澤漆水提取物對(duì)豬流行性腹瀉病毒的體外抑制作用研究

鐘睦琪 李凱遠(yuǎn) 王 雪 劉甜甜,3 楊 明,3 郝智慧*

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 化學(xué)與藥學(xué)院,山東 青島 266109;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,北京 100193;3.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,烏魯木齊 830099)

豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)屬于冠狀病毒科α冠狀病毒屬,單股正鏈RNA病毒,全長(zhǎng)約28 ku[1]。編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白(S、E、M、N)、16種非結(jié)構(gòu)蛋白(nsp1-nsp16)和1個(gè)輔助蛋白ORF3[2]。PEDV通過(guò)糞口傳播并在小腸絨毛細(xì)胞中感染和復(fù)制[3],引起新生仔豬急性腹瀉、嘔吐、脫水和發(fā)燒等癥狀[4]。自上世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來(lái),PEDV以極高的傳播速度迅速席卷全球,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[5]。2010年發(fā)現(xiàn)的PEDV變異株可引發(fā)新生仔豬100%的發(fā)病率及80%～100%的死亡率[6-7],并且極易與其他冠狀病毒(如豬傳染性胃腸炎病毒)混合感染[8],口服及注射疫苗效果甚微[9],因此,迫切需要開(kāi)發(fā)新藥物來(lái)抵御PEDV的傳播。

中藥在抗病毒方面具有良好的功效。大量研究證明中藥提取物可通過(guò)多種途徑抑制病毒感染。Tang等[10]發(fā)現(xiàn)紫蘇葉提取物通過(guò)滅活病毒粒子抑制SARS-CoV-2復(fù)制,與抗病毒藥瑞德西韋聯(lián)合使用表現(xiàn)加成增效作用。Cho等[11]發(fā)現(xiàn)淫羊藿水提取物在體內(nèi)體外均具有良好的抗PEDV作用。Cao等[12]證明油茶葉水提取物可通過(guò)抑制氧化應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡來(lái)抑制PEDV復(fù)制,油茶葉水提物在濃度≥500 μg/mL時(shí)可抑制PEDV的復(fù)制?？傊?中藥提取物具有良好的抗病毒功效,可通過(guò)多種途徑抑制病毒感染,因此在抗PEDV方面具有廣闊的研究前景。

澤漆(EuphorbiahelioscopiaL.)是大戟科一年生草本植物,廣泛分布于我國(guó)除新疆、西藏以外的地區(qū),有清熱、祛痰、利尿和消腫之效[13]。以澤漆為主要成分配伍而成的澤漆湯具有清熱解咳的功效,在我國(guó)被廣泛使用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),澤漆還具有抗腫瘤[14]、抗菌[15]、抗氧化[16]、殺蟲(chóng)[17]、抗炎等多種作用[18]。同時(shí),研究發(fā)現(xiàn)澤漆還具有抗病毒活性。周廣生[19]研究發(fā)現(xiàn)澤漆注射液具有抗新城疫病毒的作用,可顯著降低感染新城疫病毒的雞胚死亡率,抗病毒效果優(yōu)于金剛烷胺。另外,澤漆水煎劑具有體外抗單純皰疹病毒的作用[20],但是澤漆對(duì)于抗PEDV的作用尚未有相關(guān)研究,而且提取物使用的劑量越大在生產(chǎn)中投入的成本越高,在臨床上的生物安全性越難評(píng)估。而澤漆水提物價(jià)格低廉,細(xì)胞毒性相對(duì)較高,在抗病毒研究中使用的劑量更低。因此,本研究探究了不同濃度的澤漆提取物體外抑制PEDV的作用和對(duì)PEDV復(fù)制的影響,以期挖掘澤漆在抗PEDV方面的應(yīng)用潛力。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)毒株與細(xì)胞系

豬流行性腹瀉病毒(CV777株,GenBank AF353511)、非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero CCL-81)由本研究室保存,用含1%雙抗、10% FBS的高糖 DMEM 培養(yǎng)基,于37 ℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2 試驗(yàn)試劑

