• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    貴州魔芋軟腐病菌多基因分子鑒定及其致病力分析

    2023-08-05 19:53:05黃露周兵正安星宇等
    植物保護(hù) 2023年4期
    關(guān)鍵詞:軟腐病魔芋

    黃露 周兵正 安星宇等

    關(guān)鍵詞 魔芋;軟腐??;病原鑒定;致病力

    中圖分類號(hào):S 436.32 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A DOI:10.16688/j.zwbh.2022328

    魔芋Amorph,ophallus konjac是天南星科的一種多年生草本植物,主要分布在中國(guó)、日本及東南亞等國(guó)家和地區(qū),其塊莖富含葡甘聚糖,被廣泛用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域,是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物,也是貴州省的特色產(chǎn)業(yè)之一[1-2]。隨著魔芋大面積規(guī)?;N植,病害發(fā)生也越來(lái)越重,其中魔芋軟腐病是魔芋生產(chǎn)中危害最嚴(yán)重的病害,可造成產(chǎn)量損失30%~50%,甚至絕收[3]。魔芋軟腐病普遍發(fā)生于貴州魔芋種植區(qū),已成為限制貴州魔芋產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要因素之一。

    魔芋軟腐病是由果膠桿菌Pectobacterium和迪基氏菌Dickeya等引起的細(xì)菌性病害,有學(xué)者認(rèn)為其致病菌為胡蘿卜歐文氏菌胡蘿卜亞種Erwinia carotovora subsp.carotovora[4-5],修建華等通過(guò)16S- 23S rDNA轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)分析,將魔芋軟腐病菌分為胡蘿卜歐文氏菌胡蘿卜亞種、菊歐文氏菌Erwinia chrysanthemi及一株未能確定的菌株[6]。吳金平認(rèn)為我國(guó)魔芋軟腐病的病原菌主要為胡蘿卜歐文氏菌胡蘿卜亞種和菊歐文氏菌,同時(shí)分離到一株新的引起軟腐病的細(xì)菌一腸桿菌屬細(xì)菌En-terobacter sp.[7]。盧美歡等發(fā)現(xiàn)陜南地區(qū)魔芋軟腐病的病原菌為胡蘿卜果膠桿菌Pectobacterium ca-rotovorum[8]。孫苗苗研究發(fā)現(xiàn)引起湖北省魔芋軟腐病的主要為海芋果膠桿菌Pectobacteriumaroidearum和方中達(dá)迪基氏菌Dickeya fang-zhongdai[9]。魏環(huán)宇等發(fā)現(xiàn)云南省珠芽魔芋軟腐病的病原菌為海芋果膠桿菌[10-11]。而對(duì)貴州魔芋軟腐病菌的研究,僅有本研究組前期發(fā)現(xiàn)黔東南魔芋軟腐病菌為菊歐文氏菌E.chrysanthe-mi[12]。目前貴州省內(nèi)許多地區(qū)引起軟腐病的病原菌種類和分布仍不清晰,本研究采集貴州省主要魔芋種植基地的軟腐病樣,進(jìn)行病菌的分離鑒定及致病力分析,明確貴州魔芋軟腐病菌種類、致病力及分布特點(diǎn),旨在為魔芋軟腐病的防治工作提供科學(xué)依據(jù)。

    1材料與方法

    1.1試驗(yàn)材料和培養(yǎng)基

    從貴州省威寧、水城、赫章、雷山等魔芋種植地采集發(fā)生軟腐病的魔芋塊莖、葉柄,裝進(jìn)采樣袋中,標(biāo)記采集信息,帶回試驗(yàn)室備用。

    營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(NA):蛋白胨10g/L,牛肉膏粉5g/L,氯化鈉5g/L,瓊脂12g/L。營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(NB):蛋白胨10g/L,牛肉膏粉3g/L,氯化鈉5g/L。

