水牛ACSL基因家族全基因組及表達(dá)分析

梁莎莎 于農(nóng)淇 鄢勝飛 盧瑛 李廳廳 黃健 譚正準(zhǔn) 李輝 黃榮春 潘偉軍 覃廣勝

摘要 為鑒定水牛長(zhǎng)鏈脂酞輔酶A合成酶（long-chain fatty Acyl-CoA synthetases，ACSLs）的家族成員并探究該基因家族在泌乳方面的功能，通過(guò)生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)水牛ACSL基因家族進(jìn)行了motif、基因結(jié)構(gòu)分析、共線性分析、不同物種系統(tǒng)進(jìn)化分析，運(yùn)用qPCR技術(shù)檢測(cè)ACSLs在不同組織的mRNA表達(dá)量。結(jié)果表明：水牛ACSL基因家族共有5個(gè)家族成員并分別命名為bbu.ACSL1、bbu.ACSL3、bbu.ACSL4、bbu.ACSL5和bbu.ACSL6。染色體分布情況結(jié)果顯示：bbu.ACSL1位于1號(hào)染色體，bbu.ACSL3位于2號(hào)染色體，bbu.ACSL4位于25號(hào)染色體，bbu.ACSL5位于23號(hào)染色體，bbu.ACSL6位于9號(hào)染色體。這5個(gè)ACSL氨基酸數(shù)在699～722 aa，所有蛋白的等電點(diǎn)除ACSL6外均大于7.00。Motif分析發(fā)現(xiàn)，除ACSL3和ACSL4缺少motif8外，其余均含有預(yù)測(cè)出的Motif 1～10，且排序相同。物種內(nèi)共線性分析結(jié)果顯示，水牛和普通牛中均不存在串聯(lián)重復(fù)和片段重復(fù)，種間共線性分析結(jié)果顯示，水牛ACSL與普通牛ACSL存在4對(duì)片段重復(fù)基因。不同物種ACSL系統(tǒng)發(fā)育分析顯示，ACSL基因家族具有較高的保守性，其中水牛與普通牛和牦牛的聚類更為相近。不同組織表達(dá)量分析發(fā)現(xiàn)ACSL1、ACSL3在乳腺組織的mRNA表達(dá)量高于其他組織，ACSL6在大腦的mRNA表達(dá)量高于其他組織，ACSL4在肺部的mRNA表達(dá)量高于其他組織，ACSL5在肝的mRNA表達(dá)量高于其他組織。根據(jù)RNA-seq 測(cè)序結(jié)果分析不同泌乳時(shí)期表達(dá)量結(jié)果顯示，ACSL1在整個(gè)泌乳期均有高表達(dá)量，尤其是在泌乳第50、140和280天。ACSL3和ACSL5在泌乳第7天和第50天高表達(dá)，但隨著泌乳天數(shù)增加，表達(dá)量降低。ACSL4和ACSL6在泌乳第7天表達(dá)量最高，但在整個(gè)泌乳期的表達(dá)量均遠(yuǎn)低于該家族的其他3個(gè)成員。

關(guān)鍵詞 水牛； ACSL； 基因結(jié)構(gòu)； 共線性； 系統(tǒng)發(fā)育；乳腺組織；表達(dá)量

中圖分類號(hào) S823.8+3? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2023）14-0079-07

作者簡(jiǎn)介 梁莎莎（1992—），女，廣西南寧人，助理研究員，從事水牛分子遺傳學(xué)研究。*通信作者，研究員，從事動(dòng)物育種與繁殖研究。

