小二仙草總黃酮提取工藝的優(yōu)化及其抗氧化活性分析

夏雨弘，劉 穎，周 茗，朱震鑫，盧 月，劉洪存，孟 娟，龔志強(qiáng)，楊立芳,

（1.廣西民族大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，廣西林產(chǎn)化學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧 530008；2.廣西民族大學(xué)海洋與生物技術(shù)學(xué)院，廣西多糖材料與改性重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧 530008；3.廣西民族大學(xué)預(yù)科教育學(xué)院，廣西南寧 530008）

小二仙草（Haloragis micrantha（Thunb.）R. Brown.）是小二仙草科植物，又名豆瓣草、水豆瓣、女兒紅等，味苦、澀，性涼[1]，主要分布于廣西、廣東、云南、湖南等地，具有調(diào)經(jīng)活血、清熱利濕、止咳平喘等功效[2-3]。小二仙草中多酚類化合物含量較多，多為單寧類化合物和黃酮類化合物，黃酮類化合物具有抗氧化[4]、清除自由基[5]、調(diào)節(jié)免疫力[6]、保肝[7]、降血糖[8]、抗腫瘤[9]、抗炎[10]等多種藥理活性，在食品和醫(yī)藥行業(yè)應(yīng)用廣泛，常作為保健食品出現(xiàn)在公眾的視野，雷永平[11]探討了刺玫果總黃酮的純化工藝，并研制了刺玫果總黃酮膠囊，具有抗氧化的功效。林燕燕等[12]提取白鳳菜中的總黃酮，并以其為原料調(diào)制出白鳳菜保健飲料。王蓮婧[13]提取了化橘紅中多種有效成分，并研制出化橘紅維C 泡騰片。目前，對于小二仙草的研究僅限于對其化學(xué)成分分離提取[14]，未見有對其黃酮類物質(zhì)提取及其藥理活性進(jìn)行研究的文獻(xiàn)。

目前總黃酮的提取方法主要有加熱回流法、超聲提取法、超聲復(fù)合酶法等[15]，超聲提取法能使溶劑高速振動(dòng)，產(chǎn)生劇烈的空化效應(yīng)，使提取溶劑快速滲入，促進(jìn)對有效成分的提取[16-17]。超聲波提取法具有簡單易行、提取效率高、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。因此，本文選用小二仙草開展研究，采用超聲波輔助提取法探討小二仙草總黃酮的提取工藝，考察了乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、超聲溫度、提取時(shí)間對小二仙草總黃酮含量的影響；采用Box-Behnken 法優(yōu)化提取工藝，并檢測小二仙草總黃酮提取物的抗氧化活性，以期為提高小二仙草的黃酮類化合物的提取效率，及進(jìn)一步的深入研究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

小二仙草 購自廣西靖西，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)田慧教授鑒定，干燥后，用粉碎機(jī)粉碎，過60 目篩，密封備用；蘆丁對照品（含量＞98%） 中國藥品生物制品檢定所；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH） 上?；捎邢薰?；維生素C 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；2,2'-聯(lián)氮-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺鹽（ABTS） 麥克林生化科技有限公司；其他有機(jī)試劑均為分析純。

UVmini-1240 型紫外可見分光光度計(jì) 日本島津公司；AR224CN 電子天平 奧豪斯儀器有限公司；KQ-500DE 數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；Epoch 型全波長酶標(biāo)儀 美國Bio Tek公司；RE-2000A 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；LEGEND MICRO17 微量臺式離心機(jī) 美國賽默飛公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 單因素實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取小二仙草粉末，每份1.0 g，在設(shè)定的實(shí)驗(yàn)條件下超聲提取，提取3 次，過濾，得到小二仙草總黃酮提取液，每組實(shí)驗(yàn)平行3 次，研究不同提取條件對黃酮得率的影響。

1.2.1.1 不同乙醇體積分?jǐn)?shù)對小二仙草總黃酮得率的影響 設(shè)定料液比1:30 g/mL，超聲溫度60 ℃，超聲時(shí)間30 min，超聲功率為400 W，超聲頻率為40 kHz，考察乙醇體積分?jǐn)?shù)（55%、65%、75%、85%、95%）對總黃酮得率的影響。

1.2.1.2 不同料液比對小二仙草總黃酮得率的影響 設(shè)定乙醇體積分?jǐn)?shù)75%，超聲溫度60 ℃，超聲時(shí)間30 min，超聲功率為400 W，超聲頻率為40 kHz，考察料液比（1:10、1:20、1:30、1:40、1:50 g/mL）對總黃酮得率的影響。

