣泛應(yīng)用于各領(lǐng)域,如褐藻膠作為增稠劑、分散劑、乳化劑等應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)中[9]。隨著越來越多海洋多糖資源的發(fā)掘以及海洋生物技術(shù)的發(fā)展,如利用工程細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)海洋多糖,將不斷豐富海洋多糖資源。眾多的海洋多糖為海洋寡糖的制備提供了豐富的原料資源[10]。生產(chǎn)寡糖較多的海洋多糖原料有黃原膠、殼聚糖、瓊脂、卡拉膠、褐藻膠、巖藻聚糖等。我國是世界最大的褐藻膠(海藻酸鈉)生產(chǎn)國[11],殼聚糖是地球上年產(chǎn)量僅次于纖維素的天然高分子化合物[12],黃原膠是目前世界上生產(chǎn)規(guī)模最大的微生物多糖[13],故本文選取褐藻膠、殼聚糖和黃原膠為代表性海藻多糖、海洋動物多糖和海洋微生物多糖進(jìn)行研究。

    表1 海洋多糖Table 1 Marine polysaccharides

    1.1 褐藻膠

    褐藻膠又叫褐藻酸,分子量介于20~250 kDa 之間[20]。褐藻膠是廣泛存在于海帶、巨藻、馬尾藻等褐藻細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)間的一種海藻多糖,在天然狀態(tài)下主要以游離酸、一價鹽和二價鹽的形式存在。β-D-甘露糖醛酸(M)和α-L-古洛糖醛酸(G)以1→4 糖苷鍵構(gòu)成線性多糖即為褐藻膠[20]。以上線性多糖有均聚甘露糖醛酸(PM)、均聚古羅糖醛酸(PG)和雜聚物(PMG)三種排列方式[21](圖1)。這兩種糖醛酸的比例因褐藻種類的不同而有很大差異,這種結(jié)構(gòu)的多樣性可能是由于褐藻對環(huán)境或生理條件的功能適應(yīng)性[23]。早在1881 年,英國的化學(xué)家Stanford 首次在褐藻中發(fā)現(xiàn)并成功分離出褐藻膠[24]。目前市售的褐藻酸鈉(又叫海藻酸鈉)是以海帶等為原料,采用稀堿溶液提取法制備得到。褐藻酸鈉具有抗氧化性、抑菌性、抗腫瘤、降膽固醇等生理活性,用作食品添加劑、醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的支架材料、農(nóng)藥化肥增效劑等[25-27]。褐藻中褐藻膠的含量最高可達(dá)藻體干重的40%[28]。褐藻膠為親水性分子,褐藻酸與堿金屬離子生成褐藻酸鹽,易溶于水。褐藻膠的溶解性受PM、PG 和PMG的排列方式、M/G 的比例、溶液離子強度、pH 等的影響[21,23]。褐藻膠為酸不溶性,在pH 低于3 時,會轉(zhuǎn)變?yōu)楹衷逅岫龀鯷23]。

    圖1 褐藻膠的結(jié)構(gòu)式[22]Fig.1 Structural formula of alginate[22]

    1.2 殼聚糖

    殼聚糖是一種廣泛存在于蝦、螃蟹、貝殼等海洋節(jié)肢動物的甲殼以及海洋軟體動物的殼和骨骼中的海洋動物多糖,純天然有機大分子,是甲殼素脫去乙?;?。殼聚糖也是目前大自然中發(fā)現(xiàn)的獨一無二帶正電荷的大分子堿性多糖[29]。它的基本糖單元為氨基葡萄糖或乙酰氨基葡萄糖(圖2),起連接作用的鍵為β-1,4-糖苷鍵。殼聚糖的單體為β-(1→4)-2-氨基-2-脫氧b-d-葡聚糖和β-(1→4)-2-乙酰氨基-2-脫氧-b-d-葡聚糖,分子量介于10~1 000 kDa 之間;殼聚糖溶于稀酸,不溶于水和有機溶劑;殼聚糖在稀酸中的溶解性與其脫乙酰度呈正相關(guān)[30]。它的表面含有大量的氨基、羥基等活性基團(tuán),可以發(fā)生烷基化、?;?、羧基化等多種化學(xué)反應(yīng),能與碳水化合物等陰離子或高分子化合物形成具有不同性能的殼聚糖衍生物。殼聚糖有免疫調(diào)節(jié)[31]、防治高血壓[32]、抗腫瘤[33]等生理活性,可自然降解,已在食品、醫(yī)療等領(lǐng)域產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。

    圖2 殼聚糖的結(jié)構(gòu)式[30]Fig.2 Structural formula of chitosan[30]

