依托泊苷輸液在不同儲(chǔ)存條件下的穩(wěn)定性考察*

鈔艷惠,聶會(huì)娟,張瑞,荊自偉,康健,劉勝利,孫丙軍,杜書(shū)章

(1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部,鄭州 450052;2.沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥學(xué)院,沈陽(yáng) 110016)

依托泊苷注射液說(shuō)明書(shū)要求,本品最終稀釋濃度不應(yīng)超過(guò)0.25 mgmL-1,且稀釋以后應(yīng)立即使用,靜脈滴注時(shí)間不少于30 min,而對(duì)成品輸液的儲(chǔ)存條件及穩(wěn)定存放的時(shí)間并未明確提及。我院靜脈藥物配置中心對(duì)高危藥品實(shí)行集中調(diào)配、集中配送制度。從藥品調(diào)配結(jié)束到送至相應(yīng)病區(qū),約需要2 h。成品輸液送至病區(qū)后,受病情變化等各種因素的影響,患者有時(shí)并不能立即使用。1991年由Wilson首創(chuàng)的EPOCH方案(依托泊苷、長(zhǎng)春新堿和多柔比星,96 h持續(xù)靜脈輸注)[1],是美國(guó)國(guó)家綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(National Comprehensive Cancer Network,NCCN)《非霍奇金淋巴瘤臨床實(shí)踐指南》和我國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)《彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤診斷與治療指南》推薦的具有適應(yīng)證患者的一線治療方案。我院血液科已經(jīng)將EPOCH方案用于治療具有適應(yīng)證的患者。3種抗腫瘤藥,分別使用3個(gè)通路,同時(shí)持續(xù)泵入24 h,連用4 d,而24 h內(nèi)依托泊苷輸液的穩(wěn)定性變化如何尚未可知。不同廠家制備工藝不同,可能導(dǎo)致藥品稀釋后穩(wěn)定性的差異。目前,筆者尚未見(jiàn)關(guān)于依托泊苷注射液[齊魯制藥(海南)有限公司)]高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)法含量測(cè)定和稀釋后穩(wěn)定性的文獻(xiàn)報(bào)道。本研究設(shè)置成品輸液濃度為0.04、0.1、0.2、0.25、0.4 mgmL-1,設(shè)置儲(chǔ)存條件為室溫遮光、室溫不遮光和2～8 ℃冷藏,在各時(shí)間點(diǎn)觀察輸液外觀變化,并使用pH計(jì)、高效液相色譜儀測(cè)定pH值和含量,以考察依托泊苷成品輸液在不同儲(chǔ)存條件下的穩(wěn)定性,為臨床合理用藥提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 高效液相色譜儀,Waters ACQUITY Xevo UPLC-MS/MS(美國(guó) Waters 公司);Adventurer 電子分析天平(美國(guó)奧豪斯公司,感量:0.01 mg);LDZ5-2 型低速自動(dòng)平衡離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠);PHS-2C型精密酸度計(jì)(上海雷磁儀器廠);色譜柱:Silversil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)。

1.2試藥 依托泊苷注射液[齊魯制藥(海南)有限公司,規(guī)格:5 mL：0.1 g,批號(hào):BB1K1015)];依托泊苷對(duì)照品(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批號(hào):E121713,含量:98%);0.9%氯化鈉注射液(上海百特醫(yī)療用品有限公司,批號(hào):S2207135);乙腈(天津市康科德科技有限公司,批號(hào):220214,含量≥99.9%);去離子水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1依托泊苷含量測(cè)定方法的建立

2.1.1色譜條件 流動(dòng)相:乙腈-水(40：60);流速:1.0 mLmin-1;檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm;液相柱:C18反相硅膠色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),柱溫:40 ℃,進(jìn)樣量:50 μL。

2.1.2空白對(duì)照溶液的配制 于10 mL量瓶中加入無(wú)水乙醇200 μL超聲,500 μL聚山梨酯-80渦旋超聲,甲醇定容至刻度,搖勻,濾過(guò);精密量取續(xù)濾液1 mL,置于50 mL量瓶中,0.9% 氯化鈉注射液定容至刻度,搖勻,經(jīng)孔徑0.22 μm微孔濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液作為空白對(duì)照溶液。

2.1.3依托泊苷對(duì)照品溶液的配制 精密稱取依托泊苷對(duì)照品10.0 mg于10 mL量瓶中,按照“2.1.2節(jié)”下步驟操作,得依托泊苷對(duì)照品液。

2.1.4依托泊苷供試品溶液的配制 精密量取依托泊苷注射液0.5 mL于10 mL量瓶中,按照“2.1.2節(jié)”下步驟操作,得依托泊苷供試品溶液。

2.1.5專屬性的考察 按照“2.1.1節(jié)”下色譜條件,分別進(jìn)樣空白對(duì)照溶液、依托泊苷對(duì)照品溶液,記錄色譜圖。結(jié)果如圖1所示,依托泊苷峰型良好,空白對(duì)照溶液對(duì)依托泊苷的含量測(cè)定無(wú)影響。

