柑橘皮多甲氧基黃酮提取物抑菌及對(duì)紅提葡萄的保鮮作用

張?zhí)熘?，李嘉豪，?奧，李淑珍,

（1.重慶醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)院，重慶 401331；2.重慶市藥物制劑工程技術(shù)研究中心，重慶 401331；3.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧沈陽(yáng) 110034；4.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，遼寧沈陽(yáng) 110034）

紅提（Vitis vinifera‘Red Globe’），又名紅地球、晚紅等，具有味甘酸、性平的特點(diǎn)，經(jīng)常食用紅提葡萄還可以起到清除體內(nèi)自由基、阻止血小板凝聚、防止人體低密度脂蛋白氧化以及抗腫瘤的作用[1]。由于紅提葡萄果皮薄、含糖量較高、呼吸強(qiáng)度大、極易受到機(jī)械損傷以及微生物污染，在貯藏過程中容易出現(xiàn)腐爛、干梗等現(xiàn)象，因此紅提葡萄采后的貯藏保鮮是當(dāng)前亟待解決的問題之一。目前，關(guān)于紅提葡萄的保鮮方法主要可以分為物理、化學(xué)、生物三個(gè)方面。

天然提取物保鮮技術(shù)屬于生物保鮮領(lǐng)域，是利用植物源提取物中的活性物質(zhì)的天然抑菌性，抑制果蔬表面微生物的活性以及果蔬中相關(guān)酶的活力，從而延長(zhǎng)果蔬貨架期，如肉桂精油、連翹多酚等[2?3]。目前，柑橘主要用于罐頭、果汁等的生產(chǎn)加工，而約占果實(shí)重量20%的柑橘果皮，除了用于加工為陳皮外，絕大部分被廢棄或填埋，造成資源的浪費(fèi)。多甲氧基黃酮（Polymethoxy flavones，PMFs）是存在于柑橘屬果皮中的一類黃酮類化合物，包含大于等于2 個(gè)甲氧基[4]。黃酮類化合物已被證實(shí)具有多種生物活性功能，包括抗菌、抗炎、抗癌、保護(hù)心血管、改善認(rèn)知障礙、提高免疫力等，已被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)療等領(lǐng)域[5?8]。相關(guān)研究表明，黃酮類化合物主要通過破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜體系、抑制核酸合成及能量代謝、抑制致病菌的呼吸作用等，從而達(dá)到防腐保鮮的效果[9?10]。而柑橘皮PMFs，與一般的黃酮類化合物相比，其抗氧化性和抗菌等生物活性更強(qiáng)[11?13]，且呈脂溶性，具有更易親近滲透細(xì)胞膜的優(yōu)勢(shì)，例如已有研究證實(shí)PMFs 可通過抑制冷卻肉腐敗菌的生長(zhǎng)和繁殖，延長(zhǎng)冷卻肉的保質(zhì)期[14]。

本文探究了柑橘皮PMFs 提取物對(duì)5 種常見食源性細(xì)菌和2 種紅提葡萄易感染真菌的抗菌效應(yīng)及對(duì)紅提葡萄貯藏品質(zhì)的影響，以期為柑橘皮PMFs 提取物作為天然保鮮劑提供科學(xué)理論依據(jù)，不僅可提高柑橘果皮的附加價(jià)值，同時(shí)也豐富了食品添加劑市場(chǎng)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

紅提葡萄 訂購(gòu)自遼寧省遼陽(yáng)市果蔬基地，采收后立即運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，選擇果形整齊、大小均勻、無(wú)病蟲害和機(jī)械損傷、色澤及成熟度一致的果實(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；柑橘皮多甲氧基黃酮 食品級(jí)，購(gòu)自西安圣青科技有限公司（多甲氧基黃酮，>65%）；大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞桿菌、灰葡萄孢菌和青霉菌 購(gòu)自中國(guó)微生物菌種保藏中心；腦心浸液肉湯培養(yǎng)基（BHI）、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 購(gòu)自上海澤葉生物科技有限公司；丙二醛（MDA）測(cè)試盒（A003-3-1）、多酚氧化酶（PPO）測(cè)試盒（A136）購(gòu)自南京建成生物工程研究所；其他化學(xué)試劑 均為分析純，購(gòu)自天津光復(fù)化學(xué)試劑有限公司。

