甲胎蛋白、AFP-L3%和DCP在HBV相關肝細胞癌早期診斷中的臨床價值

段建平?杜鐳?宋霆?劉振勝

【摘要】目的 探討甲胎蛋白、甲胎蛋白異質體3比率（AFP-L3%）和脫-γ-羧基凝血酶原（DCP）不同組合用于HBV相關肝細胞癌患者的早期診斷。方法 納入167例受試者，其中肝細胞癌組100例，HBV感染相關肝硬化組（肝硬化組） 67例，通過化學發(fā)光酶免疫法檢測血清甲胎蛋白、AFP-L3%和DCP水平，采用受試者操作特征（ROC）曲線進行分析。結果 肝細胞癌組甲胎蛋白、AFP-L3%和DCP水平明顯高于肝硬化組（P均﹤0.05）。肝細胞癌組0期和A期比較甲胎蛋白和AFP-L3%水平差異均無統(tǒng)計學意義（P均﹥0.05）；肝細胞癌組0期DCP水平明顯低于肝細胞癌組A期（P﹤0.05）。甲胎蛋白、AFP-L3%和DCP診斷早期肝細胞癌的靈敏度和特異度分別為51.5%、92.5%、28.3%和95.5%、60.0%、84.7%。ROC曲線下面積（AUC）結果分析顯示甲胎蛋白、AFP-L3%和DCP診斷早期肝細胞癌的AUC值分別為0.760、0.619和0.749；甲胎蛋白和DCP聯(lián)合檢測的AUC值為0.810，具有最高診斷效能。結論 甲胎蛋白診斷早期肝細胞癌具有重要診斷價值，甲胎蛋白和DCP聯(lián)合可提高HBV相關早期肝細胞癌的診斷效能。

【關鍵詞】肝細胞癌；肝硬化；甲胎蛋白；甲胎蛋白異質體比率；脫-γ-羧基凝血酶原

Clinical value of alpha-fetoprotein： alpha-fetoprotein-L3 isoform ratio and des-γ-carboxyprothrombin in early diagnosis of HBV-related hepatocellular carcinoma Duan Jianping△， Du Lei， Song Ting， Liu Zhensheng.△Department of Infective Center， Qingdao Sixth People s hospital infection center， Qingdao 266000， China

Corresponding author， Liu Zhensheng， E-mail： lixiang920912@163.com

【Abstract】 Objective To evaluate the value of different combinations of alpha-fetoprotein （AFP）， alpha-fetoprotein-L3 isoform ratio （AFP-L3%） and des-γ-carboxyprothrombin （DCP） for early diagnosis of hepatitis B virus （HBV）-related hepatocellular carcinoma （HCC）. Methods A total of 167 patients were enrolled in this study， including 100 patients with HCC and 67 patients with infection-related liver cirrhosis （LC）. The levels of serum AFP， AFP-L3% and DCP were detected by chemiluminescence enzyme immunoassay. The receiver operating characteristic （ROC） curve was delineated for subsequent analysis. Results The levels of AFP， AFP-L3% and DCP in HCC patients were significantly higher than those in LC patients （all P < 0.05）. There was no significant difference in AFP and AFP-L3% levels between stage 0 and stage A patients in HCC group （both P > 0.05）. DCP levels in stage 0 patients were significantly lower than those in stage A patients in HCC group （P < 0.05）. The sensitivity and specificity of AFP， AFP-L3% and DCP in the diagnosis of early HCC were 51.5%， 92.5%， 28.3%， and 95.5%， 60.0%， 84.7%， respectively. Analysis of the area under the ROC curve （AUC） results showed that the AUC values of AFP， AFP-L3% and DCP for the diagnosis of early HCC were 0.760， 0.619 and 0.749， respectively. The AUC value of combined detection of AFP and DCP was 0.810， which yielded the highest diagnostic efficiency. Conclusion AFP has important diagnostic value in the diagnosis of early HCC. The combination of AFP and DCP can improve the diagnostic efficiency of HBV-related early HCC.

