雞滑液囊支原體疫苗研究進展

王林浩，徐慧琳，王雪霏

（青島易邦生物工程有限公司，山東青島 266000）

引起家禽支原體病最主要的病菌就是滑液囊支原體，當滑液囊支原體寄生在雞的體內(nèi)后，首先會容易出現(xiàn)腱鞘炎、關(guān)節(jié)腫脹、氣囊炎等癥狀，其次病菌會在雞的體內(nèi)產(chǎn)生大量的有毒物質(zhì)，例如神經(jīng)毒素、溶細胞酶、過氧化氫酶等，這些物質(zhì)會影響雞的細胞功能，是引發(fā)疾病的重要因素。近年來該病呈現(xiàn)出逐年增長的流行趨勢，給養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)帶來了較大的經(jīng)濟損失。預(yù)防該病最有效的手段就是接種疫苗，但是有些疫苗目前還在研究當中。本文論述了雞滑液囊支原體疫苗目前的研究進展情況。

1 雞滑液囊支原體的流行病學(xué)介紹

滑液囊支原體也叫做傳染性滑膜炎，是由支原體類的微生物引發(fā)，該病對家禽產(chǎn)生的危害較大且較為常見。這種微生物沒有細胞壁，一般會呈現(xiàn)出球狀、球桿狀，滑液囊支原體主要是通過雞的呼吸道進入到雞的滑液囊以及腱鞘等部位，主要寄生部位有呼吸道、關(guān)節(jié)、黏膜表面等，支原體會源源不斷的從宿主體內(nèi)吸收營養(yǎng)。長時間的寄生，會對宿主的生理功能帶來一定的影響，嚴重時會發(fā)生發(fā)炎、感染等癥狀?；耗抑гw在生長過程中會產(chǎn)生大量的有毒物質(zhì)，這些有毒物質(zhì)是誘發(fā)雞發(fā)病最主要的原因。雞滑液囊支原體最為常見的是慢性感染以及隱性感染，主要的傳染源就是已經(jīng)發(fā)病的雞以及體內(nèi)攜帶毒素暫未發(fā)病的雞，該病有多種傳播方式，其中接觸傳播以及呼吸道傳播的感染幾率最高，可以達到100%。如果養(yǎng)殖場的衛(wèi)生條件不達標，也會增加疾病的傳播風(fēng)險。由于雛雞的抵抗能力不足，所以雛雞的感染概率要比成年雞更高。雞在一年四季都有可能感染該病，但是冬春季節(jié)的感染率明顯更高。該病呈現(xiàn)出地方性的流性態(tài)勢，且逐漸增長，感染該病后，也容易誘發(fā)其他并發(fā)癥。對于該病的防治，主要有藥物防治、疫苗接種、加強安全措施等方法，但是由于蛋雞、肉雞在使用抗菌藥物時有一定的限制，所以目前最主要的防治方式就是接種疫苗。目前針對該病的疫苗主要有3 種，分別是弱毒疫苗、滅活疫苗以及基因工程亞單位疫苗。

2 雞滑液囊支原體疫苗的研究進展分析

2.1 弱毒疫苗

弱毒疫苗是當前被廣泛使用的一種疫苗，弱毒疫苗最明顯的優(yōu)勢就是易于保存，將疫苗放置在家用冰箱冷凍室也不會影響使用。目前國外使用的雞滑液囊支原體疫苗主要有2 種，一種是雞滑液囊支原體弱毒疫苗MS-H 株，另一種是弱毒疫苗MSI 株，弱毒疫苗MSI 株國內(nèi)目前還沒有投入使用。弱毒疫苗MS-H 株是一種商品化疫苗，對于溫度較為敏感，該疫苗在國內(nèi)的注冊時間是2017 年。將該疫苗置于-20℃的環(huán)境中，疫苗的存放時間不能超過4 周，溫度越低，儲存時間就越長，在使用之前需要先將疫苗解凍，疫苗解凍后需要在2 小時內(nèi)完成接種。該疫苗的接種方法主要有2 種，一種是點眼，另一種是噴霧。在給3～6 周齡的雞進行免疫時，就可以選擇點眼的接種方式，需要注意的是，如果雞群此前使用了抗菌藥物，就需要休藥期結(jié)束后才能進行接種。該疫苗可以與其他疫苗共同接種，例如傳染性支氣管炎以及其他的呼吸系統(tǒng)疾病。對白來航雞使用點眼的接種方式完成免疫后，通過檢測雞體內(nèi)的血清抗體可以發(fā)現(xiàn)，第27 周的抗體陽性率是90%，其余階段都是100%。通過對照試驗可以發(fā)現(xiàn)，接種過疫苗的雞感染疾病后的臨床表現(xiàn)相對未接種疫苗的雞要明顯更輕，發(fā)病率也相對更低。給火雞進行疫苗接種時可以選擇噴霧的方式，這種方式不會損傷火雞的氣囊和氣管。雞在接種疫苗之后，因感染疾病而引發(fā)的蛋殼尖端異?，F(xiàn)象有明顯的減少。但是疫苗株定植后容易損傷雞的呼吸道粘膜，呼吸道粘膜的損傷會加大感染其他疾病的風(fēng)險。當雞已經(jīng)被感染，這時接種疫苗不但不會有保護作用，甚至還可能會加重病情。雖然弱毒疫苗相對安全、高效，但是保存以及免疫要求較高，使用起來也較為繁瑣，根據(jù)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，我國現(xiàn)有的雞群中陰性的比例較少，所以該疫苗的適用性相對較低。

