過敏性紫癜患兒濾泡輔助性T細(xì)胞及其亞群水平變化的臨床意義

白跳艷

西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,陜西西安 710016

過敏性紫癜為兒童常見疾病,主要臨床癥狀包括下肢及臀部紫癜、關(guān)節(jié)疼痛或關(guān)節(jié)炎、腹痛等,且患兒出現(xiàn)腎功能損害的概率達(dá)20%,嚴(yán)重影響患兒健康[1]。研究發(fā)現(xiàn),過敏性紫癜常見于10歲以下兒童,尤其是4～6歲年齡段,并且該病復(fù)發(fā)率高,給患兒家庭及社會(huì)帶來較大負(fù)擔(dān)[2-3]。目前關(guān)于過敏性紫癜的發(fā)病機(jī)制仍處于探索階段,眾多研究均表明,免疫功能紊亂是引起過敏性紫癜的重要因素[4-5]。隨著對(duì)機(jī)體免疫功能紊亂研究的加深,有研究者認(rèn)為過敏性紫癜可能與濾泡輔助性T細(xì)胞(Tfh)有關(guān)[6]。Tfh屬于CD4+T細(xì)胞亞群,其可表達(dá)趨化因子受體5(CXCR5),輔助B細(xì)胞誘導(dǎo)抗體應(yīng)答,在B細(xì)胞轉(zhuǎn)化中具有重要調(diào)控作用。根據(jù)Tfh表面趨化因子表達(dá)情況,可將其分為Tfh1(CCR6-CXCR3+Tfh)、Tfh2(CCR6-CXCR3-Tfh)、Tfh17(CCR6+CXCR3-Tfh)3個(gè)亞群,后二者能夠輔助B細(xì)胞分化成漿細(xì)胞,繼而產(chǎn)生免疫球蛋白[7-8]。以往有研究報(bào)道Tfh及亞群參與了兒童過敏性紫癜發(fā)病過程,但主要聚焦在作用機(jī)制及紫癜性腎炎的發(fā)生[9-10],而關(guān)于Tfh及其亞群與患兒預(yù)后關(guān)系的報(bào)道卻較為少見。本研究通過觀察過敏性紫癜患兒Tfh及亞群水平,并分析其與患兒病情及預(yù)后的關(guān)系,以期為臨床改善患兒預(yù)后提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年8月至2022年1月西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院(以下簡(jiǎn)稱本院)收治的114例過敏性紫癜患兒作為觀察組,其中男60例,女54例;年齡4～13歲,平均(9.83±1.96)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合過敏性紫癜診斷標(biāo)準(zhǔn)[11];(2)年齡3～14歲;(3)入組前未使用過糖皮質(zhì)激素或其他免疫抑制劑。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)存在嚴(yán)重感染性疾病;(2)有系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎病綜合征等免疫系統(tǒng)疾病史;(3)合并心、肝、肺等重要臟器功能障礙;(4)有過敏性鼻炎、支氣管哮喘等過敏性疾病史。另選擇同期于本院行體檢的57例健康兒童作為對(duì)照組,其中男34例,女23例;年齡5～14歲,平均(9.91±2.03)歲。兩組研究對(duì)象性別、年齡比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本次研究符合《赫爾辛基宣言》,患兒家屬均知情同意。

1.2儀器與試劑 FACSCantoⅡ型流式細(xì)胞儀購(gòu)自BD Biosciences公司,CD3-BV510、CXCR3-PE、CXCR5-PECY7、CCR6-PerCP-Cy5.5均購(gòu)自BD Biosciences公司,紅細(xì)胞裂解液購(gòu)自天根生化科技北京有限公司,CD4-FITC購(gòu)自北京四正柏公司。

1.3方法

1.3.1Tfh及亞群水平檢測(cè) 采集受檢者清晨空腹靜脈血3 mL,肝素鈉抗凝,分成3管,第1管加入CD3-BV510、CD4-FITC,第2管加入CD3-BV510、CD4-FITC、CXCR5-PECY7,第3管加入CD3-BV510、CD4-FITC、CXCR3-PE、CXCR5-PECY7、CCR6-PerCP-Cy5.5,振蕩混勻后室溫下避光孵育30 min,之后向每管加入2 mL紅細(xì)胞裂解液,振蕩混勻,靜置10 min后以3 000 r/min離心3 min,除去上清液,加入1 mL磷酸鹽緩沖液(PBS),振蕩混勻,再次以3 000 r/min離心3min,除去上清液,重復(fù)相關(guān)操作,向得到的液體中加入200 μL PBS重懸細(xì)胞,置于流式細(xì)胞儀上檢測(cè)。