1.2.1.3 不同超聲時(shí)間對小二仙草總黃酮得率的影響 設(shè)定乙醇體積分?jǐn)?shù)75%，料液比1:40，超聲溫度60 ℃，超聲功率為400 W，超聲頻率為40 kHz，考察超聲時(shí)間（10、20、30、40、50 min）對總黃酮得率的影響。

1.2.1.4 不同超聲溫度對小二仙草總黃酮得率的影響 設(shè)定乙醇體積分?jǐn)?shù)75%，料液比1:40 g/mL，超聲時(shí)間40 min，超聲功率為400 W，超聲頻率為40 kHz，考察超聲溫度（40、50、60、70、80 ℃）對總黃酮得率的影響。

1.2.2 響應(yīng)面試驗(yàn) 以單因素結(jié)果為依據(jù)，選擇其中的顯著因素為自變量。使用Design-Expert 8.0.6 軟件結(jié)合Box-Behnken 設(shè)計(jì)法，選取乙醇體積分?jǐn)?shù)（A）、料液比（B）、超聲時(shí)間（C）為自變量，總黃酮得率為響應(yīng)值，在超聲溫度為70 ℃、超聲功率為400 W、超聲頻率為40 kHz 的條件下，優(yōu)化小二仙草總黃酮的提取工藝，因素水平設(shè)計(jì)如表1 所示。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素與水平Table 1 Design factors and levels of response surface experiment

1.2.3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 取12.5 mg 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，精密稱定，用75%乙醇充分溶解并定容至25 mL，配制成0.5 mg/mL 的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

1.2.4 檢測波長的選擇 參照魯憲坤等[18]方法并加以改進(jìn)，量取3 mL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液于25 mL 容量瓶中，加入5% NaNO2溶液1 mL 混勻，靜置6 min，再加10% Al（NO3）3溶液1 mL 混勻，靜置6 min，之后加4% NaOH 溶液5 mL 后，加水定容至25 mL，混勻，靜置10 min，以75%乙醇做空白對照，在400～800 nm 測定吸收光譜，選擇最大吸收波長，發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物在512 nm 處有最大吸收峰。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取0.5 mg/mL 的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液0、1、2、3、4、5 mL 于25 mL 容量瓶中，采用實(shí)驗(yàn)1.2.4 中的顯色法測定吸光度值，繪制以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液的質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A=11.928X-0.0085，R2=0.9997，且在0.01～100 μg/mL 呈良好的線性關(guān)系。

1.2.6 小二仙草總黃酮得率的測定 稱取小二仙草粉末1.0 g，加入75%乙醇30 mL，在超聲溫度為60 ℃，超聲功率為400 W，超聲頻率為40 kHz 的條件下提取總黃酮30 min，提取3 次，過濾，搖勻，得到小二仙草總黃酮提取液。將小二仙草總黃酮提取液用75%乙醇定容至100 mL 容量瓶中，精密量取1 mL，采用實(shí)驗(yàn)1.2.4 中的顯色法測定吸光度值（A），代入回歸方程計(jì)算提取液中總黃酮的質(zhì)量濃度（C），計(jì)算小二仙草總黃酮得率（Y）的公式如下：

式中：Y 為小二仙草總黃酮得率，mg/g；C 為提取液中總黃酮的質(zhì)量濃度，mg/mL；M 為稱取小二仙草的質(zhì)量，g。

1.2.7 體外抗氧化活性分析

1.2.7.1 DPPH 自由基清除能力的測定 參照關(guān)奎奎等[19]方法，向96 孔板中分別加入100 μL 不同濃度的樣品溶液，加入0.2 mmol/L 的DPPH 溶液100 μL，混勻后室溫避光孵育30 min，于517 nm 處測定溶液的吸光度值A(chǔ)樣品。同時(shí)以等體積的無水乙醇代替DPPH 溶液測定溶液的吸光度值為A對照，以等體積的無水乙醇代替樣品溶液測定的吸光度值為A空白。VC作為陽性對照，樣品組為不同濃度的總黃酮提取物，為了直觀的對比樣品組的抗氧化效果，陽性對照與樣品組的濃度保持一致，每個(gè)濃度的樣品做三組平行試驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)所測得的吸光度值計(jì)算清除率。DPPH 自由基清除率計(jì)算公式如下：