    1.3 黃原膠

    黃原膠,又稱為黃膠、漢生膠。它是海洋微生物代謝的一種水溶性胞外多糖。黃原膠分子(圖3)是由D-葡萄糖、D-甘露糖和D-葡糖醛酸組成。以上三種成分按2:2:1 組成相對分子量在1000 kDa 以上的天然有機高分子化合物[19]。黃原膠一級結(jié)構(gòu)含葡糖基主鏈和三糖單位的側(cè)鏈,葡糖基主鏈與纖維素主鏈結(jié)構(gòu)相同,即β-1,4-糖苷鍵連接兩分子D-葡萄糖;1 分子D-葡糖醛酸和2 分子D-甘露糖在側(cè)鏈中交替排列,與主鏈相連的甘露糖在C-6 處被乙?;?,丙酮酸部分替代側(cè)鏈末端的甘露糖,并以縮醛形式連接在4-和6-位置;其二級結(jié)構(gòu)為雙螺旋結(jié)構(gòu),在氫鍵作用下,側(cè)鏈反向纏繞主鏈而形成;其三級結(jié)構(gòu)為螺旋復(fù)合體,在共價鍵的作用下,由二級結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上形成,正因這種特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu),使黃原膠溶液具有良好的耐鹽性、耐酸耐堿性、協(xié)同凝膠特性、獨特的流變性等[13]。因此,黃原膠作為增稠劑、穩(wěn)定劑等在食品工業(yè)、醫(yī)藥行業(yè)等大范圍使用。黃原膠是目前世界上生產(chǎn)規(guī)模最大的微生物多糖[13]。

    2 酶法制備海洋寡糖

    海洋寡糖的制備方法主要有化學(xué)法、物理法和生物酶法(表2)?;瘜W(xué)法是通過化學(xué)催化劑如草酸、過氧化氫、氫氧化鈉等催化海洋多糖生成寡糖的方法,化學(xué)法應(yīng)用廣泛,操作簡便,是一種成熟的方法。但它存在化學(xué)催化劑污染環(huán)境、反應(yīng)條件劇烈、副產(chǎn)物量大等缺點[34-36]。物理法(微波輻射、紫外線照射、高溫高壓等)操作簡便、不需要催化劑,但存在降解效率低下、海洋寡糖得率低等問題[37-39]。生物酶法條件溫和、酶專一性強、海洋寡糖得率高、不產(chǎn)生副產(chǎn)物、環(huán)境友好,是制備海洋寡糖的有效方法[40-42]。早期生物酶法制備海洋寡糖以游離酶法為主,目前生物酶法制備海洋寡糖主要采用固定化酶法。游離酶法和固定化酶法通常均采用單一酶,而不是復(fù)合酶[40-46]。當(dāng)前酶法制備得到的海洋寡糖主要有:殼寡糖[6]、褐藻膠寡糖[7,9,35]、卡拉膠寡糖、黃原膠寡糖、瓊膠寡糖等[42]。

    表2 海洋寡糖制備方法Table 2 The preparation methods of marine oligosaccharides

    2.1 游離酶法制備海洋寡糖

    游離酶法制備海洋寡糖是以海洋多糖為原料。海洋多糖種類眾多,而酶催化具有高度專一性,故制備海洋寡糖的酶種類眾多;包括一類是降解特定的海洋多糖如褐藻膠裂解酶、殼聚糖酶、黃原膠降解酶、卡拉膠酶、瓊膠酶等,另一類降解非特定的海洋多糖,如:淀粉酶、纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶、甘露糖酶等,以上酶主要來自微生物。酶法制備海洋寡糖始于上世紀(jì)50 年代中后期,其目的主要是為了研究海洋寡糖的結(jié)構(gòu)與構(gòu)效關(guān)系以開發(fā)藥物和功能性制品。經(jīng)過多年的發(fā)展,利用游離酶制備海洋寡糖已經(jīng)取得了顯著進(jìn)展;特別在新酶的發(fā)現(xiàn)、酶結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與功能的解析、酶的改造、酶催化條件的優(yōu)化等方面做了大量的研究[40-41,47]。

    不同酶作用于不同的海洋多糖,其反應(yīng)條件和產(chǎn)物不同。Falkeborg 等[27]利用β-褐藻膠裂解酶催化5%褐藻酸鈉,反應(yīng)條件:酶用量5%、溫度35 ℃、pH7.0、酶解時間48 h,產(chǎn)物為聚合度不大于4 的寡糖。季珂等[48]以殼聚糖酶催化1%殼聚糖,反應(yīng)條件:酶用量120 U/g、溫度50 ℃、pH6.0、酶解時間4 h,制備得到的寡糖聚合度不大于4。谷金蕓等[49]以黃原膠降解酶催化2 mg/mL 的黃原膠,酶解條件:酶用量1 mg/mL、溫度45 ℃、pH8.0、酶解時間2 min,得到了黃原膠寡糖聚合度為7~18。同一酶,但不同類型,催化產(chǎn)物也不相同。β-褐藻膠裂解酶和雙功能褐藻膠裂解酶AlySY08 制備得到的寡糖聚合度不同。Li 等[50]利用雙功能褐藻膠裂解酶AlySY08 催化0.3%褐藻膠,酶解條件:酶用量21.5 U/mg、溫度40 ℃、pH7.6、酶解時間8 h,所制備的寡糖聚合度不大于5,寡糖得率超過80%。

    游離酶法雖然降解效率高、可制得低分子量的海洋寡糖,但存在酶無法重復(fù)利用、易失活以及在均相催化中與底物/產(chǎn)物難以分離等缺點,導(dǎo)致其生產(chǎn)成本提高,使游離酶法制備海洋寡糖在工業(yè)生產(chǎn)中嚴(yán)重受到限制[40-43]。