    1.2試驗(yàn)方法

    1.2.1病原菌分離

    采用平板劃線法分離病原菌[13-14]。病樣用75%乙醇表面消毒2 min,在無(wú)菌條件下挑取魔芋病樣病健交界部分的小塊組織,轉(zhuǎn)移到含0.5 mL無(wú)菌生理鹽水(0.85%NaCl)的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,用滅菌玻璃棒將病組織搗碎,無(wú)菌條件下室溫靜置10~15 min,形成細(xì)菌懸浮液。用滅菌的移植環(huán)蘸取少量汁液在NA平板上劃線,于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,挑取單菌落,轉(zhuǎn)接純化1~2次后,4℃和—80℃保存。

    1.2.2病原菌的分子鑒定

    1.2.2.1病原菌DNA提取及PCR擴(kuò)增

    采用天根細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取病原菌基因組DNA,參考Bing等和Waleron等的方法[15-16],選用icdA、mdh、mtlD、proA、rpoS基因的引物(表1)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增體系(25μL):2×Taq PCR Mix 12.5μL,10μmol/L的上、下游引物各1μL,DNA模板1μL,ddH20 9.5μL。PCR反應(yīng)程序:95℃預(yù)變性5 min;95℃變性30s,退火溫度下退火30s,72℃延伸1 min,35個(gè)循環(huán);72℃延伸5min。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。將有清晰條帶的樣品送北京諾賽基因組研究中心有限公司測(cè)序。

    1.2.2.2單基因和多基因序列分析及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建

    將測(cè)序獲得的序列進(jìn)行BLAST比對(duì)。采用BioEdit軟件對(duì)從NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取的可信度較高的相似序列進(jìn)行多序列比對(duì),基于icdA,mdh,mtlD,proA和rpoS 5個(gè)管家基因單個(gè)基因及多基因,用MEGA 6.0軟件鄰接法進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建和聚類分析。

    1.2.3病原菌的致病力測(cè)定

    分離的病原菌于NB培養(yǎng)液中,28℃,180 r/min培養(yǎng)24 h,配制成濃度1×10 cfu/mL的菌懸液,吸取2μL接種于用75%乙醇消毒的健康魔芋塊莖(40 mm×40 mm)中央處,以無(wú)菌水為對(duì)照,2次重復(fù),放于28℃培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)24 h后觀察發(fā)病情況,根據(jù)病斑的長(zhǎng)度評(píng)價(jià)病菌的致病力,用Excel和DPS 7.5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用Duncan氏新復(fù)極差法(α=0.05)進(jìn)行差異顯著性分析。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):病斑長(zhǎng)度>30 mm為高致?。╤ighly pathogenic level,H);10mm<病斑長(zhǎng)度≤30 mm為中等致病力(moderately pathogenic level,M);病斑長(zhǎng)度≤10 mm為低致病力(lowly pathogenic level,L),

    2結(jié)果與分析

    2.1魔芋軟腐病原菌分離

    通過(guò)對(duì)貴州赫章、威寧、雷山、平壩、息烽、花溪、荔波、關(guān)嶺、水城等魔芋種植地的軟腐病進(jìn)行調(diào)查,發(fā)現(xiàn)植株于展葉期染病,葉柄頂部及基部首先出現(xiàn)濕潤(rùn)狀暗綠色或黑色小斑(圖1a),后整個(gè)葉柄潰爛,植株倒伏,散發(fā)惡臭味;植株基部或塊莖染病時(shí),早期葉片仍保持綠色,后整株逐漸變黃、干枯、倒伏,地下塊莖呈灰色或黑灰色腐爛,并散發(fā)惡臭味(圖1b~c)。對(duì)采集的各魔芋軟腐病樣進(jìn)行病原菌分離、純化,共獲得47株菌株,回接魔芋塊莖后都造成塊莖腐爛,但不同菌株對(duì)魔芋塊莖的致病程度不同(圖1d~f)。

