遮陰方式與培養(yǎng)時(shí)期對(duì)珠美海棠試管苗室外瓶內(nèi)生根的影響

盧興霞，姚彤亮，柴慈江，時(shí)海東

（天津農(nóng)學(xué)院 園藝園林學(xué)院，天津 300392）

珠美海棠（Malus Zumi）為薔薇科蘋果屬植物，具有較強(qiáng)的抗逆性，抗白粉病和黑星病，且較耐澇，尤其具有較強(qiáng)的耐鹽能力，在含鹽量0.4%左右的土壤中能夠正常生長與開花結(jié)果[1]，可以作為鹽漬地區(qū)的綠化樹種和蘋果砧木推廣應(yīng)用。利用組培快繁技術(shù)是快速獲得珠美海棠大量優(yōu)質(zhì)苗木的有效途徑。關(guān)于珠美海棠組培快繁技術(shù)的研究報(bào)道首見于1981 年[2]。目前，珠美海棠組培快繁技術(shù)已趨于成熟[3]，并且在有的地區(qū)已經(jīng)形成了組培苗木的規(guī)?；a(chǎn)[4]。

降低試管苗的成本可以提高珠美海棠組培苗的生產(chǎn)效率。在珠美海棠試管苗生根培養(yǎng)中，通常使用瓊脂培養(yǎng)基并在恒溫培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)。大量瓊脂的使用及恒溫培養(yǎng)室的電力消耗是導(dǎo)致試管苗成本升高的主要原因。馮雪贊等對(duì)珠美海棠試管苗的氣培生根技術(shù)進(jìn)行了研究，使珠美海棠試管苗莖段在空氣中生根率達(dá)80%以上[5]，柴慈江等以土壤做培養(yǎng)基支撐物可以使珠美海棠試管苗生根率達(dá)到100%[6]，這兩項(xiàng)研究都省去了瓊脂的使用，降低了試管苗成本。宋秋月等[7]和王然等[8]進(jìn)行了栒子試管苗的室外瓶內(nèi)生根試驗(yàn)，生根率最高可達(dá)95.9%。黃潔萍等、董媛媛等和夏瑞等分別對(duì)北美海棠、葡萄和櫻桃李試管苗的室外瓶內(nèi)生根進(jìn)行了研究，均取得了比較理想的結(jié)果[9-11]。楊廣艷等研究表明室外培養(yǎng)的珠美海棠試管苗的生根效果與培養(yǎng)室等環(huán)境無顯著差異[12]，顯示也可以將珠美海棠試管苗的生根培養(yǎng)放在室外進(jìn)行。在此基礎(chǔ)上，本研究探討了遮陰方式與培養(yǎng)時(shí)期對(duì)珠美海棠試管苗室外瓶內(nèi)生根的影響，以期完善珠美海棠試管苗的室外瓶內(nèi)生根技術(shù)，減少電力消耗及設(shè)施投入，進(jìn)一步降低成本。目前國內(nèi)尚未見關(guān)于試管苗室外瓶內(nèi)生根的其他研究報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為在含有0.5 mg/L 6-BA 的MS培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)4 代的珠美海棠試管苗，試管苗長至2～3 cm 時(shí)取莖段用于各項(xiàng)試驗(yàn)。其中，用于2016 年4 月中旬不同遮陰方式試驗(yàn)的試管苗莖段取自繼代培養(yǎng)約100 d 的珠美海棠試管苗，其余各項(xiàng)試驗(yàn)所用試管苗莖段均取自繼代培養(yǎng)40～60 d的試管苗。配制生根培養(yǎng)基使用的土壤為取自本校綠地的黏壤土，6 月份取土裝入瓦盆并放于地表，經(jīng)夏季雨水淋洗后，當(dāng)年10 月份將風(fēng)干后的土壤過1mm 篩備用。該黏壤土pH 值為8.2，含鹽量0.41‰。市場購買小粒蛭石同樣過1 mm 篩備用。試驗(yàn)用遮陽網(wǎng)透光率約為40%。

