西黃膠囊調(diào)控IL-6/JAK2/STAT3信號(hào)通路促進(jìn)非哺乳期乳腺炎大鼠模型創(chuàng)面愈合的作用機(jī)制研究

王月，劉麗芳，周亮，胡金輝

〔摘要〕 目的 觀察西黃膠囊對(duì)非哺乳期乳腺炎大鼠模型創(chuàng)面愈合及白細(xì)胞介素-6（interleukin-6， IL-6）/非受體型酪氨酸蛋白激酶2（Janus kinase 2， JAK2）/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3（signal transducer and activator of transcription 3， STAT3）信號(hào)通路的影響。方法 復(fù)制非哺乳期乳腺炎大鼠模型，隨機(jī)分為模型對(duì)照組、陽性藥物組、中藥治療組、聯(lián)合用藥組，每組10只，另選取10只同批次SPF級(jí)健康SD大鼠作為假手術(shù)組。干預(yù)后觀察并評(píng)估各組大鼠的創(chuàng)面愈合情況及乳腺炎癥指數(shù)，HE染色法觀察各組大鼠乳腺組織的病理改變；免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠乳腺組織B淋巴細(xì)胞瘤-2基因關(guān)聯(lián)X蛋白（B-cell lymphoma-2-associated X， BAX）、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）的平均光密度值；Western blot法及RT-PCR法檢測各組大鼠乳腺組織IL-6、JAK2、STAT3、人胱天蛋白酶9（Caspase-9）蛋白及mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果 與假手術(shù)組大鼠比較，模型對(duì)照組大鼠的創(chuàng)面愈合率明顯降低（P<0.05），而乳腺炎癥指數(shù)，乳腺組織BAX、Bcl-2平均光密度值，IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9蛋白及mRNA的表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）。HE染色可見模型對(duì)照組大鼠乳腺腺葉存在明顯的肉芽腫變性，周圍充斥大量炎癥細(xì)胞，陽性藥物組、中藥治療組、聯(lián)合用藥組大鼠的病理情況存在不同程度的緩解，炎性細(xì)胞浸潤及肉芽腫組織明顯減少，“空泡樣”壞死存在不同程度的愈合。與模型對(duì)照組比較，陽性藥物組、中藥治療組、聯(lián)合用藥組的創(chuàng)面愈合率、Bcl-2光密度值均明顯升高（P<0.05）；其中聯(lián)合用藥組的創(chuàng)面愈合率、Bcl-2光密度值明顯高于陽性藥物組及中藥治療組（P<0.05）；陽性藥物組的創(chuàng)面愈合率高于中藥治療組（P<0.05），Bcl-2光密度值與中藥治療組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與模型對(duì)照組比較，陽性藥物組、中藥治療組、聯(lián)合用藥組的BAX光密度值、乳腺炎癥指數(shù)均明顯下降（P<0.05）；其中聯(lián)合用藥組的BAX光密度值、乳腺炎癥指數(shù)明顯低于陽性藥物組及中藥治療組（P<0.05）；陽性藥物組的乳腺炎癥指數(shù)低于中藥治療組（P<0.05），BAX光密度值與中藥治療組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與模型對(duì)照組比較，陽性藥物組、中藥治療組、聯(lián)合用藥組的IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9蛋白及mRNA的表達(dá)水平均明顯降低（P<0.05）；其中聯(lián)合用藥組上述蛋白及mRNA表達(dá)水平明顯低于陽性藥物組及中藥治療組（P<0.05），而陽性藥物組的上述蛋白及mRNA表達(dá)水平均明顯高于中藥治療組（P<0.05）。結(jié)論 西黃膠囊能有效促進(jìn)非哺乳期乳腺炎大鼠模型的乳腺組織創(chuàng)面愈合，抑制乳腺組織細(xì)胞凋亡及炎癥反應(yīng)，其作用機(jī)制可能與西黃膠囊抑制IL-6/JAK2/STAT3信號(hào)通路相關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 非哺乳期乳腺炎；西黃膠囊；IL-6/JAK2/STAT3信號(hào)通路；創(chuàng)面修復(fù)；作用機(jī)制

〔中圖分類號(hào)〕R285? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ? 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０23.07.004

Mechanism of action for Xihuang Capsule in promoting wound healing in non-lactational mastitis rat model by regulating IL-6/JAK2/STAT3 signaling pathway

