胸腺五肽對AA肉雞免疫器官發(fā)育的影響

許輝 張樂 劉小琬 張晶晶 王寒

摘 要：本試驗旨在研究胸腺五肽對AA肉雞免疫器官發(fā)育的影響。選用125只14日齡健康A(chǔ)A肉雞，按體重、性別隨機(jī)分為5個處理，每個處理25只。從第14天開始，對照組注射生理鹽水，4個試驗組分別通過胸大肌注射50、150、300、500 μg/kg體重的胸腺五肽，1次/d，連續(xù)注射5 d。試驗分別于用藥5 d（19日齡）及停藥5 d（24日齡）測定各組肉雞的胸腺、脾臟和法氏囊的干濕比。結(jié)果表明：在19日齡，各處理組間肉雞脾臟及法氏囊干濕比無顯著差異，但50、150 μg/kg 組肉雞胸腺g干濕比顯著高于300、500 μg/kg組及對照組（P<0.05）。在24日齡，各處理組間肉雞脾臟及法氏囊干濕比仍無顯著差異，而50、150 μg/kg 組肉雞胸腺干濕比依舊顯著高于300、500 μg/kg組及對照組（P<0.05）。高劑量胸腺五肽（500 μg/kg）并未對肉雞胸腺、法氏囊、脾臟、肝臟及腎臟造成損傷。綜上所述，注射低劑量（50、150 μg/kg）胸腺五肽可促進(jìn)肉雞胸腺發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體免疫，且對脾臟和法氏囊無不良影響。

關(guān)鍵詞：胸腺五肽；AA肉雞；免疫器官發(fā)育

中圖分類號：S831 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1673-1085（2023）08-0009-06

胸腺肽是由胸腺組織分泌的具有生理活性的一組多肽，可通過誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的分化、增殖促進(jìn)T細(xì)胞的成熟，提高巨噬細(xì)胞的抗原呈遞及吞噬功能，增強(qiáng)細(xì)胞免疫，從而提高機(jī)體抵抗病原的能力[1]。1949年，胸腺肽粗提液首次被制備出來，此后國內(nèi)外學(xué)者們一直致力于胸腺肽的研究，并在提取、分離、純化及功能探究等方面均取得極大進(jìn)展[2]。當(dāng)前在臨床上，胸腺肽已廣泛應(yīng)用于輔助治療各種腫瘤性疾病[3]。此外，胸腺肽無明顯的種屬特異性，對多種動物也均有增強(qiáng)免疫的功能。

近年來，隨著人們對動物疾病預(yù)防、治療的重視程度不斷提高，胸腺肽在獸醫(yī)臨床上逐步被研究、應(yīng)用及推廣，為病毒性疾病的治療帶來新的希望[4]。有研究表明，胸腺肽可以用于治療患有新城疫及傳染性喉氣管炎雙重強(qiáng)毒感染的小雞；而且飼糧中添加或肌注胸腺肽，能促進(jìn)肉雞抗體生成，提高免疫功能和生長性能[5-6]。然而，目前胸腺五肽在肉雞上的應(yīng)用研究多集中在對飼料轉(zhuǎn)化率、生化指標(biāo)及血常規(guī)等影響方面，而關(guān)于胸腺五肽對肉雞胸腺、脾臟等免疫器官發(fā)育的影響還沒有相關(guān)研究報道。胸腺及脾臟是禽類最重要的免疫器官，其發(fā)育狀態(tài)及機(jī)能直接決定禽類機(jī)體的免疫水平。免疫器官指數(shù)可在一定程度上反映藥物對器官的影響，是毒性的重要指標(biāo)。免疫器官指數(shù)增加則說明器官可能有充血、水腫、肥大等變化，免疫器官指數(shù)下降表明器官可能有萎縮、退行性變化等。因此，本試驗旨在探究胸腺五肽對肉雞免疫器官干濕重比及其組織形態(tài)學(xué)的影響，為胸腺五肽在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料和動物