    2.2單基因序列分析

    以分離的魔芋軟腐病菌基因組總DNA為模板,分別進(jìn)行icdA、mdh、mtlD、proA、rpoS等5個(gè)管家基因的PCR擴(kuò)增及測(cè)序,并分別構(gòu)建單基因系統(tǒng)發(fā)育樹,發(fā)現(xiàn)不同基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹對(duì)軟腐病菌的鑒定結(jié)果有一定的差異,但所有菌株經(jīng)鑒定均分屬于為海芋果膠桿菌Pectobacterium aroidea-rum、胡蘿卜果膠桿菌Pectobacterium carotovoorum或方中達(dá)迪基氏菌Dickeya fangzhongdai 3個(gè)種,其中根據(jù)mdh,mtlD,proA基因構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果基本一致,而采用icdA和rpoS基因時(shí),菌株GZCC.20047、GZCC.20049和GZCC.20053鑒定結(jié)果有差異。基于icdA基因,GZCC.20049菌株與P.carotovorum聚為一支,GZCC.20053單獨(dú)聚為一支;基于rpoS基因,菌株GZCC. 20047、GZCC.20053與P.aroidearum聚為一支(圖2)。

    2.3多位點(diǎn)序列分析

    將分離的魔芋軟腐病菌基因組的5個(gè)管家基因片段進(jìn)行拼接、比對(duì)分析并構(gòu)建多基因聯(lián)合序列系統(tǒng)發(fā)育樹(圖3)。發(fā)現(xiàn)47個(gè)菌株有的聚在同個(gè)類群,有的則聚在不同類群,其中GZCC.20001、GZCC. 20003、GZCC. 20004等33個(gè)菌株與Pectobacterium aroidearum聚在同一個(gè)分支,同源性較高,均屬于P.aroidearum;GZCC.20039菌株與Pectobacterium carotovorum聚類在同一個(gè)分支,屬于P.carotovorum;而GZCC. 20002、GZCC. 20010、GZCC. 20011等13個(gè)菌株與Dickeya fangzhongdai聚類在同一個(gè)分支,為D.fangzhongdai。

    2.4魔芋軟腐病菌致病力測(cè)定

    通過(guò)對(duì)魔芋軟腐病菌進(jìn)行致病力測(cè)定,發(fā)現(xiàn)不同軟腐菌株的致病力有一定的差異。其中菌株GZCC. 20022、23、24、25、26、43、47、48、49和52號(hào)菌株具有強(qiáng)致病力,病斑直徑達(dá)40 mm;GZCC. 20003、4、5、7、8、12號(hào)菌株致病力較弱,病斑直徑在5. 7~9.8 mm;其余菌株的致病稍弱,病斑在10.5~28.5 mm間(表2)。

    2.5貴州魔芋軟腐病菌分布情況

    通過(guò)對(duì)貴州魔芋軟腐病病原菌進(jìn)行鑒定,發(fā)現(xiàn)病菌分為3個(gè)種Pectobacterium aroidearum、P.ca-rotovorum和Dickeya fangzhongdai,其中P.aroidearum為貴州魔芋軟腐病主要病原菌,約占分離菌株數(shù)的70%,廣泛分布在多個(gè)地區(qū);其次為D.fangzhongdai,占28%,也普遍存在于貴州魔芋種植區(qū);P.carotovorum僅在息烽縣魔芋種植地分離到1株,占2%。