BSC-1100IIA2 生物安全柜 北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；MLS-3750 高壓蒸汽滅菌鍋 日本三洋電器股份有限公司；BJPX-H54 恒溫培養(yǎng)箱 山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司；ZDP-250 臺(tái)式恒溫振蕩培養(yǎng)箱 上海五九自動(dòng)化設(shè)備有限公司；牛津杯（內(nèi)徑6 mm，外徑8 mm，高10 mm）上海精密儀器儀表有限公司；WGZ-2XJ 濁度測(cè)定儀 上海昕瑞儀器儀表有限公司；5428 型離心機(jī) 德國(guó)艾本德公司；721 型紫外可見分光光度計(jì) 上海佑科儀器儀表有限公司；GY-3 型果實(shí)硬度計(jì) 杭州托普儀器有限公司；PAL-1 型手持折光儀 上海精密儀器儀表有限公司；HH-4 型數(shù)顯恒溫?cái)嚢杷″?常州賽普實(shí)驗(yàn)儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 柑橘皮PMFs、鏈霉素和制霉菌素配制 取10 mg 柑橘皮PMFs 粉末溶于1 mL 蒸餾水中，置于超聲破碎儀中室溫超聲（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，配制成10 mg/mL 的混懸液母液。而后用蒸餾水將母液分別稀釋相應(yīng)倍數(shù)，制得濃度為0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mg/mL 的工作液，備用；取0.5 mg 鏈霉素或制霉菌素溶于1 mL生理鹽水中，配制為0.5 mg/mL 工作液，作為陽(yáng)性對(duì)照，待用。

1.2.2 抑菌效應(yīng)檢測(cè)

1.2.2.1 凍存菌種活化 接種環(huán)挑取斜面保藏菌種，放入3 mL BHI 液體培養(yǎng)基中，置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中，細(xì)菌于37 ℃培養(yǎng)過夜，真菌于30 ℃培養(yǎng)48 h。取100 μL 活化菌液，用涂布器在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基上均勻涂抹，細(xì)菌置于恒溫培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng)過夜，真菌置于恒溫培養(yǎng)箱30 ℃培養(yǎng)48 h，待用。

1.2.2.2 牛津杯法測(cè)定抑菌圈 參照夏俊芳等[15]研究方法，牛津杯經(jīng)滅菌處理后，垂直放置于已涂布菌液的平板培養(yǎng)基上，分別加入200 μL 不同濃度的PMFs、生理鹽水（作為陰性對(duì)照）及鏈霉素（作為細(xì)菌的陽(yáng)性對(duì)照）或制霉菌素（作為真菌的陽(yáng)性對(duì)照），細(xì)菌置于37 ℃培養(yǎng)24 h，真菌置于30 ℃培養(yǎng)48 h，測(cè)量抑菌圈，并記錄數(shù)據(jù)。

1.2.2.3 最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定 參照Andrews等[16]研究方法，將稀釋菌懸液為105～106CFU/mL，取100 μL 菌懸液、2 mL 不同濃度的PMFs 和15 mL BHI 液體培養(yǎng)基共同置于錐形瓶中，37 ℃振蕩培養(yǎng)24 h 或30 ℃培養(yǎng)48 h 后，取100 μL 培養(yǎng)液，于517 nm處測(cè)定光吸收值（OD 值），以O(shè)D 為0 的培養(yǎng)液（首先將培養(yǎng)液OD 值調(diào)0）中加入的PMFs 濃度為MIC。

1.2.3 紅提葡萄貯藏實(shí)驗(yàn) 將選取的紅提葡萄分為五組，實(shí)驗(yàn)組分別以2.0、4.0、6.0、8.0 mg/mL 的柑橘皮PMFs 提取液浸泡5 min，分別記為A、B、C、D 四組，對(duì)照組使用蒸餾水浸泡相同時(shí)間，記為CK 組，果實(shí)浸泡完畢后取出，自然晾干后用葡萄專用PE 保鮮袋進(jìn)行包裝（不扎口），在室溫（22±2 ℃）下貯藏，每2 d 測(cè)定一次數(shù)據(jù)。