收稿日期 2022-08-08

水牛以耐粗飼而著稱，具有適應(yīng)性強(qiáng)、耐高溫高濕、抗病力強(qiáng)和易飼養(yǎng)等特點(diǎn)［ 1］。除了作為役畜外，水牛還可提供奶類和肉類，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值［ 2］。水牛奶乳汁濃厚，奶質(zhì)優(yōu)良，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有較高的乳脂肪（8.0%）、乳蛋白（4.5%）、不飽和脂肪酸比例和較低的磷脂和膽固醇水平［ 3］，有“奶中之王”之稱。然而，水牛平均產(chǎn)奶量遠(yuǎn)低于荷斯坦普通牛，奶產(chǎn)量?jī)H占世界牛奶產(chǎn)量的13%［ 4］。因此，提高水牛泌乳性能至關(guān)重要，而挖掘與產(chǎn)奶性狀相關(guān)的候選基因有助于改善水牛泌乳性能。

長(zhǎng)鏈脂酞輔酶A合成酶家族（longchain fatty Acyl-CoA synthetases，ACSLs）是哺乳動(dòng)物利用脂肪酸活化催化生成酯酰輔酶A過(guò)程中所必需的酶［ 5］。目前已發(fā)現(xiàn)，哺乳動(dòng)物ACSLs基因有5種亞型，分別為ACSL1、ACSL3、ACSL4、ACSL5和ACSL6［ 6-7］。研究表明，ACSLs基因在甘油三酯、磷脂和膽固醇合成及脂肪酸代謝中具有重要作用［ 8］。ACSL1基因可以提高甘油三酯中油酸的沉積，增加脂肪在細(xì)胞內(nèi)的沉積量［ 5］，對(duì)牛脂肪細(xì)胞中的多不飽和脂肪酸合成具有積極調(diào)控作用［ 9］。在中國(guó)紅草原牛中，脂肪細(xì)胞分化過(guò)程誘導(dǎo)ACSL3，其過(guò)表達(dá)可促進(jìn)脂滴甘油三酯含量的增加［ 10］。ACSL4被發(fā)現(xiàn)的功能包括細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)儲(chǔ)存［ 11］，膽固醇從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)運(yùn)輸?shù)骄€粒體［ 12］，有研究發(fā)現(xiàn)，ACSL4多態(tài)性與不同豬品種的IMF含量和脂肪酸組成有關(guān)［ 13］。ACSL5存在于各種組織中，包括棕色脂肪組織、骨骼肌、肝臟和大腦，有發(fā)揮促進(jìn)脂肪酸在合成代謝脂類和分解代謝β-氧化通路之間的通道作用［ 14］。ACSL6最初在大鼠大腦中被發(fā)現(xiàn)［ 15］，ACSL6缺乏癥會(huì)破壞正常的腦功能和精子發(fā)生，小鼠缺乏ACSL6會(huì)表現(xiàn)出運(yùn)動(dòng)功能障礙和星形膠質(zhì)細(xì)胞增生增加［ 16］。

大量研究表明，ACSLs對(duì)哺乳動(dòng)物的許多代謝過(guò)程中發(fā)揮著不可或缺的作用，特別是脂質(zhì)代謝方面，然而目前關(guān)于水牛ACSL基因家族的研究較少。筆者以水?；蚪M為參考，從全基因組水平鑒定水牛的ACSL家族成員，分析該家族成員的蛋白序列特征、motif分布、外顯子-內(nèi)含子結(jié)構(gòu)、染色體定位、共線性關(guān)系、系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系，運(yùn)用qPCR和RNA-seq技術(shù)檢測(cè)水牛ACSL基因家族在不同組織和不同泌乳時(shí)期的表達(dá)量差異，以期為后續(xù)深入挖掘水牛ACSL基因家族的功能提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)水牛組織cDNA（心、肝、肺、腎、胃、乳腺和大腦）均來(lái)自廣西水牛研究所，品種為尼里水牛，月齡約48個(gè)月，體重約500 kg，雌性，泌乳期3頭。

1.2 主要試劑和儀器設(shè)備 主要試劑? PerfectStart Green qPCR SuperMix購(gòu)自北京全式金公司。主要儀器? NanoDrop2000紫外分光光度計(jì)（Gene，USA）和Roche Lightcycler 480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