1.3.2紫癜癥狀評(píng)估 根據(jù)FESSATOU等[12]制訂的過敏性紫癜癥狀評(píng)分法對(duì)觀察組患兒紫癜癥狀(皮膚紫癜、關(guān)節(jié)、消化道、腎臟)進(jìn)行評(píng)估,評(píng)分越高表示患兒過敏性紫癜癥狀越嚴(yán)重。

1.3.3預(yù)后評(píng)估 觀察組患兒出院后均進(jìn)行隨訪,隨訪截止日期為2022年9月30日,記錄隨訪期間患兒過敏性紫癜復(fù)發(fā)情況,若復(fù)發(fā)則判為預(yù)后不良,若無復(fù)發(fā)則判為預(yù)后良好。

2 結(jié) 果

2.1觀察組和對(duì)照組Tfh及其亞群水平比較 觀察組Tfh、Tfh2水平均高于對(duì)照組,Tfh1水平低于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但兩組Tfh17水平比較,差異無統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)。見表1。

表1 觀察組和對(duì)照組Tfh及其亞群水平比較

2.2不同紫癜癥狀評(píng)分的過敏性紫癜患兒Tfh及其亞群水平比較 觀察組患兒紫癜癥狀評(píng)分為(5.27±1.14)分,其中≤4分38例,>4分76例。紫癜癥狀評(píng)分>4分的患兒Tfh、Tfh2水平高于紫癜癥狀評(píng)分≤4分的患兒,Tfh1水平低于紫癜癥狀評(píng)分≤4分的患兒,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但不同紫癜癥狀評(píng)分患兒的Tfh17水平比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同紫癜癥狀評(píng)分的過敏性紫癜患兒Tfh及其亞群水平比較

2.3過敏性紫癜患兒Tfh及其亞群水平與紫癜癥狀評(píng)分的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,過敏性紫癜患兒Tfh、Tfh2水平與紫癜癥狀評(píng)分呈正相關(guān)(P<0.05),Tfh1水平與紫癜癥狀評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),Tfh17水平與紫癜癥狀評(píng)分無明顯相關(guān)性(P>0.05)。見表3。

表3 過敏性紫癜患兒Tfh及其亞群水平與紫癜癥狀評(píng)分的相關(guān)性分析

2.4不同預(yù)后的過敏性紫癜患兒Tfh及其亞群水平比較 根據(jù)隨訪結(jié)果,將觀察組患兒分為預(yù)后良好組(80例)和預(yù)后不良組(34例)。預(yù)后不良組Tfh、Tfh2水平均高于預(yù)后良好組,Tfh1水平低于預(yù)后良好組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但兩組Tfh17水平比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 不同預(yù)后的過敏性紫癜患兒Tfh及其亞群水平比較

2.5Tfh及其亞群水平對(duì)過敏性紫癜患兒預(yù)后的診斷價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示,以預(yù)后良好為對(duì)照,Tfh、Tfh1、Tfh2評(píng)估過敏性紫癜患兒預(yù)后不良的曲線下面積(AUC)分別為0.894、0.849、0.783,診斷過敏性紫癜兒童預(yù)后不良靈敏度分別為88.24%、85.29%、76.47%,特異度分別為71.25%、70.00%、70.83%。見表5。