WANG Yue， LIU Lifang， ZHOU Liang， HU Jinhui*

The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To observe the effects of Xihuang Capsule on wound healing and the signaling pathway of interleukin-6 （IL-6）/Janus kinase 2 （JAK2）/signal transducer and activator of transcription 3 （STAT3） in non-lactational mastitis rat model. Methods The non-lactational mastitis rat model was duplicated and randomly divided into model control group， positive drug group， Chinese medicines group， and drug combination group， with 10 rats in each group. Another 10 SPF grade healthy SD rats in the same batch were selected as sham-operated group. After intervention， the wound healing condition and breast inflammation index of rats were observed and evaluated in each group， and histopathological changes of breast tissue of rats in each group were observed by HE staining. Immunohistochemical method was used to determine the average optical density of B-cell lymphoma-2 gene associated X protein （BAX） and B-cell lymphoma-2 gene （Bcl-2） in breast tissues of rats in each group. Western blot and RT-PCR were used to examine the expression levels of IL-6， JAK2， STAT3， human Caspase-9 protein， and mRNA in breast tissue of rats in each group. Results Compared with the rats in sham-operated group， the wound healing rate of rats in model control group was significantly lower （P<0.05）， while the breast inflammation index， the average optical density of BAX and Bcl-2 in the breast tissue， and the expression levels of IL-6， JAK2， STAT3， Caspase-9 protein， and mRNA were significantly higher （P<0.05）. HE staining showed that there was obvious granuloma degeneration in the mammary gland lobes of rats in model control group， surrounded by numerous inflammatory cells. The pathological condition of rats in positive drug group， Chinese medicines group， and drug combination group were alleviated to varying degrees. There was a significant decrease in inflammatory cell infiltration and granuloma tissue and the "vacuolar" necrosis was healed to varying degrees. Compared with model control group， the wound healing rate and Bcl-2 optical density of positive drug group， Chinese medicines treatment group， and drug combination group increased significantly （P<0.05）. The wound healing rate and Bcl-2 optical density of drug combination group were significantly higher than those of positive drug group and Chinese medicines group （P<0.05）. The wound healing rate of positive drug group was higher than that of Chinese medicines group （P<0.05）， and there was no statistically significant difference in Bcl-2 optical density compared with Chinese medicines group （P>0.05）. Compared with model control group， the BAX optical density and breast inflammation index of positive drug group， Chinese medicines group， and drug combination group decreased significantly （P<0.05）. The BAX optical density and breast inflammation index of drug combination group were significantly lower than those of positive drug group and Chinese medicines group （P<0.05）; the breast inflammation index of positive drug group was lower than that of Chinese medicines group （P<0.05） and the BAX optical density showed no statistical significance compared with that of Chinese medicines group （P>0.05）. Compared with model control group， the expression levels of IL-6， JAK2， STAT3， Caspase-9 protein， and mRNA in positive drug group， Chinese medicines group， and drug combination group reduced significantly （P<0.05）. The expression levels of the aforementioned proteins and mRNA in drug combination group were significantly lower than those in positive drug group and Chinese medicines group （P<0.05）， while the expression levels of the aforementioned proteins and mRNA in positive drug group were significantly higher than those in Chinese medicines group （P<0.05）. Conclusion Xihuang Capsule can effectively promote the wound healing of breast tissue in non-lactational mastitis rat model， and inhibit the apoptosis and inflammatory response of breast histiocyte. Its mechanism of action may be related to the inhibition of IL-6/JAK2/STAT3 signaling pathway by Xihuang Capsule.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 non-lactational mastitis; Xihuang Capsule; IL-6/JAK2/STAT3 signaling pathway; wound healing; mechanism of action