以200 mL 大口瓶為培養(yǎng)容器。將上述黏壤土和蛭石按照1∶2的體積比混合均勻，裝入大口瓶。然后加入培養(yǎng)液，培養(yǎng)液的成分為含有0.5 mg/L IBA 和15 g/L 蔗糖的蒸餾水，pH 值調(diào)至6.0。加入培養(yǎng)液后，用封瓶膜封口，然后將培養(yǎng)瓶放在高壓滅菌器中滅菌，滅菌方法為在0.11～0.12 Mpa（121 ℃）條件下保持20 min。滅菌后，當(dāng)培養(yǎng)基冷卻后，用膠粘帶把封瓶膜的透氣孔粘住以防水分蒸發(fā)過快和在露地進(jìn)入雨水。在超凈工作臺(tái)上每個(gè)培養(yǎng)瓶內(nèi)接種5 個(gè)約1.5 cm 的珠美海棠試管苗莖段。將接種了珠美海棠試管苗莖段的培養(yǎng)瓶用于各項(xiàng)試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 室外環(huán)境中不同遮陰方式的試驗(yàn)

該試驗(yàn)在2016 年4 月中旬、日最低溫穩(wěn)定在10 ℃以上時(shí)進(jìn)行。試驗(yàn)地點(diǎn)為天津農(nóng)學(xué)院東校區(qū)地被植物試驗(yàn)園。遮陰方式設(shè)樹蔭遮陰、雙層遮陽網(wǎng)遮陰和三層遮陽網(wǎng)遮陰3個(gè)處理，具體如下：

樹蔭遮陰：在地被植物園南邊選擇一株國槐用于遮陰，樹高約6 m，冠徑約4 m，干高約2.5 m。將接種了珠美海棠試管苗莖段的培養(yǎng)瓶放置在樹冠下樹干的北面，培養(yǎng)瓶的東西兩面豎向放置一層遮陽網(wǎng)，使培養(yǎng)瓶避免陽光的直接照射。

雙層遮陽網(wǎng)遮陰：在地被植物園空曠地面搭建小拱棚，小拱棚的頂部和東、南、西三面用雙層遮陽網(wǎng)覆蓋，然后將培養(yǎng)瓶放在小拱棚內(nèi)。

三層遮陽網(wǎng)遮陰：如上法搭建小拱棚，并在小拱棚的頂部和東、南、西三面用三層遮陽網(wǎng)覆蓋，然后將培養(yǎng)瓶放在小拱棚內(nèi)。

試驗(yàn)按完全隨機(jī)法設(shè)計(jì)。每處理均接種6瓶，共30 個(gè)試管苗莖段進(jìn)行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)期間，取一個(gè)未接種試管苗莖段的含有土壤培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，將最高溫度計(jì)的感溫端插入封瓶膜置于瓶內(nèi)懸空處，每隔5 d 觀測(cè)一次各處理培養(yǎng)瓶內(nèi)的最高溫，同時(shí)用學(xué)聯(lián)牌JD-3 型數(shù)字式照度計(jì)測(cè)定各處理培養(yǎng)瓶頂部的光照強(qiáng)度。

培養(yǎng)40 d 后，各處理統(tǒng)計(jì)生根率，并用卡方測(cè)驗(yàn)的方法做顯著性測(cè)驗(yàn)，同時(shí)調(diào)查各處理所有成活試管苗的根長、根數(shù)、莖長、葉數(shù)等指標(biāo)，并按照完全隨機(jī)試驗(yàn)單向分組資料的統(tǒng)計(jì)分析方法做方差分析。

1.2.2 室外環(huán)境中不同培養(yǎng)時(shí)期的試驗(yàn)

