液相色譜-質(zhì)譜法測定茶葉中氧樂果農(nóng)藥殘留量的不確定度評定

吳 坤，劉李婷，魏寧果，陳姍姍，劉雪峰

（陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，陜西 西安 710054）

氧樂果是一種廣譜內(nèi)吸性有機磷農(nóng)藥，有良好的觸殺和胃毒作用，隨著農(nóng)藥的廣泛使用，其殘留問題日益嚴重[1]，長期食用氧樂果超標的食品，對人體健康可能有一定危害。一直以來，食品安全受到高度重視，對檢測結(jié)果的精確度要求越來越高[2]。《食品安全國家標準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[3]（GB 2763—2021） 中規(guī)定，氧樂果在茶葉中的最大殘留量為0.05 mg/kg。提高氧樂果殘留量的檢測技術(shù)和檢測過程風險評定具有研究價值。測量不確定度是衡量數(shù)據(jù)結(jié)果準確性和可靠性的重要特征指標，不確定度的數(shù)值可直接體現(xiàn)檢測質(zhì)量的高低，影響檢測結(jié)果的可靠性[4]。尤其是在實際工作中，當測量值出現(xiàn)在限定值附近時，為確保數(shù)據(jù)的可信度，對檢測結(jié)果進行不確定度評價是不可或缺的[5]。完整的定量分析結(jié)果應(yīng)該由被測量值和被測量值分散性的值（即不確定度） 組成[6]，這既可增加檢測方法和結(jié)果的可信度，又便于不同實驗室分析結(jié)果進行對比，因此合理地評定不確定度，確保檢測結(jié)果的權(quán)威與公正，能夠更好地保障食品安全與質(zhì)量。 郭軍霞、李貴軍等人[7-8]對茶葉中氧樂果的氣相色譜法，氣相色譜質(zhì)譜法的不確定度進行了廣泛的研究與討論，而液相色譜法中氧樂果殘留檢測的不確定度評定文獻中鮮有報道。

試驗基于國家食品安全標準《GB 23200.121—2021 植物源食品中331 種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》[9]的檢測方法，依據(jù)《測量不確定度評定與表示》[10]和《化學(xué)分析測量不確定度評定》[11]，分析評定檢測過程中各不確定度分量的來源，給出擴展不確定度，對提高試驗操作規(guī)范性及檢測結(jié)果的準確性和可靠性提供了數(shù)據(jù)支撐，為實驗室質(zhì)量控制提供了一定依據(jù)，為食品安全日常檢測結(jié)果提供了重要技術(shù)保障。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

WATERS XEVO TQ-S Cronos 型超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國WATERS 公司產(chǎn)品；漩渦混勻器，海門市其林貝爾儀器制造有限公司產(chǎn)品；H1850 型高速離心機，湖南湘儀實驗儀器開發(fā)有限公司產(chǎn)品；電子天平（分度值為0.1 mg），賽多利斯科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

氧樂果標準溶液（100 μg/mL），天津阿爾塔科技有限公司提供；甲酸（色譜純），天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司提供；乙腈（色譜純），美國Fisher公司提供； QuEChERS 萃取鹽包（貨號S7400055），上海安譜實驗科技股份有限公司提供；QuEChERS凈化管（貨號MO042881），深圳逗點生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準溶液配制

使用移液器量取1 mL 氧樂果標準溶液（100 μg/mL）于10 mL 容量瓶中，乙腈定容至刻度，配制成10 mg/L氧樂果儲備液。精確量取1 mL 氧樂果儲備液于10 mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，配制成1 mg/L 氧樂果中間液。

1.2.2 樣品溶液制備

稱取2 g 試樣（精確至0.01 g） 于50 mL 塑料離心管中，加10 mL 水渦旋混勻，靜置30 min。加入15 mL 乙腈-乙酸溶液及1 顆陶瓷均質(zhì)子，劇烈振蕩1 min，加入6 g 無水硫酸鎂、1.5 g 乙酸鈉，劇烈振蕩1 min 后以轉(zhuǎn)速4 200 r/min 離心5 min。吸取2 mL上清液至QuEChERS 凈化管中，渦旋混勻1 min，以轉(zhuǎn)速4 200 r/min 離心5 min，吸取上清液過0.22 μm微孔濾膜，待測定。