【Key words】Hepatocellular carcinoma； Liver cirrhosis； Alpha-fetoprotein； Alpha-fetoprotein isoform ratio； Des-γ-

carboxyprothrombin

肝細胞癌是原發(fā)性肝癌的主要類型，是全球癌癥相關死亡的第三大常見原因［1-2］。肝癌的危險因素包括HBV感染相關肝硬化、各種致癌物、代謝性疾病和飲酒等眾多病因。我國的HBV相關肝細胞癌患者約占肝癌病例的85%［3-4］。多數(shù)肝細胞癌患者發(fā)現(xiàn)即晚期，在有限的治療選擇下將面臨1年生存率為15%～39%，總體5年生存率為10%～20%［5-6］。但是，早期診斷可以明顯改善預后［7］。盡管超聲、磁共振和甲胎蛋白已用于篩查和監(jiān)測肝癌，但早期診斷率仍很低，因此，聯(lián)合各種血清肝癌標志物早期診斷肝癌至關重要［8-9］。

甲胎蛋白異質體3（AFP-L3）是由肝癌細胞產(chǎn)生的。AFP-L3水平與肝細胞癌的發(fā)展線性相關。脫-γ-羧基凝血酶原（DCP）是維生素K 缺乏或拮抗劑-Ⅱ誘導的蛋白質，可出現(xiàn)于肝細胞癌患者的血清中。近年來，血清腫瘤生物標志物如甲胎蛋白、DCP和甲胎蛋白異質體3比率（AFP-L3%），已逐漸用于肝癌的早期診斷［7， 10-11］。研究表明，甲胎蛋白對肝癌診斷的靈敏度和特異度較低，且不同病因相關肝癌的特異度和靈敏度大不相同［12-14］。且目前很少有研究探討多種血清腫瘤生物標志物聯(lián)合在HBV相關肝細胞癌早期檢測中的價值，尤其在我們國家HBV相關肝細胞癌占很大比例的情況下。因此，在本研究中，我們旨在探討甲胎蛋白、AFP-L3%和DCP的不同組合在HBV相關肝癌患者早期診斷中的價值，提高患者肝癌早期診斷率。

對象與方法

一、研究對象

選取2012年1月1日至2020年11月31日來自青島市第六人民醫(yī)院肝病病房或者門診年齡35～55歲的肝細胞癌患者（肝細胞癌組）及HBV感染相關肝硬化患者（肝硬化組）。納入標準：HBsAg陽性，HBeAg陽性或者HBeAg陰性的慢性HBV感染相關LC或肝細胞癌；ALT水平不超過正常上限值2倍，正常上限為40 U/L，HBV DNA小于2 000 IU/mL；腹部超聲、磁共振和CT診斷明確肝硬化或肝細胞癌，或者肝穿病理明確診斷肝硬化或肝細胞癌。所有入選的患者肝功能分級（Child-Pugh評分系統(tǒng)）均為A級或B級，分期［巴塞羅那肝癌臨床分期（BCLC分期）］均為最早期或者早期階段患者（BCLC分期0期和A期），排除其他腫瘤或其他嚴重的基礎疾病、轉移性肝癌、吸毒、合并其他肝炎病毒感染、HIV感染和其他原因引起的肝硬化。本研究獲得了研究對象的書面知情同意書，并經(jīng)過青島市第六人民醫(yī)院倫理委員會許可（批號：PJ2023-06-29）。

二、觀察指標

檢測研究對象的血清腫瘤生物標志物甲胎蛋白、DCP和AFP-L3%。抽取研究對象靜脈血3～

4 mL，3 500 r/min離心10 min分離血清備用。血清甲胎蛋白使用全自動化學發(fā)光酶免疫法（CLEIA）（型號LUMIPULSEG1200，日本富士瑞必歐公司）檢測（甲胎蛋白檢測試劑盒：上海一研生物科技有限公司）、DCP（ELISA 試劑盒：北京華健生物科技有限公司）、AFP-L3%采用磁微?；瘜W發(fā)光免疫分析雙抗體夾心法檢測（北京熱景C2000分析儀）。所有步驟均按照說明書進行。