本試驗中注射用胸腺五肽（50 mg/瓶）購自河北征宇制藥有限公司（石家莊）。試驗動物購自正大公司的1日齡健康A(chǔ)A肉仔雞。

1.2 試驗設(shè)計

選用125只1日齡健康A(chǔ)A肉雞，正常飼養(yǎng)14日后隨機(jī)分為5個處理（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V組），每個處理25只。I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別通過胸大肌注射50、150、300、500 μg/kg體重的胸腺五肽，而V組（陰性對照組）注射等體積的生理鹽水。每日注射1次，連續(xù)注射5 d。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗雞采用高床平養(yǎng)，雞舍內(nèi)通風(fēng)良好，溫度、濕度等按飼養(yǎng)規(guī)程控制，并按常規(guī)程序進(jìn)行衛(wèi)生清理與消毒。所有雞飼喂相同的飼料，飼料按NRC（1998）肉雞營養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)配制，不添加任何藥物添加劑。試驗期間所有雞自由采食和飲水。第7天，雞群進(jìn)行首免雞新城疫-傳染性支氣管炎二聯(lián)苗免疫。第14天，雞群進(jìn)行傳染性法氏囊疫苗免疫。每日觀察并記錄雞群的臨床表現(xiàn)（包括注射部位紅腫、痛、壞死等）。

1.4 測定指標(biāo)

1.4.1 免疫器官干濕比測定 于用藥5 d（19日齡）及停藥5 d（24日齡），分別從各組AA肉雞隨機(jī)選取5只解剖，收集胸腺、脾臟、法氏囊并稱重，隨后將其置于100℃干燥箱干燥再稱其干重，計算干濕比。

1.4.2 組織病理學(xué)檢查 試驗結(jié)束后選擇陰性對照組和Ⅳ組的雞只，采集肝臟、腎臟、脾、胸腺、法氏囊等組織，10%中性福爾馬林固定24 h后，進(jìn)行石蠟包埋、切片、HE染色、鏡檢，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.5 統(tǒng)計分析

采用EXCEL對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行初步整理，用SPSS 22.0軟件中ANOVA程序進(jìn)行單因素方差分析，差異顯著時采用Duncan氏方法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，以P<0.05為差異顯著。

2 試驗結(jié)果

2.1 胸腺五肽對肉雞免疫器官干濕比的影響

表1為胸腺五肽對肉雞免疫器官干濕比的影響。由表1可知，在19日齡（即注射胸腺五肽5 d后），各處理組間肉雞脾臟及法氏囊干濕比無顯著差異（P>0.05）。但是，Ⅰ組和Ⅱ組胸腺干濕比顯著高于Ⅲ、Ⅳ及V組（P<0.05），而Ⅲ、Ⅳ組和對照組之間差異不顯著（P>0.05）。結(jié)果說明注射低劑量胸腺五肽（50、150 μg/kg）可能促進(jìn)胸腺發(fā)育，顯著提高肉雞胸腺干濕比，但對脾臟、法氏囊無顯著影響；而使用高劑量胸腺五肽（300、500 μg/kg）對肉雞胸腺、脾臟、法氏囊干濕比無顯著影響。

在24日齡（即停止注射胸腺五肽5 d后），觀察到的結(jié)果同19日齡相似。各處理組間肉雞脾臟及法氏囊干濕比仍無顯著差異（P>0.05）。Ⅰ、Ⅱ組肉雞胸腺干濕比仍顯著高于Ⅲ、Ⅳ及V組（P<0.05），而Ⅲ、Ⅳ組胸腺干濕比和V組間依舊差異不顯著（P>0.05）。結(jié)果表明，停藥5日后低劑量胸腺五肽（50、150 μg/kg）對肉雞胸腺的發(fā)育仍具有一定的促進(jìn)效果。

2.2 胸腺五肽對肉雞組織器官組織形態(tài)學(xué)的影響

在19 d（即注射胸腺五肽5 d后）和24 d（即停止注射胸腺五肽5 d后），Ⅳ組（500 μg/kg胸腺五肽注射組）肉雞胸腺、法氏囊、脾臟、肝臟各器官均未觀察到明顯的病理組織學(xué)變化。胸腺細(xì)胞無明顯變化，染色均質(zhì)，內(nèi)有大量淋巴細(xì)胞正在分化（圖1）。法氏囊細(xì)胞均一、干凈，顆粒感明顯，有大量正在分化的B淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞（圖2）。脾臟組織有少量的充血、出血，部分細(xì)胞核碎裂，可能與剖殺雞只過程中的操作不當(dāng)有關(guān)（圖3）。肝臟核大而圓、居中，胞漿染色質(zhì)豐富，胞質(zhì)嗜酸性，少量炎細(xì)胞浸潤（圖4）。腎臟細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞核清晰可見，胞質(zhì)、胞漿對比鮮明，有小部分的細(xì)胞脫落、腫脹，細(xì)胞分布不均一（圖5）。

