基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的甘麥大棗湯抗抑郁的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究*

蒲蓮蓮，劉漫，楊穎，嵇晶，何苗，程建明，劉陶世

1 南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 江蘇南京 210023

2 江蘇省經(jīng)典名方工程研究中心 江蘇南京 210023

3 太極四川綿陽(yáng)制藥有限公司 四川綿陽(yáng) 621000

甘麥大棗湯為“醫(yī)圣”張仲景所創(chuàng)，載于《金匱要略》[1]曰：“婦人臟躁，喜悲傷欲哭……甘麥大棗湯主之。甘草三兩，小麥一斤，大棗十枚……亦補(bǔ)脾氣?！痹摲浇M成簡(jiǎn)單，僅有甘草、小麥、大棗三味，可謂藥簡(jiǎn)效彰。方中小麥補(bǔ)營(yíng)益陰，寧心安神為君藥；甘草補(bǔ)養(yǎng)心氣，和中緩急為臣藥；大棗補(bǔ)中益氣，養(yǎng)血安神為佐使藥；三物合用，共奏甘潤(rùn)滋養(yǎng)，養(yǎng)心寧神，和中緩急之功[2]。歷來(lái)醫(yī)家常用于臟躁、郁癥等情志類疾病。有統(tǒng)計(jì)[3]分析古籍中治療類似抑郁癥的方劑中，該方使用頻數(shù)占其匯總方劑的榜首?，F(xiàn)代臨床常用于各類抑郁癥、失眠、更年期綜合征等的治療[4-6]。甘麥大棗湯的長(zhǎng)期臨床應(yīng)用已證明其療效確切，但對(duì)其研究多集中于藥理作用、臨床療效等方面，缺乏對(duì)其復(fù)方中化學(xué)成分的系統(tǒng)分析，嚴(yán)重限制了該方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究及質(zhì)量控制指標(biāo)的確定。

UPLC-Q-TOF-MS是一種高通量、高靈敏度、快速高效的非靶向分析方法，廣泛應(yīng)用于單味或復(fù)方中藥化學(xué)成分的系統(tǒng)分析。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是一種基于系統(tǒng)生物學(xué)理論，選取特定信號(hào)節(jié)點(diǎn)（Nodes）進(jìn)行多靶點(diǎn)藥物分子設(shè)計(jì)的方法。應(yīng)用于中藥研究，形象的反應(yīng)了中藥發(fā)揮療效的多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的特點(diǎn)。本研究采用UPLC-Q-TOF-MS 技術(shù)結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探討甘麥大棗湯抗抑郁的關(guān)鍵成分及作用機(jī)制。

材 料

1 儀器

LC-30A超高效液相色譜儀（日本島津）；Triple Tof5600 +質(zhì)譜儀（美國(guó)ABSCIEX）；超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；電熱套（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

2 藥材和試劑

方中甘草、淮小麥、大棗三味，均購(gòu)置于安徽亳州中藥材市場(chǎng)，經(jīng)鑒定甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的根和根莖；淮小麥為禾本科植物小麥Triticum aestivum L.的穎果；大棗為鼠李科植物棗Ziziphus jujuba Mill.的果實(shí)。

甘草酸銨對(duì)照品（中檢所，110731-202021）；甘草苷對(duì)照品（批號(hào)111610-201908，99%）；熊果酸對(duì)照品（批號(hào)L03A6Y1，99%）；齊墩果酸對(duì)照品（批號(hào)H04J9262784，99%）；鹽酸氟西?。ㄉ虾Ｖ形髦扑幱邢薰荆籐PS（Biosharp公司）；甲醇（美國(guó)TEDIA公司）；乙醇（無(wú)錫市亞盛化工有限公司）；生理鹽水（四川科倫藥業(yè)股份有限公司）；乙腈（德國(guó)默克公司）；甲酸（阿拉丁試劑（上海）有限公司）；小鼠ELISA試劑盒（南京翼飛雪生物科技有限公司）。

3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Babl/c雄性小鼠50只，體質(zhì)量18～20 g，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（滬）2022-0004。適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，自由飲食和飲水。南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查并批準(zhǔn)（202207A062）。