    3結(jié)論與討論

    隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展,近20年來(lái),軟腐病菌的分類發(fā)生很大的變化。1998年,歐文氏菌屬Erwinia spp.有了重大修訂,其許多種被歸到果膠桿菌屬Pectobacterium[17-18],隨后在2005年P(guān)ecto-bacterium chrysanthemi被劃定到新屬迪基氏菌屬Dicke ya[19-20]中。目前Pectobacterium屬包括19個(gè)種,分別為獼猴桃果膠桿菌P.actinidiae,水生果膠桿菌P.aquaticum,海芋果膠桿菌P.aroidearum,黑莖果膠桿菌P.atrosepticum,甜菜果膠桿菌P.betavasculorum,巴西果膠桿菌P.brasiliense,仙人掌果膠桿菌P.cacticidum,胡蘿卜果膠桿菌P.ca-rotovorum,泉水果膠桿菌P.fontis,氣味果膠桿菌P.oderiferum,帕蒙蒂埃果膠桿菌P.parmentieri,微小果膠桿菌P.parvum,秘魯果膠桿菌P.peruvi-ense,北極星果膠桿菌P.polare,波蘭果膠桿菌P.polonicum,旁遮普果膠桿菌P.punjabense,廣泛果膠桿菌P.versatile,山葵果膠桿菌P.wasabiae和馬蹄蓮果膠桿菌P.zantedeschiae;而Dickeya屬有12個(gè)種,分別為菊迪基氏菌D. chrysanthemi,達(dá)旦迪基氏菌D.dadantii(subsp.dadantii and subsp.dieffenbachiae),石竹迪基氏菌D.dianthicola,玉米迪基氏菌D.zeae,水稻迪基氏菌D.oryzae,玉米迪基氏菌D.parazeae,茄迪基氏菌D.solani,方中達(dá)迪基氏菌D.fangzhongdai,水生迪基氏菌D.aquatica,湖泊迪基氏菌D.lacustris,水棲迪基氏菌D.undicola和喜禾本迪基氏菌D.poaceiphilan[18]。

    本研究通過(guò)建立單基因和多基因系統(tǒng)發(fā)育樹對(duì)貴州魔芋軟腐病病原菌進(jìn)行鑒定,發(fā)現(xiàn)貴州魔芋軟腐病病原菌具有一定的多樣性,包括海芋果膠桿菌P.aroidearum、胡蘿卜果膠桿菌P.carotovorum和方中達(dá)迪基氏菌D.fangzhongdai 3個(gè)種,但一些菌株的單基因鑒定結(jié)果與多基因聯(lián)合鑒定結(jié)果有一定差異,由于P.aroidearum、P.carotovorum和D.fangzhongdai 3個(gè)種比較相似,在歷史分類地位上也常把其歸為一類[17-19,21]。僅通過(guò)單個(gè)基因?qū)ζ溥M(jìn)行分類鑒定有一定的局限性,而采用多基因和全基因測(cè)序?qū)ζ滂b定的準(zhǔn)確性更好。本研究發(fā)現(xiàn)P.aroidearum為魔芋軟腐病菌的主要種,廣泛分布于貴州多個(gè)魔芋種植區(qū),其菌株間致病力差異較大,低、中、高致病力菌株都有,而D.fangzhongdai菌株間差異較小,僅有中、高致病力菌株。

    海芋果膠桿菌P.aroidearum在2013年被認(rèn)定主要危害單子葉植物,但不僅限于單子葉植物的軟腐病菌新種[22],近年來(lái)相繼被報(bào)道危害馬鈴薯、西葫蘆、白菜、魔芋、萵苣、辣椒、馬蹄蓮、胡蘿卜、合果芋、甘蔗等作物[18,21,23-32]。對(duì)于魔芋軟腐病的病原菌,以前報(bào)道多是胡蘿卜歐文氏菌胡蘿卜亞種Pecto-bacterium carotovora subsp.carotovora(P.carotovo-rum)和菊歐文氏菌Erwinia chrysanthemi (Dickeya sp.),但近年來(lái)通過(guò)全基因組及多基因序列分析,發(fā)現(xiàn)一些P.carotovorum其實(shí)是P.aroidearum,例如從陜西魔芋軟腐樣品中分離到一株細(xì)菌M8為P.aroidearum[21,33],魏環(huán)宇等發(fā)現(xiàn)云南省珠芽魔芋軟腐病的致病菌也為P.aroidearum[10-11]。

    本研究基于貴州魔芋軟腐病菌種類不清的情況,確定了貴州魔芋軟腐病菌的主要種類、致病力及分布情況,明確P.aroidearum、D.fangzhongdai是貴州魔芋軟腐病的主要病菌,為魔芋軟腐病的發(fā)生流行和科學(xué)防控提供了科學(xué)依據(jù)。