3 討論

近年來，隨著養(yǎng)禽業(yè)向規(guī)?；?、集約化不斷發(fā)展，禽病也越來越多樣化，如何提高家禽的免疫功能、減少病毒性疾病及其他免疫抑制性疾病的發(fā)生，是當(dāng)前獸醫(yī)工作者們熱切關(guān)心的問題，各種免疫調(diào)節(jié)劑在臨床上的使用是大勢所趨。因此，研究免疫調(diào)節(jié)劑在雛雞胸腺、法氏囊、脾臟等免疫器官的影響意義重大。

3.1 胸腺五肽對AA肉雞免疫器官干濕比的影響

在實際生產(chǎn)過程中，肉雞抗應(yīng)激能力較差，受刺激后極易發(fā)生脂質(zhì)過氧化，產(chǎn)生過量的自由基，進(jìn)而造成氧化應(yīng)激，影響免疫系統(tǒng)功能，造成雞群抵抗力下降。王志強(qiáng)等[5]研究表明200 μg/kg胸腺五肽能拮抗環(huán)磷酰胺對T淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用，促進(jìn)免疫雛雞胸腺的生長發(fā)育，促進(jìn)外周T淋巴細(xì)胞的增殖和脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2，顯著提高免疫抑制雛雞血清中的新城疫抗體效價。鄧夢玲[7]研究表明注射高劑量的胸腺五肽可能增強(qiáng)AA肉雞的免疫力，對其他各項血常規(guī)指標(biāo)沒有明顯的不良影響。本試驗中，注射50、150 μg/kg胸腺五肽能促進(jìn)肉雞胸腺的發(fā)育，對脾臟、法氏囊等免疫器官的增重?zé)o顯著影響；注射500 μg/kg胸腺五肽對正常肉雞免疫器官及肝腎組織無明顯的病理損害作用。本試驗中僅觀察到胸腺五肽對胸腺發(fā)育的積極作用，可能與其靶向性有關(guān)，胸腺五肽主要作用于胸腺，誘導(dǎo)和促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的成熟，因此對法氏囊、脾臟等免疫器官發(fā)育影響和調(diào)節(jié)作用有限。

3.2 胸腺五肽對AA肉雞免疫器官功能的影響

胸腺是重要的淋巴器官，是T細(xì)胞發(fā)育分化和成熟的場所，可以分泌多種激素，有增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能、調(diào)節(jié)免疫平衡、抗感染等作用[8]。免疫器官的發(fā)育狀態(tài)和機(jī)能強(qiáng)弱，是對禽類免疫水平判定的一項重要指標(biāo)[9]，家禽的淋巴器官包括胸腺、法氏囊、淋巴結(jié)和脾臟等，淋巴器官的發(fā)育和機(jī)體免疫力均離不開T淋巴細(xì)胞的參與，胸腺作為最重要的細(xì)胞免疫中樞器官，為外周淋巴器官正常發(fā)育和機(jī)體免疫所必需。研究發(fā)現(xiàn)胸腺五肽能刺激特異性淋巴細(xì)胞的活性[10]，能替代胸腺的功能，誘導(dǎo)前體淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂忻庖吖δ艿腡細(xì)胞。同時老齡動物的胸腺萎縮及功能退化，胸腺五肽可以提高胸腺的抗氧化酶活力，降低氧自由基和脂質(zhì)過氧化物的生成，從而提高動物機(jī)體抗氧化能力，延緩部分老年性疾病的出現(xiàn)，故其在抗衰老方面有著極其廣闊的前景[11]。

目前已有胸腺肽制劑在獸醫(yī)臨床的應(yīng)用報道，有研究表明，胸腺五肽注射濃度分別為0.2、0.4、0.8 mg/kg時，對正常大鼠的脾臟、胸腺進(jìn)行病理組織學(xué)觀察無明顯影響，說明其沒有免疫毒性[12]。而本試驗中注射高劑量（500 μg/kg）胸腺五肽對正常肉雞免疫器官及肝腎組織無明顯的病理損害作用，與上述結(jié)果相一致。