    2.2 固定化酶法制備海洋寡糖

    固定化酶技術(shù)是指使用物理或化學(xué)方法將游離酶限定在一定空間內(nèi)或完全束縛在某種特定的載體上,但仍能保持酶活性的一種生物技術(shù)[51]。與游離酶相比,固定化酶對不良環(huán)境耐受性更強,同時具有重復(fù)利用性、儲存穩(wěn)定性和操作穩(wěn)定性等優(yōu)點[46,52]。酶的固定化方法多種多樣,主要有吸附法、包埋法、交聯(lián)法和共價結(jié)合法(表3)。吸附法是指將酶分子吸附在纖維素、二氧化硅、活性炭、氧化鋁等載體表面從而實現(xiàn)固定化的方法;吸附法成本低、操作簡便,但固定化效率低[53]。包埋法是指將酶分子包裹在載體材料中從而實現(xiàn)固定化的方法,常以海藻酸鈉、瓊脂等為載體材料[54]。酶通過戊二醛、京尼平等試劑交聯(lián)載體,從而達(dá)到固定化的方法稱為交聯(lián)法,交聯(lián)法常與吸附法聯(lián)用,提高酶的固定化效率及穩(wěn)定性,但在交聯(lián)過程中反應(yīng)劇烈,使得酶的活性降低,需要不斷探索更加溫和的固定化工藝來減少酶活損失[55]。共價結(jié)合法是指酶分子中的非必需側(cè)鏈基團(tuán)(氨基、羧基和巰基等)與載體中的功能基團(tuán)(環(huán)氧基、羥基、羧基等)通過共價鍵結(jié)合,使酶分子固定在載體上的方法[56]。

    表3 固定化酶制備方法Table 3 The preparation methods of immobilized enzyme

    與游離酶相比,通過與其他載體材料結(jié)合,提高了固定化酶的穩(wěn)定性,且易與底物/產(chǎn)物分離,實現(xiàn)了酶的重復(fù)利用,極大地降低了生產(chǎn)成本,因此,固定化酶技術(shù)在工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用前景廣闊,從而引發(fā)了國內(nèi)外學(xué)者對多糖降解酶固定化的探討。Jiang 等[57]用四氧化三鐵納米磁性材料為載體,固定化了褐藻膠裂解酶AlgL17,此固定化酶重復(fù)使用5 次后,仍能保持最大酶活的70%;利用其催化5 mg/mL 的褐藻膠,得到了聚合度不大于4 的褐藻寡糖。研究人員以戊二醛-瓊脂糖固定化了殼聚糖酶,固定化酶重復(fù)使用25 次后,仍能保持最大酶活的40%;利用該固定化酶催化20 mg/mL 的殼聚糖,得到的寡糖聚合度不大于20[58]。我國科學(xué)家已成功實現(xiàn)了納米SiO2材料固定化幾丁質(zhì)酶,固定化酶的活力是未固定化酶的70%;該固定化酶可用于催化真菌多糖幾丁質(zhì)產(chǎn)生幾丁寡糖[59]。但固定化往往存在降低酶活力,固定化酶只適用于小分子底物等問題;這些問題極大地限制了固定化酶的應(yīng)用。

    固定化酶法展現(xiàn)出很好的應(yīng)用前景。反應(yīng)器是固定化酶法制備海洋寡糖的重要載體。反應(yīng)器可以為固定化酶法制備海洋寡糖提供其所需的最佳催化條件。反應(yīng)器的設(shè)計需要考慮溫度、pH、攪拌等參數(shù)的控制,還需要考慮物質(zhì)和能量傳遞、能耗等因素[62]。目前反應(yīng)器的運行模式主要有批式、分批補料及連續(xù)式。反應(yīng)器主要有攪拌罐式反應(yīng)器、膜式反應(yīng)器、固定床式反應(yīng)器和流動床式反應(yīng)器[63]。反應(yīng)器已經(jīng)成為固定化酶法制備海洋寡糖效率的關(guān)鍵設(shè)備,已受到越來越多的關(guān)注。

    3 多糖降解酶及其催化機制

    目前,酶法制備海洋寡糖的關(guān)鍵是高效多糖降解酶的發(fā)掘。近年來,研究者們已經(jīng)從海洋軟體動物、海洋細(xì)菌和真菌、土壤細(xì)菌和真菌等微生物中分離純化出多種多糖降解酶,用于海洋寡糖的制備[64]。同時利用色譜法、結(jié)晶法、X 射線衍射法、生物信息學(xué)方法等,結(jié)合突變技術(shù)、共結(jié)晶技術(shù)、基因工程技術(shù)等[23,27-28],解析了多糖降解酶結(jié)構(gòu)和功能,初步揭示其催化機制。由于不同海洋多糖其結(jié)構(gòu)和組成存在較大差異,需要采用不同多糖降解酶;此外,由于多糖降解酶來源、酶的組成、酶的分子量、酶的結(jié)構(gòu)等相差很大,故不同多糖降解酶的催化機制差異顯著。在多糖降解酶的活性中心、酶的分子修飾、海洋多糖降解模式與產(chǎn)物生成特點之間規(guī)律等方面缺乏深入研究,多糖降解酶的催化機制目前尚未完全闡明,需要進(jìn)一步研究。本文綜述了三種多糖降解酶來源、分類及其催化機制。