    猜你喜歡
    軟腐病魔芋
    中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所發(fā)現(xiàn)黃瓜幼苗細(xì)菌性軟腐病抗性基因
    不同葉菜類蔬菜品種對(duì)軟腐病的抗性
    揭開魔芋的健康秘密
    中老年保健(2021年1期)2021-12-04 22:55:44
    河南周口水果市場(chǎng)上獼猴桃軟腐病主要病原真菌鑒定及防治研究
    魔芋產(chǎn)業(yè)化,打開致富新大門
    伊犁地區(qū)蝴蝶蘭軟腐病病原體的分離與鑒定
    魔芋優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培管理技術(shù)研究
    三個(gè)蘿卜主產(chǎn)區(qū)軟腐病病原菌的分離與鑒定
    巨魔芋
    魔芋腐乳發(fā)酵工藝優(yōu)化
    蜜桃国产av成人99| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 操美女的视频在线观看| 男女下面插进去视频免费观看| 天天影视国产精品| 黄色成人免费大全| 一区二区三区国产精品乱码| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 99在线人妻在线中文字幕 | 色播在线永久视频| 国产片内射在线| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久中文字幕一级| 久久久精品免费免费高清| 欧美日韩亚洲高清精品| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲午夜理论影院| 国产精品欧美亚洲77777| 国产精品成人在线| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 亚洲美女黄片视频| 国产精品1区2区在线观看. | 波多野结衣一区麻豆| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 一进一出抽搐动态| 满18在线观看网站| 亚洲熟妇熟女久久| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲专区中文字幕在线| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 天天添夜夜摸| 国产不卡一卡二| 午夜视频精品福利| 美女视频免费永久观看网站| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美久久黑人一区二区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲av日韩在线播放| 人妻一区二区av| 18禁国产床啪视频网站| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久人人97超碰香蕉20202| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 淫妇啪啪啪对白视频| 91大片在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 热99re8久久精品国产| av网站免费在线观看视频| 天堂中文最新版在线下载| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产精品av久久久久免费| 满18在线观看网站| 亚洲精品自拍成人| 亚洲一区二区三区欧美精品| 麻豆av在线久日| 丝袜人妻中文字幕| 国产在线免费精品| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 欧美 日韩 精品 国产| 欧美激情久久久久久爽电影 | 成人黄色视频免费在线看| 一级片免费观看大全| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 亚洲国产av影院在线观看| 99riav亚洲国产免费| 亚洲熟妇熟女久久| 国产av一区二区精品久久| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 少妇 在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 精品高清国产在线一区| 精品国产国语对白av| 亚洲欧美一区二区三区久久| 午夜福利影视在线免费观看| 一区二区三区乱码不卡18| 一本久久精品| 欧美精品啪啪一区二区三区| 午夜激情av网站| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 2018国产大陆天天弄谢| 国产一区二区在线观看av| 嫁个100分男人电影在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 视频区欧美日本亚洲| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲熟女精品中文字幕| cao死你这个sao货| 又大又爽又粗| 51午夜福利影视在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| av在线播放免费不卡| 精品一区二区三卡| 99久久人妻综合| 欧美精品啪啪一区二区三区| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 一本色道久久久久久精品综合| 99久久精品国产亚洲精品| 热99re8久久精品国产| 视频区图区小说| 国产成人av教育| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲五月婷婷丁香| 国产精品 国内视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 免费观看人在逋| 极品教师在线免费播放| 国产三级黄色录像| 91精品三级在线观看| 久久av网站| 午夜福利,免费看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 精品人妻在线不人妻| 午夜福利乱码中文字幕| 在线观看一区二区三区激情| 99久久人妻综合| 97在线人人人人妻| 国产男靠女视频免费网站| 国产成人系列免费观看| 丁香六月天网| 久久人人97超碰香蕉20202| 少妇粗大呻吟视频| 999精品在线视频| 免费少妇av软件| 国产亚洲欧美在线一区二区| 