1.2.3 基質(zhì)標準工作曲線

將空白試樣按1.2.2 制備成基質(zhì)溶液，精確量取一定量的氧樂果中間液（1 mg/L），使用量程為100～1 000 mL 移液槍和10 mL 容量瓶，逐級用空白基質(zhì)溶液稀釋成質(zhì)量濃度為0.100，0.050，0.020，0.010，0.005 mg/L 的基質(zhì)標準工作溶液。以定量離子的質(zhì)量色譜圖峰面積為縱坐標，基質(zhì)標準工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標，繪制基質(zhì)標準工作曲線。

1.2.4 液相色譜條件

色譜柱：WATERS ACQUITY UPLC BEH C18型（1.7 μm，2.1 mm×100 mm）；柱溫40 ℃；樣品室溫度20 ℃；進樣量2 μL。流速0.3 mL/min，流動相：A 相為0.1%甲酸水溶液，B 相為0.1%甲酸乙腈溶液；線性梯度洗脫。

1.2.5 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI+）；離子化電壓3 500 V；離子源溫度150 ℃；去溶劑氣溫度350 ℃；去溶劑氣流量600 L/Hr，碰撞氣流量30 L/Hr。

氧樂果的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 氧樂果的質(zhì)譜參數(shù)

1.2.6 數(shù)學(xué)模型建立

試樣中氧樂果殘留量以質(zhì)量分數(shù)X 計，按以下公式計算：

式中：X——試樣中氧樂果殘留量，mg/kg；

C——樣品溶液中氧樂果質(zhì)量濃度，mg/L；

V——提取液體積，mL；

m——試樣質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與分析

2.1 不確定度來源分析

根據(jù)上述試驗方法和數(shù)學(xué)模型，該方法的測量不確定度來源主要有樣品稱量引入的不確定度，由天平的線性不確定度構(gòu)成；樣品前處理溶液體積變化引入的不確定度，由試液定容、溫度變化等引入的不確定度組成；校準過程引入的不確定度，由標準品原液稀釋成標準工作溶液時引入；標準工作曲線擬合引入的不確定度，樣品重復(fù)測量及回收率引入的不確定度。

2.2 不確定度分量評定

2.2.1 稱樣引入的相對標準不確定度urel（m）

稱量樣品使用天平的最大允差為0.000 5g，按均勻分布估算，。實際稱量樣品質(zhì)量的平均值為2.062 1g，則

2.2.2 待測樣品溶液定容引入的不確定度urel（V）

樣品定容用的是5 mL 移液器，移液器引入的不確定度主要由容量允差、溫度波動和測量重復(fù)性引入。根據(jù)JJG 646—2006《移液器檢定規(guī)程》[12]，移取5 000 μL 溶液時，移液器容量允差為±0.6%，測量重復(fù)性為0.2%，按均勻分布估算，則

試樣加入1%乙酸乙腈15 mL，使用5 000 μL 移液器3 次；故樣品提取過程中由移液器量取引入的不確定度為：

移取樣品溶液時實驗室溫度為24 ℃，移液器校準時溫度為20 ℃，乙腈的體積膨脹系數(shù)為1.37×10-3℃，假設(shè)體積變化為均勻分布，則

2.2.3 標準物質(zhì)的不確定度urel（Sb）

由標準溶液廠家提供的證書中得到的氧樂果標準溶液純度為99%，擴展不確定度U 為5%，拓展因子k=2，所以氧樂果標準溶液的不確定度為：

2.2.4 標準溶液配制引入的相對標準不確定度urel（SP）

標準使用溶液配制過程引入的不確定度主要包括定容的容量瓶、移液槍和溫度引入的不確定度，配制溶液過程中用到的容量瓶（10 mL），移液槍（1 000 μL）。 具體計算如下：容量瓶的允許誤差為±0.02 mL，按矩形分布計，則容量瓶引入的校準不確定度為：