2.2 滅活疫苗

目前該病的滅活疫苗還沒有商品化，國內(nèi)已經(jīng)有多家機構(gòu)展開了相關(guān)研究。有研究將雞滑液囊支原體毒株使用甲醛滅活后進行制備。這種疫苗在試驗時可以發(fā)現(xiàn)有明顯的淋巴細胞增殖現(xiàn)象，有效激發(fā)了雞體內(nèi)的細胞以及體液免疫反應(yīng)，該疫苗有較為明顯的抑制作用。也有人使用福爾馬林對毒株進行滅活，通過這種方式制備出的疫苗可以有效清除雞體內(nèi)的病原。王昆的試驗是使用環(huán)化二乙烯亞胺來滅活雞滑液囊支原體毒株，然后分別加入油乳佐劑、71RVG 油佐劑、CPG 免疫增強劑，制成4 種滅活疫苗進行對比分析。對比實驗后可以發(fā)現(xiàn)其中加入71RVG 油佐劑的滅活疫苗在使用后效果要明顯優(yōu)于其他滅活疫苗，使用后雞群的氣管黏膜出現(xiàn)增生以及關(guān)節(jié)病的病變概率極低。孫開石的試驗是先使用甲醛對雞滑液囊支原體分離株進行滅活，然后加入復(fù)合佐劑混合制成，接種對象是山坑風(fēng)、矮A 兩種肉雞，試驗結(jié)果表明，這種方式制成的滅活疫苗有較強的保護作用，同時發(fā)現(xiàn)不同的品種在接種之后母源抗體對子代的保護效果具有一定的差異性。目前國內(nèi)已經(jīng)進行了多種類型的試驗，研究結(jié)果表明，使用滅活疫苗后可以對雞群帶來一定的刺激，進而達到一定的免疫保護作用。但是仍然還有許多細節(jié)需要進一步研究解決。雞群在接種疫苗后，對于雞群的生長性能是否會產(chǎn)生較大的影響，例如料肉比、每日的增長情況、產(chǎn)蛋率以及雞蛋的品質(zhì)等方面。疫苗接種的目的是為了有效預(yù)防疾病，但是前提是不能夠影響到雞群的正常生長狀況。其次就是佐劑的選擇方面，通過大量的試驗可以發(fā)現(xiàn)，不同的佐劑產(chǎn)生的免疫效果差異較大，如果佐劑選擇不合理，最終會影響到雞群的肉質(zhì)，導(dǎo)致養(yǎng)殖效益降低。最后一點就是在接種疫苗之后是否可以達到理想的清除效果，是否可以阻斷疾病在雞群之間的傳播。除此之外，雞滑液囊支原體的培育周期較長，培養(yǎng)成本也相對較高，這也是影響滅活疫苗研究的一個重要因素。

2.3 基因工程亞單位疫苗

基因工程亞單位疫苗具有明顯的應(yīng)用優(yōu)勢，不僅具有較高的安全性，而且生產(chǎn)成本較低，可以規(guī)?；a(chǎn)，所以這是目前的一個較為主要的研發(fā)方向。首先需要篩選出免疫效果相對更好的抗原，由于支原體沒有細胞壁，所以主要依靠支原體表面的膜蛋白來實現(xiàn)與宿主之間的聯(lián)系，無論是疾病的感染還是注射疫苗后的免疫，都發(fā)揮出了較為關(guān)鍵的作用。通過試驗可以發(fā)現(xiàn)，雞滑液囊支原體與雞多抗之間可以發(fā)生特異性反應(yīng)，這說明其中存在具有免疫作用的雞滑液囊支原體膜蛋白。除此之外，還發(fā)現(xiàn)了另一種具有良好免疫原性的烯醇化酶蛋白。這些發(fā)現(xiàn)推動了基因工程亞單位疫苗的研發(fā)工作，為疫苗的研發(fā)提供了較為重要的靶標分子。但是這些研究工作側(cè)重的是單個蛋白，目前只是對這些蛋白的免疫反應(yīng)性、免疫原性進行了測定，還沒有研究免疫學(xué)功能以及實際的免疫保護效果。目前國內(nèi)對于該項研究仍然處在基礎(chǔ)發(fā)展階段，海量的數(shù)據(jù)、信息為抗原的篩選提供了有力的支撐，目前的研發(fā)方向是要篩選出具有更高保護性以及免疫反應(yīng)性的抗原。根據(jù)進行全基因組測序的雞滑液囊支原體菌株主要有5 種，可以發(fā)現(xiàn)目前已知的支原體基因已經(jīng)超過了700 個。當細菌對雞群的機體形成刺激之后，機體就會出現(xiàn)免疫反應(yīng)，從而形成蛋白以及外膜蛋白。另一種篩選方法是先使支原體成為破碎狀態(tài)，之后采取二維電泳的方式與支原體抗血清反應(yīng)，這種方法可能會漏掉一部分分泌出的蛋白，但是會對機體形成一定的刺激。

3 結(jié)語

目前，已經(jīng)商品化的疫苗是MS-H 弱毒疫苗，該疫苗的適用范圍主要是還沒有感染的雞群，已經(jīng)感染的雞群并不適用，注射疫苗后可能會加重病情。滅活疫苗是目前正在研究中的一種疫苗，在已經(jīng)進行的試驗中免疫效果較為理想，接下來要加快推動臨床試驗，爭取盡快讓滅活疫苗商品化。同時要加強陽性雞群的疫苗研究工作，要積極尋找母源抗體干擾的突破點。此外，基因工程單位疫苗的研究重點是對免疫顯性蛋白抗原進行篩選，對不同蛋白的免疫效果進行評價，找到更適合制備疫苗的抗原。