炮制方法對(duì)黃芩中黃芩苷及黃芩素含量的影響

王昀,湯倩,齊丹

黃芩(拉丁學(xué)名：ScutellariabaicalensisGeorgi)是多年生草本植物,唇形科黃芩屬,以根入藥[1]。黃芩為一味具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎功效的中藥材,適用范圍寬,如雙黃連口服液、黃芩湯及藍(lán)芩口服液等。查閱近年來有關(guān)黃芩的藥理研究進(jìn)展,發(fā)現(xiàn)黃芩中的黃酮類成分在利尿、降壓、抗菌、消炎、抗病毒、保肝利膽、防過敏及鎮(zhèn)靜等方面的效果較好,為黃芩的臨床應(yīng)用奠定了堅(jiān)實(shí)的藥理依據(jù)[2-4]。

古代醫(yī)家在黃芩的臨床使用過程中采取了不同的炮制處理方式,較常見的有炒黃芩、姜黃芩、生黃芩片、蜜黃芩、酒黃芩及黃芩炭6種,其中生黃芩片、酒黃芩和炒黃芩應(yīng)用最廣泛,黃芩的不同炮制方式對(duì)該藥材中有效成分含量也具有一定差異[5-6]。目前,中藥黃芩的炮制工藝種樣繁多[7-9]。本實(shí)驗(yàn)選取了目前市場(chǎng)上較常用的酒黃芩、醋黃芩、炒黃芩、蜜黃芩4種黃芩炮制品為考量目標(biāo),以黃芩素及黃芩苷的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),考察4種不同黃芩炮制品中兩種活性成分含量的變化,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材 料

1.1 儀器 HPLC高效液相色譜儀(型號(hào)：LC-20AT,檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器,生產(chǎn)廠家：Shimadzu);電子分析天平(型號(hào)：mL104,生產(chǎn)廠家：Mettler Toledo);電子分析天平(型號(hào)：XSR105DU/A,生產(chǎn)廠家：Mettler Toledo),炒鍋(型號(hào)：CKN7630J 30 CM,生產(chǎn)廠家：浙江炊大王炊具有限公司);移液器[型號(hào)：YE187AL1168351,生產(chǎn)廠家：大龍星創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器(北京)有限公司]。

1.2 藥材 黃芩藥材(生產(chǎn)廠家：安徽亳藥千草國藥股份有限公司),批號(hào)200501,產(chǎn)地山西,按《中華人民共和國藥典》2015年版第一部及第四部標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn),結(jié)果符合規(guī)定。

1.3 試藥 黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)：111595-201306,純度97.8%)、黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)：110715-201318,純度93.8%)均購于中國藥品生物制品檢定所;娃哈哈純凈水;乙腈為色譜純;甲酸等其余試劑均為分析純;米醋(總酸≥9.00 g/100 ml,產(chǎn)地：江蘇鎮(zhèn)江,生產(chǎn)廠家：江蘇恒順醋業(yè)股份有限公司);蜂蜜(批號(hào)：200601,產(chǎn)地：湖北荊州,生產(chǎn)廠家：南京老山藥業(yè)股份有限公司);花雕酒(酒精度：≥12%vol,產(chǎn)地：浙江紹興,生產(chǎn)廠家：浙江古越龍山紹興股份有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

2.1.1 酒制黃芩：取批號(hào)為200501的黃芩藥材100 g和黃酒20 ml,混合拌勻,敷保鮮膜悶潤(rùn)30 min后,置于炒鍋內(nèi),用文火(控制鍋溫在270 ℃左右)炒制30 min,取出,放涼備用。

2.1.2 炒黃芩：取批號(hào)為200501的黃芩藥材100 g,加入炒鍋中,用文火(控制鍋溫在270 ℃左右)炒至黃芩表面棕黃色后立刻停止,取出,放涼備用。

2.1.3 醋制黃芩：取批號(hào)為200501的黃芩藥材100 g和米醋20 ml,混合拌勻,悶潤(rùn)30 min放入至炒鍋中,用文火(控制鍋溫在200 ℃)炒制30 min,取出攤放,并篩去碎屑。