1.2.7.2 ABTS+自由基清除能力的測定 參照楊永濤[20]方法并進(jìn)行改良，取等體積7 mmoL/L 的ABTS+溶液和1.4 mmoL/L 過硫酸鉀溶液混合均勻，避光24 h，使用時(shí)用蒸餾水調(diào)節(jié)吸光度值為0.7±0.02 即可獲得工作液。向96 孔板中加入150 μL 工作液和50 μL樣品溶液混合均勻，避光反應(yīng)6 min，于734 nm 波長處測定吸光度值為A樣品。空白組用雙蒸水代替樣品溶液測定的吸光度值為A空白，對照組用雙蒸水代替工作液測定的吸光度值為A對照。VC作為陽性對照，樣品組為不同濃度的總黃酮提取物，為了直觀的對比樣品組的抗氧化效果，陽性對照與樣品組的濃度保持一致，每個(gè)濃度的樣品做三組平行試驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)所測得的吸光度值計(jì)算清除率。

1.2.7.3 還原力測定 參考趙晉彤等[21]方法，將1.0 mL樣品溶液，2.5 mL 磷酸鹽緩沖溶液（pH=6.6）依次加入試管中，混合均勻后向每支試管中加入2.5 mL 的1%鐵氰化鉀溶液，于50 ℃水浴20 min 后，分別加入10 %三氯乙酸2.5 mL，混勻之后再以3000 r/min 離心10 min，取2.5 mL 上清液置于試管中，加入0.5 mL的0.1%三氯化鐵溶液和2.5 mL 蒸餾水，搖勻后取適量于700 nm 處測定吸光度值。VC作為陽性對照，為了直觀的對比樣品組的抗氧化效果，陽性對照與樣品組的濃度保持一致，樣品組為不同濃度的總黃酮提取物，所有樣品平行測定三組。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)均重復(fù)三次，運(yùn)用Excel 2010、Origin 2021、Design-Expert 8.0.6、SPSS 21.0 等軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對小二仙草總黃酮得率的影響 乙醇體積分?jǐn)?shù)對小二仙草總黃酮得率的影響如圖1 所示，乙醇體積分?jǐn)?shù)由55%增加到75%時(shí)，總黃酮得率逐漸升高，在75%時(shí)達(dá)到最高，總黃酮得率為21.23±0.12 mg/g。在乙醇體積分?jǐn)?shù)由75%增加到95%時(shí)，總黃酮得率顯著下降（P＜0.05），總黃酮得率降低至18.30±0.13 mg/g。分析其原因，黃酮是一類典型的有機(jī)化合物，其易溶于乙醇等有機(jī)試劑，總黃酮得率會隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高而增大，但當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)超過75%時(shí)，提取液中除黃酮外的其他物質(zhì)的溶出量也隨之提高，從而影響黃酮類物質(zhì)的提取，此結(jié)果與劉曉梅等[22]采用大孔樹脂吸附提取川麥冬須根總黃酮的研究結(jié)果相似。但乙醇體積分?jǐn)?shù)過高，會導(dǎo)致溶液極性降低，低極性雜質(zhì)如脂溶性、醇溶性物質(zhì)等將被大量溶出，并擠占黃酮的溶出空間，使總黃酮得率下降[23]。因此，選取乙醇體積分?jǐn)?shù)在65%～85%范圍內(nèi)作為小二仙草總黃酮的提取溶劑進(jìn)行優(yōu)化。

圖1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對小二仙草總黃酮得率的影響Fig.1 Effect of ethanol volume fraction on the extraction rate of total flavonoids from Haloragis micrantha

2.1.2 料液比對小二仙草總黃酮得率的影響 料液比對小二仙草總黃酮得率的影響如圖2 所示，總黃酮得率隨著料液比的升高呈先升高后下降的趨勢?？傸S酮得率在料液比為1:40 g/mL 時(shí)最高，當(dāng)料液比大于1:40 g/mL 時(shí)，總黃酮得率顯著降低（P＜0.05），得率由24.00±0.10 mg/g 降低至22.95±0.21 mg/g，其原因可能是溶劑過多，使小二仙草受到超聲波的空化效應(yīng)減弱[24]，且當(dāng)黃酮完全溶出后，總黃酮得率將不會有顯著的變化。為減少實(shí)驗(yàn)試劑節(jié)約成本，且提高總黃酮得率，設(shè)定料液比在1:30～1:50 g/mL 范圍內(nèi)進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

圖2 料液比對小二仙草總黃酮得率的影響Fig.2 Effect of solid-liquid ratio on the extraction rate of total flavonoids from Haloragis micrantha