    3.1 褐藻膠裂解酶及其催化機制

    褐藻膠裂解酶是特異性降解褐藻膠的一類酶的總稱,其種類繁多、分布廣泛。自1984 年Hensen 從土壤和海洋中分離出的枯草芽孢桿菌JBH2 中發(fā)現(xiàn)褐藻膠裂解酶以來,50 多種褐藻膠裂解酶已經(jīng)被分離出來,它們主要來源于腐爛的褐藻、海洋軟體動物消化液、海洋和土壤微生物中[65]。褐藻膠裂解酶分子量一般不大于1000 kDa[66]。Wang 等[67]從腐爛海帶中分離得到海洋弧菌Vibriosp. YWA,通過硫酸銨沉淀、柱層析等組合方法從該菌發(fā)酵液中分離純化得到特異性水解1,4-β-D-聚甘露糖醛酸的褐藻膠裂解酶,其分子量約為62.5 kDa;最適pH 和溫度分別為7.0 和 25 ℃;EDTA 和Zn2+增強該酶的活性,而Ba2+抑制它的活性。褐藻膠裂解酶可以分成不同類型,按酶作用底物來劃分,可以分成三類:1,4-β-D-聚甘露糖醛酸(Poly M)裂解酶(EC 42.2.3);1,4-α-L-聚古羅糖醛酸(Poly G)裂解酶(EC 4.2.2.11)以及Poly M 和Poly G 均可降解的雙功能酶。按酶作用位點來劃分,可以分成內(nèi)切酶和外切酶。大部分褐藻膠裂解酶為內(nèi)切酶[66],其酶切位點如圖4 所示。

    褐藻膠裂解酶的催化機制目前認(rèn)為主要是在酶β-消除作用下,使褐藻膠中起連接作用的糖苷鍵斷裂,生成寡糖。酶使兩個殘基之間1,4-O-糖苷鍵斷裂,同時在C4 和C5 之間產(chǎn)生雙鍵,在產(chǎn)物的非還原性末端形成不飽和糖醛酸,得到一連串各種長度的寡糖[68]。Gacesa[69]認(rèn)為褐藻膠裂解酶降解過程分三步進(jìn)行:首先,底物上的羧基通過形成鹽橋被中和;其次,C5 位的質(zhì)子被提取,形成穩(wěn)定的烯醇陰離子中間體;最后,C4 和C5 之間從羧基得到電子,并形成不飽和雙鍵,從而使1,4-O-糖苷鍵斷裂,完成β消除反應(yīng)。綜上,盡管對部分褐藻膠裂解酶的結(jié)構(gòu)和催化機制進(jìn)行了研究,由于不同來源的褐藻膠裂解酶降解褐藻膠的機制和制備寡糖的結(jié)構(gòu)不同,仍然有大部分的酶作用機制需要進(jìn)一步去研究。

    3.2 殼聚糖酶及其催化機制

    殼聚糖酶是催化殼聚糖的酶。它主要存在于真菌和細(xì)菌細(xì)胞中,此外,殼聚糖酶也存在一些植物中,分子量介于20~60 kDa 之間[70]。1973 年,Monaghan等[71]首次從土壤微生物中發(fā)現(xiàn)了殼聚糖酶,并提出:殼聚糖酶是一種特異性降解殼聚糖的新型酶,對于膠態(tài)幾丁質(zhì)基本不能水解,但可催化幾丁質(zhì)生成殼聚糖。根據(jù)殼聚糖酶的作用位點的不同,可以分為內(nèi)切型殼聚糖酶和外切型殼聚糖酶[72]。目前所發(fā)現(xiàn)的殼聚糖酶大多為內(nèi)切型殼聚糖酶,而對于外切型殼聚糖酶的報道相對較少。

    基于氨基酸序列的不同,殼聚糖酶可以分為GH3、GH5、GH7、GH8、GH46、GH75 和GH80 七種[73]。其中,已經(jīng)破解GH46、GH75、G8 和GH80殼聚糖酶的結(jié)構(gòu)。GH46 殼聚糖酶主要分離自桿菌屬和鏈霉菌屬的細(xì)菌,其催化機制和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)已被廣泛研究。GH75 殼聚糖酶主要來源于真菌。殼聚糖酶GH46、GH75 和GH80 只能水解殼聚糖,是殼聚糖的專一性水解酶,而其他家族的殼聚糖酶往往具有其他酶活性如纖維素酶和糖基轉(zhuǎn)移酶等[74]。根據(jù)酶底物特異性的不同,可以將殼聚糖酶分為四個不同的類型:Ⅰ類殼聚糖酶(切割GlcN-GlcN 和GlcNACGlcN 糖苷鍵)、Ⅱ類殼聚糖酶(水解GlcN-GlcN 糖苷鍵)、Ⅲ類殼聚糖酶(切割GlcN-GlcN 和GlcNGlcNAC 糖苷鍵)以及Ⅳ類殼聚糖酶(裂解以上三種糖苷鍵)[75]。

    催化機制因不同殼聚糖酶而異,基于酶解產(chǎn)物還原端異頭碳結(jié)構(gòu)的差異,通常有保持異頭構(gòu)型的“retaining”機制(圖5a)和形成倒立異頭構(gòu)型“inverting”機制(圖5b);“retaining”通過兩步置換機制催化水解,有兩個關(guān)鍵氨基酸殘基參與反應(yīng),其中一個氨基酸殘基作為親核基團(tuán),另一個作為廣義酸/堿;相反,“inverting”遵循一步、單一的置換機制,也有兩個關(guān)鍵氨基酸參與反應(yīng),其中一個作為廣義堿使水分子極化以產(chǎn)生更強的親核基團(tuán)來攻擊異頭碳,而另一個則作為廣義酸使糖苷氧質(zhì)子化以加速反應(yīng)[70]。x 射線結(jié)構(gòu)表明:在殼聚糖酶的催化過程中,Glu22 和Asp40 有著重要作用??傊?,盡管近幾年在個別家族的殼聚糖酶催化機制方面取得了一定的研究成果,但殼聚糖酶屬于多個糖苷水解酶家族,大部分家族的殼聚糖酶結(jié)構(gòu)和催化機制研究甚少。