三、統(tǒng)計學處理

采用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料經(jīng) Kolmogorov-Smirnov檢驗進行數(shù)據(jù)正態(tài)性檢驗，符合正態(tài)分布計量資料以表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，計數(shù)資料以例（%）表示，比較采用χ 2檢驗，多組間比較采用方差分析。偏態(tài)分布計量資料以中位數(shù)（下四分位數(shù)，上四分位數(shù)）即M（P25，P75）表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗，多組間比較采用Krushkal-Wallis H檢驗。為了評估和比較腫瘤生物標志物的診斷性能，繪制了每個腫瘤生物標志物單個及其組合受試者操作特征（ROC）曲線，根據(jù)曲線下面積（AUC）計算各腫瘤生物標志物單個及其組合的靈敏度、特異度和準確度。P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結果

一、研究對象入組時的基線特征和臨床特征

共167例患者入選本研究，其中肝細胞癌組100例，肝硬化組67例；肝細胞癌組中BCLC分期0期患者30例，BCLC分期A期患者70例。肝細胞癌組和肝硬化組患者的年齡、血紅蛋白、肝功能（總膽紅素、AST和ALT）、血小板、HBeAg陽性及HBeAg陰性比例、HBV DNA < 2 000 IU/mL及HBV DNA 2 000 IU/mL、HBsAg陽性及HBsAg陰性比例、BLCL分期比較差異均無統(tǒng)計學意義（P均> 0.05）。見表1。

二、肝細胞癌組和肝硬化組甲胎蛋白、DCP和AFP-L3%水平比較

肝硬化組甲胎蛋白水平明顯低于肝細胞癌組患者；肝細胞癌組AFP-L3%水平高于肝硬化組，且差異有統(tǒng)計學意義；肝細胞癌組DCP水平明顯高于肝硬化組。見表2。

肝硬化組甲胎蛋白水平低于肝細胞癌組0期和A期，組間比較差異有統(tǒng)計學意義；肝細胞癌組0期和A期比較甲胎蛋白水平差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）；肝細胞癌組0期和A期AFP-L3%水平明顯高于肝硬化組；肝細胞癌組0期和A期AFP-L3%水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）；肝細胞癌組A期DCP水平高于肝細胞癌組0期和肝硬化組，差異有統(tǒng)計學意義；肝細胞癌組0期和肝硬化組DCP水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。見表3。

三、甲胎蛋白、AFP-L3%和DCP在早期肝細胞癌的診斷性能

DCP在早期診斷肝細胞癌的靈敏度為60.0%，甲胎蛋白為51.5%。甲胎蛋白與DCP診斷肝細胞癌的AUC值差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。甲胎蛋白和DCP聯(lián)合檢測診斷肝癌的靈敏度和特異度分別為67.0%和83.1%，其中AUC值最大。甲胎蛋白與DCP聯(lián)合檢測時，與甲胎蛋白單獨檢測相比，靈敏度由51.5%提高到67.0%，而特異度從92.5%僅下降到83.1%，甲胎蛋白+AFP-L3%聯(lián)合檢測的靈敏度53.5%，特異度89.1%，AUC值為0.761。甲胎蛋白、AFP-L3%和DCP聯(lián)合檢測的AUC值與甲胎蛋白和DCP聯(lián)合檢測的AUC值相同。見圖1。

討論

慢性HBV感染仍然是一個我國重要的公共衛(wèi)生問題，HBV感染是我國肝細胞癌的主要原因［15］。肝癌患者預后差的主要原因是癥狀出現(xiàn)晚和晚期診斷，早期診斷是提高肝癌患者長期存活率的最重要因素。