1.3 試驗(yàn)數(shù)據(jù) 以水牛及其相關(guān)物種的全基因組序列為基礎(chǔ)進(jìn)行分析。全基因組數(shù)據(jù)包括全基因組的基因序列、蛋白質(zhì)序列和基因注釋文件。全基因組數(shù)據(jù)源自NCBI基因組數(shù)據(jù)庫(kù)（表1）。

1.4 水牛ACSL基因家族成員蛋白序列的獲得

登陸UniProt（https：∥www.uniprot.org/）搜索ACSL基因家族的蛋白質(zhì)序列，勾選所有該家族不同物種的可靠蛋白序列，下載保存并使用MEGA 7.0軟件比對(duì)其同源性。登陸NCBI下載水牛完整蛋白序列，再使用hmmbuild和hmmsearch軟件構(gòu)建HMM模型，并搜索序列庫(kù)找到水牛ACSL基因家族所有的蛋白序列，最后使用TBtools軟件將序列提取出來(lái)。

1.5 水牛ACSLs蛋白序列特征分析

使用ProtScale（https：∥web.expasy.org/protscale/）計(jì)算水牛ACSL家族蛋白質(zhì)分子量和等電點(diǎn)；使用TBtools軟件中的Table Row Extract or Filter插件從水牛和普通牛的基因注釋文件中提取ACSLs染色體分布信息。

1.6 水牛ACSLs蛋白質(zhì)保守基序分析及基因結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

使用MEME（http：∥memesuite.org/tools/meme）和GSDS（http：∥gsds.cbi.pku.edu.cn/）分析水牛ACSL家族蛋白質(zhì)保守基序（motif）和基因結(jié)構(gòu)；使用Pfam（http：∥pfam.xfam.org/）搜索每個(gè)motif所屬的結(jié)構(gòu)域；使用MEGA 7.0構(gòu)建水牛ACSL家族系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)；最后使用TBtools軟件將水牛ACSLs系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)和motif分析結(jié)果整合到一起進(jìn)行可視化。

1.7 水牛和普通牛ACSLs共線性分析

為了探討ACSL基因家族的進(jìn)化進(jìn)展，使用TBtools軟件中的one step MCscanX插件對(duì)水牛和普通牛的種內(nèi)及種間進(jìn)行共線性分析，使用Advanced Circos和Dual Systeny Plot插件繪制物種內(nèi)及種間共線性圖。

1.8 不同物種ACSLs系統(tǒng)發(fā)育分析

為揭示水牛與其近緣物種ACSLs之間的進(jìn)化關(guān)系，使用MEGA 7.0構(gòu)建水牛、普通牛、牦牛、山羊、綿羊、馬和駱駝的ACSL家族系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，最后使用Adobe Illustrator CS6對(duì)系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)進(jìn)行美化。

1.9 水牛ACSLs表達(dá)分析

1.9.1 不同組織表達(dá)量檢測(cè)及分析。

使用Primer 3.0設(shè)計(jì)水牛ACSL基因家族qPCR引物，引物序列見(jiàn)表2。將水牛組織（心、肝、肺、腎、胃、乳腺和大腦）的cDNA 稀釋至70～80 ng/μL，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)ACSL基因家族在不同組織中的表達(dá)情況，以GAPDH作為內(nèi)參。反應(yīng)體系為20 μL，其中2 x PerfectStart Green qPCR SuperMix 10.0 μL，Rnase water 8.2 μL，上下游引物各0.4 μL，cDNA 1.0 μL；反應(yīng)條件：94 ℃ 預(yù)變性30 s，94 ℃ 5 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 10 s，40個(gè)循環(huán)。運(yùn)用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量，采用Duncans新復(fù)極差法對(duì)不同組織表達(dá)量進(jìn)行多重比較，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