澤漆干燥全草由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)中獸醫(yī)藥創(chuàng)新中心提供。鼠源PEDV-N蛋白單克隆抗體購(gòu)于Medgene Labs公司;鼠源GAPDH單克隆抗體購(gòu)于武漢三鷹生物技術(shù)有限公司;山羊抗鼠/兔 IgG-HRP購(gòu)于艾比瑪特生物醫(yī)藥(上海)有限公司;反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green Realtime PCR Master Mix購(gòu)于南京諾唯贊生物科技股份有限公司;細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、ECL發(fā)光液購(gòu)于美國(guó)MCE公司;利巴韋林(Ribavirin,Rib)、4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1澤漆水提取物制備

準(zhǔn)確稱(chēng)量澤漆藥材20 g,粉碎后過(guò)60目篩,澤漆細(xì)粉與蒸餾水按照料液1∶9混合,浸泡30 min。加熱回流3次,每次2 h,濃縮為50 mL提取液(0.400 g/mL)。經(jīng)冷凍干燥,獲得5.283 g水提物凍干粉末。精確稱(chēng)量20 mg凍干粉末用10 mL蒸餾水溶解配置為2 000 μg/mL的母液,經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾后于-20 ℃保存。

1.3.2澤漆水提取物對(duì)細(xì)胞的毒性測(cè)定

Vero細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,密度為5×104個(gè)/mL。細(xì)胞置于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后加入不同濃度(125、250、500、1 000和2 000 μg/mL)的澤漆水提物,分別在12、24和36 h時(shí)添加CCK-8試劑,繼續(xù)孵育1 h后測(cè)定450 nm處的吸光度并計(jì)算各組細(xì)胞存活率,并依據(jù)GB/T 16886—5中細(xì)胞毒性的判定標(biāo)準(zhǔn)(細(xì)胞活力<空白組70%),判定澤漆水提物有無(wú)細(xì)胞毒性。

1.3.3RT-qPCR法檢測(cè)澤漆水提物對(duì)PEDV-NmRNA表達(dá)量的影響

Vero細(xì)胞接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板,密度為2.5×105個(gè)/mL。將不同濃度的澤漆水提物(62.5、125、250和500 μg/mL)與PEDV(MOI=0.01)在37 ℃下共同孵育2 h,棄去病毒藥物混合液,加入澤漆水提取物繼續(xù)孵育至24 h。使用Trizol試劑提取Vero細(xì)胞中的RNA,并用Nanodrop檢測(cè)其質(zhì)量濃度。使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,以cDNA為模板進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng),引物序列如表1所示。

表1 RT-qPCR引物序列Table 1 Primer sequence of RT-qPCR

反應(yīng)條件:2×Taq Pro Universal SYBER qPCR Master Mix 10 μL,上下游引物各0.4 μL,cDNA 2 μL,DEPC水補(bǔ)齊總體系為20 μL。反應(yīng)條件為 95 ℃預(yù)變性30 s,95 ℃持續(xù)變性10 s,60 ℃退火延伸 30 s,共40個(gè)循環(huán)。

1.3.4澤漆水提物對(duì)PEDV病毒滴度的影響

Vero細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,密度為5×104個(gè)/mL。藥物與病毒處理方法同1.3.3,24 h后收集細(xì)胞上清液。將細(xì)胞上清液依次10倍稀釋為10-1～10-88個(gè)梯度后加入96孔板內(nèi)(每孔100 μL),37 ℃孵育72 h后通過(guò)間接免疫熒光觀察PEDV感染情況,病毒滴度由Reed-Muench法計(jì)算得出。