非哺乳期乳腺炎（non-puerperal mastitis， NPM）多指女性在非妊娠期、哺乳期發(fā)病的乳房慢性炎癥[1-2]。肉芽腫性乳腺炎（granulomatous lobular mastitis， GLM）是NPM中最常見的臨床類型。NPM往往反復(fù)發(fā)作，遷延不愈，并在乳房皮膚形成大量瘺管竇道，嚴(yán)重破壞患者的乳房外觀[3]。目前，醫(yī)學(xué)界治療NPM仍無標(biāo)準(zhǔn)的臨床指南和治療方案，NPM在釀膿期后進(jìn)行手術(shù)切開排膿治療往往會(huì)造成更多的病理性竇道及瘺管，手術(shù)治療帶來的創(chuàng)傷、恐懼心理、乳房外形損傷、術(shù)后瘢痕形成嚴(yán)重降低了患者的生活質(zhì)量[4]?，F(xiàn)階段，NPM是醫(yī)學(xué)界頗為棘手的難題，是研究者亟須攻克的臨床重點(diǎn)，查閱現(xiàn)有文獻(xiàn)總結(jié)本病的治療關(guān)鍵，包括調(diào)控乳腺局部炎性反應(yīng)、改善局部癥狀、提升免疫功能[5-6]。在NPM發(fā)病機(jī)制的相關(guān)研究上，有學(xué)者提出了研究結(jié)論，但仍存在較大爭議，臨床療效欠佳[7]。因此，尋求有效治療NPM、保護(hù)乳房外形、減少患者身心痛苦的治療手段意義重大。

NPM相當(dāng)于中醫(yī)學(xué)“粉刺性乳癰”[8]，諸多醫(yī)家對(duì)本病的病因病機(jī)及發(fā)展預(yù)后多有論述，一般認(rèn)為痰瘀郁結(jié)、熱盛肉腐是NPM的病機(jī)。西黃膠囊由牛黃、麝香、乳香、沒藥等藥物組成，方簡力專，具有清熱結(jié)、通瘀滯、消腫止痛的功效[9]。目前，西黃膠囊治療NPM的臨床研究較多，但其治療NPM的基礎(chǔ)研究鮮見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究以前期預(yù)實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)，通過構(gòu)建NPM大鼠模型，探討西黃膠囊對(duì)NPM大鼠模型創(chuàng)面愈合的影響及作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1? 動(dòng)物

50只SPF級(jí)雌性SD大鼠，6～7周齡，體質(zhì)量180～200 g，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0004，合格證號(hào)：43072663411384024。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由攝食，環(huán)境溫度24～26 ℃，相對(duì)濕度50%～60%，實(shí)驗(yàn)全程按照動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行（倫理批準(zhǔn)號(hào)：LL2021009）。

1.2? 主要藥物與試劑

西黃膠囊（石家莊東方藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：20220317）；醋酸潑尼松龍片（天津信誼津津藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2022062304）；白細(xì)胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、非受體型酪氨酸蛋白激酶2（Janus kinase 2， JAK2）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3（signal transducer and activator of transcription 3， STAT3）、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因關(guān)聯(lián)X蛋白（B-cell lymphoma-2-associated X， BAX）、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）、人胱天蛋白酶9（Caspase-9）抗體（美國proteintech公司，批號(hào)分別為21865-1-AP、66466-1-Ig、10253-2-AP、10380-1-AP、50599-2-Ig、12789-1-AP）；HRP山羊抗小鼠IgG二抗（美國Proteintech公司，批號(hào)：SA00001-1）；PBS緩沖液（美國Hyclone公司，批號(hào)：803344098）。

1.3? 主要儀器

電鏡（德國徠卡公司，型號(hào)：8344-II）；熒光PCR板、熒光定量RCP儀（美國Thermo公司，型號(hào)分別為66347-A、PIKOREAL96）；電動(dòng)搖床（海門市其林貝爾儀器制造有限公司，型號(hào)：TS-92）；水平瓊脂糖電泳槽、電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀（北京六一儀器廠，型號(hào)分別為JK3056、DYY-2C、DYCZ-40D）；其余實(shí)驗(yàn)試劑及儀器均由實(shí)驗(yàn)室提供。

1.4? NPM大鼠模型的建立與分組

參考YU等[10]的NPM大鼠模型建立方法。術(shù)中取人體新鮮NPM病變組織與生理鹽水按1∶3比例，3 000 r/min（半徑16 cm）離心，離心后與弗氏完全佐試劑按1∶1比例混合備用。將制備好的組織勻漿（0.04 mL）于大鼠第3、第4對(duì)乳房進(jìn)行注射包埋，1周后進(jìn)行大鼠乳腺組織局部觀察，隨機(jī)處死2只大鼠，取第3、第4對(duì)乳腺組織，進(jìn)行病理切片觀察，鏡下出現(xiàn)特征性的脂質(zhì)空泡周圍伴多種炎癥細(xì)胞浸潤，形成肉芽腫性炎癥或微膿腫時(shí)，即可確認(rèn)造模成功。

