提高山區(qū)肉牛凍精人工授精受胎率的方法

楊 延

（湖南省綏寧縣長(zhǎng)鋪?zhàn)用缱宥弊遴l(xiāng)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，湖南 邵陽 422600）

中國(guó)肉牛業(yè)發(fā)展過程中，供需不平衡問題較為顯著。雖然肉牛存欄量呈現(xiàn)出穩(wěn)定增長(zhǎng)的態(tài)勢(shì)，但仍無法滿足市場(chǎng)需求。中國(guó)每年肉牛產(chǎn)量高達(dá)600萬t 以上，但每年還需從國(guó)外進(jìn)口200 萬t 左右的牛肉，肉牛養(yǎng)殖發(fā)展空間大。為增強(qiáng)肉牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展的穩(wěn)定性，解決部分地區(qū)凍精授精應(yīng)激大、成本高、人工不足、交通不便等問題，部分地區(qū)采取上門提供凍精人工授精的方式，通過凍精服務(wù)改良，提高凍精人工授精受胎率，推動(dòng)肉牛養(yǎng)殖業(yè)健康、持續(xù)發(fā)展。

1 山區(qū)肉牛養(yǎng)殖中凍精人工授精分析

在市場(chǎng)需求刺激下，中國(guó)肉牛養(yǎng)殖業(yè)不斷呈現(xiàn)出規(guī)模化發(fā)展趨勢(shì)，部分地區(qū)散養(yǎng)戶數(shù)量減少，建設(shè)了一些規(guī)?；B(yǎng)牛場(chǎng)，誕生了部分養(yǎng)牛大戶。在青貯技術(shù)逐步推廣與應(yīng)用、國(guó)家環(huán)境保護(hù)政策推行下，肉牛養(yǎng)殖主要采用圈養(yǎng)方式。由于傳統(tǒng)授精方法肉牛受胎率低，采用凍精人工授精方法，不僅能節(jié)約授精成本，還能實(shí)現(xiàn)肉牛養(yǎng)殖的精準(zhǔn)繁育［1］。然而部分山區(qū)凍精冷配點(diǎn)距離較遠(yuǎn)，驅(qū)趕適齡母牛到凍精冷配點(diǎn)授精易產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，且需付出較高配種時(shí)間及資金成本，導(dǎo)致部分地區(qū)肉牛凍精受胎率較低，制約了肉牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。雖然部分地區(qū)已采取人工上門服務(wù)的方式，為部分山區(qū)養(yǎng)殖戶實(shí)施凍精授精服務(wù)，然而在凍精存儲(chǔ)管理、人工輸精操作等原因影響下，人工受胎率仍不高，需要結(jié)合影響凍精人工授精受胎率的影響因素，探尋具體的改良措施，有效提高凍精人工受胎率。

2 肉牛凍精改良受胎率的主要影響因素

2.1 飼養(yǎng)管理方式欠佳、母牛營(yíng)養(yǎng)不良

部分山區(qū)的養(yǎng)殖戶專業(yè)知識(shí)不扎實(shí)，對(duì)母牛配種時(shí)機(jī)的把控能力不強(qiáng)，肉牛養(yǎng)殖中所采用的飼養(yǎng)管理方式也不科學(xué)，導(dǎo)致肉牛因營(yíng)養(yǎng)不均衡而出現(xiàn)了發(fā)情期提前或延后的現(xiàn)象，甚至部分母牛長(zhǎng)時(shí)間不發(fā)情，或是配種成功率低，導(dǎo)致肉牛凍精人工授精的受胎率受到了影響［2］。母牛營(yíng)養(yǎng)狀況決定著受胎率的高低，所提供的飼草量不充足，飼料營(yíng)養(yǎng)成分不均衡，導(dǎo)致母牛體內(nèi)礦物質(zhì)不足或缺少維生素等成分降低母牛機(jī)體免疫力，影響母牛的卵巢功能，因卵巢靜止、變硬或出現(xiàn)囊腫等原因，導(dǎo)致母牛卵巢機(jī)能受損，從而出現(xiàn)母牛不發(fā)情現(xiàn)象，人工授精時(shí)受胎率下降。