2.1.4 蜜制黃芩：(1)輔料制備：取生蜂蜜40 g,煉制蜂蜜20 g,紹興花雕酒10 g,純化水20 g,將除煉蜜外所有輔料混合均勻備用。(2)浸潤(rùn)：將上述混合均勻的輔料和100 g批號(hào)為200501的黃芩至悶潤(rùn)容器中,攪拌均勻,浸潤(rùn);悶潤(rùn)至混合輔料全部被吸收。(3)炙炒：將悶潤(rùn)好的黃芩放入炒鍋中,以文火炒至手按覺硬度為宜,約八分干時(shí),將煉蜜倒至黃芩上拌炒,炒至黃芩表面呈蜜樣光澤,觸之不粘手,以握之成團(tuán),撒手即散為度,取出攤放,放涼備用。

2.2 色譜條件 色譜柱：YMC-Pack ODS-A(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸水=47∶53;檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm;流速1.0 ml/min;柱溫30 ℃;進(jìn)樣量10 μl。

2.3 溶液的制備

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備：精密稱定黃芩苷10.180 2 mg、黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品3.051 2 mg,加入50 ml量瓶中,用70%乙醇充分溶解后定容,獲得含有黃芩苷203.6 μg/ml和黃芩素61.02 μg/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液,備用。

2.3.2 供試品溶液制備：精密稱定按照炮制方法炮制后的黃芩炮制品50 g,打粉,全部通過3號(hào)篩(50目),精密稱定黃芩炮制品粉末0.03 g,置于100 ml圓底燒瓶中,在精密汲取70%乙醇40 ml,在70 ℃水域鍋內(nèi)回流3 h后,放冷,濾過,濾液置100 ml量瓶中,用70%乙醇少量多次洗滌容器和殘?jiān)?洗液一同濾入量瓶中,定容,搖勻,過0.45 μm針孔有機(jī)濾膜,得黃芩炮制品供試品溶液,備用。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取“2.3.1”項(xiàng)下黃芩素和黃芩苷混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液,按“2.2”項(xiàng)下色譜條件,進(jìn)樣,黃芩苷和黃芩素色譜峰分離良好,色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.3.1”項(xiàng)下制備黃芩苷、黃芩素混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液50、100、200、400、800、1 000 μl分別置于1 ml的量瓶中,加70%乙醇定容,配制成濃度為3.051 μg/ml的黃芩素和10.18 μg/ml的黃芩苷、6.102 μg/ml的黃芩素和20.36 μg/ml的黃芩苷、12.204 μg/ml的黃芩素和40.72 μg/ml的黃芩苷、24.408 μg/ml的黃芩素和81.44 μg/ml的黃芩苷、48.816 μg/ml的黃芩素和162.88 μg/ml的黃芩苷、61.02 μg/ml的黃芩素和203.60 μg/ml的黃芩苷混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。取上述不同濃度混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液,按照“2.2”項(xiàng)下色譜分析條件檢測(cè),以黃芩苷和黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品的濃度(X)為橫坐標(biāo),以相應(yīng)測(cè)得的黃芩苷和黃芩素的峰面積(Y)為縱坐標(biāo),計(jì)算回歸方程。得黃芩素的回歸方程為Y=8 585.9X+1 933,r2=0.999 6;黃芩苷的回歸方程為Y=9 542.8X+24 564,r2=0.999 7。結(jié)果表明黃芩素線性范圍為3.051～61.02 μg/ml、黃芩苷線性范圍為10.18～203.60 μg/ml。