1.5? 動(dòng)物分組與給藥

隨機(jī)選取40只已成模的NPM大鼠模型分為模型對(duì)照組、陽性藥物組（醋酸潑尼松龍組）、中藥治療組（西黃膠囊組）、聯(lián)合用藥組（醋酸潑尼松龍+西黃膠囊組），每組10只。另選取10只SPF級(jí)SD大鼠作為假手術(shù)組。

假手術(shù)組與模型對(duì)照組均予2 mL的生理鹽水灌胃1次/d；中藥治療組大鼠予西黃膠囊人等效劑量溶于2 mL生理鹽水進(jìn)行灌胃，給藥劑量0.072 g/（kg·d），1次/d；陽性藥物組予醋酸潑尼松龍片人等效劑量溶于2 mL生理鹽水灌胃，給藥劑量0.001 8 g/（kg·d），1次/d；聯(lián)合用藥組予醋酸潑尼松龍片+西黃膠囊浸膏灌胃，劑量同前，1次/d。均連續(xù)干預(yù)14 d。

1.6? 指標(biāo)觀察

1.6.1? 創(chuàng)面愈合率測定? 于干預(yù)1、2、3周后，采用Image PLUS 6.0軟件測量各組大鼠乳腺存在瘺管竇道的創(chuàng)面面積，計(jì)算創(chuàng)面愈合率。創(chuàng)面愈合率=（初始創(chuàng)面測量面積-處死前創(chuàng)面測量面積）/初始創(chuàng)面測量面積×100%。

1.6.2? 組織病理學(xué)檢測? 隨機(jī)選取各組大鼠乳腺瘺管竇道組織，于4%多聚甲醛固定48 h后脫水、包埋，采用HE染色法觀察各組大鼠瘺管竇道的組織病理情況。

1.6.3? 乳腺炎癥指數(shù)? 參考周瑤等[11]評(píng)價(jià)NPM大鼠模型乳腺炎癥指數(shù)的方法對(duì)各組大鼠的乳腺炎癥指數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。詳見表1。

1.6.4? 免疫組織化學(xué)染色? 根據(jù)試劑說明書步驟進(jìn)行操作，具體為：選取各組大鼠的乳腺瘺管竇道組織，將脫蠟后進(jìn)行封閉，添加一抗、二抗，DAB顯色，進(jìn)一步脫水、封片，隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行分析，分析軟件及版本號(hào)為Image pro Plus 6.0，平均光密度值（average optical density value， AOD）作為蛋白陽性表達(dá)水平。

1.6.5? Western blot檢測大鼠乳腺瘺管竇道組織IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9表達(dá)水平? 提取各組大鼠乳腺組織總蛋白，經(jīng)凝膠電泳后將蛋白置于PVDF膜，5%脫脂奶粉完全封閉孵育60 min，添加一抗抗體IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9，4 ℃環(huán)境下靜置12 h，棄去一抗，TBST洗膜3次，每次5 min。室溫孵育二抗2 h，洗滌后棄去二抗，TBST洗膜3次，每次5 min。顯色后以GAPDH作為內(nèi)參，計(jì)算各蛋白的灰度比值。

1.6.6? RT-PCR檢測大鼠乳腺瘺管竇道組織IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9 mRNA表達(dá)水平? 提取大鼠乳腺組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，特異性擴(kuò)增IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9，GAPDH為內(nèi)參，反應(yīng)條件為95 ℃，10 min變性；95 ℃，15 s；60 ℃，60 s；40次循環(huán)。采用2-△△Ct方法計(jì)算各蛋白的mRNA表達(dá)量，引物序列詳見表2，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系詳見表3。

1.7? 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理與分析。采用“ｘ±s”描述計(jì)量資料。組間比較采用多樣本單因素方差分析，多次重復(fù)比較采用重復(fù)測量的方差分析，兩兩樣本比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 各組大鼠模型乳腺創(chuàng)面愈合率比較

假手術(shù)組大鼠乳腺創(chuàng)面在第3周已完全愈合。與假手術(shù)組大鼠比較，模型對(duì)照組大鼠的創(chuàng)面愈合率顯著降低（P<0.05）；與模型對(duì)照組比較，陽性藥物組、中藥治療組、聯(lián)合用藥組的創(chuàng)面愈合率均明顯升高（P<0.05），其中聯(lián)合用藥組創(chuàng)面愈合率明顯高于陽性藥物組及中藥治療組（P<0.05），陽性藥物組創(chuàng)面愈合率高于中藥治療組（P<0.05）。詳見表4。