1.3.5Western Blot檢測(cè)澤漆水提物對(duì)PEDV-N蛋白表達(dá)的影響

Vero細(xì)胞接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板,密度為2.5×105個(gè)/mL。藥物與病毒處理方法同1.3.3,細(xì)胞使用Western IP裂解液裂解30 min后于12 000 r/min離心15 min。上清液與Protein Loading Buffer混勻,在95 ℃金屬浴變性10 min后獲得蛋白樣品。蛋白質(zhì)用10% SDS-PAGE分離,將聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白濕轉(zhuǎn)于PVDF膜上,使用5% 脫脂牛奶在37 ℃下孵育1.5 h。TBST清洗3次后,分別與鼠源PEDV-N蛋白單克隆抗體(1∶1 000)、鼠源GAPDH單克隆抗體(1∶8 000)4 ℃過(guò)夜孵育。TBST清洗3次,再加入IgG-HRP(1∶5 000)常溫孵育1 h。使用ECL發(fā)光液檢測(cè)蛋白免疫印跡反應(yīng)并通過(guò)Image J軟件進(jìn)行灰度值分析。

1.3.6間接免疫熒光法檢測(cè)澤漆水提物對(duì)PEDV病毒感染的影響

Vero細(xì)胞接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板,密度為1.5×105個(gè)/mL。藥物與病毒處理方法同1.3.3,細(xì)胞于4%多聚甲醛溶液中固定15 min,PBS清洗3次。使用0.3% Triton X-100對(duì)細(xì)胞處理10 min,并于3%牛血清白蛋白溶液中常溫封閉1 h。細(xì)胞在2%明膠稀釋的1∶1 000的鼠源PEDV-N蛋白單克隆抗體中4 ℃孵育過(guò)夜,PBST清洗3次后與山羊抗鼠IgG-FITC在37 ℃孵育1 h。在PBST中洗滌3次后,使用DAPI染色5 min后于熒光顯微鏡下觀察。

1.3.7澤漆水提物預(yù)防給藥對(duì)PEDV-N表達(dá)的影響

將不同濃度的澤漆水提物(125、250和500 μg/mL)和陽(yáng)性藥物Ribavirin(80 μg/mL)在37 ℃條件下與Vero細(xì)胞共孵育2 h,棄掉藥液。Vero細(xì)胞接種PEDV(MOI=0.01)37 ℃孵育2 h,棄掉病毒液,補(bǔ)充病毒維持液37 ℃下孵育至24 h,收集蛋白進(jìn)行Western Blot檢測(cè)。

1.3.8澤漆水提物對(duì)PEDV復(fù)制周期各個(gè)階段PEDV-N表達(dá)的影響

1.3.8.1澤漆水提物對(duì)PEDV吸附階段PEDV-N表達(dá)的影響

將不同濃度的澤漆水提物(125、250和500 μg/mL)和陽(yáng)性藥物Ribavirin(80 μg/mL)分別與PEDV(MOI=0.01)混合后感染細(xì)胞,在4 ℃孵育1 h,棄掉病毒藥物混合液,補(bǔ)充病毒維持液37 ℃孵育24 h,收集蛋白進(jìn)行Western Blot檢測(cè)。

1.3.8.2澤漆水提物對(duì)PEDV入侵階段PEDV-N表達(dá)的影響

Vero細(xì)胞接種PEDV(MOI=0.01)在4 ℃孵育2 h,2 h后棄掉病毒液,預(yù)冷PBS清洗3次。Vero細(xì)胞與澤漆水提物、陽(yáng)性藥物Ribavirin(80 μg/mL)37 ℃孵育2 h,2 h后棄掉藥液,補(bǔ)充病毒維持液在37 ℃條件下孵育至24 h,收集蛋白進(jìn)行Western Blot檢測(cè)。

1.3.8.3澤漆水提物對(duì)PEDV復(fù)制增殖階段PEDV-N表達(dá)的影響

Vero細(xì)胞接種PEDV(MOI=0.01)在37 ℃孵育2 h,2 h后棄掉病毒液,PBS清洗3次。Vero細(xì)胞與澤漆水提物、陽(yáng)性藥物Ribavirin(80 μg/mL)在37 ℃條件下孵育至24 h,收集蛋白進(jìn)行Western Blot檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)方差”方式表示。使用Excel 2021、GraphPad Prism 8.0進(jìn)行繪圖及統(tǒng)計(jì)分析。通過(guò)One-way ANOVA分析顯著性差異,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。