4 ?小結(jié)

在本試驗條件下，注射劑量為50、150 μg/kg時，胸腺五肽可促進(jìn)肉雞胸腺發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體免疫，且對脾臟和法氏囊無不良影響，有作為免疫增強(qiáng)劑的潛力。

參考文獻(xiàn)：

[1] ?李潔，王曉杰，鄒素蘭.胸腺肽的臨床應(yīng)用與研究進(jìn)展[J].中國藥房，2008，19（14）：1108-1109.

[2] ?Chandratilleke D，Marsh J A.The effect of thymulin on avian IL-2 receptor expression[J]. International journal of immunopharmacology， 2000， 22（11）：887-896.

[3] ?麻銘川.胸腺五肽類藥物在化療期間對老年惡性腫瘤患者免疫功能的影響[J]. 中國醫(yī)學(xué)工程， 2019（6）：57-58.

[4] ?楊玲媛，謝青梅，畢英佐.胸腺五肽研究進(jìn)展[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，29（10）：57-60.

[5] ?王志強(qiáng)，張斌，陸宏，等.人工合成胸腺五肽對雛雞免疫功能的影響[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2009， 39（6）：555-560.

[6] ?張春莉，劉照惠，王妍，等.胸腺五肽固相合成及免疫增強(qiáng)作用的研究[J].中國生物制品學(xué)雜志，2003，16（2）：87-89.

[7] ?鄧夢玲.胸腺肽對AA肉雞血液常規(guī)指標(biāo)的影響[J].畜禽業(yè)，2019（12）：1-3+5.

[8] ?黃凌凌，謝婷，梁寧生.胸腺五肽對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響研究[J].內(nèi)科，2016， 11（3）：347-349+3.

[9] ?程相朝，張春杰，李銀聚，等.中藥免疫增強(qiáng)劑對肉仔雞免疫器官生長發(fā)育及免疫活性細(xì)胞影響的研究[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2002（3）：6-8.

[10]劉紅，孫長崗，杜峰.胸腺五肽對腫瘤惡病質(zhì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的實驗研究[J]. 濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報， 2013，35（2）：91-93.

[11]左朋飛，韓香，劉璐．胸腺五肽的合成及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].天津藥學(xué)，2008，20（1）：53-57．

[12] 李久立.胸腺五肽的固相合成及免疫學(xué)初步研究[D].上海：上海交通大學(xué)，2008.

Effects of Thymopentin on Immune Organs Development

in Arbor Acres Broilers

XU Hui1， ZHANG Le2， LIU Xiaowan1， ZHANG Jingjing1， WANG Han1

（1.Sichuan Water Conservancy Vocational College， Sichuan ?611200， China;

2.Qilu Animal Health Products Co.， Ltd.， Jinan ?250100， China）

Abstract： This experiment was conducted to study the effects of thymopentin on immune organ development of AA broilers. A total of 125 14-day-old healthy AA broilers were randomly divided into 5 groups according to body weight and sex， with 25 broilers per group. At age of 14 days， the control group was injected with normal saline， and the 4 experimental groups were injected with 50， 150， 300， 500 μg/kg body weight thymopentin once a day in the pectoral major muscle， respectively， for consecutive 5 days. The organ indices of thymus， spleen and bursa of fabricius were determined at age of 19 days and 24 days. The results showed that there was no significant difference in spleen and bursa of fabricius index among treatments at age of 19 days. But 50 μg/kg and 150 μg/kg thymopentin significantly increased the thymus index compared with other treatments （P<0.05）. At age of 24 days， there was also no significant difference in spleen and bursa index among treatments. The thymus index of broilers in treatments of 50 μg/kg and 150 μg/kg thymopentin was still significantly higher than those in other treatments. Besides， high dose of thymopentin （500 μg/kg） did not damage thymus， bursa of fabricius， spleen， liver and kidney of broilers. In conclusion， low dose （50，150 μg/kg） of thymopentin can promote the development of thymus， enhance the immune function， and has no adverse effect on spleen and bursa of fabricius.

Keywords： Thymopentin; Arbor Acres broilers; Immune organ development