2.1.3 超聲時(shí)間對小二仙草總黃酮得率的影響 超聲時(shí)間對小二仙草總黃酮得率的影響如圖3 所示，隨著超聲時(shí)間的增加，總黃酮得率在超聲10 min 到30 min 時(shí)直線升高，在40 min 時(shí)達(dá)到最高，得率由15.92±0.20 mg/g 升高至24.25±0.09 mg/g。隨著超聲時(shí)間的延長，總黃酮得率開始出現(xiàn)下降的趨勢（P＜0.05）。原因可能是小二仙草中總黃酮含量一定，過長的超聲時(shí)間可能會導(dǎo)致超聲破壞了黃酮的分子結(jié)構(gòu)，降低總黃酮得率[25]。因此，選擇超聲時(shí)間在30～50 min 進(jìn)行后續(xù)響應(yīng)面試驗(yàn)。

圖3 超聲時(shí)間對小二仙草總黃酮得率的影響Fig.3 Effect of ultrasonic time on the extraction rate of total flavonoids from Haloragis micrantha

2.1.4 超聲溫度對小二仙草總黃酮得率的影響 超聲溫度對小二仙草總黃酮得率的影響如圖4 所示，小二仙草總黃酮得率隨著超聲溫度的升高呈先升高后下降的趨勢，但升高趨勢較緩慢。小二仙草總黃酮得率在超聲溫度為70 ℃時(shí)達(dá)到最高（26.45±0.21 mg/g），當(dāng)超聲溫度大于70 ℃時(shí)，得率開始下降。其原因可能是高溫可能會破壞部分黃酮的分子結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致小二仙草總黃酮得率下降[26]。因此，適宜超聲溫度為70 ℃。

圖4 超聲溫度對小二仙草總黃酮得率的影響Fig.4 Effect of ultrasonic temperature on the extraction rate of total flavonoids from Haloragis micrantha

2.2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.2.1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果 采用Design-Expert 8.0.6 軟件對響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，響應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2 所示，得到小二仙草總黃酮提取液的擬合回歸方程為：Y=28.41+0.97A-0.26B+1.23C-0.94AB-2.05AC+0.63BC-3.36A2-4.41B2-4.30C2。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Response surface experimental design and results

2.2.2 響應(yīng)面回歸模型方差分析 回歸模型方差分析見表3，由表3 可知，模型P＜0.01，具有極顯著的差異；失擬項(xiàng)P值為0.0984（P＞0.05），不顯著，表明模型的擬合度良好。該模型調(diào)整決定系數(shù)R2=0.9695，因此我們得知本實(shí)驗(yàn)可靠性高，能夠分析和預(yù)測小二仙草總黃酮提取工藝實(shí)驗(yàn)。根據(jù)F值可知考察因素對響應(yīng)值的影響主次順序?yàn)槌晻r(shí)間（C）＞乙醇體積分?jǐn)?shù)（A）＞料液比（B），其中一次項(xiàng)A 和C 的P值小于0.05，有顯著性差異，交叉項(xiàng)AC 具有極顯著差異（P＜0.01），其他交互作用影響均不顯著，二次項(xiàng)A2、B2、C2均具有極顯著性差異（P＜0.01）。

表3 回歸模擬的方差分析Table 3 Analysis of variance for regression simulation

2.2.3 響應(yīng)面試驗(yàn)交互作用分析 圖5 為Design-Expert 8.0.6 軟件繪制的乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比和超聲時(shí)間三個(gè)因素交互作用對小二仙草總黃酮得率的響應(yīng)面圖。由圖可知，各因素對響應(yīng)面的陡峭程度的影響為超聲時(shí)間＞乙醇體積分?jǐn)?shù)＞料液比，這說明超聲時(shí)間對小二仙草總黃酮得率影響最大，其次是乙醇體積分?jǐn)?shù)，料液比影響最小。乙醇體積分?jǐn)?shù)與料液比及超聲時(shí)間與料液比間的等高線稀疏，為圓形，因素之間的交互作用的響應(yīng)值的影響不顯著。乙醇體積分?jǐn)?shù)與超聲時(shí)間的等高線密集，為橢圓形，說明二者交互作用對響應(yīng)值的影響明顯，與方差分析結(jié)果相對應(yīng)。

圖5 各因素交互影響小二仙草總黃酮得率的響應(yīng)面圖Fig.5 Response surface showing the interactive effects of variables on the yield of total flavonoids from Haloragis micrantha

2.2.4 最佳提取工藝的確定與驗(yàn)證 根據(jù)方程和響應(yīng)面圖確定小二仙草總黃酮的最佳提取工藝為乙醇體積分?jǐn)?shù)76.15% 、料液比1:39.66 g/mL、超聲時(shí)間41.14 min，預(yù)測值為28.54 mg/g。根據(jù)實(shí)際情況對提取工藝進(jìn)行調(diào)整，即乙醇體積分?jǐn)?shù)76%、料液比1:40 g/mL、超聲時(shí)間41 min，進(jìn)行3 次平行驗(yàn)證試驗(yàn)，最終得出小二仙草總黃酮的得率為28.61±0.05 mg/g，接近預(yù)測值，表明該響應(yīng)面模型預(yù)測性較好，可用于小二仙草總黃酮的提取工藝。