露出奶头的视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久九九热精品免费| 精品熟女少妇八av免费久了| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 日韩中文字幕视频在线看片| 欧美成人免费av一区二区三区 | 免费观看av网站的网址| cao死你这个sao货| 又大又爽又粗| 在线观看免费日韩欧美大片| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲国产av影院在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 中文字幕最新亚洲高清| 精品第一国产精品| 中文字幕av电影在线播放| 欧美性长视频在线观看| 国产视频一区二区在线看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久精品国产a三级三级三级| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美精品高潮呻吟av久久| 日本黄色日本黄色录像| 中国美女看黄片| 视频在线观看一区二区三区| 成人手机av| 国产成人欧美在线观看 | 麻豆国产av国片精品| 精品一区二区三区四区五区乱码| 女人精品久久久久毛片| 777米奇影视久久| 日日夜夜操网爽| 精品国产国语对白av| 精品国产亚洲在线| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲av美国av| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 极品人妻少妇av视频| 午夜久久久在线观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲国产欧美网| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 一区二区日韩欧美中文字幕| 视频区欧美日本亚洲| 麻豆av在线久日| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美一级毛片孕妇| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 美女福利国产在线| 亚洲专区国产一区二区| 好男人电影高清在线观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| 两个人免费观看高清视频| 十八禁网站网址无遮挡| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产1区2区3区精品| 亚洲成人手机| 欧美日韩黄片免| 99re在线观看精品视频| 天天添夜夜摸| 国产熟女午夜一区二区三区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 成人18禁在线播放| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲精品中文字幕在线视频| 一级黄色大片毛片| 午夜福利欧美成人| 90打野战视频偷拍视频| 黄片大片在线免费观看| 一级毛片电影观看| 一区二区三区乱码不卡18| 999精品在线视频| 两个人免费观看高清视频| 老司机影院毛片| 久久亚洲真实| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久 成人 亚洲| 亚洲五月色婷婷综合| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| tube8黄色片| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 叶爱在线成人免费视频播放| 波多野结衣一区麻豆| 色尼玛亚洲综合影院| av不卡在线播放| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 男女边摸边吃奶| 最新在线观看一区二区三区| 国产免费视频播放在线视频| 精品久久久精品久久久| 一区二区三区激情视频| 99re在线观看精品视频| 国产成人精品无人区| 国产一区二区在线观看av| 中文字幕av电影在线播放| 成人特级黄色片久久久久久久 | 高清视频免费观看一区二区| cao死你这个sao货| 一本色道久久久久久精品综合| 中文字幕av电影在线播放| 精品国产亚洲在线| 久久亚洲精品不卡| 黄色视频,在线免费观看| 中文欧美无线码| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 免费少妇av软件| 日本黄色日本黄色录像| 在线看a的网站| 精品久久久久久电影网| 丰满迷人的少妇在线观看| 欧美日韩精品网址| www.自偷自拍.com| 国产伦理片在线播放av一区| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲伊人久久精品综合| 91大片在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 搡老岳熟女国产| 国产有黄有色有爽视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲欧洲日产国产| 香蕉久久夜色| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产又色又爽无遮挡免费看| 香蕉丝袜av| 免费不卡黄色视频| 久久人妻av系列| a级毛片黄视频| 亚洲美女黄片视频| 黄色视频,在线免费观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 精品国产国语对白av| 欧美 日韩 精品 国产| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲熟女精品中文字幕| 一级毛片女人18水好多| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 高清视频免费观看一区二区| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲第一av免费看| 电影成人av| 在线播放国产精品三级| 午夜91福利影院| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产在线视频一区二区| 男人操女人黄网站| 色视频在线一区二区三区| 动漫黄色视频在线观看| 