2.2&nbsp; 各組大鼠模型乳腺創(chuàng)面病理情況

HE染色結(jié)果顯示，模型對(duì)照組與假手術(shù)組對(duì)比，大鼠乳腺腺葉存在明顯的肉芽腫變性，周圍充斥大量炎癥細(xì)胞；陽性藥物組、中藥治療組、聯(lián)合用藥組大鼠的病理情況存在不同程度的緩解，炎性細(xì)胞浸潤及肉芽腫組織明顯減少，“空泡樣”壞死存在不同程度的愈合。詳見圖1。

2.3? 各組大鼠乳腺炎癥指數(shù)及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較

與假手術(shù)組大鼠比較，模型對(duì)照組大鼠乳腺組織BAX、Bcl-2 AOD值，乳腺炎癥指數(shù)顯著升高（P<0.05）；與模型對(duì)照組比較，陽性藥物組、中藥治療組、聯(lián)合用藥組的Bcl-2 AOD值均明顯升高（P<0.05），其中聯(lián)合用藥組Bcl-2 AOD值明顯高于陽性藥物組及中藥治療組（P<0.05），陽性藥物組與中藥治療組比較無明顯差異（P>0.05）；與模型對(duì)照組比較，陽性藥物組、中藥治療組、聯(lián)合用藥組的BAX AOD值均明顯下降（P<0.05），其中聯(lián)合用藥組BAX AOD值明顯低于陽性藥物組及中藥治療組（P<0.05），陽性藥物組與中藥治療組比較無明顯差異（P>0.05）；與模型對(duì)照組比較，陽性藥物組、中藥治療組、聯(lián)合用藥組的乳腺炎癥指數(shù)均明顯下降（P<0.05），其中聯(lián)合用藥組乳腺炎癥指數(shù)明顯低于陽性藥物組及中藥治療組（P<0.05），陽性藥物組乳腺炎癥指數(shù)低于中藥治療組（P<0.05）。詳見表5、圖2。

2.4? 各組大鼠乳腺組織IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9蛋白及mRNA的表達(dá)水平比較

與假手術(shù)組大鼠比較，模型對(duì)照組大鼠IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9蛋白及mRNA的表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）；與模型對(duì)照組比較，陽性藥物組、中藥治療組、聯(lián)合用藥組的IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9蛋白及mRNA的表達(dá)水平均明顯降低（P<0.05），其中聯(lián)合用藥組上述蛋白及mRNA表達(dá)水平明顯低于陽性藥物組及中藥治療組（P<0.05），而陽性藥物組的IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9蛋白及mRNA的表達(dá)水平均明顯高于中藥治療組（P<0.05）。詳見表6—7、圖3。

3 討論

目前，NPM的發(fā)生、發(fā)展及治療相關(guān)機(jī)制仍未完全闡明?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，NPM的發(fā)生受自身免疫功能異常、反復(fù)發(fā)生的炎癥感染、泌乳素異常分泌、基因多態(tài)性、外來損傷等因素影響，同時(shí)與體內(nèi)的多個(gè)信號(hào)通路及生物學(xué)過程調(diào)控的生理病理改變密切相關(guān)[12-13]。在治療上多采取手術(shù)治療、抗感染治療、激素治療、免疫治療等方式，但往往臨床效果欠佳。KONG等[14]研究表明，NPM的發(fā)生與炎癥因子IL-6密切相關(guān)，由其作為啟動(dòng)子的JAK2/STAT3信號(hào)通路目前已被證實(shí)是調(diào)控女性泌乳素增高的關(guān)鍵信號(hào)通路，同時(shí)LIU等[15]認(rèn)為其可能是導(dǎo)致NPM發(fā)生、發(fā)展的重要信號(hào)通路。