    圖5 殼聚糖酶催化機制[70]Fig.5 Catalytic mechanism of chitosanase[70]

    3.3 黃原膠降解酶及其催化機制

    黃原膠降解酶是指能夠降解黃原膠的酶的統(tǒng)稱。由于黃原膠獨特的雙螺旋結(jié)構(gòu)和側(cè)鏈基團(tuán)產(chǎn)生的位阻,其不易被酶降解,需要在多種酶的協(xié)同下才能被徹底水解,因此,黃原膠降解酶是由多種酶組成的混合酶系,分子量介于10~100 kDa 之間;黃原膠降解酶由黃原膠主鏈修飾酶和黃原膠側(cè)鏈修飾酶組成[76]。黃原膠主鏈修飾酶作用于其主鏈,主要有β-D-葡聚糖酶和β-D-葡聚糖苷酶;黃原膠側(cè)鏈修飾酶是可以攻擊黃原膠分子中所有側(cè)鏈連接的混合酶系,包括黃原膠裂解酶、α-D-甘露糖苷酶和不飽和葡糖醛酸水解酶;其中,β-D-葡聚糖酶和黃原膠裂解酶屬于胞外酶,β-D-葡聚糖苷酶、α-D-甘露糖苷酶和不飽和葡糖醛酸水解酶屬于胞內(nèi)酶[77]。

    黃原膠在上述五種酶的參與下才能徹底水解,Nankai 等[78]詳細(xì)報道了由芽孢桿菌Bacillussp. strain GL 1 產(chǎn)生的這五種酶降解黃原膠的過程(圖6)。首先,芽孢桿菌細(xì)胞外的黃原膠裂解酶攻擊黃原膠側(cè)鏈分子中丙酮酸化的甘露糖基和葡糖醛酸殘基之間的糖苷鍵,從而除去丙酮酸化的甘露糖;其次,無末端的黃原膠主鏈在胞外酶β-D-葡聚糖酶的催化下生成四元糖,后經(jīng)糖轉(zhuǎn)運途徑被轉(zhuǎn)運到細(xì)胞內(nèi),在細(xì)胞內(nèi)被β-D-葡聚糖苷酶轉(zhuǎn)化為三元糖(不飽和葡萄糖醛酸-乙酰甘露糖-葡萄糖);再次,不飽和葡糖醛酸水解酶水解三元糖,生成葡萄糖醛酸和雙糖甘露糖-葡萄糖;最后,雙糖被α-D-甘露糖苷酶分解成葡萄糖和甘露糖[78]??傊?,利用黃原膠降解酶催化黃原膠制備寡糖的作用機制研究仍然十分匱乏,同時無法實現(xiàn)黃原膠相關(guān)降解酶的獲取,且生成寡糖的含量有限,很難實現(xiàn)黃原膠寡糖的工業(yè)化生產(chǎn)。

    圖6 黃原膠降解途徑[78]Fig.6 Degradation pathway of xanthan gum[78]

    4 總結(jié)與展望

    海洋寡糖種類繁多、來源廣泛,具有抗腫瘤、抗氧化、抗凝血和抗炎等生理活性,在醫(yī)藥、化妝品、食品、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域發(fā)揮著越來越重要的作用,有著廣闊的發(fā)展前景。目前,海洋寡糖生物酶法制備具有反應(yīng)條件溫和、綠色環(huán)保、降解率高等優(yōu)勢,因此,高效優(yōu)質(zhì)的海洋寡糖酶法制備工藝開發(fā)是當(dāng)前的主流發(fā)展方向。隨著科學(xué)技術(shù)和酶工程的不斷發(fā)展,很多新型酶進(jìn)入人們的視野。其中,納米酶是有催化作用的納米材料。納米酶很穩(wěn)定、價格低廉和易于工業(yè)化放大等優(yōu)點,引起了人們的廣泛關(guān)注[79]。迄今為止,已發(fā)現(xiàn)具有氧化還原酶、水解酶、裂合酶和異構(gòu)酶四種催化類型的納米酶[80]。納米酶的發(fā)現(xiàn)成為未來酶法制備海洋寡糖的發(fā)展方向。