丁香欧美五月| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 精品熟女少妇八av免费久了| 丝袜美足系列| 亚洲成人免费av在线播放| 黄频高清免费视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲色图综合在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 人妻一区二区av| 中文欧美无线码| 亚洲 欧美一区二区三区| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 岛国毛片在线播放| 美女主播在线视频| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲精品中文字幕在线视频| www.999成人在线观看| 一区二区三区精品91| 伦理电影免费视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产成人精品久久二区二区91| 欧美一级毛片孕妇| 一二三四在线观看免费中文在| 久久久久精品人妻al黑| 在线观看舔阴道视频| 9色porny在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 国产不卡av网站在线观看| 欧美精品一区二区大全| 久久久精品94久久精品| 亚洲欧美激情在线| 国产主播在线观看一区二区| 最近最新免费中文字幕在线| 正在播放国产对白刺激| 日韩一区二区三区影片| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 日日爽夜夜爽网站| 乱人伦中国视频| 18禁美女被吸乳视频| 国产区一区二久久| 亚洲成人手机| 91成人精品电影| 免费高清在线观看日韩| 精品久久久久久电影网| 午夜91福利影院| 免费看a级黄色片| 五月开心婷婷网| 日韩有码中文字幕| 色视频在线一区二区三区| 亚洲欧美激情在线| 国产不卡av网站在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 婷婷丁香在线五月| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 乱人伦中国视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 两人在一起打扑克的视频| 热re99久久国产66热| 亚洲精品在线观看二区| 90打野战视频偷拍视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产精品熟女久久久久浪| 免费在线观看影片大全网站| 十八禁网站网址无遮挡| 久9热在线精品视频| 久久热在线av| 久久久精品区二区三区| 日本黄色日本黄色录像| 免费观看a级毛片全部| 人人澡人人妻人| 不卡一级毛片| 十八禁网站免费在线| 国产av又大| 怎么达到女性高潮| 免费在线观看影片大全网站| 欧美日本中文国产一区发布| 成人黄色视频免费在线看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 自线自在国产av| 精品国产乱码久久久久久男人| 老熟女久久久| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产成人精品久久二区二区91| 成人三级做爰电影| 九色亚洲精品在线播放| 蜜桃在线观看..| 香蕉国产在线看| 香蕉久久夜色| 国产高清激情床上av| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 欧美久久黑人一区二区| 999久久久国产精品视频| 午夜福利在线免费观看网站| 日本av免费视频播放| 日日夜夜操网爽| 午夜福利视频在线观看免费| 极品教师在线免费播放| 大片电影免费在线观看免费| 又黄又粗又硬又大视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久久久精品国产欧美久久久| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 男人舔女人的私密视频| 99国产综合亚洲精品| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产精品国产高清国产av | 精品人妻在线不人妻| 欧美成狂野欧美在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产又爽黄色视频| 桃红色精品国产亚洲av| 99九九在线精品视频| 精品一品国产午夜福利视频| 男女下面插进去视频免费观看| √禁漫天堂资源中文www| 丰满饥渴人妻一区二区三| 性高湖久久久久久久久免费观看| 少妇的丰满在线观看| 麻豆成人av在线观看| 岛国在线观看网站| 国产片内射在线| 成年版毛片免费区| 欧美激情 高清一区二区三区| 一区在线观看完整版| 99九九在线精品视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 黄色视频,在线免费观看| 在线观看免费午夜福利视频| 大码成人一级视频| 手机成人av网站| 午夜福利一区二区在线看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 欧美成人免费av一区二区三区 | 妹子高潮喷水视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 日本av免费视频播放| 色老头精品视频在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 国产精品电影一区二区三区 | 国产精品二区激情视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产又色又爽无遮挡免费看| 日韩大片免费观看网站| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲天堂av无毛| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 男女下面插进去视频免费观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久久欧美国产精品| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 色播在线永久视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产亚洲av高清不卡| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 