通常認(rèn)為，IL-6/JAK2/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是細(xì)胞內(nèi)調(diào)控轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵通路。IL-6作為炎性應(yīng)激的啟動(dòng)子激活JAK2蛋白，其能夠激活細(xì)胞內(nèi)的STAT3蛋白促進(jìn)泌乳素的分泌，同時(shí)使得促炎因子積聚在乳腺部位，STAT3蛋白激活后，其磷酸化水平增加，發(fā)生活化并進(jìn)入細(xì)胞核，入核后的STAT3能夠啟動(dòng)基因Caspase-9、BAX等凋亡基因的表達(dá)，并促進(jìn)IL-6蛋白的表達(dá)，前者介導(dǎo)細(xì)胞凋亡水平加快，后者介導(dǎo)炎性反應(yīng)加劇，二者之間往往形成惡性循環(huán)，Caspase-9、BAX等凋亡基因可促進(jìn)炎性反應(yīng)，反之亦然，導(dǎo)致大量的炎性物質(zhì)釋放至細(xì)胞外，造成強(qiáng)烈的炎性反應(yīng)[16-18]。ZHANG等[19]研究證實(shí)，IL-6/JAK2/STAT3信號(hào)通路的激活機(jī)制屬于級(jí)聯(lián)反應(yīng)，一旦該信號(hào)通路過度激活，促進(jìn)局部的炎性反應(yīng)及自身免疫抵抗，從而發(fā)生超量的免疫、炎性反應(yīng)及局部損傷。在臨床中，NPM患者往往在乳房局部發(fā)生非乳房部位的結(jié)節(jié)性紅斑、關(guān)節(jié)炎等表現(xiàn)。由此可見，IL-6/JAK2/STAT3信號(hào)通路介導(dǎo)的炎癥以及自身免疫應(yīng)答反應(yīng)是NPM發(fā)生、發(fā)展的兩大重要因素。在本研究動(dòng)物模型的選擇上，由于目前臨床上多數(shù)NPM患者在病理上可發(fā)現(xiàn)肉芽腫[20]，因此，選取人NPM組織和弗氏完全佐試劑混合勻漿后進(jìn)行造模的方法構(gòu)建NPM大鼠模型，造模成功率較高，存在較好的創(chuàng)新性，值得進(jìn)一步推廣，亦將在接下來的研究中繼續(xù)使用。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，NPM多屬于“粉刺性乳癰”范疇，清代名醫(yī)葉桂在《臨證指南醫(yī)案·卷九》中提出：“（女子）乳房以肝為先天”，肝氣郁結(jié)，拂郁難解，日久痰瘀結(jié)聚乳房局部，加之脾胃濕熱，熱盛肉腐，腫塊難消，形成難膿、難潰、難斂之有形包塊，日久遷延，頗為棘手，患者痛苦不堪。古今醫(yī)家多從清熱、化痰、散瘀等治法著手，可起到較顯著的臨床療效。西黃膠囊是中醫(yī)外科經(jīng)典方劑西黃丸的膠囊劑型，其由牛黃、麝香、乳香、沒藥等藥物組成，方簡力專，能清熱結(jié)、通瘀滯、消腫止痛。顧媛媛等[21]研究證實(shí)，西黃丸具有改善局部內(nèi)環(huán)境免疫穩(wěn)態(tài)、緩解炎性反應(yīng)的功能。目前有關(guān)西黃膠囊治療NPM的藥效機(jī)制研究及基礎(chǔ)研究較為少見，多數(shù)研究屬于個(gè)案分析及臨床觀察，因此本研究具有較高的創(chuàng)新性。

本研究結(jié)果顯示，西黃膠囊能有效促進(jìn)NPM大鼠模型創(chuàng)面愈合，調(diào)控BAX、Bcl-2等凋亡因子改善局部病理情況，抑制局部炎性反應(yīng)程度，同時(shí)降低NPM大鼠模型乳腺組織IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9蛋白及mRNA表達(dá)水平，其中聯(lián)合用藥組效果最佳，凸顯出中西醫(yī)結(jié)合治療NPM的“協(xié)同增效”作用。研究IL-6/JAK2/STAT3信號(hào)通路在NPM的具體作用機(jī)制，為本病治療提供了新的思路及方法，是較為值得去嘗試的重要研究方向之一。綜上所述，西黃膠囊能有效促進(jìn)NPM大鼠模型的乳腺組織創(chuàng)面愈合，抑制乳腺組織細(xì)胞凋亡及炎癥反應(yīng)，其作用機(jī)制可能與西黃膠囊抑制IL-6/JAK2/STAT3信號(hào)通路相關(guān)。

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（本文編輯? 匡靜之）