2.3 小二仙草總黃酮抗氧化活性的測定

2.3.1 小二仙草總黃酮清除DPPH 自由基的能力小二仙草總黃酮對DPPH 自由基清除能力如圖6 所示，隨著質(zhì)量濃度的增加，小二仙草總黃酮和維生素C對DPPH 自由基清除能力逐漸增強(qiáng)，在0.18～3 mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，呈顯著的劑量依賴關(guān)系。小二仙草總黃酮3 mg/mL 清除DPPH 自由基能力最強(qiáng)，此時(shí)清除率為88.65%，但清除能力低于維生素C。由此得出，小二仙草總黃酮具有一定的DPPH 自由基清除能力，但效果低于維生素C。

圖6 小二仙草總黃酮對DPPH 自由基的清除能力Fig.6 Scavenging ability of total flavonoids of Haloragis micrantha on DPPH free radicals

2.3.2 小二仙草總黃酮清除ABTS+自由基的能力小二仙草總黃酮對ABTS+自由基清除能力如圖7 所示，小二仙草總黃酮和維生素C 對ABTS+自由基清除能力逐漸增強(qiáng)，在0.18～3 mg/mL 質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，呈顯著的劑量依賴關(guān)系。當(dāng)小二仙草總黃酮濃度為1.5 mg/mL 時(shí)，其對ABTS+自由基清除能力逐漸接近維生素C；當(dāng)小二仙草總黃酮濃度為3 mg/mL 時(shí)，清除率達(dá)到98.28%，其對ABTS+自由基清除能力幾乎與維生素C（清除率為99.81%）相當(dāng)，表現(xiàn)了較好的ABTS+自由基清除能力。

圖7 小二仙草總黃酮對ABTS+自由基的清除能力Fig.7 Scavenging ability of total flavonoids of Haloragis micrantha to ABTS+ free radicals

2.3.3 小二仙草總黃酮的總還原力 小二仙草總黃酮的總還原力如圖8 所示，小二仙草總黃酮具有一定的總還原力，且隨著質(zhì)量濃度的增加，總還原力逐漸增強(qiáng)。維生素C 比小二仙草總黃酮的總還原力強(qiáng)，在質(zhì)量濃度為0.18～3 mg/mL 時(shí)，總還原力趨于穩(wěn)定，總還原力均在2.5 左右，由此得出小二仙草總黃酮具有一定的還原能力，但顯著低于相同濃度的維生素C 的還原能力。

圖8 小二仙草總黃酮的總還原力Fig.8 Total reducing power of the total flavonoids of Haloragis micrantha

3 結(jié)論

由于響應(yīng)曲面法在提取分離中藥的有效成分領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，因此選擇響應(yīng)曲面分析法優(yōu)化小二仙草總黃酮的提取工藝參數(shù)，并進(jìn)行抗氧化活性研究。響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果顯示，小二仙草總黃酮的最佳提取工藝為乙醇體積分?jǐn)?shù)76.15%、料液比1:40 g/mL、超聲時(shí)間41 min，此時(shí)得率為28.61±0.05 mg/g，接近預(yù)測值，表明該響應(yīng)面模型預(yù)測性較好，可用于小二仙草總黃酮的提取工藝。小二仙草總黃酮對DPPH 和ABTS+自由基的清除能力在一定范圍內(nèi)呈遞增趨勢，具有劑量依賴性，且在質(zhì)量濃度為1.5 和3 mg/mL 時(shí)，清除ABTS+自由基能力與維生素C 效果相當(dāng)。小二仙草總黃酮還具有較好的還原力，顯示其抗氧化活性較好，可作為良好的天然抗氧化劑。本研究只對小二仙草總黃酮的提取工藝和抗氧化活性進(jìn)行了初步研究，但對抗氧化的藥效物質(zhì)及機(jī)制尚未進(jìn)行深入探究，后續(xù)實(shí)驗(yàn)可對小二仙草黃酮類化合物進(jìn)行分離制備，并采用體內(nèi)、體外藥理活性實(shí)驗(yàn)探究小二仙草黃酮類化合物抗氧化活性物質(zhì)基礎(chǔ)及抗氧化的機(jī)理，為小二仙草的深度研究與開發(fā)利用提供理論依據(jù)。