1.依托泊苷。

2.1.6線性與范圍 制備2、5、10、20、50、100、200 μgmL-1的依托泊苷對(duì)照品溶液,進(jìn)樣50 μL,記錄峰面積。以峰面積(A)對(duì)濃度(C,μgmL-1)進(jìn)行線性回歸(圖2),得線性回歸方程為A=68 164C+72 315,R2=0.999 9。表明依托泊苷濃度在2～200 μgmL-1范圍內(nèi)線性良好。

圖2 依托泊苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.7儀器精密度實(shí)驗(yàn) 依托泊苷對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣50 μL,6次,記錄峰面積。計(jì)算得RSD=1.19%,表明依托泊苷HPLC含量測(cè)定方法的精密度良好。

2.1.8方法準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 平行制備6份依托泊苷對(duì)照品溶液,分別進(jìn)樣50 μL,記錄峰面積。計(jì)算得濃度RSD=0.67%,表明依托泊苷HPLC含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度良好。

2.1.9回收率考察 平行制備含有依托泊苷對(duì)照品溶液80%、100%和120%樣品9份,低、中、高濃度各3份,分別進(jìn)樣50 μL,計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1,低、中、高濃度的平均回收率在98%～102%,RSD≤2%,符合要求。

表1 依托泊苷含量測(cè)定方法的回收率

2.2依托泊苷輸液穩(wěn)定性的考察

2.2.1不同濃度依托泊苷輸液的配制 分別取依托泊苷注射液1.0、2.5、5.0、6.25、10.0 mL加入0.9%氯化鈉注射液輸液袋中,配制成終濃度分別為0.04、0.1、0.2、0.25、0.4 mgmL-1的依托泊苷成品輸液,并排出多余空氣,輕柔搖勻,避免產(chǎn)生氣泡。配制好的依托泊苷輸液分別于室溫遮光、室溫不遮光和2～8 ℃冷藏條件下,在0、1、2、4、6、8、10、12、24 h時(shí),肉眼觀察輸液外觀澄清度及顏色是否有變化,并拍照記錄;pH計(jì)測(cè)定pH值;使用建立的HPLC法測(cè)定含量。

2.2.2外觀 當(dāng)濃度≤0.25 mgmL-1時(shí),依托泊苷輸液在3種儲(chǔ)存條件下,24 h內(nèi)外觀均澄清透明,且無(wú)顏色、氣體、沉淀、渾濁產(chǎn)生;當(dāng)濃度為0.4 mgmL-1時(shí),依托泊苷輸液在3種儲(chǔ)存條件下,均出現(xiàn)不同程度的渾濁和沉淀。室溫遮光條件下12 h時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)渾濁;室溫不遮光條件下,6 h時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)渾濁;2～8 ℃冷藏條件下,4 h時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)渾濁;離心后觀察會(huì)更明顯。

2.2.3pH值 不同濃度的依托泊苷輸液分別于室溫遮光、室溫不遮光和2～8 ℃冷藏條件下放置,在各時(shí)間點(diǎn)時(shí),使用pH計(jì)測(cè)定pH值。結(jié)果見(jiàn)表2—4,各濃度依托泊苷輸液在3種儲(chǔ)存條件下24 h內(nèi)pH值穩(wěn)定。

表2 不同濃度依托泊苷輸液在室溫遮光條件下的pH值

表3 不同濃度依托泊苷輸液在室溫不遮光條件下的pH值

表4 不同濃度依托泊苷輸液在2～8 ℃冷藏條件下的pH值

2.2.4含量 不同濃度的依托泊苷輸液分別于室溫遮光、室溫不遮光和2～8 ℃冷藏條件下放置,在各時(shí)間點(diǎn)時(shí),取樣,10 000 r·min-1離心10 min后,用孔徑0.22 μm的微孔濾膜過(guò)濾,取續(xù)濾液按照“2.1.1節(jié)”下色譜條件進(jìn)樣,記錄峰面積。以0時(shí)刻時(shí)的含量為100%,計(jì)算不同時(shí)刻各濃度依托泊苷輸液的含量變化,結(jié)果見(jiàn)表5—7,當(dāng)濃度≤0.25 mgmL-1時(shí),依托泊苷輸液在3種儲(chǔ)存條件下24 h內(nèi)含量幾乎無(wú)變化,均在95%～105%。當(dāng)濃度為0.4 mgmL-1時(shí),依托泊苷輸液在室溫遮光、室溫不遮光和2～8 ℃條件下,24 h時(shí)含量分別下降至67.07%、61.00%和38.29%。