1.9.2 基于RNA-seq進(jìn)行不同泌乳時(shí)期表達(dá)分析。

為揭示ACSLs不同成員在水牛乳腺組織中不同泌乳時(shí)期的表達(dá)量差異，筆者選用4個(gè)泌乳時(shí)期：泌乳第7天（7 d）、第50天（50 d）、第140天（140 d）和第280天（280 d），每個(gè)時(shí)期2頭，活體采集共8頭摩拉水牛乳腺組織進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，測(cè)序結(jié)果已上傳到NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)，登錄號(hào)：PRJNA480718（SRR7523532～SRR7523538）。

ACSLs表達(dá)量分析：使用sratoolkit將所有RNA-seq原始sra文件轉(zhuǎn)換為fastq格式。運(yùn)用kallisto構(gòu)建水牛ACSL基因家族index庫(kù)，并分別比對(duì)8個(gè)RNA-seq結(jié)果，進(jìn)行量化分析，計(jì)算ACSLs在不同RNA-seq中的TPM（Transcripts Per Million）值，由TPM值來(lái)表示基因的表達(dá)量，計(jì)算每組的平均值后，使用TBtools軟件中的Heatmap插件對(duì)其進(jìn)行可視化，繪制表達(dá)量熱圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 水牛ACSL蛋白序列的獲得及特征分析

對(duì)水牛基因組的蛋白序列進(jìn)行搜索，共鑒定得到5條水牛ACSL蛋白的編碼基因，命名為bbu.ACSL1、bbu.ACSL3、bbu.ACSL4、bbu.ACSL5和bbu.ACSL6。染色體分布情況結(jié)果顯示，bbu.ACSL1位于1號(hào)染色體，bbu.ACSL3位于2號(hào)染色體，bbu.ACSL4位于25號(hào)染色體，bbu.ACSL5位于23號(hào)染色體，bbu.ACSL6位于9號(hào)染色體。bbu.ACSL6的氨基酸數(shù)為722 aa，最短的是bbu.ACSL1，為699 aa。所有蛋白的等電點(diǎn)除了bbu.ACSL6，均大于7.00（表3）。

2.2 水牛ACSLs motif分析和基因結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

根據(jù)水牛ACSLs系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)結(jié)果，可將水牛ACSL家族基因分為3組，即ACSL1和ACSL6為一組，ACSL5單獨(dú)為一組，ACSL3和ACSL4為一組。

蛋白保守基序結(jié)果顯示，共預(yù)測(cè)出10個(gè)保守的motifs（命名為Motif 1～10）。這10個(gè)保守motifs的分布見(jiàn)圖1，氨基酸序列信息見(jiàn)表4。由圖1可知，水牛ACSL家族成員中，除了ACSL3和ACSL4外缺少motif8外，其余均含有預(yù)測(cè)出的Motif 1～10且排序相同。使用Pfam分析每個(gè)motif后發(fā)現(xiàn)，除了motif7和motif8外，均含有AMP-binding結(jié)構(gòu)域。基因結(jié)構(gòu)結(jié)果顯示，水牛ACSL1和ACSL5基因有23個(gè)外顯子，22個(gè)內(nèi)含子，ACSL3有15個(gè)外顯子，14個(gè)內(nèi)含子，ACSL4有18個(gè)外顯子，17個(gè)內(nèi)含子，ACSL6有24個(gè)外顯子和23個(gè)內(nèi)含子。

2.3 水牛和普通牛ACSLs共線性分析

為了研究ACSL家族的進(jìn)化進(jìn)展，對(duì)水牛和普通牛的種內(nèi)及種間進(jìn)行共線性分析（圖2）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在水牛和普通牛中均未發(fā)現(xiàn)串聯(lián)重復(fù)基因?qū)?。種間共線性分析結(jié)果表明，水牛ACSL與普通牛ACSL存在4對(duì)片段重復(fù)基因，分別是bbu.ACSL3-bta.ACSL3、bbu.ACSL6-bta.ACSL6、bbu.ACSL5-bta.ACSL5和bbu.ACSL4-bta.ACSL4（圖2、3）。