方 法

1 色譜條件

色譜柱：Kromasil （250 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫：40 ℃，流動(dòng)相A為0.1%甲酸水（v/v），流動(dòng)相B為乙腈。梯度洗脫：0～3 min，10% B；3～39 min，90%B；39～41 min，90% B；41～42 min，10% B；42～45 min，0 B。流速為1mL/min，進(jìn)樣量為20 μL。

2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（ESI），離子源溫度（TEM）550 ℃，氣簾氣（CUR）40 psi，霧化氣（GSI）55 psi，輔助加熱氣（GS2）55 psi，離子源噴霧電壓（IS）5500 V/-5500 V，碰撞電壓（CE）10V/-10V，去簇電壓（DP）100 V/-100V，掃描范圍為m/z 50～1500。

3 供試品溶液制備

3.1 對(duì)照品溶液 分別取甘草酸銨、甘草苷、熊果酸、齊墩果酸對(duì)照品各10 mg，置10 mL容量瓶中，甲醇超聲溶解，定容，制成1mg/mL的對(duì)照品溶液。分別量取各對(duì)照品溶液液適量，混合后加入甲醇稀釋，備用。

3.2 甘麥大棗湯樣品溶液 取甘草9 g、淮小麥30 g、大棗15 g，10倍量水浸泡30 min，加熱至沸騰后煎煮60 min，過(guò)濾，再加8倍量水煎煮50 min，濾過(guò)，取濾液8000 r.min-1離心10 min，取上清液過(guò)0.22μm微孔濾膜，備用。取上述所得甘麥大棗湯濾液，濃縮至生藥量1g/m L。

3.3 甘麥大棗湯總黃酮溶液 取甘草9 g、淮小麥30 g、大棗15 g，10倍量乙醇浸泡30 min，回流提取60 min，濾過(guò)，濃縮至無(wú)醇味，加水稀釋至生藥量1 g/m L。

3.4 鹽酸氟西汀溶液 取適量藥品，以生理鹽水配制為2mg/mL藥物溶液。

4 化合物結(jié)構(gòu)分析

照“1”“2”項(xiàng)下條件，采集甘麥大棗湯正、負(fù)離子模式下的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。首先，通過(guò)SciFinder、本草組鑒（HERB）以及文獻(xiàn)，收集整理甘草、淮小麥、大棗的化學(xué)成分信息，構(gòu)建甘麥大棗湯化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)。其次，采用Peakview 1.2軟件對(duì)一級(jí)質(zhì)譜提供的精確準(zhǔn)分子離子峰進(jìn)行分析，計(jì)算其未知化合物的元素組成和可能的分子式（誤差±5.0×10-6），對(duì)各色譜峰進(jìn)行初步鑒定。最后，將目標(biāo)化合物的二級(jí)質(zhì)譜碎片信息與對(duì)照品、數(shù)據(jù)庫(kù)及文獻(xiàn)提供的保留時(shí)間、裂解規(guī)律等進(jìn)行對(duì)比分析。

5 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

5.1 甘麥大棗湯潛在活性成分 通過(guò)PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)獲取已鑒定各成分的SMILES號(hào)或2D結(jié)構(gòu)，導(dǎo)入SwissADME數(shù)據(jù)庫(kù)，根據(jù)ADME參數(shù)篩選潛在活性化學(xué)成分。篩選條件GI absorption為High，Lipinski為Yes[7-8]，少數(shù)不符合條件者，但有研究證明其為主要有效成分，亦將其作為潛在活性成分。如甘草苷、甘草酸[9-10]。

5.2 甘麥大棗湯潛在作用靶點(diǎn) 將潛在活性成分導(dǎo)入SuperPred和SwissTargetPrediction 數(shù)據(jù)庫(kù)，預(yù)測(cè)其靶點(diǎn)，整合去重。在GeneCards、DrugBank、PharmGKB、TDD數(shù)據(jù)庫(kù)，以“depression”為關(guān)鍵詞檢索，整合去重得到抑郁癥疾病靶點(diǎn)。分別將成分和疾病靶點(diǎn)輸入Venny 2.1網(wǎng)站，繪制Venn圖，獲取交集靶點(diǎn)，即為潛在作用靶點(diǎn)。

