淺析農(nóng)藥殘留檢測過程中提高數(shù)據(jù)準確度的方法探析

●曹志玲（灤平縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 河北 承德 068250）

《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》（NY/T 761—2008）方法標準是利用氣相色譜法來測定蔬菜和水果中農(nóng)藥殘留，分為試樣制備、提取凈化、測定等步驟，檢測者應(yīng)在檢測過程的每一個環(huán)節(jié)都掌握方法要領(lǐng)，注重細節(jié)處理，才能做到數(shù)據(jù)的準確可靠[1]。

1 原理

1.1 有機磷類農(nóng)藥殘留檢測原理

試樣中有機磷類農(nóng)藥殘留用乙腈提取，提取溶液經(jīng)過過濾、濃縮后，用丙酮定容，注入氣相色譜儀，農(nóng)藥組分經(jīng)毛細管柱分離，用火焰廣度檢測器（FPD 磷濾光片）檢測。保留時間定性、外標法定量。

1.2 有機氯類、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留檢測原理

試樣中有機氯、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留用乙腈提取，提取液經(jīng)過過濾、濃縮后，采用固相萃取柱分離，凈化，淋洗液經(jīng)濃縮后，被注入氣相色譜，農(nóng)藥組分經(jīng)毛細管柱分離，用電子捕獲檢測器（ECD）檢測。保留時間定性，外標法定量。

2 試劑與材料

按照NY/T 761—2008 標準，在檢測有機磷和有機氯及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留時，要使用GB/T 6682 中規(guī)定的至少二級的水，乙腈、丙酮、正己烷都應(yīng)選用色譜純。在使用試劑前，檢測人員應(yīng)對乙腈、丙酮、正己烷等試劑做有效性驗證。通過上機檢測，確認純度級別能夠滿足實驗要求，對檢測物質(zhì)的成分沒有干擾的試劑才能用于檢測實驗，提高檢測數(shù)據(jù)的準確度。

在實驗中，還要用到氯化鈉。使用前要將氯化鈉在干燥箱中140℃烘烤4 h，才能起到良好的鹽析和分層作用，從而確保實驗數(shù)據(jù)的準確度。

3 農(nóng)藥標準溶液的配制

按照NY/T 761—2008 標準，檢測員需要配制低濃度（一般為0.05～0.10 mg/L）的農(nóng)藥混合標準溶液，配制方法如下：

將1 mL 100 mg/L 的農(nóng)藥標準品全部轉(zhuǎn)移液至10 mL 容量瓶中，用丙酮或正己烷定容，得到10 mg/L 單一標準儲備液。每種10 mg/L 單一標準儲備液各1 mL，轉(zhuǎn)移至同一10 mL 容量瓶中，用丙酮或正己烷定容，得到1 mg/L 混合標準中間液，再將混合標準中間液按照實驗需要逐級稀釋，配制成實驗所需的上機標準混合工作液[2]。

在配制標準混合工作液時，檢測者要根據(jù)各農(nóng)藥在儀器上產(chǎn)生的響應(yīng)值，按照NY/T761—2008 標準要求，對不同的農(nóng)藥進行分組，配制成不同組分的混合標準上機工作液，這樣能夠避免響應(yīng)值接近的農(nóng)藥組分在同一組而無法區(qū)分，從而確保檢測數(shù)據(jù)的準確度。

在實驗操作中，對于辣椒、韭菜等一些基質(zhì)干擾比較強的蔬菜，檢測者應(yīng)配制基質(zhì)標，使用基質(zhì)標對待測物質(zhì)進行標量，這樣可以排除試樣基質(zhì)組分對待測組分的干擾，盡可能提高檢測結(jié)果的準確度。配制基質(zhì)標的方法如下：

移取1 mL 1 mg/L 混合標準儲備液至10 mL容量瓶中，用待測物質(zhì)空白溶液定容，得到0.1 mg/L 混合標準工作液，移入自動進樣瓶中，上機檢測，簡稱基質(zhì)標，可根據(jù)實際操作的需要配制不同濃度的基質(zhì)標。

4 試樣制備

用于農(nóng)藥殘留檢測的試樣應(yīng)是新鮮植物性農(nóng)產(chǎn)品樣品，應(yīng)按照NY/T 761—2008 標準方法制備，具體方法如下：