表5 不同濃度依托泊苷輸液在室溫遮光條件含量變化

表6 不同濃度依托泊苷輸液在室溫不遮光條件下含量變化

表7 不同濃度依托泊苷輸液在2～8 ℃冷藏條件下含量的變化

3 討論

3.1方法學(xué) 本研究建立了依托泊苷注射液的含量測(cè)定方法。研究過(guò)程中的藥物濃度經(jīng)稀釋均可在HPLC法的線性范圍濃度內(nèi),色譜條件的選擇主要是根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2020版以及閱讀文獻(xiàn)并經(jīng)后期優(yōu)化而來(lái),即流動(dòng)相:乙腈-水(40：60);流速:1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm;液相柱:C18反相硅膠色譜柱(4.6 mm×250 mm),柱溫:40 ℃,進(jìn)樣量:50 μL。在該條件下,依托泊苷可與溶劑峰分離,峰型良好,保留時(shí)間為5.1 min,HPLC含量測(cè)定方法的專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、加樣回收率均符合要求,在2～200 μgmL-1范圍內(nèi)線性良好。

3.2配伍穩(wěn)定性 依托泊苷注射液說(shuō)明書(shū)規(guī)定成品輸液濃度不得超過(guò)0.25 mgmL-1,而原研說(shuō)明書(shū)中規(guī)定的配伍濃度為0.2～0.4 mgmL-1,若超過(guò)0.4 mgmL-1將會(huì)產(chǎn)生析出物沉淀。結(jié)合臨床常用濃度,本研究設(shè)置了0.04、0.1、0.2、0.25和0.4 mgmL-1共5個(gè)濃度。考慮到臨床使用輸液時(shí)通常在室溫條件下進(jìn)行,且經(jīng)常詢問(wèn)輸液是否需要遮光,本研究設(shè)置了室溫遮光和室溫不遮光儲(chǔ)存條件。一般情況下,溫度越低,藥物降解速度越慢,成品輸液穩(wěn)定性越好。為了研究溫度對(duì)依托泊苷輸液穩(wěn)定性的影響,本研究設(shè)置了2～8 ℃冷藏的儲(chǔ)存條件。

有研究[2-6]考察了依托泊苷與其他藥物配伍在同一輸液袋中的穩(wěn)定性,結(jié)果表明,依托泊苷濃度不超過(guò)0.25 mg·mL-1的混合輸液室溫下24 h內(nèi)含量穩(wěn)定。但是使用的均是江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司提供的依托泊苷注射液。KLASEN等[7]的研究使用的是以色列梯瓦制藥工業(yè)有限公司提供的依托泊苷注射液,結(jié)果表明,當(dāng)稀釋溶劑為0.9%氯化鈉注射液,室溫下0.1和0.4 mg·mL-1的依托泊苷輸液24 h內(nèi)含量穩(wěn)定,0.6 mg·mL-1的依托泊苷輸液8 h內(nèi)含量穩(wěn)定。本研究使用的是依托泊苷注射液[齊魯制藥(海南有限公司)],結(jié)果表明,室溫下0.4 mg·mL-1的依托泊苷輸液24 h時(shí)含量降至約60%。出現(xiàn)這種結(jié)果可能是因?yàn)椴煌瑥S家的制劑,在制備過(guò)程中,添加的輔料、采用工藝不同。本研究的局限在于僅考察了依托泊苷輸液的化學(xué)穩(wěn)定性,配制的輸液24 h內(nèi)的微生物穩(wěn)定性如何還有待考察。

3.3研究?jī)r(jià)值 當(dāng)依托泊苷輸液的配伍濃度不超過(guò)0.25 mgmL-1時(shí),室溫遮光、室溫不遮光和2～8 ℃冷藏條件下,24 h內(nèi)外觀、pH值和含量均穩(wěn)定,可以不局限于說(shuō)明書(shū)規(guī)定的“稀釋后立即使用”。雖然靜脈用藥調(diào)配中心調(diào)配的輸液屬于微生物污染低風(fēng)險(xiǎn),但是有文獻(xiàn)報(bào)道[8-9],配制好的輸液瓶口無(wú)論是否經(jīng)過(guò)處理,暴露于病區(qū)治療室環(huán)境后,均會(huì)有不同程度的細(xì)菌污染,因此,建議不能立即使用的患者可以將配制好的輸液暫時(shí)存放在靜脈藥物配置中心的潔凈環(huán)境中,從而減少輸液污染的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于使用EPOCH方案化療的患者,建議每天更換一次輸液,以保證輸液的質(zhì)量。當(dāng)依托泊苷輸液的配伍濃度超過(guò)0.25 mgmL-1時(shí),依托泊苷的穩(wěn)定性不太好,容易析出沉淀,因此非必要不建議依托泊苷的配伍濃度超過(guò)0.25 mgmL-1。若使用時(shí)濃度必須超過(guò)0.25 mgmL-1,如某些需要限液的患者,也應(yīng)注意最大配伍濃度不要超過(guò)0.4 mgmL-1,且輸液配制后應(yīng)盡快使用。