1.2.4 指標(biāo)測(cè)定方法

1.2.4.1 可溶性固形物的測(cè)定 每組在每簇果實(shí)中隨機(jī)選取3 粒果實(shí)，研磨成勻漿，過濾后取汁液，使用手持折光儀進(jìn)行測(cè)定。

1.2.4.2 抗壞血酸（VC）含量的測(cè)定 參考曹建康等[17]的方法。利用草酸滴定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸線性方程Y=0.07936X+0.0148。每組在每簇紅提葡萄隨機(jī)選取3 粒果實(shí)，與草酸混合后，測(cè)定吸光值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算VC含量。

1.2.4.3 腐爛率、落粒率的測(cè)定 腐爛率的測(cè)定：出現(xiàn)病斑的果記為爛果，計(jì)算公式為：

落粒率的測(cè)定：用手抓住紅提葡萄果穗頂部，自然拿起，果實(shí)從果穗上自然脫落的記為落果，計(jì)算公式為：

1.2.4.4 果實(shí)硬度的測(cè)定 參考曹建康等[17]的方法，每組在每簇紅提葡萄隨機(jī)選取3 粒果實(shí)，圍繞果實(shí)赤道部位，間隔等距離的三個(gè)位置，用小刀去除部分果皮，使用GY-3 硬度計(jì)測(cè)定果實(shí)硬度，結(jié)果取平均值。

1.2.4.5 可滴定酸的測(cè)定 參考曹建康等[17]的方法，每組在每簇果實(shí)中隨機(jī)選取3 粒果實(shí)，通過氫氧化鈉滴定法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算公式為：

式中：C 為氫氧化鈉濃度（0.1 mol/L）；V1為滴定時(shí)消耗的氫氧化鈉的毫升數(shù)（mL）；M 為稱取葡萄的重量（g）；K 為葡萄折算系數(shù)，酒石酸0.075。

1.2.4.6 呼吸強(qiáng)度的測(cè)定 參考曹建康等[17]的方法，每組在每簇果實(shí)中隨機(jī)選取3 粒果實(shí)，采用靜置法測(cè)定紅提葡萄的呼吸強(qiáng)度，計(jì)算公式為：

式中：V1為空白滴定中草酸溶液消耗量（mL）；V2為測(cè)定滴定中草酸溶液消耗量（mL）；c 為草酸溶液濃度（mol/L）；m 為紅提果實(shí)質(zhì)量（kg）；t 為測(cè)定時(shí)間（h）。

1.2.4.7 多酚氧化酶活性的測(cè)定 每組在每簇果實(shí)中隨機(jī)選取3 粒果實(shí)，按照試劑盒說明書進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算公式為：

式中：W 為樣本質(zhì)量（g）；ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。

1.2.4.8 丙二醛含量測(cè)定 每組在每簇果實(shí)中隨機(jī)選取3 粒果實(shí)，按照試劑盒說明書進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算公式為：

式中：C標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，10 nmol/mL；W 為樣本重量（g）；V提為所加提取液的總量（mL）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3 次，經(jīng)Graphpad Prism9 軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，并進(jìn)行差異分析。多組數(shù)據(jù)采用單因素方差分析差異，且當(dāng)P<0.05 認(rèn)定為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并制圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 柑橘皮PMFs 提取物的抑菌效果