在采樣地點依據(jù)地形和樣品批次量的多少分別采用對角線采樣法、棋盤采樣法、蛇形（S）采樣法和梅花點采樣法等常用采樣法選取不少于3 kg 的整顆樣品，這些方法可以確保采取的樣品具有代表性，確保檢測數(shù)據(jù)的準確度。

將采取的樣品去除根及腐爛萎蔫部分，保留可食部分，將樣品切成小塊后采用四分法縮分，一般不少于1 kg。四分法縮分時，要保證充分混勻，取縮分后的樣品放入勻漿機勻漿，制成待測樣，按每份不少于100 g 分裝入潔凈的容器，密封并標識，待測。處理完每份樣品后要對處理器具進行清洗，防止樣品間的互相干擾。

制備好的待測樣品應(yīng)分為待檢樣和留樣，放置于-20～16℃的冰柜中保存，保存環(huán)境應(yīng)安裝監(jiān)控設(shè)備，防止樣品腐爛變質(zhì)而影響檢測數(shù)據(jù)。

5 提取

用天平稱取25 g 樣品置于勻漿杯中，加入50 mL 乙腈，在勻漿機中高速勻漿2min 后用濾紙過濾到裝有5～7 g 氯化鈉的100 mL 具塞量筒中。天平開機自檢完成并穩(wěn)定后才能開始稱樣。在稱樣時，為了保證樣品的均勻一致性，要將容器內(nèi)的樣品攪拌均勻后稱取，將樣品置于勻漿杯的底部，不沾上口，不得外灑。氯化鈉的量要合適，含水量大的試樣氯化鈉用量較大。勻漿機在使用前要用丙酮和蒸餾水依次清洗，勻漿時要保證勻漿的速率和時間，轉(zhuǎn)速以15 000 r/min 為宜，使樣品和乙腈充分混勻，注意控制刀頭探入液體的深度，既要做到充分勻漿，又不能使液體濺出。勻漿后要用自來水、丙酮、蒸餾水依次清洗刀頭，避免污染下一樣品。

待濾液收集40～50 mL 后，蓋上瓶塞，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分離。震蕩時要保證一批樣品的震蕩幅度和頻率的一致性，震蕩后具塞量筒底部要有少量氯化鈉存留，確保鹽析充分。靜置時間要充足，保證足夠的提取時間，使乙腈相和水相完全分離，確保提取完全，保證檢測數(shù)據(jù)的準確度。

在提取過程中，有些試樣因含脂肪、色素、糖、果膠等物質(zhì)較多，常常發(fā)生乳化現(xiàn)象，有的甚至變成糊狀，影響檢測結(jié)果，往往造成檢測數(shù)值偏低。因此，要防止和處理好樣液乳化，若發(fā)生乳化，需加水或離心處理。

6 凈化

6.1 有機磷類農(nóng)藥殘留檢測凈化過程

從具塞量筒中用移液管吸取10 mL 上層乙腈溶液，置于150 mL 燒杯中，將燒杯置于80℃水浴鍋中用氮氣吹至近干，加入2 mL 丙酮，蓋上鋁箔，備用。將備用液安全轉(zhuǎn)移至15 mL 刻度離心管中，再用約3 mL 的丙酮分3 次沖洗燒杯，并將液體全部轉(zhuǎn)移至離心管中，最后用丙酮定容至5 mL。渦旋混勻，轉(zhuǎn)移至兩個2 mL 進樣瓶中，待上機檢測。若定容后的樣品溶液過于混濁，要用0.2 μm 濾膜過濾后再進行測定。

6.2 有機氯及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留檢測凈化過程

從具塞量筒中用移液管吸取10 mL 上層乙腈溶液，置于150 mL 燒杯中，將燒杯置于80℃水浴鍋中用氮氣吹至近干，加入2 mL 正己烷，蓋上鋁箔，待凈化。

按1∶9 的比例配制丙酮、正己烷混合液，將弗羅里矽柱依次用5 mL 混合液、5 mL 正己烷預(yù)淋洗，條件化。當溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即倒入上述待凈化液，用15 mL 刻度離心管接收洗脫液，再用5 mL 混合液沖洗燒杯后淋洗弗羅里矽柱，并重復(fù)淋洗一次。將盛有淋洗液的刻度離心管置于氮吹儀上，在50℃條件下，氮吹至少5 mL，用正己烷定容至5 mL。渦旋混勻，轉(zhuǎn)移至兩個2 mL 進樣瓶中，待上機檢測[3]。