2.2 輸精時(shí)間把控不準(zhǔn)、解凍及輸精操作不規(guī)范

肉牛凍精人工授精過程中，凍精的質(zhì)量、凍精解凍過程的規(guī)范性、解凍時(shí)間的長(zhǎng)短均會(huì)影響肉牛凍精人工授精的受胎率。母牛受胎能否成功，還與輸精時(shí)間的選擇是否正確、輸精技術(shù)是否規(guī)范存在直接關(guān)聯(lián)。部分地區(qū)凍精人工授精需要養(yǎng)牛戶將母牛驅(qū)趕至凍精冷配點(diǎn)授精，在山區(qū)交通因素影響下，錯(cuò)過母牛發(fā)情期，從而錯(cuò)失最佳的輸精時(shí)間。在經(jīng)過遠(yuǎn)距離行走后，母牛體力消耗大，排卵期可能出現(xiàn)異常現(xiàn)象，若此時(shí)強(qiáng)行輸精，會(huì)對(duì)母牛子宮產(chǎn)生損傷，甚至導(dǎo)致授精失敗。部分地區(qū)在轉(zhuǎn)移凍精時(shí)，凍精離開液氮的時(shí)間過長(zhǎng)，或是解凍凍精時(shí)，存在操作失誤或解凍溫度及時(shí)間不適合等問題，均會(huì)降低凍精的活性，在輸精時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)精液外溢或數(shù)量不足等問題，影響凍精人工授精的受胎率。

2.3 母牛體質(zhì)不佳、患有多種疾病

母牛的身體素質(zhì)不佳，存在先天性或后天性缺陷，如子宮發(fā)育畸形或子宮發(fā)育不良等問題，或母牛卵巢先天較小或子宮頸口閉鎖，這些繁殖性疾病將會(huì)導(dǎo)致母牛難以受胎［3］。母牛身體過胖或過瘦影響其排卵功能的正常發(fā)揮，也會(huì)降低凍精人工授精的受胎率。母?；加凶訉m炎、陰道炎或卵巢囊腫等疾病，會(huì)對(duì)其排卵、輸精產(chǎn)生影響，部分母牛雖能正常輸精，但授精過程不順暢，導(dǎo)致受胎后無法正常發(fā)育，妊娠過程中出現(xiàn)死胎等現(xiàn)象。

3 提高山區(qū)肉牛凍精人工授精受胎率的方法

3.1 優(yōu)化肉牛飼養(yǎng)管理、加強(qiáng)母牛營(yíng)養(yǎng)均衡性

由于母牛攝取營(yíng)養(yǎng)是否充足、均衡與母牛配種受胎率存在關(guān)聯(lián)，因而凍精人工授精時(shí)，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理是提高受胎率的重要方法。首先要保障母牛營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)充足，并要均衡搭配蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)以及維生素等各類營(yíng)養(yǎng)成分，以免母牛的繁殖性能受到影響。母牛飼養(yǎng)過程中，要優(yōu)化飼養(yǎng)環(huán)境，特別是夏季高溫時(shí)要加強(qiáng)牛舍溫度調(diào)控，避免母牛由于溫度過高而產(chǎn)生熱應(yīng)激反應(yīng)，影響母牛正常排卵，導(dǎo)致母牛出現(xiàn)遲配或漏配現(xiàn)象，降低母牛凍精人工授精的受胎率。還需要加強(qiáng)母牛繁殖管理，對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)肉牛群體的結(jié)構(gòu)進(jìn)行合理優(yōu)化，一旦發(fā)現(xiàn)母牛繁殖能力不佳應(yīng)立即淘汰，并及時(shí)引進(jìn)或培育后備青年母牛，且要科學(xué)制定肉牛凍精人工授精配種計(jì)劃，做到肉牛生產(chǎn)管理的規(guī)范化、有序化開展。

3.2 加強(qiáng)肉牛凍精人工授精過程控制、提升技術(shù)操作規(guī)范性

3.2.1 保證凍精質(zhì)量 凍精人工授精中，凍精質(zhì)量決定著母牛受胎率，提高凍精人工授精受胎率需要加強(qiáng)凍精質(zhì)量管理。首先要做好前期準(zhǔn)備工作，凍精引進(jìn)地應(yīng)為國(guó)家正規(guī)供精站，并且需要按照本地要求嚴(yán)格篩選種牛凍精。凍精人工授精時(shí)輔助材料需要從正規(guī)生產(chǎn)單位引進(jìn)，符合規(guī)定要求。根據(jù)中國(guó)凍精質(zhì)量規(guī)定，優(yōu)質(zhì)凍精的標(biāo)準(zhǔn)是解凍活力高于35%、畸形率低于20%，低于該標(biāo)準(zhǔn)的凍精不得引進(jìn)、存儲(chǔ)與利用［4］。通過加強(qiáng)凍精質(zhì)量控制，為母牛受胎率提供優(yōu)質(zhì)精子。

