蘋果中吡蟲啉殘留的檢測方法探索

楊璐羽，馬敏娟 *，楊永兵，陶向前，王 丹

(1.紅河州農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，云南 蒙自 661199；2.彌勒市農(nóng)業(yè)農(nóng)村和科學(xué)技術(shù)局，云南 彌勒 652300)

蘋果是一種營養(yǎng)價值高的常見水果，在種植蘋果期間，為了有效防治病蟲害，使用農(nóng)藥是不可避免的，其中吡蟲啉就是一種使用最為頻繁的殺蟲劑。然而由于我國果農(nóng)用藥技術(shù)水平參差不齊，部分果農(nóng)在使用吡蟲啉時可能會出現(xiàn)濫用的情況，使得最終流通到市場的蘋果吡蟲啉殘留超標(biāo)。目前檢測蘋果中吡蟲啉殘留應(yīng)用QuEChERS對蘋果基質(zhì)的前處理的研究相對較少。因此，本文基于國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23379-2009《水果、蔬菜及茶葉中吡蟲啉殘留的測定 高效液相色譜法》，應(yīng)用QuEChERS法與固相萃取法進行樣品前處理，以期簡化前處理與儀器分析過程，加快吡蟲啉殘留檢測速度。

1 材料與方法

1.1 實驗儀器與試劑 實驗儀器：超高效液相色譜儀、色譜柱、分液器、移液槍、離心機、振蕩器、容量瓶、氮吹儀等。

實驗試劑：吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品(≥98%，100 μg/mL-1)、乙腈、甲酸、乙酸銨、N-丙基乙二胺、純水、氯化鈉、無水硫酸鎂、氫氧化鈉等，所有試劑均選用色譜純。

1.2 實驗樣品概況 本實驗檢測的蘋果樣品均采購于xx市農(nóng)貿(mào)市場，購買蘋果樣品共10份，每份樣品均取25.0 g，并進行編號備用。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 標(biāo)準(zhǔn)母液取吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品1.0 mL，并將轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，以乙腈定容后搖勻，即得到了濃度為10 μg/mL的吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)母液。

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別取0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mL的吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)母液，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶，并以乙腈定容，搖勻后接得到了濃度分別為0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 μg/mL的吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 樣品前處理

1.4.1 提取 取適量蘋果，將其置于食品粉碎機中，打碎至勻漿；稱取25.0 g的蘋果樣品，并將其轉(zhuǎn)移至50 mL的離心管中；在離心管中加入20 mL的乙腈，并將其放置于震蕩機中，渦旋震蕩3 min；取出離心管后，在其中加入2 g的氯化鈉和3 g的無水硫酸鈉，再次放置于震蕩機中，渦旋震蕩2 min；震蕩結(jié)束后，將離心管轉(zhuǎn)移至離心機中，以4 000 r/min的速度進行離心，去上清液進行凈化。

1.4.2 固相萃取凈化 在離心管中取4 mL上清液放置于氮吹儀中，于40℃環(huán)境下完全吹干；在吹干后的樣品中再次加入2.5 mL乙腈進行復(fù)溶；使用2.5 mL的乙腈淋洗C18色譜柱，并將復(fù)溶后的樣品完全過柱；再次使用5.0 mL的純水進行淋洗；使用1.0 mL的乙腈進行洗脫；在洗脫后的樣品中加入1.0 mL的純水，進行渦旋振蕩30 s；混合均勻后使用0.45 μm的濾膜過濾，過濾后即得到待測樣品。

1.4.3 QuEChERS凈化 取離心管上清液10.0 mL，并在其中加入0.5 g的氯化鈉與1 g的無水硫酸鎂；將樣品渦旋振蕩30 s，之后靜置5 min；靜置后在樣品中取上清液2 mL，轉(zhuǎn)移至氮吹儀中，40℃濃縮至約0.5 mL；在濃縮后的樣品中加入乙腈，定容至1 mL，再次渦旋震蕩30 s；混合均勻后使用0.22 μm的濾膜過濾，過濾后即得到待測樣品。

1.5 超高效色譜儀檢測條件 本實驗進行檢測時，超高效色譜儀的檢測條件：色譜柱：ACQUITY UPLCTM BEH C18，50 mm×2.1 mm×1.7 μm；流速：0.30 mL/min；柱溫：35℃；進樣體積：1 μL；運行時間：5 min；流動相A：0.1%的甲酸與2 mmol/L的乙酸銨等體積混合溶液；流動相B：乙腈；洗脫梯度：等度洗脫。

2 結(jié)果與分析

2.1 吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)譜圖

空白譜圖(圖1)：

圖1 空白蘋果譜圖

本實驗采用超高效液相色譜儀結(jié)合紫外檢測器對標(biāo)準(zhǔn)樣品中的吡蟲啉進行檢測，檢測時紫外檢測器的波長設(shè)置為270 nm，檢測分析時間平均為4.9 min。最終獲得的檢測色譜圖(圖2)所示。與國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法相比較，本實驗方法的樣品檢測分析時間均<10 min，說明本實驗法減小了國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法中梯度洗脫的部分時間消耗。