2016、2017 和2018 年每年在4 月下旬至6月下旬和9 月上旬，按照上述1.1 中的方法配制土壤支撐培養(yǎng)基，取繼代培養(yǎng)40～60 d 的珠美海棠試管苗，剪取長約1.5 cm 的試管苗莖段接入培養(yǎng)基，用封瓶膜封口后再用透明膠帶將封瓶膜透氣孔封堵。然后將接種了珠美海棠試管苗莖段的培養(yǎng)瓶放置于樹蔭下（培養(yǎng)地點(diǎn)及樹蔭遮陰方式均同試驗(yàn)1.2.1）進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶放置在室外的具體時(shí)間分別為：2016 年：6 月19 日和9 月7 日；2017 年：4 月21 日，4 月29 日，5 月22 日和9月11 日；2018 年：4 月27 日和9 月7 日。40 d后調(diào)查試管苗生根與生長狀況。試管苗生根與生長指標(biāo)的調(diào)查和統(tǒng)計(jì)分析的方法均與試驗(yàn)1.2.1相同。培養(yǎng)期間培養(yǎng)瓶內(nèi)最高溫和培養(yǎng)瓶頂部光照強(qiáng)度的測(cè)定也同試驗(yàn)1.2.1。

2 結(jié)果與分析

2.1 室外環(huán)境中不同遮陰方式對(duì)珠美海棠試管苗生根培養(yǎng)的影響

不同遮陰方式下珠美海棠試管苗生根培養(yǎng)結(jié)果見表1。

表1 室外環(huán)境中不同遮陰方式對(duì)珠美海棠試管苗生根培養(yǎng)的影響

由表1 可見，3 種遮陰處理下培養(yǎng)的珠美海棠試管苗的根長、根數(shù)、生根率、莖長和葉數(shù)均無顯著性差異，表明這3 種遮陰方式對(duì)試管苗根系發(fā)生與生長的影響效果一致。

根據(jù)氣象資料，4 月中旬開始，每日的最低氣溫已經(jīng)穩(wěn)定在10 ℃以上，不會(huì)成為試管苗生長的限制因子。但是隨著氣溫升高和陽光照射，培養(yǎng)瓶內(nèi)的最高溫可能會(huì)限制試管苗生長。

由圖1 可見，培養(yǎng)期間，3 種遮陰方式下培養(yǎng)瓶內(nèi)的最高溫度明顯受到瓶內(nèi)接受光照強(qiáng)度的影響。雙層遮陽網(wǎng)遮陰的培養(yǎng)瓶內(nèi)接受了較多光照（平均光照強(qiáng)度為6 777 lx），因此其最高溫明顯高于三層遮陽網(wǎng)遮陰（平均光照強(qiáng)度為3 325 lx）。樹蔭遮陰的瓶內(nèi)最高溫在培養(yǎng)前期與雙層遮陽網(wǎng)遮陰相似，后期則與三層遮陽網(wǎng)遮陰一致，這可能是前期樹冠枝葉稀疏光照較強(qiáng)，后期樹冠郁閉光照較弱的緣故。總體上看，3 種遮陰處理瓶內(nèi)最高溫雖然有差異，但都在25～35℃范圍內(nèi)波動(dòng)，沒有出現(xiàn)35 ℃以上的高溫。從光照條件看，一般恒溫培養(yǎng)室中人工光源提供的光照強(qiáng)度為3 000 lx左右，而處于培養(yǎng)瓶頂部的光照強(qiáng)度僅為2 000 lx左右。本試驗(yàn)中，以樹冠郁閉后的樹蔭下光照強(qiáng)度最低，但仍然可以達(dá)到2 000 lx 以上，因此，3種遮陰方式均可以滿足試管苗對(duì)光照強(qiáng)度的需要。3 種遮陰方式中雙層遮陽網(wǎng)遮陰處理的光照強(qiáng)度最強(qiáng)，雖然3 種遮陰方式下的根長、莖長和葉數(shù)等指標(biāo)無顯著差異，但該處理比其他兩個(gè)處理有促進(jìn)根系和莖葉生長的趨向，這可能意味著增強(qiáng)光照具有促進(jìn)試管苗生長的潛力，對(duì)此有待于進(jìn)一步研究。盡管在溫度、光照方面存在一定差異，但在4 月中旬至5 月下旬這3 種遮陰方式對(duì)珠美海棠試管苗的室外瓶內(nèi)生根都是適宜的。