2.4 不同物種ACSLs系統(tǒng)發(fā)育分析

為揭示水牛與水牛近緣物種ACSLs之間的進(jìn)化關(guān)系，分別獲取了普通牛（Bos taurus）、牦牛（Bos mutus）、山羊（Capra hircas）、綿羊（Ovis aries）、馬（Equus caballus）和駱駝（Camelus ferus）的ACSL家族蛋白序列，并構(gòu)建了進(jìn)化樹(shù)（圖4）。根據(jù)進(jìn)化樹(shù)信息，發(fā)現(xiàn)所有的基因劃分為大類，分別是Group Ⅰ、Group Ⅱ和Group Ⅲ。Group Ⅰ 包括所有上述物種的ACSL1和ACSL6，Group Ⅱ只包括ACSL5，GroupⅢ包括ACSL3和ACSL4，其中水牛ACSL家族基因與普通牛和牦牛的聚類更為相近。

2.5 水牛ACSLs不同組織表達(dá)量分析

為了探究水牛ACSLs的組織特異性，利用qPCR技術(shù)檢測(cè)了ACSLs在心、肝、肺、腎、胃、乳腺和大腦7個(gè)組織中的mRNA表達(dá)量，結(jié)果顯示（圖5），這5個(gè)ACSL基因在這7個(gè)組織中均有表達(dá)，其中ACSL1、ACSL3在乳腺組織中的mRNA表達(dá)量極顯著高于其他組織（P<0.01），ACSL6在乳腺組織中的mRNA表達(dá)量極顯著高于肺、肝、腎、胃、心、脂肪，ACSL3和ACSL6在大腦的mRNA表達(dá)量極顯著高于肝、心、胃、心、脂肪組織（P<0.01），ACSL4在肺部的mRNA表達(dá)量極顯著高于其他組織（P<0.01），ACSL5在肝的mRNA表達(dá)量極顯著高于其他組織（P<0.01）。

2.6 水牛ACSLs不同泌乳時(shí)期表達(dá)分析

在組織表達(dá)分析中，ACSL基因家族在水牛泌乳期組織中均有表達(dá)，為了進(jìn)一步探索ACSLs對(duì)水牛乳房發(fā)育及泌乳性能的作用，該試驗(yàn)選用4個(gè)泌乳時(shí)期：泌乳第7天（7 d）、第50天（50 d）、第140天（140 d）和第280天（280 d），每個(gè)時(shí)期2頭，活體采集共8頭摩拉水牛乳腺組織進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，分析了水牛ACSLs不同泌乳時(shí)期的表達(dá)量差異。TPM計(jì)算結(jié)果顯示，這5個(gè)ACSL基因在4個(gè)泌乳時(shí)期的乳腺組織中均有表達(dá)，其中ACSL1在整個(gè)泌乳期均有高表達(dá)量，尤其是在泌乳第50、140和280天。ACSL3和ACSL5在泌乳第7天和第50天高表達(dá)，但隨著泌乳天數(shù)增加，表達(dá)量降低。ACSL4和ACSL6在泌乳第7天表達(dá)量最高，但在整個(gè)泌乳期的表達(dá)量均遠(yuǎn)低于該家族的其他3個(gè)成員（表5、圖6）。

3 討論

該研究利用生物信息學(xué)技術(shù)在水牛全基因組序列中鑒定出5個(gè)ACSL家族成員，根據(jù)它們的進(jìn)化關(guān)系分成了3組。這5個(gè)ACSL蛋白長(zhǎng)度在699～722 aa，所有蛋白的等電點(diǎn)除ACSL6外均大于7。說(shuō)明除了ACSL6外，其余家族成員均為堿性蛋白質(zhì)。Motif分析發(fā)現(xiàn)，除ACSL3和ACSL4外缺少motif8外，其余均含有預(yù)測(cè)出的Motif 1～10且排序相同，說(shuō)明水牛ACSL基因家族成員蛋白功能相似。