2.1.1 牛津杯法測(cè)定抑菌圈直徑 利用牛津杯法檢測(cè)柑橘皮PMFs 提取物的抑菌效應(yīng)，測(cè)定抑菌圈直徑，記錄數(shù)據(jù)，見表1。結(jié)果所示，0.5 和1.0 mg/mL柑橘皮PMFs 對(duì)7 種菌都具有抑制效應(yīng)，以灰葡萄孢菌為例，0.5 mg/mL 柑橘皮PMFs 作用后，產(chǎn)生的抑菌圈直徑為9.75±0.88 mm，與陽(yáng)性對(duì)照作用后產(chǎn)生的抑菌圈（直徑為11.49±0.97 mm）相比，較弱，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），但1.0 mg/mL 柑橘皮PMFs作用后，產(chǎn)生的抑菌圈直徑為10.67±1.02 mm，與陽(yáng)性對(duì)照相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。柑橘皮PMFs 對(duì)7 種菌的抑制作用，強(qiáng)弱依次為青霉菌>灰葡萄孢菌>金黃色葡萄球菌>大腸桿菌>蠟樣芽孢桿菌>枯草芽孢桿菌>銅綠假單胞桿菌，且呈濃度依賴性。橘黃酮已被證實(shí)可抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和黑曲霉菌等的生長(zhǎng)[18]，PMFs 為存在于橘總黃酮中的多甲氧基黃酮成分，其中包含的川陳皮素和橘皮素等也已被證實(shí)具有抑菌作用[19?20]，是柑橘皮PMFs 產(chǎn)生抑菌效應(yīng)的重要成分。

表1 牛津杯法測(cè)定柑橘皮PMFs 提取物的抑菌效果Table 1 The antibacterial effects of PMFs extract from Citrus peels determined by Oxford cup method

2.1.2 最小抑菌濃度（MIC）測(cè)定 不同濃度梯度的柑橘皮PMFs 與7 種測(cè)試菌共同培養(yǎng)，測(cè)定OD 值，結(jié)果見表2。如表所示，灰葡萄孢菌、青霉菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC 為0.0625 mg/mL，蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的MIC 為0.125 mg/mL，銅綠假單胞桿菌的MIC 為0.25 mg/mL。由此可見，柑橘皮PMFs 對(duì)灰葡萄孢菌、青霉菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用最強(qiáng)，對(duì)蠟樣芽胞桿菌和枯草芽孢桿菌的抑制作用次之，而對(duì)銅綠假單胞桿菌的抑制作用最弱。李煜等[21]證實(shí)了紅豆越橘中總黃酮對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和白色葡萄球菌具有明顯的抑制作用，對(duì)大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的MIC 均為2.5 mg/mL，大于本文的0.0625 mg/mL 和0.125 mg/mL，因其研究對(duì)象為總黃酮，而本文為PMFs，PMFs 含有多個(gè)甲氧基，其生物活性更強(qiáng)。另外所對(duì)應(yīng)柑橘種類不一樣，可能也導(dǎo)致抑菌效應(yīng)的差異。

表2 柑橘皮PMFs 提取物的MICTable 2 The MIC of PMFs extract from Citrus peels

2.2 柑橘皮PMFs 提取物對(duì)紅提葡萄貯藏品質(zhì)的影響

2.2.1 不同濃度柑橘皮PMFs 提取物對(duì)紅提葡萄可溶性固形物和VC含量的影響 可溶性固形物（Soluble solid）是指果蔬中能溶于水的糖、礦物質(zhì)等可溶性物質(zhì)的含量，是影響果實(shí)風(fēng)味的重要因素之一，同時(shí)也可直接反映果蔬的成熟程度和品質(zhì)狀況[22]。由圖1A可知，經(jīng)4.0 mg/mL 柑橘皮PMFs 提取物處理8 d 后紅提中可溶性固形物含量為8.64 Bx，高于CK 組（為7.85 Bx），但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，紅提葡萄可溶性固形物含量總體變化平緩，其他各組之間差異不明顯，含量均在7.6～8.3 Bx 之間。

圖1 不同濃度PMFs 對(duì)紅提葡萄可溶性固形物（A）和VC（B）含量的影響Fig.1 Effect of different concentrations of PMFs on soluble solids（A）and VC（B）contents in red grape