6.3 提取過程需要注意的事項

用移液管移取上層乙腈溶液時，要先潤洗移液管2～3 次。氮吹時，氣針距離液面的高度在1.5 cm 左右為宜，要控制氮氣氣流的流量，切記氣流過大。同時控制氣針的高度和氣流的流量，保持液面微微抖動為宜，切記液體濺出，造成液體損耗。某些農(nóng)藥組分若完全吹干會導(dǎo)致回收率偏高或過低，因此氮吹一定要做到近干即可，吹至燒杯內(nèi)保留一定液體或底部濕潤為宜。氮吹完畢要立即加入丙酮或正己烷復(fù)溶，并蓋上鋁箔防止揮發(fā)。

6.4 凈化過程需注意的事項

在有機氯、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留檢測實驗固相萃取時，要選用適宜的弗羅里矽柱，預(yù)淋洗液要棄去。預(yù)淋洗和淋洗時要控制柱內(nèi)的液面，既要保證柱床不干，又要貼近柱床。添加淋洗液時要做到平穩(wěn)，不外漏、不飛濺、不外溢，避免液體的損耗影響檢測結(jié)果。要控制淋洗速度，不能過快或過慢，影響萃取效率。淋洗到最后，當液面接近篩板時，用吸耳球擠壓，收集全部淋洗液，但不要過度。

7 上機檢測

7.1 有機磷類農(nóng)藥殘留用FPD 檢測器進行測定

按照NY/T 761—2008 標準要求，色譜柱選用長度30 m，內(nèi)徑0.25 mm 的Rtx-opp 柱，設(shè)定進樣口溫度220℃，檢測器溫度250℃，柱溫：初始溫度150℃，保持2 min[4]。升溫程序：以8℃/min升到250℃。載氣為純度≥99.999%的氮氣，流速10 mL/min；助燃器為純度≥99.999%的氫氣，流速70 mL/min；助燃器為空氣，流速100 mL/min。進樣方式為不分流進樣。自動進樣器分別吸取1 μL 的標準混合溶液和凈化后的待上機樣品溶液注入色譜儀中，以保留時間定性，以樣品溶液峰面積與標準溶液峰面積比較定量。

7.2 有機氯及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留用ECD 檢測器進行檢測

按照NY/T 761—2008 標準要求，色譜柱選用長度30 m，內(nèi)徑0.25 mm 的Rtx-CLP 柱，設(shè)定進樣口溫度200℃，檢測器溫度320℃，柱溫：初始溫度150℃，保持2 min。升溫程序：以6℃/min升到270℃。載氣為純度≥99.999%的氮氣，流速1 mL/min；輔助氣為純度≥99.999%的氮氣，流速60 mL/min。進樣方式為分流進樣，分流比為10∶1。自動進樣器分別吸取1.0 μL 的標準混合溶液和凈化后的待上機樣品溶液注入色譜儀中，以保留時間定性，以樣品溶液峰面積與標準溶液峰面積比較定量。

7.3 儀器性能對檢測結(jié)果的影響

在上機檢測過程中，儀器性能對檢測結(jié)果有極大地影響，首先氣相色譜儀的襯管對定量結(jié)果有直接影響，要及時清潔更換；其次新?lián)Q或長期不用的色譜柱在使用前應(yīng)進行充分的老化，要按照程序升溫過程對儀器進行升溫，待儀器穩(wěn)定后再進行樣品的測定，儀器的穩(wěn)定性可通過測定標準溶液來考察。

8 結(jié)果計算

按照NY/T 761—2008 標準采用外標法定量時，采用單點定量要使用與樣品中所含農(nóng)藥殘留相近濃度的標準溶液進行定量，數(shù)據(jù)才會準確。在對樣品濃度的峰面積進行計算時，要合理選取積分基線，充分利用軟件的數(shù)據(jù)比較功能。部分有機磷類農(nóng)藥如氧樂果等基質(zhì)效應(yīng)較大，選用基質(zhì)標溶液進行定量可以有效去除基質(zhì)效應(yīng)，極大提高檢測數(shù)據(jù)的準確度。