3.2.2 加強(qiáng)凍精存儲(chǔ)管理

1）定期清洗液氮罐。為避免精子存儲(chǔ)過程中活性降低或遭到病菌侵襲，應(yīng)在存儲(chǔ)凍精之前全面清洗液氮罐，安排專人管理液氮罐，做好真空抽氣閥、頸管等結(jié)構(gòu)保護(hù)，避免強(qiáng)力撞擊液氮罐，移動(dòng)液氮罐時(shí)不可在地上拖拽，應(yīng)離地搬運(yùn)，并且要做到輕拿輕放。每年至少清洗1 次液氮罐，以提高罐身的潔凈度，避免顆粒物進(jìn)入罐中導(dǎo)致凍精受到污染。清洗液氮罐時(shí)，需先將其中存儲(chǔ)的液氮倒出并放于其他液氮罐中，空罐靜置2 h，待罐內(nèi)溫度升高到規(guī)定要求后方可利用中性洗滌液清洗。

2）選擇合適的存儲(chǔ)空間及密封材料。存儲(chǔ)凍精的液氮罐應(yīng)放置于陰涼通風(fēng)處，確保存儲(chǔ)環(huán)境較為干燥，防止液氮罐被陽光直射，液氮罐應(yīng)存儲(chǔ)于單獨(dú)房間，避免溫度升高導(dǎo)致液氮?dú)饣?，或是影響工作人員的身體健康。工作人員不可在液氮罐存放空間吸煙或酗酒，避免精子受損而降低活性，導(dǎo)致母牛受胎率下降。存儲(chǔ)過程中，要對(duì)凍精活力進(jìn)行定期檢查。按照規(guī)定要求，精子存活率不得低于60%，若低于這一標(biāo)準(zhǔn)不可用于人工授精［5］。由于液氮?dú)饣篌w積會(huì)快速變大，最高可達(dá)到原來的650 倍左右，為防止液氮罐爆炸，需要采用透氣性強(qiáng)的材料密封液氮罐，禁止應(yīng)用密度較高的塑料膜薄，防止由于液氮罐內(nèi)部及外部氣壓不穩(wěn)定導(dǎo)致罐體爆炸。

3）做到液氮及時(shí)補(bǔ)充及管理。為保障凍精存活率達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，無論是細(xì)管凍精還是顆粒凍精均要完全浸泡在液氮內(nèi)，且要確保罐體內(nèi)液氮量充足，需要利用科學(xué)有效的方法測(cè)量液氮量，以確保液氮與凍精充分接觸。如先稱量液氮罐質(zhì)量，再稱量灌滿液氮后整個(gè)罐體的總質(zhì)量，在液氮消耗期間，每日稱量液氮罐質(zhì)量，了解液氮的日消耗量，若液氮量不足灌滿的30%，需要立即補(bǔ)充。同時(shí)，還可利用竹木棍作為測(cè)量工具，將之插入到液氮罐底部，查看竹木棍上結(jié)霜高度，確定液氮罐的液氮含量，以便于及時(shí)補(bǔ)充液氮，保證凍精質(zhì)量。由于凍精存儲(chǔ)時(shí)有較高的溫度要求，液氮溫度應(yīng)控制在-196 ℃左右，并做好標(biāo)記，以提高液氮罐管理的便利性。