5.3 成分—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將活性成分、疾病及靶點(diǎn)輸入Cytoscape 3.9.1軟件，構(gòu)建成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。通過(guò)CytoNCA插件對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?，根?jù)degree大小篩選甘麥大棗湯抗抑郁的關(guān)鍵成分。

5.4 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將潛在作用靶點(diǎn)輸入String11.5數(shù)據(jù)庫(kù)，物種選擇“Homo sapiens”，其他參數(shù)默認(rèn)不變，獲取PPI網(wǎng)絡(luò)。將結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1軟件，繪制PPI網(wǎng)絡(luò)圖，利用其CytoNCA功能對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)信息進(jìn)行拓?fù)浞治?，得到甘麥大棗湯治療抑郁癥的核心靶點(diǎn)。

5.5 GO功能與 KEGG 通路富集分析 將篩選出的交集靶點(diǎn)輸入Metascape數(shù)據(jù)庫(kù)，以P＜0.01 作為條件，進(jìn)行GO功能與 KEGG通路富集分析，并采用“微生信”云平臺(tái)進(jìn)行數(shù)據(jù)可視化。最終，構(gòu)建甘麥大棗湯抗抑郁作用的“成分-靶點(diǎn)-通路”關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)。

6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

6.1 分組及給藥 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，按體重隨機(jī)分為空白組、模型組、鹽酸氟西汀組、甘麥大棗湯組、甘麥大棗湯總黃酮組，每組8只小鼠。各組小鼠均灌胃給藥，2次/d（隔12 h）連續(xù)給藥7d?？瞻捉M、模型組灌胃純水，其他組灌胃各組對(duì)應(yīng)藥物。灌胃體積均為10 mL/kg。

6.2 急性抑郁造模方法 在實(shí)驗(yàn)第8天，以LPS腹腔注射方式造模。除空白組外，各組小鼠腹腔注射LPS溶液（.83 mg/kg），給藥體積10 mL/kg，空白組注射等體積生理鹽水。4.5 h后開(kāi)始行為學(xué)檢測(cè)，評(píng)價(jià)小鼠抑郁癥狀。造模6 h后收集小鼠外周血清及腦組織，分別于-20℃及-80℃保存待測(cè)。

6.3 行為學(xué)檢測(cè)方法

6.3.1 懸尾實(shí)驗(yàn) 在小鼠尾尖約2cm處固定，將小鼠頭朝下懸掛于一四周封閉紙箱內(nèi)6min，距離底部約10cm，記錄小鼠2～6min內(nèi)的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。

6.3.2 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 將小鼠置于一直徑10cm，水深20cm容器內(nèi)，水溫24℃左右，觀察6min內(nèi)小鼠游泳情況，記錄小鼠2～6min內(nèi)的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。

6.4 小鼠外周血清IL-1β、TNF-α、5-HT、NE含量檢測(cè) 各組小鼠血清均采用ELISA法檢測(cè)TNF-α、IL-1β、NE、5-HT的含量，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒方法操作。

結(jié) 果

1 甘麥大棗湯化學(xué)成分的鑒定

采用UPLC-Q-TOF-MS/MS 技術(shù)以質(zhì)譜條件項(xiàng)下質(zhì)譜條件對(duì)甘麥大棗湯樣品進(jìn)行正、負(fù)離子全掃，其總離子流圖見(jiàn)圖1。照化合物結(jié)構(gòu)分析項(xiàng)下數(shù)據(jù)處理方法，在甘麥大棗湯中共鑒定出95個(gè)化合物，包括45個(gè)黃酮類、19個(gè)萜類、12個(gè)有機(jī)酸類、4個(gè)氨基酸類以及15個(gè)其他類化合物。各化合物的保留時(shí)間（tR）、碎片離子等信息，見(jiàn)表1。

表1 甘麥大棗湯化學(xué)成分鑒定分析

圖1 甘麥大棗湯的負(fù)離子（A）和正離子（B）模式下 TIC 圖

2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

2.1 甘麥大棗湯化學(xué)成分及其潛在作用靶點(diǎn) 共篩選獲得59個(gè)活性成分，對(duì)活性成分別進(jìn)行靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)和收集，獲得成分靶點(diǎn)366個(gè)和602個(gè)，整理去重共得成分靶點(diǎn)155個(gè)。以“depression”為關(guān)鍵詞，進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，合并去重，最終得到1037個(gè)疾病靶點(diǎn)。繪制成分和疾病靶點(diǎn)Venn圖，獲得潛在靶點(diǎn)40個(gè)，見(jiàn)圖2。