VC含量是果蔬中重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之一，且隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，果實(shí)中VC的含量會(huì)逐漸減少[23]。由圖1B 可知，CK、A 組在第4 d 時(shí)VC含量急速下降，分別為7.43 mg/100 g 和8.61 mg/100 g，這可能是由于紅提的自身氧化分解而造成的；但A 組比CK 組VC含量下降緩慢，說明柑橘皮PMFS提取物對(duì)A 組中紅提葡萄的VC含量有一定的影響；B、C、D 組VC含量在貯藏期間均有緩慢下降的趨勢(shì)，這可能是由于有保鮮劑的保護(hù)，不至于在短期間出現(xiàn)VC的迅速消耗。貯藏第12 d 時(shí)，CK 組VC含量為3.26 mg/100 g，損失量為67.59%；B、C、D 組在第12 d 時(shí)分別為4.25、4.33、4.49 mg/100 g，保鮮效果比較相近，損失量在55%左右，與CK 組相比，VC含量下降較為緩慢，損失量小，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。以上結(jié)果說明柑橘皮PMFs 提取物對(duì)紅提葡萄中的可溶性固形物和VC含量均有較好的保持效應(yīng)。

2.2.2 不同濃度柑橘皮PMFs 提取物對(duì)紅提葡萄腐爛率、落粒率和硬度的影響 果實(shí)的腐爛主要由于細(xì)菌、真菌感染而引起，腐爛率越低，保鮮效果越好，貯藏時(shí)間也較長(zhǎng)[24]。由圖2A 可以看出，隨著貯藏時(shí)間的增加，紅提腐爛率呈上升趨勢(shì)?？傮w來看，用柑橘皮PMFs 提取物處理的紅提腐爛率的上升趨勢(shì)低于CK 組，其中經(jīng)4.0 mg/mL 處理的紅提腐爛率上升趨勢(shì)最低，對(duì)紅提腐爛率抑制效果最好，其次為濃度6.0 mg/mL 的柑橘皮PMFs 提取物。以貯藏12 d時(shí)為例，CK 組腐爛率為23.64%，與CK 組相比，A 組腐爛率下降了6.42%，B 組下降13.47%，C 組下降11.19%，D 組下降10.34%，B、C 和D 組與CK 組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），以上數(shù)據(jù)綜合表明4 mg/mL柑橘皮PMFs 提取物緩解紅提腐爛效果最佳。

圖2 不同濃度PMFs 對(duì)紅提葡萄腐爛率（A）、落粒率（B）和硬度（C）的影響Fig.2 Effect of different concentrations of PMFs on the decay rate (A),shattering rate (B) and flesh firmness (C) of red grape

由于葡萄果梗與果粒連接處易受真菌侵染，且在貯藏期間該部位由于呼吸作用引起失水，造成葡萄落粒的發(fā)生[25]。由圖2B 可以看出，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，紅提葡萄的落粒率呈上升趨勢(shì)。總體來看，經(jīng)柑橘皮PMFs 提取物處理的紅提各個(gè)時(shí)期的落粒率均低于CK 組，且落粒率較CK 組上升趨勢(shì)緩慢，其中經(jīng)4.0 mg/mL 處理的葡萄落粒率上升的最為緩慢。當(dāng)貯藏至12 d 時(shí)，CK 組紅提落粒率達(dá)到13.82%，與CK 組相比，A 組落粒率減少了6.99%，B 組減少了9.91%，C 組減少了9.57%，D 組減少了9.39%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），由此可見4.0 mg/mL 柑橘皮PMFs 提取物對(duì)紅提落粒率抑制效果最佳。

果實(shí)的硬度影響著果實(shí)的口感和品質(zhì)，與果實(shí)的成熟度和衰敗程度有關(guān)，也是評(píng)價(jià)果實(shí)外觀品質(zhì)的重要指標(biāo)之一[26]。圖2C 顯示，隨著貯藏時(shí)間的增加，紅提果實(shí)硬度呈逐漸下降的趨勢(shì)。總體來看，用柑橘皮PMFs 提取物處理的紅提果實(shí)硬度下降的趨勢(shì)低于CK 組，且貯藏前6 d 中，CK 組硬度為4.91 kg/cm2，與CK 組相比，B 組硬度提高19.1%，C 組提高16.5%，D 組提高13.2%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；當(dāng)貯藏至12 d 時(shí)，柑橘皮PMFs 提取物處理的紅提果實(shí)硬度與CK 組無(wú)明顯變化，因此對(duì)于前期貯藏的紅提，柑橘皮PMFs 提取物對(duì)果實(shí)硬度的下降具有一定的抑制效果。