2 結(jié)果與分析

2.1 澤漆水提取物對(duì)細(xì)胞毒性分析

如圖1所示,當(dāng)澤漆水提取物與Vero細(xì)胞共孵育12和24 h時(shí),濃度≤1 000 μg/mL,Vero細(xì)胞的存活率均大于85%,濃度為2 000 μg/mL會(huì)顯著降低Vero細(xì)胞的存活率(P<0.001);澤漆水提物與Vero細(xì)胞共孵育36 h時(shí),濃度≤500 μg/mL,Vero細(xì)胞的存活率>90%,濃度≥1 000 μg/mL會(huì)顯著降低Vero細(xì)胞的存活率(P<0.01)。結(jié)果表明,澤漆水提物的濃度≤500 μg/mL時(shí),無(wú)細(xì)胞毒性。

**和***分別代表與濃度為0 μg/mL的空白組相比差異顯著和極顯著(P<0.01,P<0.001)。** and *** represent significant differences and extremly significant differences compared to the blank group, respectively (P<0.01, P<0.001).圖1 澤漆水提物在12、24和36 h對(duì)細(xì)胞毒性的影響Fig.1 Cytotoxicity of aqueous extract from Euphorbia helioscopia L. to Vero at 12, 24 and 36 h

2.2 澤漆水提取物對(duì)PEDV-N mRNA轉(zhuǎn)錄水平及病毒滴度的影響

RT-qPCR檢測(cè)表明澤漆水提物對(duì)PEDV-NmRNA的轉(zhuǎn)錄具有顯著抑制作用(圖2(a))(P<0.001),當(dāng)澤漆水提物濃度為62.5 μg/mL時(shí),其抑制率達(dá)96.17%。病毒滴度檢測(cè)進(jìn)一步證明了澤漆水提物以劑量依賴的方式抑制PEDV感染(圖2(b)),當(dāng)澤漆水提物濃度為500 μg/mL時(shí),可將病毒滴度降低3～4個(gè)數(shù)量級(jí)。結(jié)果表明,澤漆水提取物以劑量依賴的方式抑制PEDV感染。

圖2 澤漆水提物對(duì)PEDV-N mRNA轉(zhuǎn)錄水平(a)及病毒滴度(b)的影響Fig.2 Effects of aqueous extract from Euphorbia helioscopia L. onPEDV-N mRNA transcription level (a) and virus titer (b)

2.3 澤漆水提取物在PEDV感染12、24和36 h時(shí)對(duì)PEDV-N表達(dá)的影響

蛋白免疫印跡(圖3)及間接免疫熒光(圖4)結(jié)果表明,在12、24和36 h時(shí),不同濃度的澤漆水提物均能顯著抑制PEDV-N蛋白的表達(dá)(P<0.05)。當(dāng)澤漆水提物濃度≤250 μg/mL時(shí),對(duì)PEDV-N蛋白的抑制隨時(shí)間的增加而降低。當(dāng)澤漆水提物濃度為500 μg/mL時(shí),36 h內(nèi)均能有效抑制PEDV-N蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明,澤漆水提物可長(zhǎng)效抑制PEDV感染。

(a)PEDV-N蛋白在12、24和36 h的表達(dá);(b)12、24和36 h PEDV-N蛋白定量分析。(a) PEDV-N protein expression at 12, 24 and 36 h; (b) Quantitative analysis of PEDV-N protein at 12, 24 and 36 h.圖3 Western Blot檢測(cè)不同濃度澤漆水提物對(duì)PEDV-N蛋白表達(dá)影響Fig.3 Effects of aqueous extract from Euphorbia helioscopia L. with different concentrations on PEDV-N protein expression were determined by Western Blot

圖4 間接免疫熒光檢測(cè)不同濃度澤漆水提物在12、24 和36 h對(duì)PEDV-N蛋白表達(dá)影響Fig.4 Effects of aqueous extract from Euphorbia helioscopia L. at 12, 24 and 36 h with different concentrations on PEDV-N protein expression were determined by IFA