圖2 成分靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)韋恩圖

2.2 成分—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將甘麥大棗湯活性成分、疾病及交集靶點(diǎn)輸入Cytoscape 3.9.1 軟件，構(gòu)建甘麥大棗湯成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)（圖3）。通過(guò)拓?fù)浞治觯詃egree計(jì)，大于中位數(shù)的即為甘麥大棗湯抗抑郁的關(guān)鍵成分，共12個(gè)，即芹菜素、N-去甲（基）荷葉堿、山奈酚、大豆素、柚皮素、甘草黃酮C、烏拉爾醇、甘草黃酮醇、甘草寧C、甘草次酸、烏藥堿、巴婆堿。

圖3 成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.3 PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建及核心靶點(diǎn)篩選 將潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入String11.5數(shù)據(jù)庫(kù)，獲取靶點(diǎn)間相互作用關(guān)系，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，見(jiàn)圖4。以degree、betweenness、closeness 3 個(gè)重要拓?fù)鋮?shù)均大于其中位數(shù)進(jìn)行篩選，并以degree計(jì)，TNF、SLC6A3、ESR1、MAOB、MAPK1、PTGS2、MAOA等16個(gè)靶點(diǎn)可能為甘麥大棗湯抗抑郁作用的核心靶點(diǎn)。

圖4 交集靶點(diǎn) PPI 網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 GO功能KEGG信號(hào)通路分析 對(duì)個(gè)16核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能和KEGG信號(hào)通路富集分析，共獲得個(gè)GO條目284個(gè)，分別為生物過(guò)程（BP）條目248 個(gè)，細(xì)胞組成（CC）條目28 個(gè)，分子功能（MF）條目8 個(gè)，見(jiàn)圖5。生物過(guò)程主要涉及到神經(jīng)遞質(zhì)水平調(diào)節(jié)、跨突觸信號(hào)調(diào)節(jié)、認(rèn)知、學(xué)習(xí)和記憶等；細(xì)胞組成主要是樹(shù)突、膜筏、軸突、突觸膜等；分子功能主要包括胺結(jié)合、神經(jīng)遞質(zhì)受體活性、蛋白酶結(jié)合、磷酸酶結(jié)合、氧化還原酶活性等。

圖5 GO 富集分析

通過(guò) KEGG 富集分析得到信號(hào)通路37條，取前20條通路進(jìn)行可視化見(jiàn)圖6。結(jié)果顯示，與甘麥大棗湯抗抑郁有密切聯(lián)系的信號(hào)通路主要有神經(jīng)退行性病變-多種疾病通路）、5-羥色胺能突觸、環(huán)磷酸腺苷信號(hào)傳導(dǎo)、帕金森病、神經(jīng)活性配體-受體相互作用等神經(jīng)相關(guān)通路；乳腺癌、催乳素信號(hào)通路、內(nèi)分泌抵抗、雌激素信號(hào)通路等內(nèi)分泌相關(guān)通路；IL-17信號(hào)通路、人類乳突病毒感染、T細(xì)胞受體信號(hào)通路等炎癥免疫相關(guān)通路。構(gòu)建甘麥大棗湯抗抑郁作用的“關(guān)鍵活性成分-靶基因-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)，見(jiàn)圖7。

圖7 成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)

3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

3.1 小鼠行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果 結(jié)果如表2所示，與空白組比較，模型組懸尾及強(qiáng)迫游泳累計(jì)不動(dòng)時(shí)間均明顯延長(zhǎng)，表明造模成功。與模型組相比，各組懸尾及強(qiáng)迫游泳累計(jì)不動(dòng)時(shí)間均顯著降低。