以上結(jié)果揭示柑橘皮PMFs 提取物處理可明顯降低紅提葡萄貯藏期內(nèi)的脫粒率和腐爛率，這可能與其可抑制灰葡萄孢菌和青霉菌這兩種紅提葡萄易感染真菌的生長(zhǎng)有關(guān)，并且還一定程度上減緩紅提果實(shí)硬度下降，由此柑橘皮PMFs 提取物作用后可明顯提高紅提葡萄的貯藏品質(zhì)。

2.2.3 不同濃度柑橘皮PMFs 提取物對(duì)紅提葡萄可滴定酸含量和呼吸強(qiáng)度的影響 果蔬中含有蘋果酸、檸檬酸、酒石酸等多種有機(jī)酸，可滴定酸（TA）含量對(duì)果蔬風(fēng)味、貯藏性、加工性均有影響，且果蔬的可滴定酸含量隨著果蔬的成熟度而不斷變化，酸度降低，果蔬品質(zhì)也會(huì)有所下降[27]。由圖3A 可知，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，紅提中可滴定酸含量呈現(xiàn)逐漸減少的總趨勢(shì)。CK 組在第2 d 時(shí)可滴定酸含量開始快速下降，為0.51%，A 組在4 d 后迅速減少，這與紅提的呼吸作用有很大的關(guān)聯(lián)，紅提的呼吸消耗影響可滴定酸的某些成分，造成可滴定酸含量的迅速下降。B、C、D 組在第4 d 時(shí)下降較快，到第6 d 時(shí)，三組的可滴定酸度與CK 組的可滴定酸度相比，呈現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；自第6 d 后，直至到達(dá)第12 d 時(shí)，CK 組的可滴定酸度為0.38%，A、B、C 和D 組，與CK 組相比，略有波動(dòng)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，綜合以上數(shù)據(jù)4.0 mg/mL 柑橘皮PMFs 提取物可以一定程度上保持紅提中可滴定酸含量。

圖3 不同濃度PMFs 對(duì)紅提葡萄可滴定酸（A）和呼吸強(qiáng)度（B）的影響Fig.3 Effect of different concentrations of PMFs on titratable acidity (A) and respiration intensity (B) of red grape

呼吸強(qiáng)度與果蔬貯藏期間的能量消耗密切相關(guān)，呼吸強(qiáng)度越高，能量消耗越大，果實(shí)衰老速率越快[28]。由圖3B 可以看出，隨著貯藏時(shí)間的增加，紅提的呼吸強(qiáng)度呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)?？傮w來看，用柑橘皮PMFs 提取物處理過的紅提呼吸強(qiáng)度的下降趨勢(shì)高于CK 組，貯藏至第4 d 時(shí)，CK 組達(dá)到最低值，為9.34 mg CO2/kg·h，而處理組在第6 d 出現(xiàn)呼吸低峰，隨后呼吸強(qiáng)度呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，且用柑橘皮PMFs 提取物浸泡的紅提呼吸強(qiáng)度上升的趨勢(shì)明顯低于CK 組。以第12 d 為例，CK 組紅提呼吸強(qiáng)度為16.82 mg CO2/kg·h，與其相比，A 組降低25.4%，B組降低54.5%，C 組降低45.4%，D 組降低45.2%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05，P<0.01），可知柑橘皮PMFs 提取物能有效降低果實(shí)的呼吸強(qiáng)度，減慢果實(shí)腐敗衰老進(jìn)程，且柑橘皮PMFs 提取物濃度以4.0 mg/mL 為宜。以上結(jié)果揭示柑橘皮PMFs 提取物可有效緩解紅提葡萄中可滴定酸含量下降和呼吸強(qiáng)度上升。