在遺傳進(jìn)化過(guò)程中，串聯(lián)復(fù)制和片段復(fù)制有助于加速基因家族的擴(kuò)增和基因組進(jìn)化機(jī)制，為獲取新的基因功能提供了可能［ 17］，而在進(jìn)化過(guò)程中，親緣關(guān)系越近，共線性越好。該次對(duì)水牛和奶牛的種內(nèi)共線性分析中，均未發(fā)現(xiàn)串聯(lián)重復(fù)和片段重復(fù)，但是水牛和奶牛種間共線性關(guān)系很高并且發(fā)現(xiàn)了4對(duì)片段重復(fù)ACSL基因，說(shuō)明兩者ACSL基因家族的親緣關(guān)系接近［ 18］。

不同物種ACSL系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果顯示，不同物種的直系同源ACSL基因聚類在一起，可以看出ACSL基因家族具有較高的保守性，其中水牛與奶牛和牦牛的聚類更為接近。在進(jìn)化中的這種高度保守，也暗示了其在哺乳動(dòng)物中具有重要的生物學(xué)功能。

ACSL家族包括ACSL1、ACSL3、ACSL4、ACSL5和ACSL6 5種不同的異構(gòu)體，這些蛋白質(zhì)具有不同的亞細(xì)胞定位、脂肪酸底物和組織特異性。長(zhǎng)鏈脂肪酸在腦內(nèi)的代謝及其與信號(hào)分子（如甘油二?；蚅PA）和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)成分（包括髓鞘）的結(jié)合，需要ACSLs的激活，其中ACSL3和ACSL6是大腦中主要的ACSL亞型［ 19］。除了大腦，BU等［ 20］研究發(fā)現(xiàn)，ACSL3是介導(dǎo)肝臟脂肪合成的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的新角色。DONG等［ 21］研究發(fā)現(xiàn)，高果糖飲食的倉(cāng)鼠肝臟中ACSL3 的mRNA和蛋白表達(dá)明顯減少。ACSL4被發(fā)現(xiàn)與人的肺部功能相關(guān)，鐵凋亡和ACSL4的抑制可通過(guò)減少脂質(zhì)過(guò)氧化和增加谷胱甘肽和GPX4水平來(lái)減輕肺缺血再灌注（IR）誘導(dǎo)的肺損傷中的鐵質(zhì)損傷［ 22］。Lewin等［ 23］研究發(fā)現(xiàn)，大鼠禁食48 h后，肝臟線粒體ACSL5活性增加。尼里水牛不同組織mRNA表達(dá)量結(jié)果顯示，ACSL3和ACSL6在大腦的mRNA表達(dá)量極顯著高于其他組織（P<0.01）（除了ACSL3大腦低于乳腺組織），ACSL4在肺部的mRNA表達(dá)量極顯著高于其他組織（P<0.01），ACSL5在肝臟的mRNA表達(dá)量顯著高于其他組織（P<0.01）。表明在尼里水牛中，ACSL3和ACSL6可能在調(diào)節(jié)大腦，ACSL4調(diào)節(jié)肺部，ACSL5調(diào)節(jié)肝臟的脂肪酸代謝方面發(fā)揮重要作用。而肝臟是脂質(zhì)和脂肪酸代謝的重要部位，游離脂肪酸在肝臟中主要有3種代謝途徑，分別是完全氧化合成H2O和CO2；不完全氧化生成酮體及再酯化合成甘油三酯。因此，進(jìn)入肝臟的游離脂肪酸超過(guò)其氧化代謝速率時(shí)，代謝發(fā)生異常，游離脂肪酸部分再酯化成甘油三酯，從而誘發(fā)脂肪積累，使肝臟發(fā)生病變［ 24］。因此，研究ACSL3和ACSL5基因?qū)λ５闹|(zhì)和脂肪酸代謝具有重要意義。然而ACSLs在摩拉水牛乳腺組織不同泌乳時(shí)期的表達(dá)量差異與使用尼里水牛組織進(jìn)行的表達(dá)量檢測(cè)結(jié)果有所不同。在摩拉水牛中，ACSL5在泌乳第7天和第50天高表達(dá)，表達(dá)量隨著泌乳天數(shù)增加而降低，但ACSL4和ACSL6在整個(gè)泌乳期的表達(dá)量均遠(yuǎn)低于該家族的其他3個(gè)成員。這表明在不同水牛品種中，即使是相同的ACSL基因家族成員，對(duì)其泌乳性能也可能存在著不同的作用效果。