3.2.3 控制好凍精解凍時(shí)間及溫度

凍精人工授精前，需要提前解凍，對(duì)精子存活數(shù)量與輸精規(guī)定是否相符進(jìn)行查驗(yàn)。若精子存活率不足60%，立即實(shí)施補(bǔ)精處理。凍精用36～40 ℃的溫水或解凍液進(jìn)行解凍，時(shí)間應(yīng)控制在5～10 s，凍精離開液氮的時(shí)間應(yīng)不超過10 s，若5 s 內(nèi)未完成從液氮罐中取出凍精的操作，應(yīng)重新將凍精在液氮中放置3 s 以上再取出［6］。解凍后，用餐巾紙包裹凍精，置于工作人員內(nèi)衣口袋中，利用體溫保存凍精，且需在2.5 h 內(nèi)完成人工輸精，避免精子活性降低，影響人工授精的受胎率。如果授精地距離較遠(yuǎn)，應(yīng)選用2～8 ℃的解凍液，可將授精時(shí)間延長(zhǎng)至3～7 h。用鑷子夾住凍精，在液氮中做預(yù)冷處理，之后快速取出放入溫度適宜的解凍液中，輕輕搖晃，以加快凍精解凍速度，用棉球擦干水分，確保解凍環(huán)境干燥，在危險(xiǎn)期過后，精子溫度達(dá)到5 ℃以上便可用于授精。

3.2.4 結(jié)合母牛發(fā)情及排卵狀況、掌控好人工輸精時(shí)間

1）確保母牛發(fā)情鑒定精準(zhǔn)性。為保障人工輸精受胎率的提高，需要做好母牛發(fā)情鑒定，確保母牛處于排卵期后方可實(shí)施人工輸精。通常采用外部觀察法，觀察母牛進(jìn)食狀況及爬跨行為、外陰是否有腫脹或黏液分泌現(xiàn)象，并觀測(cè)陰道黏液分泌量、排尿量、排尿頻率。母牛早期發(fā)情時(shí)，通常會(huì)維持4～6 h，發(fā)情母牛出現(xiàn)爬跨其他母?，F(xiàn)象，被爬跨母牛會(huì)逃跑、嗚叫，情緒不安。發(fā)情母牛陰戶出現(xiàn)輕微腫脹，陰道黏膜顏色偏粉紅，有大量透明、稀薄的黏液從母牛陰道處溢出，母牛出現(xiàn)叉開后肢、尾毛翹起行為［7］。處于發(fā)情旺盛期的母牛，發(fā)情時(shí)間會(huì)持續(xù)6～10 h，若其他母牛爬跨發(fā)情母牛，后者會(huì)張開后肢且靜立不動(dòng)。母牛爬跨其他母牛時(shí)，則會(huì)持續(xù)鳴叫、興奮，進(jìn)食量下降，糞尿排放量會(huì)增加，陰道黏膜出現(xiàn)潮紅現(xiàn)象，陰戶腫脹更加明顯，分泌黏液量較之前增加。處于發(fā)情后期的母牛，時(shí)間也會(huì)持續(xù)4～6 h，且尾部黏液逐漸干燥，陰戶腫脹程度有所減輕，陰道黏膜由潮紅轉(zhuǎn)為淡紅，鳴叫減少，進(jìn)食量逐漸恢復(fù)正常。

2）選擇最佳配種時(shí)間。做好母牛發(fā)情鑒定后，需要根據(jù)母牛排卵時(shí)間實(shí)施人工輸精操作。首先要選擇適合的輸精時(shí)間，根據(jù)精子及卵子的運(yùn)行速度，結(jié)合二者達(dá)到授精部位的時(shí)間分析，根據(jù)授精能力持續(xù)時(shí)間、母牛生殖道內(nèi)精子獲能時(shí)間綜合判定。結(jié)合實(shí)踐分析，通常需要在母牛發(fā)情6～12 h 內(nèi)完成凍精人工輸精操作［8］。如凌晨或清晨發(fā)情的母牛，需要在當(dāng)天下午之前完成配種輸精工作，上午發(fā)情的母牛，須在當(dāng)天傍晚之前完成輸精。下午發(fā)情母牛，在第二天上午之前必須完成人工輸精操作。為山區(qū)母牛做凍精人工輸精服務(wù)時(shí)，需提前溝通了解母牛發(fā)情的開始時(shí)間，了解母牛發(fā)情癥狀，確定最佳的配種輸精時(shí)間，并按時(shí)趕到養(yǎng)殖場(chǎng)，以確保在最佳時(shí)間完成配種輸精操作，提高母牛受胎率。