2.6 精密度考察 取“2.3.2”項(xiàng)制備的黃芩炮制品供試品溶液,按“2.2”項(xiàng)下色譜條件,平行進(jìn)樣6次,記錄黃芩苷和黃芩素峰面積。計(jì)算黃芩苷和黃芩素的峰面積的RSD值,結(jié)果為黃芩素峰面積RSD為2.06%;黃芩苷峰面積RSD為1.67%,表明分析儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性考察 精密稱定按照炮制方法炮制后的黃芩炮制品50 g,打粉,全部通過3號(hào)篩(50目),精密稱定0.03 g黃芩炮制品粉末,按“2.3.2”項(xiàng)下方法制作黃芩的供試品溶液,按“2.2”項(xiàng)下色譜分析條件分別于0、3、6、9、12、24 h進(jìn)樣,記錄黃芩苷和黃芩素峰面積。計(jì)算黃芩苷和黃芩素的峰面積的RSD值,結(jié)果為黃芩素峰面積的RSD為1.61%,黃芩苷峰面積的RSD為1.43%,表明黃芩炮制品供試溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.8 重復(fù)性考察 精密稱定按照炮制方法炮制后的黃芩炮制品50 g,打粉,全部通過3號(hào)篩(50目),精密稱定黃芩炮制品粉末0.03 g,平行稱定6份,按“2.3.2”項(xiàng)下方法制作黃芩炮制供品溶液,按“2.2”項(xiàng)下色譜分析條件進(jìn)樣,記錄黃芩苷和黃芩素峰面積,根據(jù)“2.5”線性回歸方程,計(jì)算黃芩苷和黃芩素的含量,結(jié)果表明黃芩素含量的RSD為1.84%;黃芩苷含量RSD為1.42%,表明該方法測(cè)定黃芩炮制品中黃芩苷和黃芩素的重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收考察 精密稱定按照炮制方法炮制后的黃芩炮制品50 g,打粉,全部通過3號(hào)篩(50目),精密稱定黃芩炮制品粉末0.015 g,平行6份,置于100 ml燒瓶中,分別加入含有黃芩苷0.1 869 mg/ml和含有黃芩素0.0 183 mg/ml混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液10 ml,再加70%乙醇30 ml,按照“2.3.2”項(xiàng)下在70 ℃水域鍋內(nèi)回流3 h后相同操作得樣品供試溶液,按“2.2”項(xiàng)下色譜分析條件進(jìn)樣,按照外標(biāo)法計(jì)算黃芩素及黃芩苷含量,結(jié)果見表1。

表1 黃芩素和黃芩苷加樣回收考察

2.10 含量測(cè)定 按“2.1”樣品制備方法炮制出來的不同黃芩炮制品,按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備不同黃芩炮制品的供試溶液,以黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品和黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品為標(biāo)準(zhǔn)品溶液,按“2.2”項(xiàng)下色譜分析條件進(jìn)樣,按照“2.5”線性回歸方程,計(jì)算黃芩素及黃芩苷含量,見表2。

表2 含量測(cè)定結(jié)果

3 討 論

黃芩是唇形科黃芩屬植物黃芩的干燥根,在中醫(yī)臨床用于治療肺熱咳嗽、高熱神昏、肝火頭痛、目赤腫痛、濕熱黃疸、瀉痢及胎熱不安等證。現(xiàn)代藥理研究表明,黃芩具有抗菌、消炎、降壓、利尿、降血脂及抗變態(tài)反應(yīng)等作用,其與黃芩藥材中含有的多種黃酮類衍生物相關(guān),如黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷及漢黃芩素等。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,4種黃芩炮制品中黃芩素含量依次為醋制黃芩>酒制黃芩>炒制黃芩>蜜制黃芩;黃芩苷含量依次為酒制黃芩>醋制黃芩>炒制黃芩>蜜制黃芩。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,不同的炮制方法對(duì)黃芩中黃芩素和黃芩苷這兩種黃酮類有效成分的含量影響較大。

本實(shí)驗(yàn)研究的4種黃芩炮制品中黃芩素含量范圍為0.98%～1.42%,黃芩苷含量范圍為8.58%～11.51%;其中,醋制黃芩中的黃芩素含量最高為1.42%;酒制黃芩中黃芩苷含量均較高,為11.51%,從上述表2的結(jié)果也可看出醋制黃芩和酒制黃芩中的黃芩素和黃芩苷含量均較其他兩種炮制方法的結(jié)果高。

目前市場(chǎng)在售的黃芩藥材以酒黃芩飲片為主,因?yàn)辄S芩味苦性寒,酒制后可緩解苦寒之性,此類飲片臨床使用量也相當(dāng)大。然而不同的炮制方法對(duì)黃芩藥效成分影響[10]的研究較少,多局限于不同產(chǎn)地炮制品的比較和藥理作用研究分析[11-12],缺乏系統(tǒng)的對(duì)黃芩炮制工藝的研究性基礎(chǔ)。我國古代中醫(yī)對(duì)藥材的炮制過程研究大多局限于口、耳相傳,留下的文字記載極少而且特別精簡(jiǎn),亦會(huì)有錯(cuò)漏之處,使我們對(duì)黃芩等大宗中藥材的炮制了解過于單一,缺乏深入的探討分析。

本研究為實(shí)驗(yàn)室炮制數(shù)據(jù)的整理分析,由于藥材數(shù)量相對(duì)少,實(shí)驗(yàn)結(jié)果還可另行以中試實(shí)驗(yàn)設(shè)備放大數(shù)量后進(jìn)一步研究,比較黃芩原藥材加工成醋制黃芩和酒制黃芩的優(yōu)勢(shì)所在。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突。