乳脂是一種高品質(zhì)的脂肪，由甘油三酯（TAG）、二酰甘油、磷脂和丁酸等組成，其中甘油三酯的含量能達(dá)到總?cè)橹?8%。甘油三酯在細(xì)胞內(nèi)會(huì)聚集成大脂滴，以乳脂球的形式分泌到牛奶中，因此通常以甘油三酯的含量來(lái)研究牛奶中的乳脂含量［ 25］。脂肪酸在乳腺中是被用來(lái)合成乳脂的底物，短鏈脂肪酸（C4-C8）和中鏈脂肪酸（C8-C14）幾乎完全是在乳腺上皮細(xì)胞中從頭合成的，而長(zhǎng)鏈脂肪酸（>C16）是從血液中直接攝取的，Cl6脂肪酸在2種來(lái)源中各占50%左右。大部分長(zhǎng)鏈脂肪酸（LCFA）主要通過(guò)ACSLl活化成長(zhǎng)鏈酰基輔酶A穿過(guò)細(xì)胞膜，然后長(zhǎng)鏈酰基輔酶A將LCFA帶入細(xì)胞后活化再利用［ 26］。ACSL3能促進(jìn)卵磷脂的合成和細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成，有助于維持脂質(zhì)平衡［ 27］。ACSL6通過(guò)將CoA與脂肪酸連接來(lái)激活脂肪酸，對(duì)具有C16-C20骨架的飽和脂肪酸以及多不飽和脂肪酸具有相同作用，ACSL6還能參與小脂質(zhì)滴的生物發(fā)生過(guò)程及TAG和膽固醇酯的形成過(guò)程［ 28-29］，這些對(duì)乳脂的形成至關(guān)重要。此外，LIANG等［ 30］在荷斯坦奶牛中發(fā)現(xiàn)了6個(gè)ACSL1基因的SNPs，它們?cè)谝欢ǔ潭壬吓c產(chǎn)奶量、乳脂含量、乳蛋白含量和體細(xì)胞評(píng)分（SCS）有關(guān)。Li等［ 31］研究發(fā)現(xiàn)，ACSL3是奶牛乳脂肪酸性狀相關(guān)的20個(gè)新的候選基因中的關(guān)鍵基因之一。呂艷濤［ 32］研究發(fā)現(xiàn)，泌乳期母豬乳腺中ACSL3在家族成員中基因表達(dá)量最高，且隨著泌乳的進(jìn)行mRNA表達(dá)量顯著升高。王夢(mèng)巖等［ 33］研究發(fā)現(xiàn)，ACSL5基因可能與中國(guó)荷斯坦奶牛的乳蛋白代謝相關(guān)，這些研究均表明ACSLs與哺乳動(dòng)物乳脂合成密切相關(guān)。而深入挖掘ACSL基因家族的功能也將有助于改善水牛的產(chǎn)奶性狀，優(yōu)化水牛乳制品的品質(zhì)，對(duì)今后提高水牛乳業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益具有重要意義。

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