表5 Tfh及其亞群水平對(duì)過敏性紫癜患兒預(yù)后的診斷價(jià)值

3 討 論

盡管過敏性紫癜具體發(fā)病機(jī)制還不明確,但大量研究證實(shí),過敏性紫癜發(fā)病時(shí)機(jī)體細(xì)胞免疫處于異常狀態(tài),Th1/Th2、Th17/Treg細(xì)胞免疫失衡,這與過敏性紫癜的發(fā)生具有密切關(guān)聯(lián)[13]。近年來有研究發(fā)現(xiàn),除了Th1、Th2等細(xì)胞外,還存在一種具有獨(dú)立效應(yīng)的CD4+T淋巴細(xì)胞亞群,即Tfh。Tfh受B細(xì)胞淋巴瘤6蛋白(Bcl-6)控制,其通常遷移到淋巴濾泡,能夠同時(shí)表達(dá)CXCR5、程序性細(xì)胞死亡蛋白-1(PD-1)、誘導(dǎo)性共刺激分子(ICOS)等因子,可輔助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體[10,14]。有研究顯示,Tfh為抗體產(chǎn)生的重要輔助者,其功能失調(diào)是影響多種疾病(如自身免疫性疾病、腫瘤)發(fā)生的重要因素[15]。而在對(duì)過敏性紫癜患兒的研究中發(fā)現(xiàn),與無過敏性紫癜兒童比較,過敏性紫癜患兒Tfh細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子呈高表達(dá)[16]。本研究顯示,觀察組Tfh水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05),即過敏性紫癜患兒Tfh處于高水平,過敏性紫癜的發(fā)生可能與患兒機(jī)體Tfh水平有關(guān),與以往研究相符。分析原因,Tfh能通過ICOS、CD40L等分子和分泌白細(xì)胞介素(IL)-10、IL-21促使次級(jí)淋巴組織濾泡生發(fā)中心初始B細(xì)胞發(fā)育,還可以促進(jìn)B細(xì)胞抗體類別轉(zhuǎn)換[17],Tfh功能亢進(jìn)可能會(huì)引起自身抗體非正常增殖,介導(dǎo)病態(tài)免疫反應(yīng),繼而參與過敏性紫癜的發(fā)生。進(jìn)一步分析Tfh亞群水平,觀察組Tfh1、Tfh2水平與對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示過敏性紫癜患兒Tfh1/Tfh2處于失衡狀態(tài),其Tfh細(xì)胞以Thf1水平下降、Tfh2水平上升為特點(diǎn)亞群紊亂。

本研究結(jié)果還顯示,不同紫癜癥狀評(píng)分的過敏性紫癜患兒Tfh、Tfh1、Tfh2水平比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且過敏性紫癜患兒Tfh、Tfh1、Tfh2水平與其紫癜癥狀評(píng)分均存在明顯相關(guān)性(P<0.05),提示Tfh、Tfh1、Tfh2水平與過敏性紫癜癥狀密切相關(guān),Tfh、Tfh2水平越高、Tfh1水平越低,患兒紫癜癥狀越嚴(yán)重。Tfh異常表達(dá)越明顯,Tfh1和Tfh2失衡越嚴(yán)重,Tfh功能越亢進(jìn),自身抗體異常增殖介導(dǎo)的病態(tài)免疫反應(yīng)也會(huì)越顯著,反映到患兒上表現(xiàn)為紫癜癥狀愈加明顯。目前臨床治療過敏性紫癜主要予以去除致病因素和對(duì)癥支持治療,大部分患兒經(jīng)治療后可以獲得明顯改善,預(yù)后較好,但仍有許多患兒療效并不理想,容易反復(fù)發(fā)作[18]。本研究觀察不同預(yù)后患兒Tfh及其亞群水平發(fā)現(xiàn),預(yù)后不良組Tfh、Tfh1、Tfh2水平與預(yù)后良好組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示Tfh、Tfh1、Tfh2水平可能與患兒預(yù)后存在關(guān)聯(lián)性。ROC曲線分析結(jié)果表明,Tfh、Tfh1、Tfh2評(píng)估過敏性紫癜患兒預(yù)后不良的AUC分別為0.894、0.849、0.783,靈敏度分別為88.24%、85.29%、76.47%,特異度分別為71.25%、70.00%、70.83%,表明檢測(cè)Tfh、Tfh1、Tfh2水平有利于評(píng)估過敏性紫癜患兒預(yù)后。

綜上所述,過敏性紫癜患兒Tfh、Tfh2水平較高,Tfh1水平較低,Tfh17水平正常,Tfh、Tfh1、Tfh2水平可反映過敏性紫癜患兒病情嚴(yán)重程度,對(duì)患兒Tfh、Tfh1、Tfh2水平進(jìn)行檢測(cè),有利于評(píng)估過敏性紫癜患兒病情及預(yù)后,便于臨床醫(yī)師根據(jù)患兒病情調(diào)整臨床治療方案,盡可能改善患兒預(yù)后。