    隨著酶工程和基因工程的不斷發(fā)展,酶法制備海洋寡糖未來發(fā)展方向有如下四個方面:不斷發(fā)掘催化效率高的酶資源,包括新技術(shù)得以應(yīng)用于酶的分子修飾和改造,獲得高效的酶資源。通過基因工程獲得更多優(yōu)質(zhì)的酶,并實現(xiàn)優(yōu)質(zhì)酶的產(chǎn)業(yè)化。從自然界中發(fā)現(xiàn)新的酶;完善酶促反應(yīng)的技術(shù)路線,實現(xiàn)高濃度底物的高效降解,提高生產(chǎn)效率、降低生產(chǎn)成本;構(gòu)建基于固定化酶的高效反應(yīng)器,包括攪拌罐式反應(yīng)器、固定床式反應(yīng)器、流動床式反應(yīng)器和膜式反應(yīng)器,實現(xiàn)海洋寡糖的連續(xù)化生產(chǎn)。同時加強對新型固定化酶技術(shù)及載體的探討,提高固定化酶活性,降低生產(chǎn)成本;闡明海洋寡糖制備過程中酶的作用和調(diào)控機制,提升酶的催化效率,強化酶的調(diào)控。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和研究人員的不斷探索,將會促進(jìn)海洋多糖資源的集約開發(fā)和海洋寡糖的商業(yè)化生產(chǎn)。