表2 各組對(duì)LPS致急性抑郁小鼠抑郁樣行為的影響（ ±s，n=8）

表2 各組對(duì)LPS致急性抑郁小鼠抑郁樣行為的影響（ ±s，n=8）

注：與空白組比較 # P＜0.01，與模型組比較 * P＜0.01

組別劑量懸尾累計(jì)不動(dòng)時(shí)間/s強(qiáng)迫游泳累計(jì)不動(dòng)時(shí)間/s體重/g空白組—47.69±13.2385.77±17.7924.25±0.77模型組—86.13±16.95#141.11±16.75#24.26±1.58鹽酸氟西汀組20mg/kg27.05±7.37*47.76±14.99*23.41±0.57甘麥大棗湯組10g/kg53.91±13.47*48.67±11.19*23.90±0.81甘麥大棗湯總黃酮組10g/kg49.45±12.22*55.90±12.51*24.03±1.37

3.2 小鼠外周血清IL-1β、TNF-α含量結(jié)果 結(jié)果如表3所示，與空白組比較，模型組小鼠外周血清中的 IL-1β、TNF-α含量均顯著升高。與模型組相比，各給藥組均可明顯降低小鼠血清中IL-1β、TNF-α含量，其中甘麥大棗湯組較其總黃酮組低，差異具有顯著性。

表3 各組對(duì)LPS致急性抑郁小鼠炎性因子及神經(jīng)遞質(zhì)的影響（ ±s，n=8）

表3 各組對(duì)LPS致急性抑郁小鼠炎性因子及神經(jīng)遞質(zhì)的影響（ ±s，n=8）

注：與空白組比較 # P＜0.01，與模型組比較 * P＜0.01

組別劑量IL-1β/ng·L-1TNF-α/ng·L-1空白組—41.42±5.47188.01±65.19模型組—115.22±7.06#664.40±42.02#鹽酸氟西汀組20mg/kg54.49±7.48*290.62±85.68*甘麥大棗湯組10g/kg62.98±3.12*324.76±58.45*甘麥大棗湯總黃酮組10g/kg74.40±3.82*412.23±42.45*

3.3 小鼠外周血清5-HT、NE含量結(jié)果 結(jié)果如表4所示，與空白組相比，模型組小鼠腦組織中的5-HT、NE含量明顯降低。與模型組相比，各給藥組5-HT、NE含量不同程度升高。甘麥大棗湯組較其總黃酮組高，差異具有顯著性。

表4 各組對(duì)LPS致急性抑郁小鼠5-HT、NE的影響（ ±s，n=8）

表4 各組對(duì)LPS致急性抑郁小鼠5-HT、NE的影響（ ±s，n=8）

注：與空白組比較 # P＜0.01，與模型組比較 * P＜0.01

組別劑量5-HT/ng·L-1 NE/ng·L-1空白組—218.53±6.69121.60±10.91模型組—71.39±5.93#51.01±10.15#鹽酸氟西汀組20mg/kg190.17±9.28*110.00±9.03*甘麥大棗湯組10g/kg161.81±11.40*97.16±6.27*甘麥大棗湯總黃酮組10g/kg133.64±9.03*84.23±4.16*

討 論

本研究從甘麥大棗湯的水煎液中共鑒定出95個(gè)化學(xué)成分，包括黃酮類、萜類、有機(jī)酸等，經(jīng)篩選獲得59個(gè)活性成分。在此基礎(chǔ)上，運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析預(yù)測(cè)了甘麥大棗湯抗抑郁作用的關(guān)鍵活性成分、核心靶點(diǎn)和作用機(jī)制。篩選出的芹菜素、N-去甲（基）荷葉堿、甘草黃酮C、甘草黃酮醇、甘草次酸等12個(gè)關(guān)鍵活性成分，其中8個(gè)為黃酮類成分。已有研究證實(shí)[32]，多種黃酮類化合物具有抗抑郁作用，其作用機(jī)制可能與透過(guò)血腦屏障作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，影響單胺神經(jīng)遞質(zhì)、調(diào)節(jié)HPA軸相關(guān)。其中，芹菜素可調(diào)節(jié)大腦中的5-HT水平發(fā)揮抗抑郁作用。甘草黃酮能上調(diào)BDNF及其受體Trk B的蛋白表達(dá)發(fā)揮抗抑郁作用[33]。甘草次酸通過(guò)抑制炎性因子TNF-α、IL-6釋放產(chǎn)生抗抑郁作用[34]。因此，可認(rèn)為黃酮類成分、甘草次酸可能是甘麥大棗湯抗抑郁作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。此外，獲得了TNF、SLC6A3、MAOB等16個(gè)核心靶點(diǎn)，其中TNF是一種促炎細(xì)胞因子，而抑郁癥的發(fā)生、發(fā)展與促炎細(xì)胞因子的中樞和外周濃度升高密切相關(guān)[35]，機(jī)體應(yīng)激后情緒、行為的改變也與炎性因子密切相關(guān)[36]。許一凡[37]等研究發(fā)現(xiàn)甘麥大棗湯能明顯改善LPS急性抑郁模型小鼠抑郁樣行為，顯著降低外周及中樞IL-1β、TNF-α含量，抑制IL-1β基因表達(dá)。因此，可表明預(yù)測(cè)的潛在靶點(diǎn)TNF是甘麥大棗湯主要成分抗抑郁的靶點(diǎn)。DA、5-HT、NE等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)異常主流認(rèn)為是抑郁發(fā)生的主要因素。SLC6A3是一種多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，在神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)方面起著重要作用，與多種精神類疾病發(fā)生相關(guān)[38]。MAOB（MAOA）是一種單胺氧化酶，與5-HT代謝密切相關(guān)[39]。因此，可從炎性因子、多巴胺、5-HT能神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控等角度開(kāi)展甘麥大棗湯抗抑郁的作用機(jī)制研究。