2.2.4 不同濃度柑橘皮PMFs 提取物對(duì)紅提葡萄中多酚氧化酶活性和丙二醛含量的影響 多酚氧化酶（PPO）能催化多酚類物質(zhì)氧化，參與花色苷的降解，產(chǎn)生褐色副產(chǎn)物，從而引起果蔬褐變，因此測(cè)定PPO 酶活性可以反映果蔬的褐變程度，評(píng)判果蔬的貯藏品質(zhì)[29]。由圖4A 可知，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，紅提中PPO 酶活力呈現(xiàn)逐漸上升的總趨勢(shì)。CK 組在4 d后開始出現(xiàn)迅速上升，A 組在8 d 后快速上升，說明之前受到保鮮劑的抑制作用，到第8 d 抑制效果降低，從而快速升高。在第8 d 時(shí)，CK 與B 組之間已經(jīng)表現(xiàn)出明顯差別，CK 組PPO 酶活力為7.59 U/g鮮重，上升量為137.56%，與其相比，B 組PPO 酶活力下降16.1%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），而后隨時(shí)間延長(zhǎng)，B、C、D 組PPO 酶活性緩慢上升，可知不同濃度的柑橘皮PMFs 提取物可以延緩紅提果實(shí)中PPO 酶活性的增加速度，從而起到保鮮效果，且濃度以4.0 mg/mL 為宜。

圖4 不同濃度PMFs 對(duì)紅提葡萄多酚氧化酶活性（A）和丙二醛含量（B）的影響Fig.4 Effect of different concentrations of PMFs on PPO activity (A) and MDA contents (B) in red grape

丙二醛（MDA）可反映果實(shí)內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映果實(shí)的損傷程度[30]。由圖4B 可知，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，紅提中MDA 含量呈現(xiàn)逐漸上升的總趨勢(shì)。CK 組和A 組在4 d 后開始出現(xiàn)迅速上升，其余各組上升緩慢。在第8 d 時(shí)，CK 組MDA 含量為6.62 nmol/g，與之相比，A 組無(wú)明顯差異，B 組下降了36.4%，C 組下降了43.9%，D 組下降了46.9%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），可知4.0、6.0 和8.0 mg/mL柑橘皮PMFs 提取物均可有效減緩隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)紅提葡萄的損傷程度。

3 結(jié)論

本文探究了柑橘皮PMFs 提取物的抑菌及對(duì)紅提葡萄貯藏品質(zhì)的作用。抑菌結(jié)果顯示柑橘皮PMFs 提取物對(duì)5 種常見食源性細(xì)菌和2 種紅提葡萄易感染真菌均具有較強(qiáng)的抑菌作用；保鮮結(jié)果顯示在貯藏期內(nèi)，相對(duì)于對(duì)照組，不同濃度的柑橘皮PMFs 提取物對(duì)紅提葡萄果實(shí)均具有較好的保鮮效果，可以一定程度上抑制果實(shí)硬度的下降，降低果實(shí)腐爛率、落粒率，這與柑橘皮PMFs 可抑制灰霉菌和青霉菌的生長(zhǎng)密切相關(guān)，同時(shí)還可抑制VC和可滴定酸含量的降低，延緩呼吸強(qiáng)度、MDA 和PPO 的上升，但不同濃度的柑橘皮PMFs 提取物對(duì)紅提葡萄貯藏品質(zhì)的影響并不隨著濃度的增加而增強(qiáng)，濃度不當(dāng)反而會(huì)增加果實(shí)的損耗。綜合考慮4.0 mg/mL 的柑橘皮PMFs 提取物對(duì)紅提葡萄的貯藏效果最佳。

雖然植物源防腐劑具有較強(qiáng)的抑菌性，但部分從植物中提取出來的混合物會(huì)呈現(xiàn)一定的顏色和氣味，當(dāng)應(yīng)用于食品當(dāng)中時(shí)對(duì)食品的風(fēng)味和外觀可能會(huì)產(chǎn)生一定的影響，因此關(guān)于植物源保鮮劑的關(guān)鍵成分、量效關(guān)系、提取工藝還需要進(jìn)一步明確。而且紅提葡萄采收后，果實(shí)內(nèi)部仍然進(jìn)行著復(fù)雜的生理生化變化，導(dǎo)致紅提葡萄的成熟和衰老，因此還需不斷研究果實(shí)內(nèi)部的變化以及相應(yīng)的外部變化，從而更好地調(diào)控紅提葡萄的貯藏條件，為以后柑橘皮PMFs 提取物用于紅提葡萄的貯藏保鮮提供科學(xué)理論依據(jù)。