    猜你喜歡
    糖醛酸褐藻黃原
    褐藻膠裂解酶的研究進(jìn)展
    褐藻膠提取及制備可食性膜工藝研究
    氣相色譜法同步測定甜菜果膠中醛糖與糖醛酸
    林下參片中總糖、還原糖及糖醛酸的含量測定
    響應(yīng)面法優(yōu)化海洋弧菌產(chǎn)褐藻膠裂解酶發(fā)酵培養(yǎng)基
    中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:12
    MISHMASH
    漢語世界(2015年1期)2015-12-28 11:05:20
    Driver Zhou
    漢語世界(2015年2期)2015-03-26 09:19:01
    THE GREAT CHILL
    漢語世界(2015年2期)2015-01-18 02:44:00
    刺參多糖中糖醛酸、氨基糖和中性單糖的同步測定方法研究
    酸洗條件對未漂硫酸鹽麥草漿己烯糖醛酸去除的影響
    中國造紙(2014年1期)2014-03-01 02:10:08
    男女下面进入的视频免费午夜| 天堂影院成人在线观看| 亚洲av熟女| 久久久久久大精品| 欧美一区二区国产精品久久精品| 他把我摸到了高潮在线观看| 永久网站在线| 免费黄网站久久成人精品 | 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 午夜福利免费观看在线| 最近最新免费中文字幕在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲在线自拍视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 在线a可以看的网站| 在线播放无遮挡| 午夜福利成人在线免费观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产高清激情床上av| 在线观看午夜福利视频| 欧美最新免费一区二区三区 | 91在线观看av| 亚洲欧美日韩东京热| 国产精品久久久久久久电影| 91av网一区二区| 亚州av有码| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 久久久久性生活片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 99久久精品一区二区三区| 色综合婷婷激情| 免费av观看视频| 中文字幕高清在线视频| 如何舔出高潮| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美一区二区国产精品久久精品| 一个人免费在线观看电影| 一区二区三区四区激情视频 | 99精品久久久久人妻精品| 久久久国产成人精品二区| 欧美乱妇无乱码| 久99久视频精品免费| 国产精品久久久久久久久免 | 极品教师在线视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲成人中文字幕在线播放| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 午夜福利欧美成人| 色综合亚洲欧美另类图片| 香蕉av资源在线| 99热只有精品国产| 欧美性感艳星| 69人妻影院| 精品人妻熟女av久视频| 如何舔出高潮| 91麻豆av在线| 性色av乱码一区二区三区2| 一级黄色大片毛片| 国语自产精品视频在线第100页| av福利片在线观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 人妻夜夜爽99麻豆av| 免费看a级黄色片| 亚洲真实伦在线观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 日本在线视频免费播放| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲av免费高清在线观看| 久久午夜福利片| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 天堂影院成人在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 久久久精品欧美日韩精品| 一个人观看的视频www高清免费观看| 毛片女人毛片| 在线看三级毛片| 中出人妻视频一区二区| 国产伦精品一区二区三区四那| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 99在线人妻在线中文字幕| 偷拍熟女少妇极品色| 欧美色视频一区免费| 中文字幕免费在线视频6| 欧美高清成人免费视频www| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 全区人妻精品视频| 欧美乱色亚洲激情| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久久久久久国产a免费观看| 色播亚洲综合网| av女优亚洲男人天堂| 欧美高清性xxxxhd video| 色综合婷婷激情| 全区人妻精品视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 嫩草影院精品99| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲av免费在线观看| 亚洲av电影在线进入| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 免费搜索国产男女视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产精品国产高清国产av| 国产免费一级a男人的天堂| 国产av在哪里看| 国产三级黄色录像| 国产亚洲av嫩草精品影院| 成人鲁丝片一二三区免费| 午夜精品一区二区三区免费看| 麻豆一二三区av精品| 天天一区二区日本电影三级| 不卡一级毛片| 精品一区二区免费观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 桃色一区二区三区在线观看| av在线老鸭窝| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲精品一区av在线观看| 在线免费观看的www视频| 69人妻影院| 色综合欧美亚洲国产小说| 成人精品一区二区免费| 波野结衣二区三区在线| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产精品女同一区二区软件 | 一本一本综合久久| 国产精品永久免费网站| 日韩精品中文字幕看吧| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 天堂动漫精品| 男人和女人高潮做爰伦理| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品99久久久久久久久| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产真实伦视频高清在线观看 | 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲成人久久爱视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产欧美日韩精品一区二区| 免费无遮挡裸体视频| 在线播放无遮挡| 夜夜夜夜夜久久久久| 丰满的人妻完整版| 国产三级在线视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美成人a在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 窝窝影院91人妻| 欧美乱色亚洲激情| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲第一电影网av| 国产成+人综合+亚洲专区| 免费看光身美女| 国产三级在线视频| 欧美黑人巨大hd| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 全区人妻精品视频| 精品一区二区免费观看| 日韩欧美精品免费久久 | 日本 av在线| 国产黄色小视频在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 久久久精品大字幕| 又粗又爽又猛毛片免费看| or卡值多少钱| 色综合欧美亚洲国产小说| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲av美国av| 日日夜夜操网爽| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产精品1区2区在线观看.| 999久久久精品免费观看国产| 99热只有精品国产| 午夜福利在线观看吧| 精品久久久久久成人av| 欧美不卡视频在线免费观看| 久久久久久久久大av| 色播亚洲综合网| 国产在视频线在精品| 一区二区三区激情视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产综合懂色| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲精品一区av在线观看| 哪里可以看免费的av片| 亚洲av第一区精品v没综合| 成年免费大片在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 日本在线视频免费播放| 全区人妻精品视频| 亚洲av免费在线观看| 1024手机看黄色片| 国产精品电影一区二区三区| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 高清毛片免费观看视频网站| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲国产精品合色在线| 成人国产一区最新在线观看| av在线天堂中文字幕| 国产亚洲欧美98| 亚洲成av人片在线播放无| 免费无遮挡裸体视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 青草久久国产| 亚洲精品在线观看二区| 最新中文字幕久久久久| 夜夜爽天天搞| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 性色av乱码一区二区三区2| 成人亚洲精品av一区二区| 国产精品99久久久久久久久| 午夜福利在线在线| 久久久久久久久久黄片| 禁无遮挡网站| av在线老鸭窝| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲内射少妇av| 久99久视频精品免费| 国产亚洲精品av在线| 亚洲欧美日韩无卡精品| 夜夜爽天天搞| 亚洲在线观看片| 男人舔奶头视频| 国产高清有码在线观看视频| aaaaa片日本免费| bbb黄色大片| 精品久久久久久久久av| 亚洲七黄色美女视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 9191精品国产免费久久| av在线观看视频网站免费| 舔av片在线| 久久99热6这里只有精品| 9191精品国产免费久久| 婷婷精品国产亚洲av在线| 一个人免费在线观看的高清视频| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久久久久大精品| 99久久精品国产亚洲精品| 99久久九九国产精品国产免费| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 美女免费视频网站| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 内地一区二区视频在线| 99视频精品全部免费 在线| av中文乱码字幕在线| .