小兒原發(fā)性腎病綜合征患兒血漿蛋白Z、凝血因子Ⅷ活性的檢驗(yàn)研究＊

李曉蕾 聶曼杰

鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院河南省兒童醫(yī)院鄭州兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科(河南 鄭州 450000)

原發(fā)性腎病綜合征也可稱為不明病因的腎病綜合癥，以蛋白尿?yàn)橹饕Y狀，病人出現(xiàn)水腫的表現(xiàn)。該病由一系列相似但有不同病因和病理變化的臨床綜合征導(dǎo)致，低蛋白血癥在此類病人中常見，部分患兒有細(xì)菌感染、腎臟損害、蛋白和代謝紊亂[1]。研究表明，大約20.36%的慢性腎臟病患兒有腎病綜合征[2]。腎病綜合征相關(guān)機(jī)制尚未完全明確，截止目前研究中關(guān)于其發(fā)病原因有多種討論，諸多經(jīng)驗(yàn)證實(shí)，該病的發(fā)生與免疫學(xué)、環(huán)境、藥理學(xué)和遺傳因素有關(guān)[3]。大多數(shù)原發(fā)性腎病綜合征患兒的臨床表現(xiàn)往往與凝血功能障礙有關(guān)，檢驗(yàn)指標(biāo)可反映高凝表現(xiàn)。此狀態(tài)下患兒靜脈血栓形成風(fēng)險(xiǎn)達(dá)到提高，治療難度隨之提升，且預(yù)后不佳。目前的治療重點(diǎn)是控制休息、活動(dòng)和飲食，以及使用糖皮質(zhì)激素和細(xì)胞毒藥物。臨床治療的重點(diǎn)是利尿和小眾，減少尿液中的蛋白質(zhì)，控制血壓并調(diào)節(jié)血脂水平。近年來(lái)新型療法有所普及。靶向治療、免疫治療備受關(guān)注。并且如果通過(guò)積極的治療，原發(fā)性腎病綜合征患兒的預(yù)后可以得到良好的保障，因此，盡早診斷，早期治療尤其重要。本研究選取了我院收治的40名原發(fā)性腎病綜合征患兒，將對(duì)比不同健康狀態(tài)兒童的檢驗(yàn)指標(biāo)差異。結(jié)果顯示如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2020年10月至2021年10月我院收治的40例原發(fā)性腎病綜合征患兒為研究組。保持均衡性抽取同一時(shí)間段內(nèi)的40名健康兒童(對(duì)照組)，均為健康體檢者。研究組包括25名男童和15名女童，平均年齡為(6.5±3.5)歲(范圍3-10歲)，平均體重為(28.75±14.25)公斤(14.5～43公斤)。有20例處于急性期，20例處于恢復(fù)期。對(duì)照組由23名男童和17名女童組成，平均年齡為(7±4)歲(范圍為3-11歲)，兩組在上述一般數(shù)據(jù)上沒有顯著差異(P＞0.05)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：研究組納入患兒符合相應(yīng)疾病診斷要求。3至12歲的初次發(fā)病兒童。家屬書面簽署知情同意書者。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在重大器官疾病、障礙和功能異常者?；加芯窦膊〉膬和＠^發(fā)性腎病綜合征。合并急性傳染病。有遺傳性疾病家族史。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《腎臟病學(xué)》[4]中小兒原發(fā)性腎病綜合征的主要標(biāo)準(zhǔn)：①檢測(cè)到血漿白蛋白低于30g/L；②檢測(cè)到大量的尿蛋白(+++)，7天后24小時(shí)尿蛋白定量測(cè)定值，三次均超過(guò)50mg/L。③存在各種等級(jí)的水腫情況；④血漿膽固醇大于5.7mmol/L。在上述標(biāo)準(zhǔn)中，①和②是診斷的必要條件。

1.3 方法檢測(cè)前一天通知兒童及其親屬，將在第2天早上抽血，保持空腹。采集全部受檢兒童的外周靜脈血，樣本量為3mL，將其與枸櫞酸鈉混合(9:1)?？鼓幚聿⒃谑覝叵麓龣z，注意在60min內(nèi)萬(wàn)成檢驗(yàn)。將待檢驗(yàn)標(biāo)本通過(guò)國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司生產(chǎn)儀器離心分離血漿(型號(hào)為AvantiJXN-30/26，國(guó)械備20150131)處理。離心參數(shù)設(shè)置為半徑15cm和3000R/min轉(zhuǎn)速。血液樣本離心20分鐘，并在低溫下儲(chǔ)存，等待檢測(cè)。在這項(xiàng)研究中，血漿蛋白Z和凝血因子Ⅷ活性進(jìn)行檢查，方法為酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定的。血漿蛋白Z測(cè)定通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法實(shí)現(xiàn)，試劑盒由上海恪敏生物技術(shù)有限公司提供。凝血因子Ⅷ活性測(cè)定方式同樣為該方法，試劑盒由上海盈公生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。此外，所有具體的檢測(cè)程序都必須按照使用說(shuō)明進(jìn)行，精準(zhǔn)記錄結(jié)果并核對(duì)，確保無(wú)誤后存檔并分析。