圖1 室外3種不同遮陰條件下培養(yǎng)瓶內(nèi)最高溫度變化情況

3 種遮陰處理培養(yǎng)的珠美海棠試管苗生長狀況見圖2。

圖2 室外3種不同遮陰條件下珠美海棠試管苗的生長狀況

2.2 室外環(huán)境中不同培養(yǎng)時(shí)期對(duì)珠美海棠試管苗生根培養(yǎng)的影響

室外環(huán)境中不同時(shí)期培養(yǎng)的珠美海棠試管苗生根效果見表2。

表2 室外環(huán)境中不同培養(yǎng)時(shí)期對(duì)珠美海棠試管苗生根培養(yǎng)的影響

由表2 可見，2016 年兩個(gè)時(shí)期培養(yǎng)的試管苗生根率分別為80.0%和90.0%，兩者差異不顯著。兩者根數(shù)、莖長、葉數(shù)等指標(biāo)差異也不顯著；但9月7 日—10 月17 日培養(yǎng)時(shí)期的根長顯著高于前者，表明該時(shí)期優(yōu)于6 月19 日—7 月29 日時(shí)期。2017年四個(gè)時(shí)期培養(yǎng)的試管苗生根率無顯著差異，為87.3%～97.8%，葉數(shù)也無顯著性差異；但是4 月29 日—6 月8 日培養(yǎng)的試管苗的根長顯著高于其他各時(shí)期，4 月21 日—5 月31 日培養(yǎng)的試管苗的根數(shù)、莖長顯著高于其他各時(shí)期，綜合來看，這兩個(gè)培養(yǎng)時(shí)期培養(yǎng)的試管苗生長質(zhì)量優(yōu)于5月22日—7 月1 日和9 月11 日—10 月21 日兩個(gè)培養(yǎng)時(shí)期。2018 年9 月7 日—10 月17 日培養(yǎng)的試管苗生根率為97.5%，顯著高于4 月27 日—6 月6 日的生根率（88.4%）。

總體來看，9 月初至10 月下旬培養(yǎng)的試管苗生根率較高，3 年間均達(dá)到90%以上，但是根長或根數(shù)、莖長等指標(biāo)顯著低于4 月下旬至6 月上旬培養(yǎng)的試管苗（2017 年），其原因可能是該時(shí)期培養(yǎng)的前期，瓶內(nèi)最高溫多在30 ℃以下，對(duì)生根有利，而后期（培養(yǎng)30 d 后）瓶內(nèi)最高溫度降至20 ℃以下（圖3），較低溫度可能對(duì)試管苗的生長產(chǎn)生了一定抑制作用。

圖3 2017 年不同培養(yǎng)時(shí)期培養(yǎng)瓶內(nèi)的最高溫度變化情況

5 月下旬至7 月初（2017 年）培養(yǎng)的試管苗生根率略低于90%，達(dá)到87.3%，各項(xiàng)生長指標(biāo)與9 月初至10 月下旬培養(yǎng)的試管苗無顯著性差異，但根長、根數(shù)或莖長等至少有一項(xiàng)指標(biāo)顯著低于4月下旬至6 月上旬培養(yǎng)的試管苗。由圖3 可見，該培養(yǎng)時(shí)期的后半段（約20 d）瓶內(nèi)最高溫均超過了35 ℃，較高的溫度可能對(duì)試管苗的生長產(chǎn)生了一定抑制作用。

上述結(jié)果中6 月中旬至7 月底（2016 年）培養(yǎng)的試管苗生根率最低，為80.0%，根數(shù)、莖長、葉數(shù)等指標(biāo)與9 月初至10 月中旬培養(yǎng)的試管苗無顯著差異，但根長則顯著低于9 月初至10 月中旬培養(yǎng)的試管苗。因此，該培養(yǎng)時(shí)期試管苗的生長質(zhì)量在所有結(jié)果中也是最差的。6 月中旬至7 月底自始至終瓶內(nèi)最高溫都在35 ℃左右徘徊（圖4），這種持續(xù)的較高溫度可能對(duì)試管苗生根及生長都產(chǎn)生了抑制作用，導(dǎo)致生根率有所降低及生長質(zhì)量顯著下降。