圖2 吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)譜圖

2.2 吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)曲線 按照順序分別檢測0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 μg/mL的吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，超高效液相色譜儀的進樣量維持在1 μL，將吡蟲啉的 質(zhì)量濃度作為自變量，同時以檢測出的峰面積作為因變量，結(jié)合檢測數(shù)據(jù)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示：吡蟲啉濃度在0.05～1.00 μg/mL時，其線性方程式為Y=412 001.4X+1368.6，R2=0.999 8，說明本實驗獲得的吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好。

2.3 凈化方法 遵循1.4.1中的樣品基礎(chǔ)處理方法制備蘋果檢測樣品，并分別加入0.04 mg/kg的吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品，得到待測樣品A、B。在此之后，分別采用固相萃取法和QuEChERS法對待測樣品進行凈化，凈化后檢測樣品得出峰面積與信噪比，其結(jié)果(表1)所示。對比結(jié)果表明，兩種凈化方法中，固相萃取法凈化后的樣品信噪比檢測結(jié)果相對較大，說明這種方法的凈化效果相較于QuEChERS法更好，但與此同時QuEChERS法檢測出的吡蟲啉回收率更高。

表1 固相萃取法與QuEChERS法凈化效果比較

2.4 回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 在本研究中，我們使用了兩種不同的方法來測定蘋果中的吡蟲啉殘留量。其中一種是基于液相色譜法的方法，另一種則是基于氣相色譜法的方法。通過對這兩種方法進行比較和對比，我們可以得到它們的優(yōu)缺點以及適用范圍。定量限度回收率為兩個方法之間的差異性指標(biāo)之一，它反映了這兩個方法對于同一樣品的重復(fù)性和準(zhǔn)確性的表現(xiàn)?；厥兆V圖(圖3)：

在實驗過程中，我們發(fā)現(xiàn)兩種方法的回收率存在一定的差別。液體相色譜法的回收率相對較高，達到了>90%；而氣體相色譜法則較低一些，只有80%左右。按照1.4.1中對蘋果樣品進行基礎(chǔ)處理，并隨機選取3份蘋果樣品，在其中分別加入0.04、0.06、0.20 mg/kg的吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品，再按照1.4.3中的QuEChERS法對樣品進行凈化，凈化后檢測樣品的加標(biāo)回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，其結(jié)果(表2)所示。蘋果樣品中吡蟲啉的加標(biāo)回收率范圍為80.2%～91.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為3.8%～7.5%，符合我國國家標(biāo)準(zhǔn)中的相關(guān)要求(回收率在70%～120%內(nèi)，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差≤10%)，說明本實驗?zāi)軌蛴行z測出蘋果中的吡蟲啉殘留。

表2 蘋果樣品中吡蟲啉的回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.5 實際樣品檢測 采集于農(nóng)貿(mào)市場的10份蘋果樣品中均未檢測出吡蟲啉殘留，說明該農(nóng)貿(mào)市場的蘋果并不存在食品安全問題。

3 結(jié)論與展望

3.1 結(jié)論 本實驗基于國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23379-2009《水果、蔬菜及茶葉中吡蟲啉殘留的測定 高效液相色譜法》，應(yīng)用超高效色譜儀結(jié)合QuEChERS法建立出了一種檢測時間更短，檢測結(jié)果相對準(zhǔn)確的蘋果中吡蟲啉殘留檢測方法。與傳統(tǒng)方法相比較，本實驗提出的方法在樣品前處理過程中簡化了吡蟲啉殘留提取與凈化的過程，同時通過使用等度洗脫減少了超高效液相色譜儀洗脫的時間消耗，提升了檢測方法的靈敏度。檢測結(jié)果顯示，本實驗提出的方法能夠?qū)⑦料x啉殘留的檢測時間限制在10 min內(nèi)，其標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.05～1.00 μg/mL時呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)>0.999，加標(biāo)回收率范圍為80.2%～91.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為3.8%～7.5%。本實驗方法具有靈敏度高、操作便捷、檢測結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好等多項優(yōu)勢，適用于檢測蘋果中的吡蟲啉殘留，為蘋果食品安全質(zhì)量維護提供一定的技術(shù)支持，具有一定的現(xiàn)實意義。

3.2 展望 提高農(nóng)產(chǎn)品食品質(zhì)量，推進優(yōu)質(zhì)食品工程是我國農(nóng)業(yè)發(fā)展的重要方向。近年來，我國消費者對果蔬的品質(zhì)、安全性及其對消費者健康作用的關(guān)注日益提升，蘋果作為最常見的水果之一，其食品安全的維護至關(guān)重要。本研究通過對蘋果中吡蟲啉殘留的測定方法展開研究，探討QuEChERS法對吡蟲啉殘留檢測的影響，以期為開展農(nóng)產(chǎn)品中吡蟲啉殘留檢測方法優(yōu)化提供研究新思路。