配制標準使用溶液過程中環(huán)境溫度變化按±4 ℃計，視為矩形分布，則容量瓶由溫度變化所帶來的不確定度為

按照檢定規(guī)程，使用1 000 μL 移液器時，移取1 000 μL 溶液時，移液器容量允差為±1.0%，測量重復(fù)性為0.5%，按均勻分布估算，則不確定度為：

氧樂果標準溶液配制過程中使用了容量瓶和移液槍各7 次。因此，總不確定度為：

2.2.5 標準工作曲線擬合引入的相對標準不確定度urel（C）

氧樂果標準系列各質(zhì)量濃度點及對應(yīng)的峰面積（0.005，862；0.01，1 568；0.02，3 100；0.05，7 452；0.10，14 560），利用最小二乘法擬合標準曲線線性回歸方程Y=144 417X+158.98，其中斜率a=144 417，截距b=158.98，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9。

按1.2.2 方法平行處理試樣7 份，上機測試，由上述線性方程得試樣中氧樂果含量平均值C=0.006 29 mg/mL，由標準曲線擬合引入的標準不確定度為式：

式中：SR——標準殘差；

p——樣品測量次數(shù)，7 次；

n——標準曲線中所有濃度點的測量次數(shù)5 次；，

Ci——標準工作液質(zhì)量濃度；

yi——與ci對應(yīng)的峰面積。

因此，標準工作曲線擬合引入的相對標準不確定度為：

2.2.6 測量重復(fù)性引入的不確定度urel（X）

重復(fù)性和回收率測定見表2。

表2 重復(fù)性和回收率測定（n=7)

平行制備7 份樣品溶液進行測定，則樣品重復(fù)測量引入的不確定度為：

2.2.7 回收率引入的相對標準不確定度urel（R）

回收率結(jié)果見表2，采用A 類不確定度評定，由貝塞爾公式計算回收率R 的標準偏差S（R），則由回收率引入的相對標準不確定度為：

2.3 不確定度結(jié)果計算

2.3.1 合成相對標準不確定度

按如下公式合成各分量，即得液相色譜法質(zhì)譜法測定茶葉中氧樂果殘留量過程的相對合成標準不確定度：

2.3.2 合成標準不確定度

茶葉樣品重復(fù)測定的氧樂果平均值為0.046 mg/kg，其合成標準不確定度uc（W）為：

uc（W）=W×urel（W）=0.046 mg/kg×0.066 8=0.003 07 mg/kg.

2.3.3 擴展不確定度的計算

根據(jù)測量不確定度評定指南對普通實驗室的要求，在95%置信水平下取包含因子k=2，即得液相色譜質(zhì)譜法測定茶葉中氧樂果殘留量過程的擴展不確定度U 為：

U=k×uc（W）=2×0.003 07 mg/kg=0.006 mg/kg.

2.4 測定結(jié)果

通過液相色譜質(zhì)譜法測定，該茶葉樣品中氧樂果殘留量結(jié)果為：

3 結(jié)論

采用GB 23200.121—2021《植物源食品中331 種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》對茶葉中氧樂果農(nóng)藥殘留量進行檢測，并依據(jù)JJF 1059.1—2012《測量不確定度評定與表示》 規(guī)范， 評定了測量過程中的不確定度。結(jié)果表明，影響茶葉中氧樂果農(nóng)藥殘留測量結(jié)果的主要不確定度分量為標準工作曲線擬合、標準溶液配制、待測樣品溶液定容引入的相對標準不確定度。因此，在采用GB 23200.121—2021 測定茶葉中的農(nóng)藥殘留量時， 對于標準工作曲線，應(yīng)根據(jù)實際情況選擇適合的濃度點，適當縮小濃度范圍，或者在定量軟件中調(diào)整標準曲線的權(quán)重，獲得更好的擬合結(jié)果；保證標準溶液配制時環(huán)境溫度的穩(wěn)定，并規(guī)范使用移液管和容量瓶；嚴格控制樣品前處理的各個步驟，盡可能操作精確， 減少因定容溶液等引入的不確定度。