2.4 澤漆水提取物預(yù)防給藥對(duì)PEDV-N表達(dá)的影響

由圖5可知,澤漆水提物預(yù)處理不能抑制PEDV-N蛋白的表達(dá)(P>0.05),因此澤漆水提物無(wú)預(yù)防PEDV感染的作用。

圖5 Western Blot檢測(cè)澤漆水提物預(yù)防給藥對(duì)PEDV-N蛋白表達(dá)影響(a)及其定量分析(b)Fig.5 Effects of preventive administration of aqueous extract from Euphorbia helioscopia L. on PEDV-N protein expression was determined by Western Blot (a) and its quantitative analysis (b)

2.5 澤漆水提取物在PEDV復(fù)制周期的各個(gè)階段對(duì)PEDV-N表達(dá)的影響

由圖6(a)可知,在病毒吸附階段,澤漆水提取物可顯著抑制PEDV-N蛋白表達(dá)(P<0.001),而陽(yáng)性藥物Ribavirin對(duì)PEDV-N蛋白的表達(dá)無(wú)顯著影響(P>0.05)。在病毒復(fù)制增殖階段,澤漆水提物和Ribavirin均可有效抑制PEDV-N蛋白表達(dá)(P<0.001)(圖6(c))。在病毒的入侵階段,澤漆水提物和Ribavirin對(duì) PEDV均無(wú)顯著抑制作用(P>0.05)(圖6(b))。因此,澤漆水提物影響PEDV生命周期中的吸附和復(fù)制增殖階段。

3 討論與結(jié)論

豬流行性腹瀉病毒引發(fā)的大量仔豬死亡已在全球形成了巨大的防疫危機(jī)和經(jīng)濟(jì)損失,然而目前仍不能很好地防御PEDV對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的侵襲。澤漆是我國(guó)的傳統(tǒng)草藥,其提取物中富含蘆丁、槲皮素等多種生物活性成分。蘆丁是雙黃連、連花清瘟等抗病毒中藥復(fù)方的主要成分[21],槲皮素可通過(guò)結(jié)合PEDV 3CLpro蛋白酶來(lái)抑制PEDV復(fù)制[22]?；跐善嶂刑J丁、槲皮素等化合物的抗病毒作用,推測(cè)澤漆水提物具有抗PEDV的潛力。本研究首先通過(guò)CCK-8法證明了澤漆水提物在濃度≤500 μg/mL時(shí)無(wú)細(xì)胞毒性,之后通過(guò)RT-qPCR和病毒滴度檢測(cè)證明了澤漆水提物以劑量依賴的方式顯著降低PEDV-NmRNA的轉(zhuǎn)錄水平,同時(shí)降低了病毒滴度。然后探究了澤漆水提物抗PEDV的時(shí)間依賴關(guān)系,證明澤漆水提物在12、24和36 h均能顯著抑制PEDV-N蛋白的表達(dá)。隨感染時(shí)間的延長(zhǎng),澤漆水提物抑制PEDV的能力略有減弱,在12 h內(nèi)抑制效果最佳。高濃度(500 μg/mL)的澤漆水提物在病毒感染36 h時(shí)仍能有效抑制PEDV-N蛋白的表達(dá),說(shuō)明澤漆水提物具有長(zhǎng)效抗PEDV感染的作用。上述研究結(jié)果表明澤漆水提物具備抗PEDV的能力。近年來(lái),傳統(tǒng)中藥在抗PEDV的活性被廣泛挖掘,王亭亭[23]的研究表明,黃芪多糖提取物在最高濃度400 μg/mL時(shí)能使PEDV病毒滴度下降1～2個(gè)數(shù)量級(jí),而澤漆水提物在濃度為250 μg/mL時(shí)即可使病毒滴度下降1～2個(gè)數(shù)量級(jí),在最高濃度500 μg/mL時(shí)令PEDV病毒滴度削減3～4個(gè)數(shù)量級(jí)。Liu等[24]研究表明,馬齒莧提取物在濃度為25 mg/mL時(shí)顯著降低PEDV 總RNA水平,抑制率達(dá)92.73%,而澤漆水提物在最低濃度為62.5 μg/mL時(shí)抑制率為96.17%,具有更高抑制活性。因此,澤漆水提物具有較好的抗病毒活性。