青青草视频在线视频观看| 国产不卡一卡二| 777米奇影视久久| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 九色亚洲精品在线播放| 99国产综合亚洲精品| 精品国内亚洲2022精品成人 | 五月天丁香电影| 欧美日本中文国产一区发布| 成人三级做爰电影| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 最近最新免费中文字幕在线| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 免费高清在线观看日韩| 老司机午夜十八禁免费视频| 高清在线国产一区| 妹子高潮喷水视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 欧美日韩黄片免| 日韩欧美免费精品| 午夜成年电影在线免费观看| 99久久人妻综合| 精品免费久久久久久久清纯 | 2018国产大陆天天弄谢| 久久国产精品影院| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 色婷婷av一区二区三区视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲午夜理论影院| 91精品三级在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 悠悠久久av| 大陆偷拍与自拍| 久久ye,这里只有精品| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲精华国产精华精| 久久久久久久久免费视频了| www.自偷自拍.com| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 热re99久久国产66热| 99re在线观看精品视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲熟妇熟女久久| 国产单亲对白刺激| 麻豆乱淫一区二区| 美女高潮到喷水免费观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 丰满饥渴人妻一区二区三| 俄罗斯特黄特色一大片| 伦理电影免费视频| 天天影视国产精品| 中文欧美无线码| 成人永久免费在线观看视频 | av一本久久久久| 搡老岳熟女国产| 性少妇av在线| 亚洲精品国产区一区二| 国产成人影院久久av| 老司机亚洲免费影院| 老司机影院毛片| 精品少妇久久久久久888优播| 一进一出好大好爽视频| 亚洲免费av在线视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久久久国内视频| 欧美日韩精品网址| 男女之事视频高清在线观看| 91九色精品人成在线观看| 日韩三级视频一区二区三区| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 午夜福利一区二区在线看| 少妇的丰满在线观看| 国产精品影院久久| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 狠狠狠狠99中文字幕| 欧美乱码精品一区二区三区| 啦啦啦 在线观看视频| 精品少妇久久久久久888优播| 国产欧美日韩精品亚洲av| 午夜免费鲁丝| 久久久水蜜桃国产精品网| xxxhd国产人妻xxx| 18在线观看网站| 人人澡人人妻人| 蜜桃在线观看..| av一本久久久久| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产成人av激情在线播放| 五月开心婷婷网| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久av网站| svipshipincom国产片| 国产精品久久久av美女十八| aaaaa片日本免费| 成人国产一区最新在线观看| 国产黄频视频在线观看| 国产精品免费视频内射| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 97人妻天天添夜夜摸| 国产伦人伦偷精品视频| 丰满少妇做爰视频| 90打野战视频偷拍视频| 国产免费视频播放在线视频| 天堂动漫精品| 精品第一国产精品| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 午夜视频精品福利| 一进一出抽搐动态| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 老司机亚洲免费影院| 久久人妻熟女aⅴ| 国产在视频线精品| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产成人啪精品午夜网站| 欧美在线黄色| 91麻豆av在线| 亚洲全国av大片| 女警被强在线播放| 亚洲 国产 在线| 99热网站在线观看| 天天影视国产精品| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲精品乱久久久久久| 丝袜喷水一区| 欧美一级毛片孕妇| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国产三级黄色录像| 黄色毛片三级朝国网站| 欧美日本中文国产一区发布| av国产精品久久久久影院| 日韩三级视频一区二区三区| 脱女人内裤的视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久久水蜜桃国产精品网| 欧美久久黑人一区二区| 美女高潮到喷水免费观看| 国产99久久九九免费精品| 欧美日本中文国产一区发布| 日日爽夜夜爽网站| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 男女下面插进去视频免费观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲中文字幕日韩| 精品熟女少妇八av免费久了| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲成a人片在线一区二区| 午夜福利欧美成人| 91大片在线观看| 99国产精品免费福利视频| 国产精品电影一区二区三区 | 91成年电影在线观看| 国产99久久九九免费精品| 露出奶头的视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| cao死你这个sao货| 欧美成人午夜精品| 免费在线观看黄色视频的|