1.4 觀察指標(biāo)對(duì)研究組和對(duì)照組兒童的血漿蛋白Z和凝血因子Ⅷ水平進(jìn)行了分析，其中研究組兒童的數(shù)據(jù)為急性期，記錄研究組急性期和恢復(fù)期兒童體內(nèi)的血漿蛋白Z和凝血因子Ⅷ水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用于分析的統(tǒng)計(jì)軟件是SPSS20.0。計(jì)量數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)，以(±s)表示，P＜0.05表示組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組之間血漿蛋白Z和凝血因子Ⅷ的比較統(tǒng)計(jì)顯示，研究組的血漿蛋白Z指數(shù)明顯低于對(duì)照組，而凝血因子Ⅷ指數(shù)明顯高于對(duì)照組，兩組指數(shù)之間有顯著差異(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組血漿蛋白Z和凝血因子Ⅷ的活性檢驗(yàn)情況(n)

2.2 研究組患兒在急性期和恢復(fù)期的血漿蛋白Z和凝血因子Ⅷ的比較統(tǒng)計(jì)顯示，研究組患兒血漿蛋白Z水平在急性期明顯低于恢復(fù)期，凝血因子Ⅷ水平在急性期明顯高于恢復(fù)期，在不同的疾病階段點(diǎn)，血漿蛋白Z和凝血因子Ⅷ指數(shù)之間的差異顯著(P＜0.05)，見表2。

表2 研究組不同疾病階段血漿蛋白Z和凝血因子Ⅷ的活性檢驗(yàn)情況(n)

3 討 論

腎病綜合征包括三種類型，屬于腎臟系統(tǒng)、器官的多發(fā)病。遺傳、繼發(fā)、原發(fā)是該病的三種類型，小兒以最后一種多見。它主要發(fā)生在免疫系統(tǒng)衰弱、高血壓、高脂血癥、高血糖或不規(guī)則用藥的病人身上。原發(fā)性腎病綜合征是一種原發(fā)性腎小球疾病，原發(fā)性腎病綜合征是兒童腎臟疾病的一種類型，主要是由不同病理類型的小病變組成的臨床綜合征群，伴有腎小球基底膜的通透性增加和典型的臨床表現(xiàn)，如不同程度的水腫。同時(shí)，病人以低蛋白血癥為典型特點(diǎn)，伴隨蛋白尿、高脂血癥。根據(jù)相關(guān)研究，此類疾病兒童血液可能處于高凝狀態(tài)分析其原因可總結(jié)為主要三點(diǎn)，其一為低白蛋白血癥表現(xiàn)造成的刺激，代償性肝臟在作用下促進(jìn)凝血因子合成。同時(shí)，在合成蛋白刺激下加速纖維蛋白原合成，濾過(guò)后的檢驗(yàn)指標(biāo)相對(duì)分子量在腎小球膜通過(guò)過(guò)程中存在一定困難，不會(huì)因尿蛋白而丟失[5]。(2)患兒抗凝物質(zhì)愛好能量、水平發(fā)生變化，血漿濃度下降，故檢驗(yàn)結(jié)果發(fā)生變化。(3)隨著血小板粘附和血小板數(shù)量的提升，對(duì)血栓素A2的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)產(chǎn)生激活作用，提高血小板中鈣離子濃度，加劇激動(dòng)劑聚集反應(yīng)。

通常來(lái)說(shuō)，健康狀態(tài)西的腎小球?yàn)V過(guò)膜存在電荷屏障，能夠?yàn)V過(guò)一定分子，故正常情況下尿液中小分子蛋白質(zhì)檢驗(yàn)結(jié)果較低。腎小球的生理和病理變化增加了原尿中的蛋白質(zhì)含量，如果近端腎小管中的蛋白質(zhì)吸收量遠(yuǎn)小于尿液中的原蛋白量，往往會(huì)出現(xiàn)大量的蛋白尿。尿液中白蛋白的大量流失刺激了腎小管降解的增加和肝臟對(duì)白蛋白的代償性合成，但當(dāng)白蛋白的流失和降解大大超過(guò)肝臟合成的增加時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)低白蛋白血癥[6]。此外，患兒大量白蛋白，這一條件下肝臟代償性合成提高，可能導(dǎo)致血清中低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白和脂蛋白A濃度增加，出現(xiàn)高膽固醇(甘油三酯)血癥。糖皮質(zhì)激素治療是臨床治療的基石，是非常有效的。然而，小兒生理、心理的特殊性決定其自制力、自我管理有限。當(dāng)病人接受了不適當(dāng)?shù)乃幬镏委?，或有感染而沒有被父母及時(shí)發(fā)現(xiàn)和糾正時(shí)，疾病很可能會(huì)復(fù)發(fā)。小兒原發(fā)性腎病綜合征復(fù)發(fā)后，對(duì)糖皮質(zhì)激素的敏感性逐漸降低，使治療更加困難。因此，必須加強(qiáng)對(duì)患兒病情的診斷，同時(shí)監(jiān)測(cè)患兒的病情變化，及時(shí)有效地預(yù)防小兒原發(fā)性腎病綜合征的發(fā)生或復(fù)發(fā)。