GO功能富集分析，甘麥大棗湯可通過(guò)神經(jīng)遞質(zhì)水平調(diào)節(jié)、跨突觸信號(hào)調(diào)節(jié)、認(rèn)知、學(xué)習(xí)和記憶等BP；樹(shù)突、膜筏、軸突、突觸膜等CC；胺結(jié)合、神經(jīng)遞質(zhì)受體活性、蛋白酶結(jié)合、磷酸酶結(jié)合等MF抗抑郁。KEGG通路富集分析了37條信號(hào)通路，包括神經(jīng)退行性病變-多種疾病通路、5-羥色胺能突觸、阿茲海默病等。其中5-羥色胺能突觸通過(guò)調(diào)控相關(guān)5-HT的水平及相應(yīng)受體數(shù)量或功能改善抑郁癥狀[40]，也可影響γ-氨基丁酸、多巴胺等其他神經(jīng)遞質(zhì)釋放，還可以調(diào)控HPA軸發(fā)揮抗抑郁作用[41]。神經(jīng)退行性病變-多種疾病通路與阿爾茨海默、帕金森、腦萎縮等各種神經(jīng)損害性疾病密切相關(guān)，表現(xiàn)為大腦或脊髓特定區(qū)域神經(jīng)元死亡[42]。有研究[43]表明神經(jīng)退行性疾病和抑郁癥狀有一定的關(guān)聯(lián)度，兩者之間擁有共同的發(fā)病機(jī)制或病理生理學(xué)變化，神經(jīng)退行性疾病可能直接參與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展。

LPS腹腔注射建立急性抑郁動(dòng)物模型，已廣泛應(yīng)用于研究藥物抗抑郁作用與抑制炎癥反應(yīng)關(guān)系的模型載體[44-45]。本研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)LPS應(yīng)激后，與空白組比較，模型組小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾不動(dòng)時(shí)間均顯著增加，表明LPS可誘導(dǎo)小鼠行為學(xué)異常，抑郁造模成功。與模型組相比，各給藥組均可改善LPS誘導(dǎo)的小鼠抑郁樣行為，表現(xiàn)出抗抑郁作用，同時(shí)甘麥大棗湯及其總黃酮組可降低小鼠血清中IL-1β、TNF-α含量，上調(diào)5-HT、NE含量。該結(jié)果與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究所預(yù)測(cè)的靶點(diǎn)TNF、MAOB、通路5-HT能突觸及黃酮類成分相符，表明網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果具有一定的準(zhǔn)確性。

綜上所述，本研究首次采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)初步闡明了甘麥大棗湯中關(guān)鍵活性成分、潛在作用靶點(diǎn)及通路，并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，表明甘麥大棗湯抗抑郁作用的發(fā)揮與下調(diào)IL-1β、TNF-α含量、上調(diào)5-HT、NE含量相關(guān)。為該方進(jìn)一步的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制研究提供了參考依據(jù)。