圖4 2016 年不同培養(yǎng)時(shí)期培養(yǎng)瓶內(nèi)的最高溫度變化情況

4 月下旬至6 月上旬培養(yǎng)的試管苗生根率較高，2017 年為91.1%～97.8%，2018 年較大試驗(yàn)樣本的生根率也達(dá)到88.4%，該時(shí)期的生長質(zhì)量明顯優(yōu)于其他時(shí)期。該時(shí)期培養(yǎng)瓶內(nèi)最高溫多在25～30 ℃變化且未出現(xiàn)35 ℃高溫（圖3，圖4），溫度適宜可能是該時(shí)期生根率較高且生長質(zhì)量較好的原因之一。此外，該培養(yǎng)時(shí)期的前期樹冠未郁閉，光照強(qiáng)于其他時(shí)期（樹冠完全郁閉），較強(qiáng)的光照也利于試管苗的生根與生長。

綜上所述，在天津農(nóng)學(xué)院所處氣候條件下，珠美海棠試管苗室外瓶內(nèi)生根培養(yǎng)的適宜時(shí)期為4 月下旬至7 月初和9 月上旬至10 月中旬，其中以4 月下旬至6 月上旬為最佳培養(yǎng)時(shí)期。

3 討論與結(jié)論

試管苗的生根培養(yǎng)可以分為瓶內(nèi)生根和瓶外生根兩種方式[13]。一般認(rèn)為瓶外生根的生根率略低于瓶內(nèi)生根[14]。對(duì)于難生根植物，瓶內(nèi)生根還是唯一選擇[15]。

試管苗的瓶內(nèi)生根通常使用瓊脂培養(yǎng)基并在恒溫培養(yǎng)室進(jìn)行，成本較高且移栽困難。柴慈江等[16]和韓會(huì)會(huì)等[17]利用土壤支撐的培養(yǎng)基進(jìn)行試管苗的溫室內(nèi)瓶內(nèi)生根取得了理想的結(jié)果，既節(jié)省瓊脂和電力消耗而降低成本，又提高了試管苗移栽成活率。將試管苗的瓶內(nèi)生根放在室外進(jìn)行，則可以減少溫室設(shè)施的投入，進(jìn)一步降低成本。楊廣艷等[12]和宋秋月等[7]的研究表明了試管苗室外瓶內(nèi)生根的可行性。

溫度與光照的調(diào)節(jié)是試管苗室外瓶內(nèi)生根成功與否的關(guān)鍵，而光照又對(duì)溫度有直接的影響。在天津平原地區(qū)，4 月中旬日最低溫可以穩(wěn)定在10 ℃以上，此時(shí)開始培養(yǎng)可以避免低溫的影響，溫度調(diào)控的重點(diǎn)在于避免高溫的危害，而適度遮陰可以明顯降低培養(yǎng)瓶內(nèi)溫度。柴慈江等在栒子試管苗溫室瓶內(nèi)生根中，采用雙層遮陽網(wǎng)遮陰的瓶內(nèi)最高溫基本上低于33 ℃，未遮陰則高達(dá)39 ℃[16]。王然等在栒子試管苗的室外瓶內(nèi)生根中，4 月下旬至5 月底采用樹蔭遮陰可使瓶內(nèi)最高溫度控制在35 ℃以下[8]。本項(xiàng)研究中，4 月中旬至5 月下旬采用雙層遮陽網(wǎng)、三層遮陽網(wǎng)或樹蔭遮陰，均可以使培養(yǎng)瓶內(nèi)最高溫度控制在35 ℃以下。采用樹蔭遮陰方式，至6 月上旬仍可以控制瓶內(nèi)最高溫低于35 ℃。這些研究顯示采用適當(dāng)?shù)恼陉幋胧梢员苊馄績?nèi)出現(xiàn)過高溫度，從而為試管苗提供良好的溫度條件。遮陰會(huì)降低培養(yǎng)瓶內(nèi)的光照強(qiáng)度，本試驗(yàn)中以樹冠郁閉后的樹蔭遮陰光照強(qiáng)度最低，但是仍然可以達(dá)到2 000 lx 以上，與恒溫培養(yǎng)室中人工光源下的光照強(qiáng)度相似，因此能夠滿足試管苗生長的需要。所以，在4 月中旬至6月上旬，采取適當(dāng)?shù)恼陉幋胧瓤梢员苊鉁囟冗^高，又能夠滿足光照需求，這為試管苗的室外瓶內(nèi)生根提供了保證。