本研究以健康兒童為對(duì)照，調(diào)查兒童原發(fā)性腎病綜合征的檢驗(yàn)指標(biāo)，分析指標(biāo)變化的情況。結(jié)果顯示，研究組的凝血因子Ⅷ活性明顯高于對(duì)照組，血漿蛋白Z水平明顯低于對(duì)照組(P＜0.01)，說(shuō)明原發(fā)性腎病綜合征患兒檢驗(yàn)指標(biāo)發(fā)生變化，其中的血漿蛋白Z水平相較于正常健康水平較低，且凝血因子Ⅷ活性也出現(xiàn)改變。本研究認(rèn)為，血漿蛋白Z水平和凝血因子Ⅷ活性檢測(cè)可以有效預(yù)測(cè)兒童原發(fā)性腎病綜合征的發(fā)生。在一項(xiàng)相關(guān)的研究中，黃付甲[7]等人發(fā)現(xiàn)，作為一種鏈糖蛋白，血漿蛋白Z對(duì)維生素K有依賴性，是人類重要的凝血因子，主要在肝臟中合成。在凝血過(guò)程中，它可以介導(dǎo)凝血酶與內(nèi)皮細(xì)胞表面的結(jié)合，從而促進(jìn)血液凝固，起到抗凝血作用。它具有明顯的抗凝血特性，在檢測(cè)時(shí)顯示出較大的個(gè)體差異，通常在1.4至2.9pg/ml之間，在原發(fā)性腎病綜合征的兒童中，血漿中的Z蛋白水平往往低于正常水平。凝血因子Ⅷ是臨床診斷原發(fā)性腎病綜合征時(shí)比較常用的凝血指數(shù)(coagulationindex)。機(jī)體血管出血時(shí)，該因子被激活，并在凝血過(guò)程中起到作用。在這個(gè)過(guò)程中，它粘附在血小板上以填補(bǔ)血管中的泄漏，從而阻止出血，是一種蛋白質(zhì)成分。在正常血漿中，凝血因子是低分子量、高分子量和100至200萬(wàn)分子量的糖蛋白，正常血漿中的糖蛋白是低分子量、高分子量和100至200萬(wàn)分子量的糖蛋白，其中凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原為高分子量，低分子量有凝血?jiǎng)┗钚訹8]。原發(fā)性腎病綜合征病人凝血功能發(fā)生變化，患兒該功能受損導(dǎo)致血壓高度凝集。在低蛋白血癥的發(fā)展過(guò)程中，肝臟中的代償性蛋白質(zhì)合成往往增加。這一條件下凝血因子合成被影響，且纖維蛋白生成被刺激。同時(shí)，纖維蛋白溶解酶往往大量分泌，本病患兒的血漿濃度降低，導(dǎo)致纖維蛋白溶解能力下降，Ⅷ的腎小球?yàn)V過(guò)受損，凝血因子的腎小球?yàn)V過(guò)屏障異常。然而，Ⅷ仍然不容易超過(guò)纖維蛋白凝血因子的損失，而且凝血酶和凝血酶原S等因子的合成率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于損失率，繼而檢驗(yàn)血漿中含量和濃度所有降低，這與凝血因子滅活功能受損有關(guān)，引發(fā)了高凝狀態(tài)[9]。因此，凝血因子Ⅷ的活性與疾病發(fā)發(fā)生和進(jìn)展存在密不可分的關(guān)系，在患兒中表現(xiàn)為明顯改變的高凝狀態(tài)。該研究還發(fā)現(xiàn)，凝血因子Ⅷ活性的恢復(fù)期指數(shù)明顯低于急性期，血漿蛋白Z水平明顯高于急性期(P＜0.01)，說(shuō)明隨著疾病進(jìn)程的發(fā)展，患兒的血液檢驗(yàn)指標(biāo)的變化在病程中差異明顯，該類指標(biāo)檢測(cè)能夠分析疾病狀態(tài)、進(jìn)展和嚴(yán)重程度，對(duì)于疾病判定和預(yù)后均有意義。當(dāng)然，本研究還存在樣本量小的不足，可能導(dǎo)致研究結(jié)果出現(xiàn)誤差。在未來(lái)的研究中，期待大規(guī)模研究完善科學(xué)性和準(zhǔn)確性。

綜上所述，在原發(fā)性腎病綜合征患兒中，血漿蛋白Z明顯降低，凝血因子Ⅷ活性明顯升高，兩種檢驗(yàn)指標(biāo)存在一定負(fù)相關(guān)性。血漿蛋白Z和凝血因子Ⅷ水平的測(cè)定具有重要的臨床價(jià)值，在預(yù)防和治療兒童原發(fā)性腎病綜合征方面具有重要的研究?jī)r(jià)值。