PEDV的生命周期是從病毒表面的S蛋白與細(xì)胞表面的受體結(jié)合開(kāi)始的[25-26]。病毒通過(guò)膜融合或受體細(xì)胞的吞噬進(jìn)入細(xì)胞并釋放其基因組,之后以“不連續(xù)轉(zhuǎn)錄”的機(jī)制參與PEDV基因組復(fù)制和結(jié)構(gòu)蛋白mRNA的合成,不連續(xù)基因組被翻譯為PEDV的4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白和1個(gè)輔助蛋白[27-28]。最后,PEDV在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)完成裝配,經(jīng)高爾基體釋放出胞外。因此,抗病毒藥物的開(kāi)發(fā)可聚焦于如何阻斷PEDV正常生命周期的進(jìn)程。已有大量研究表明中藥提取物可作用PEDV生命周期的一個(gè)或多個(gè)階段來(lái)降低病毒蛋白的表達(dá),抑制病毒感染。如Lee等[29]通過(guò)乙醇提取法獲取的銀杏外種皮多糖可通過(guò)抑制病毒吸附和入侵這2個(gè)途徑來(lái)抑制PEDV感染,Xu等[30]通過(guò)水提法獲取的蘆薈水提取物則可以通過(guò)抑制病毒復(fù)制這一途徑來(lái)抑制PEDV感染。本研究以RNA聚合酶抑制劑Ribavirin為陽(yáng)性對(duì)照藥物,探究澤漆水提物對(duì)PEDV生命周期的影響。Western Blot結(jié)果表明,在PEDV感染前,使用澤漆水提物預(yù)處理Vero細(xì)胞不能降低PEDV-N蛋白的表達(dá)量,說(shuō)明澤漆水提物無(wú)預(yù)防PEDV感染的作用。在PEDV生命周期的吸附和復(fù)制增殖階段,澤漆水提物顯著降低了PEDV-N蛋白的表達(dá)水平,這表明澤漆水提物是通過(guò)阻斷PEDV對(duì)Vero細(xì)胞的吸附和病毒自身基因組的復(fù)制增殖發(fā)揮了抗病毒效果,其在PEDV入侵階段無(wú)效。澤漆水提物抗PEDV的機(jī)制可能是阻斷了病毒粒子與Vero細(xì)胞表面某種受體的結(jié)合從而使病毒無(wú)法正常吸附到細(xì)胞表面。同時(shí),澤漆水提物對(duì)PEDV基因組復(fù)制也有一定抑制作用,但具體影響了哪種復(fù)制酶的活性或哪條通路尚未探究,這也成為后期研究的重點(diǎn)。澤漆水提物復(fù)雜的化合物組成為抗PEDV提供了多條途徑,有效增強(qiáng)了抗PEDV的效果。其復(fù)雜的化學(xué)組成也增加了提取有效成分的難度,澤漆水提物中抑制PEDV有效成分的分離將是接下來(lái)面臨的挑戰(zhàn)。

綜上所述,澤漆水提物對(duì)PEDV具有良好的體外抑制作用,主要通過(guò)抑制病毒吸附和復(fù)制增殖2個(gè)階段實(shí)現(xiàn)抗病毒作用,因而具備抗PEDV的潛在應(yīng)用價(jià)值。澤漆作為民間常見(jiàn)的中草藥,價(jià)格低廉,深入挖掘其抗病毒活性在實(shí)際生產(chǎn)生活中具有深遠(yuǎn)意義。本研究對(duì)澤漆水提物的抗病毒作用進(jìn)行了機(jī)理分析,為進(jìn)一步探究澤漆水提物抗病毒機(jī)制奠定了基礎(chǔ),但具體何種化學(xué)成分主導(dǎo)了抗病毒效果尚不明確,這將是今后研究的方向。