室外環(huán)境中培養(yǎng)瓶內(nèi)溫度在很大程度上受環(huán)境氣溫影響，而環(huán)境氣溫的變化完全由季節(jié)變化決定。因此，除遮陰外，選擇適宜的培養(yǎng)時(shí)期也非常重要。在天津平原地區(qū)，炎熱的夏秋季節(jié)，單純的遮陰措施難以抑制瓶內(nèi)高溫。本項(xiàng)研究中，6 月中旬至7 月份即使在遮陰條件下培養(yǎng)瓶內(nèi)最高溫仍然超過35 ℃，特別是7 月中下旬最高氣溫頻繁達(dá)到36～37 ℃，通過遮陰降溫已很難奏效。此時(shí)培養(yǎng)的試管苗生根率下降且生長受到明顯的抑制。因此，7 月的暑熱時(shí)期不適于進(jìn)行試管苗的室外生根培養(yǎng)。8 月上中旬仍處于暑熱之中，11月至翌年3 月則處于秋末春初的低溫及冬季的嚴(yán)寒時(shí)期，這些時(shí)期理論上也不適于試管苗的室外生根培養(yǎng)。

秋季的溫暖時(shí)期（9 月初至10 月中旬）是試管苗室外瓶內(nèi)生根比較適宜的時(shí)期。此時(shí)期前期瓶內(nèi)最高溫大多在25～30 ℃之間變化，溫度適宜且穩(wěn)定，試管苗生根率較高。本研究連續(xù)3 年的試驗(yàn)中，此時(shí)期的生根率均達(dá)到90%以上。但由于后期溫度較低，瓶內(nèi)最高溫甚至低至20 ℃以下，致使此時(shí)期試管苗的生長質(zhì)量顯著低于4 月下旬至6 月上旬培養(yǎng)的試管苗。由于8 月下旬日最高氣溫一般已降至35 ℃以下，如將該時(shí)期的培養(yǎng)提前至8 月下旬開始，至10 月初結(jié)束，則有可能避免后期低溫的影響。或者進(jìn)入10 月后，由樹蔭遮陰改為雙層遮陽網(wǎng)遮陰以提高培養(yǎng)瓶內(nèi)溫度。這些都有待于進(jìn)一步研究。

5 月下旬至7 月初是試管苗室外瓶內(nèi)生根的另一個(gè)較適宜時(shí)期。此時(shí)期前期溫度適宜有利于根系發(fā)生，生根率接近90%，但后期瓶內(nèi)最高溫逐步超過35 ℃抑制試管苗生長，生長質(zhì)量明顯低于4 月下旬至6 月上旬的試管苗，而與9 月初至10 月中旬的試管苗無顯著差異。