本研究評估了甲胎蛋白、AFP-L3%和DCP診斷早期HBV相關肝細胞癌的診斷效能，結果顯示甲胎蛋白和AFP-L3%的聯(lián)合表現(xiàn)出與單獨甲胎蛋白檢測具有相似的診斷效能（AUC值分別為0.761和0.760）。然而，我們的結果與Helen等（2010年）報道不一致，這種明顯的差異可能是因為本研究參與者是HBV相關的肝細胞癌和肝硬化，而把酒精性和丙型肝炎病毒等相關的肝細胞癌和肝硬化研究者已經(jīng)被排除在外，而且我們入組的患者轉氨酶水平2倍正常值以內，甲胎蛋白水平和轉氨酶水平也具有相關性。

本研究表明甲胎蛋白診斷早期肝細胞癌表現(xiàn)出最好的診斷效能。因此，甲胎蛋白目前認為是最好的肝細胞癌監(jiān)測腫瘤生物標志物，這和以前的研究報道一致［16］。DCP和甲胎蛋白診斷早期肝細胞癌的AUC值相似（分別為0.76和0.75）。DCP在臨床研究中被廣泛用于檢測早期肝細胞癌，有研究報道DCP在早期診斷肝細胞癌方面比甲胎蛋白具有更高的靈敏度［17］。本研究結果顯示DCP在早期診斷肝細胞癌的靈敏度為60.0%，甲胎蛋白在早期診斷肝細胞癌的靈敏度為51.5%，DCP的靈敏度高于甲胎蛋白，這和我們的研究結果相同；而且我們的研究結果還顯示早期（A期）肝細胞癌患者血清DCP明顯高于最早期（0期）肝細胞癌患者，而甲胎蛋白和AFP-L3%在早期（A期）肝細胞癌和最早期（0期）肝細胞癌血清無明顯差異，提示DCP可能是診斷早期肝細胞癌良好的輔助腫瘤生物標志物，這和以前的研究報道相一致［18-19］。一項薈萃分析顯示，DCP診斷HBV相關性肝細胞癌的靈敏度和特異度分別為0.71和0.93，這與本研究中DCP的診斷價值總體相一致［20］。Wu等（2014年）認為AFP-L3%是鑒別甲胎蛋白水平相對較低的肝細胞癌的有效生物標志物。本研究結果顯示AFP-L3%在診斷早期肝細胞癌方面比甲胎蛋白和DCP具有更高的特異度，然而其靈敏度較低，可能限制其臨床應用。另據(jù)報道，約30%～40%的早期肝癌患者血清甲胎蛋白水平正常，AFP-L3%顯示出高的特異度也可以作為甲胎蛋白檢測肝細胞癌的補充［21-22］。

甲胎蛋白和DCP聯(lián)合檢測可以大大提高診斷早期肝細胞癌的靈敏度，但特異度降低，這與以前研究結果相一致［23］。早期檢測肝細胞癌的靈敏度增加是有益的，因為對于HBV相關肝細胞癌的監(jiān)測，靈敏度可能比特異度更重要，延遲的肝細胞癌診斷，可能會導致肝細胞癌從早期階段進展到晚期階段，錯失了治愈性治療手段如手術切除或肝移植等，從而影響患者的生存期。我們也可以將血清腫瘤生物標志物聯(lián)合無創(chuàng)的超聲或CT等影響學檢查，進一步提高肝細胞癌監(jiān)測靈敏度，早期診斷從而及時治療。

綜上所述，甲胎蛋白目前仍然是診斷早期HBV相關肝細胞癌的最佳血清腫瘤生物標志物。甲胎蛋白和DCP聯(lián)合可進一步提高早期HBV相關肝細胞癌的診斷效能，為早期診斷提供更多參考依據(jù)，具有較高的應用價值。

參 考 文 獻

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（收稿日期：2023-06-05）

（本文編輯：楊江瑜）