国产精品久久| a在线观看视频网站| 最新在线观看一区二区三区| 国产淫片久久久久久久久 | 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产精品av视频在线免费观看| 99riav亚洲国产免费| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 欧美性猛交黑人性爽| 99久国产av精品| 亚洲,欧美,日韩| 最新中文字幕久久久久| 国模一区二区三区四区视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲在线自拍视频| av在线蜜桃| 国产高清视频在线观看网站| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 成人美女网站在线观看视频| 一区二区三区高清视频在线| 国产亚洲欧美在线一区二区| 两人在一起打扑克的视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 丰满的人妻完整版| 成年人黄色毛片网站| 99热精品在线国产| 97碰自拍视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 少妇熟女aⅴ在线视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久久色成人| 内射极品少妇av片p| 亚州av有码| 99热6这里只有精品| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久99热这里只有精品18| 十八禁人妻一区二区| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 免费观看的影片在线观看| 成人美女网站在线观看视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 日本免费a在线| 国产高清三级在线| 美女免费视频网站| 嫩草影院入口| 中文字幕高清在线视频| 丰满的人妻完整版| 一级作爱视频免费观看| 欧美乱色亚洲激情| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 男人和女人高潮做爰伦理| 美女被艹到高潮喷水动态| 成人国产一区最新在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 欧美成人免费av一区二区三区| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 啪啪无遮挡十八禁网站| 又爽又黄a免费视频| 久久精品人妻少妇| 欧美在线一区亚洲| 高清在线国产一区| 网址你懂的国产日韩在线| 黄片小视频在线播放| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 毛片一级片免费看久久久久 | 午夜免费激情av| 久久国产精品人妻蜜桃| 麻豆成人av在线观看| 日韩欧美在线二视频| 女同久久另类99精品国产91| 长腿黑丝高跟| 日韩有码中文字幕| 黄色配什么色好看| 长腿黑丝高跟| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲色图av天堂| 波多野结衣高清作品| 麻豆av噜噜一区二区三区| 成年女人看的毛片在线观看| 日本免费a在线| 亚洲在线观看片| av欧美777| 免费观看的影片在线观看| 欧美日本视频| 久久亚洲精品不卡| 一级作爱视频免费观看| 91狼人影院| 久久99热这里只有精品18| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲av免费在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲中文字幕日韩| av天堂在线播放| 国产乱人视频| 一夜夜www| 男女那种视频在线观看| 此物有八面人人有两片| 久久久久久久精品吃奶| 男女那种视频在线观看| 精品人妻1区二区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 免费一级毛片在线播放高清视频| 黄色女人牲交| 国产淫片久久久久久久久 | 国产老妇女一区| 国产成人福利小说| 99久国产av精品| 赤兔流量卡办理| 怎么达到女性高潮| 美女免费视频网站| 简卡轻食公司| 国产精品久久久久久久电影| 国产黄色小视频在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 嫩草影院新地址| 波多野结衣巨乳人妻| 久久这里只有精品中国| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 757午夜福利合集在线观看| 免费高清视频大片| 成年免费大片在线观看| av天堂中文字幕网| 亚洲精品粉嫩美女一区| 首页视频小说图片口味搜索| 一区二区三区激情视频| АⅤ资源中文在线天堂| 中出人妻视频一区二区| 俺也久久电影网| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 此物有八面人人有两片| 亚洲欧美日韩卡通动漫| av在线老鸭窝| 久久精品国产自在天天线| aaaaa片日本免费| 亚洲第一区二区三区不卡| 欧美zozozo另类| 久久久久久久久中文| 欧美午夜高清在线| 如何舔出高潮| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲成av人片免费观看| 国产精品国产高清国产av| 欧美性猛交黑人性爽| av在线老鸭窝| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 99热6这里只有精品| 成年女人看的毛片在线观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 综合色av麻豆| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产不卡一卡二| 黄色视频,在线免费观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 黄色日韩在线| 国产一区二区激情短视频| 午夜亚洲福利在线播放| 观看免费一级毛片| 亚洲美女视频黄频| 欧美黄色淫秽网站| 国内精品美女久久久久久| 51午夜福利影视在线观看| 国产高清三级在线| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲人成电影免费在线| 国产精品久久久久久久电影| 在线观看午夜福利视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 黄片小视频在线播放| www.熟女人妻精品国产| 国产av在哪里看| 很黄的视频免费| 精品人妻1区二区| 国产69精品久久久久777片| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲国产色片| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲国产精品成人综合色| 99国产精品一区二区三区| 嫩草影院新地址| 日本熟妇午夜| 国产高清有码在线观看视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 一级毛片久久久久久久久女| 成人欧美大片| 免费av毛片视频| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲乱码一区二区免费版| 女人被狂操c到高潮| 美女大奶头视频| 国产单亲对白刺激| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 如何舔出高潮| 91av网一区二区| 一级av片app| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 欧美日本视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品一区二区性色av| 男人的好看免费观看在线视频| 国产精品国产高清国产av| 俄罗斯特黄特色一大片| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产一区二区激情短视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产av不卡久久| 成人一区二区视频在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 怎么达到女性高潮| 精品久久国产蜜桃| 成人精品一区二区免费| 嫩草影院精品99| 国产精品99久久久久久久久| 国产伦人伦偷精品视频| 天天一区二区日本电影三级| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国内精品一区二区在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 久久久久久久久久成人| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品国内亚洲2022精品成人| 精品午夜福利在线看| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产69精品久久久久777片| 国产爱豆传媒在线观看| 日韩高清综合在线| av天堂中文字幕网| 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲无线在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产av不卡久久| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 波多野结衣高清作品| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚州av有码| 免费观看精品视频网站| 欧美午夜高清在线| 久久精品国产亚洲av天美| 久久久成人免费电影| 久久国产精品人妻蜜桃| 麻豆国产97在线/欧美| 中文字幕av在线有码专区| 我要看日韩黄色一级片| 欧美乱色亚洲激情| 免费搜索国产男女视频| 欧美区成人在线视频| 青草久久国产| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国内精品久久久久久久电影| 久久人人精品亚洲av| 极品教师在线视频| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲avbb在线观看| 在线观看av片永久免费下载| 国产中年淑女户外野战色| 日韩精品青青久久久久久| 国产麻豆成人av免费视频| 日韩精品青青久久久久久| 精品无人区乱码1区二区| 国产精品影院久久| aaaaa片日本免费| www日本黄色视频网| 日本三级黄在线观看| 亚洲av免费在线观看| 麻豆一二三区av精品| 国产伦人伦偷精品视频| 波野结衣二区三区在线| 午夜精品在线福利| 男人舔奶头视频| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精品一及| 免费一级毛片在线播放高清视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 国内精品一区二区在线观看| 日韩欧美精品免费久久 | 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲成人久久性| 99热这里只有是精品在线观看 | 亚洲精品456在线播放app | 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 免费大片18禁| 免费看光身美女| 中亚洲国语对白在线视频| 国产午夜福利久久久久久| 精品无人区乱码1区二区| 五月伊人婷婷丁香| 国产 一区 欧美 日韩| 床上黄色一级片| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 亚洲第一电影网av| 天堂动漫精品| 国产精品人妻久久久久久| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 99国产综合亚洲精品| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 青草久久国产| 日韩精品青青久久久久久| 特大巨黑吊av在线直播| 草草在线视频免费看| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 免费看美女性在线毛片视频| 国产伦在线观看视频一区| 69人妻影院| 日本成人三级电影网站| 亚洲成av人片免费观看| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品国产高清国产av| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 精品熟女少妇八av免费久了| 日本与韩国留学比较| 亚洲美女搞黄在线观看 | 国产色爽女视频免费观看| 亚洲熟妇熟女久久| 中文字幕av在线有码专区| 性色av乱码一区二区三区2| 在线a可以看的网站| 久久久色成人| 国产亚洲精品av在线| 动漫黄色视频在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| av天堂在线播放| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产私拍福利视频在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 偷拍熟女少妇极品色| 精品福利观看| 性色avwww在线观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲色图av天堂| 日韩av在线大香蕉| 不卡一级毛片|