3.2.5 提升輸精技術(shù)操作規(guī)范性 輸精前，要對(duì)操作室進(jìn)行全面清潔，并提前開窗通風(fēng)。利用紫外線對(duì)操作室做消毒殺菌處理，以防止害蟲進(jìn)入，用濃度為0.1%的潔而滅溶液對(duì)操作室地面進(jìn)行噴灑消毒。用濃度為75%的乙醇對(duì)所有輸精器械做消毒處理，消毒后再用生理鹽水沖洗干凈。工作人員手上涂好潤(rùn)滑液，將左手五指合攏并攥握成錐形后，慢慢向母牛肛門內(nèi)插入，將直腸中的糞便清除，若直腸內(nèi)存在稀糞，立即用水清洗干凈后再繼續(xù)輸精。左手在陰道中觸膜到形似圓柱、較硬的組織結(jié)構(gòu)便是子宮頸，而后隔著腸壁將子宮頸握住，右手拿起輸精槍，保持傾斜向上，繞過尿道口向母牛陰道處平直插入到子宮頸外部，在雙手配合下，使輸精槍慢慢穿過子宮頸皺壁輪插入到子宮內(nèi)部5～6 cm，使輸精槍保持水平，慢慢輸精，輸精時(shí)間應(yīng)持續(xù)10 s左右。

3.3 加強(qiáng)疾病的科學(xué)防治

3.3.1 采取藥物療法改善后天不孕母牛發(fā)情狀況為提高肉牛凍精人工授精受胎率，需要及時(shí)淘汰患有先天不孕癥的母牛，后天不孕母牛除了可通過營(yíng)養(yǎng)調(diào)節(jié)，提升母牛受胎率之外，還需要結(jié)合實(shí)際情況采用相應(yīng)的治療措施。如發(fā)情持續(xù)時(shí)間較短且排卵速度快的母牛，可為其注射促卵泡生成素，加快其卵泡生成速度［9］。而處于發(fā)情前期的母牛，則可為其灌服八珍益母湯、催情散等中藥，或是注射孕酮、黃體酮等促發(fā)情西藥，應(yīng)用藥物促發(fā)情時(shí)，只選擇1 種藥物即可。

3.3.2 科學(xué)治療母牛生殖系統(tǒng)疾病 母牛若患有生殖道炎癥，可采用益母生化散治療，配種前，每日為其提供一劑藥灌服，持續(xù)用藥5 d 炎癥可消除。除中藥外，也可采用阿莫西林、雙黃連注射液混合藥劑，采用肌注療法給藥，添加劑量分別為5 g與40 mL。同時(shí)將50 mL 魚腥草混入400 萬單位青霉素中，注入母牛子宮內(nèi)，聯(lián)合施用可起到消除炎癥及預(yù)防疾病的功效。患有黏液性子宮內(nèi)膜炎的母牛，可采用濃度為0.1%的高錳酸鉀溶液每日清洗1 次子宮，再各取故子、芡實(shí)、香附40 g，加入30 g 黃柏與30 g 知母，煎后灌服，1 次/d，持續(xù)給藥3 次［10］?；加新殉材夷[疾病的可注射促黃體素、前列腺素等激素進(jìn)行治療。

4 小結(jié)

在肉牛養(yǎng)殖業(yè)中，凍精人工授精屬于重要的繁殖技術(shù)，有利于提高肉牛配種受胎率，保障肉牛養(yǎng)殖的穩(wěn)產(chǎn)、高產(chǎn)，驅(qū)動(dòng)肉牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的規(guī)模化、長(zhǎng)效化發(fā)展。為提高山區(qū)凍精人工授精受胎率，凍精改良過程中采用上門服務(wù)輸精方式，但人工授精操作過程中，母牛飼養(yǎng)管理及營(yíng)養(yǎng)供給情況、凍精存儲(chǔ)及利用的規(guī)范性、母牛體質(zhì)或疾病等因素均會(huì)影響肉牛凍精人工授精的質(zhì)量。需要優(yōu)化肉牛飼養(yǎng)管理、加強(qiáng)母牛營(yíng)養(yǎng)均衡性，保證凍精質(zhì)量、加強(qiáng)凍精存儲(chǔ)管理、控制好凍精解凍時(shí)間及溫度，結(jié)合母牛發(fā)情及排卵狀況掌控好人工輸精時(shí)間、提升輸精技術(shù)操作規(guī)范性，并要及時(shí)淘汰先天不孕母牛，科學(xué)治療肉牛繁殖性疾病，從而提高肉牛凍精人工授精的受胎率。