春末夏初（4 月中下旬至6 月上旬）是試管苗室外瓶內(nèi)生根最適宜的時(shí)期。此時(shí)最低氣溫已經(jīng)穩(wěn)定在10 ℃以上，適當(dāng)遮陰可使瓶內(nèi)溫度控制在35 ℃以下，溫度適宜，且光照也可以滿足試管苗需求。本項(xiàng)研究中此時(shí)期內(nèi)培養(yǎng)的珠美海棠試管苗生根率達(dá)到88.4%～97.8%，生長質(zhì)量也優(yōu)于其他各培養(yǎng)時(shí)期。需要指出的是，本研究在2016 年該時(shí)期的生根率僅為20.0～33.3%，明顯偏低，其原因可能與接種的試管苗莖段自身的生理狀態(tài)有關(guān)。該試管苗莖段取自繼代培養(yǎng)約100 d 的試管苗，而且其繼代培養(yǎng)期間在寒假階段因空調(diào)故障經(jīng)歷了20 余天的較低溫度培養(yǎng)，低溫期間培養(yǎng)室溫度僅為11～20 ℃。繼代培養(yǎng)時(shí)間過長和低溫的影響，可能使試管苗接近于休眠狀態(tài)，其葉片中可能積累了較多的脫落酸，影響到內(nèi)源激素的平衡，因此抑制了根系發(fā)生。對(duì)此尚待進(jìn)一步研究。2017年和2018 年該時(shí)期的培養(yǎng)均采用在常規(guī)溫度（23～27 ℃）下繼代培養(yǎng)40～60 d 的試管苗莖段接種，并取得了理想的結(jié)果。因此，去除2016 年試驗(yàn)的非正常因素影響，2017 年和2018 年的試驗(yàn)結(jié)果可以說明4 月下旬至6 月上旬是試管苗室外瓶內(nèi)生根的最適宜時(shí)期。

黃潔萍等在4 月下旬進(jìn)行北美海棠試管苗室外瓶內(nèi)生根，生根率達(dá)到90.6%[9]。董媛媛等在6月份進(jìn)行葡萄試管苗室外瓶內(nèi)生根，生根率達(dá)到92.5%[10]。夏瑞等在9 月下旬進(jìn)行櫻桃李試管苗室外瓶內(nèi)生根，生根率為83.3%，與恒溫培養(yǎng)室培養(yǎng)的無顯著差異[11]。宋秋月等研究認(rèn)為4 月21 日至5 月31 日是栒子試管苗室外瓶內(nèi)生根的適宜時(shí)期，5 月22 日至7 月1 日是次適宜時(shí)期[7]，這些研究與本研究結(jié)果基本一致。

室外瓶內(nèi)生根的試管苗可以不經(jīng)過煉苗，開瓶后直接移入田間土壤[8]，這樣可以擺脫煉苗階段對(duì)溫室的依賴，更加凸顯了室外瓶內(nèi)生根的意義。朱霖等研究認(rèn)為珠美海棠試管苗田間直接入地移栽的適宜時(shí)期為4 月下旬至6 月上旬[18]，即最遲應(yīng)在6 月上旬完成。因此，從生根與移栽的銜接方面考慮，也以4 月下旬至6 月上旬為珠美海棠試管苗室外瓶內(nèi)生根培養(yǎng)的最佳時(shí)期。

綜合上述認(rèn)為，在天津農(nóng)學(xué)院所處氣候條件下，4 月中旬至5 月下旬，在室外采用樹蔭、雙層遮陽網(wǎng)或三層遮陽網(wǎng)遮陰可以控制培養(yǎng)瓶內(nèi)溫度在35 ℃以下，培養(yǎng)瓶頂部接受的光照強(qiáng)度達(dá)到2 000 lx 以上，3 種遮陰方式下培養(yǎng)的珠美海棠試管苗生根及生長指標(biāo)無顯著差異，3 種遮陰方式均可用于試管苗培養(yǎng)；在樹蔭遮陰下，珠美海棠試管苗室外瓶內(nèi)生根的適宜時(shí)期為4 月下旬至7 月初和9 月上旬至10 月中旬，其中以4 月下旬至6月上旬為最佳培養(yǎng)時(shí)期。本結(jié)果將為進(jìn)一步降低珠美海棠試管苗培養(yǎng)成本及促進(jìn)珠美海棠離體快繁技術(shù)的生產(chǎn)應(yīng)用提供依據(jù)。