HPLC 法分析30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑含量

譚正瑩，龔會琴，楊鴻波，代前沖

(1.貴州省分析測試研究院，貴陽 550000；2.貴州醫(yī)科大學 公共衛(wèi)生學院 環(huán)境污染與疾病監(jiān)控教育部重點實驗室，貴陽 550025，3.貴州省檢測技術(shù)研究應用中心，貴陽 550000)

戊唑醇(tebuconazole)是由德國拜耳公司開發(fā)、生產(chǎn)的一種高效、廣譜、內(nèi)吸性三唑類殺菌劑，其可抑制病原菌麥角甾醇的生物合成，從而影響病原菌細胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，達到抑制病原菌生長發(fā)育的作用。戊唑醇主要通過種子處理或葉面噴灑等施用方式用于防治銹病、根腐病、白粉病和黑穗病等多種病害[1]。肟菌酯(trifloxystrobin)是由諾華公司研制、拜耳公司開發(fā)的具有高效、低毒、廣譜特性的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，是一種呼吸作用抑制劑[2]。肟菌酯能有效控制真菌病害，對子囊菌、半知菌、擔子菌、卵菌等多個綱的真菌有效，可以防治銹病、稻瘟病和白粉病等多種真菌病害[3]。按適當比例將戊唑醇和肟菌酯進行復配使用，不僅可以提高殺菌效果，同時還可降低病害對單一有效成分的抗性風險。

目前有關(guān)戊唑醇和肟菌酯單劑或與其他有效成分復配而成的制劑的分析方法報道較多，主要包括液相色譜法[410]和氣相色譜法[1113]，但戊唑醇和肟菌酯的復配制劑僅有水分散粒劑劑型的分析方法報道[10,13]，2 者復配的懸浮劑劑型的分析方法研究尚屬空白，本文建立了高效液相色法同時測定30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑中有效成分的分析方法，方法具有操作簡單、靈敏度高、快速準確等特點。

1 材料與方法

1.1 試劑

甲醇(上海安譜實驗科技有限公司，色譜純)；超純水(實驗室自制，電阻率18.2 MΩ×cm，25 ℃)；戊唑醇標準品(上海市農(nóng)藥研究所有限公司，質(zhì)量分數(shù)為99.6%)；肟菌酯標準品(國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，質(zhì)量分數(shù)為99.2%)；30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑(浙江中山化工集團股份有限公司，戊唑醇質(zhì)量分數(shù)為20%、肟菌酯質(zhì)量分數(shù)為10%)；0.45 μm 有機濾膜(上海安譜實驗科技有限公司)。

1.2 儀器

島津LC 2030C 3D Plus，具有PDA 檢測器(島津公司)；XSE205DU 型電子天平(梅特勒 托利多公司)；明澈超純水制備系統(tǒng)(默克公司)；液相色譜柱：ZORBAX SB C18(安捷倫公司，250 mm×4.6 mm，5 μm)。

1.3 液相色譜操作條件

進樣體積：5 μL；檢測波長：230 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；運行時間：15 min；流動相：甲醇+水=80+20(體積比)。在上述色譜條件下，戊唑醇保留時間約為6.3 min，肟菌酯保留時間約為7.7 min。

上述操作條件是典型操作參數(shù)，可根據(jù)不同儀器特點，對給定的操作參數(shù)作適當調(diào)整，以期獲得最佳效果。戊唑醇和肟菌酯標樣色譜圖見圖1，30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑色譜圖見圖2。

圖1 戊唑醇和肟菌酯標樣色譜圖

圖2 30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標準工作溶液的配制

分別稱取0.078 48 g 戊唑醇標樣和0.040 64 g 肟菌酯標樣于同一50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，得到戊唑醇和肟菌酯質(zhì)量濃度分別為1 563.32、806.30 mg/L 的混合標樣母液；分別移取上述母液0.5、1.0、2.5、5.0 mL 置于4 個10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，得到系列梯度濃度的標準工作溶液。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取約含0.02 g 戊唑醇的30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑試樣于50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，過膜待測。

1.4.3 測定

在1.3 節(jié)儀器操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直至相鄰2 針戊唑醇(肟菌酯)峰面積響應值相對變化小于1.5%時，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.4.4 計算

將測得的2 針試樣溶液以及試樣前后2 針標樣溶液中目標物(戊唑醇、肟菌酯)峰面積進行平均，試樣中目標物的質(zhì)量分數(shù)X1(%)按下式計算：

式中：A1為標樣溶液中目標物峰面積的平均值；A2為試樣溶液中目標物峰面積的平均值；m1為標樣的質(zhì)量(g)；m2為試樣的質(zhì)量(g)；ω1為標樣的質(zhì)量分數(shù)(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 特異性測定

采用HPLC PDA 進行掃描測定，戊唑醇和肟菌酯的最小峰純度均大于2 個峰的最小峰純度閾值，表明2 個峰在此區(qū)域具有光譜一致性，峰純度滿足試驗需求，色譜峰純度圖見圖3。

圖3 30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑中戊唑醇和肟菌酯峰純度圖譜

2.2 分析方法的線性相關(guān)性

按1.3 節(jié)儀器操作條件對1.4.1 節(jié)中配制的標準工作溶液進行分析測定。以戊唑醇質(zhì)量濃度為橫坐標，戊唑醇峰面積為縱坐標，得戊唑醇線性方程為y=9 502x+116 725，R2=0.999 2；以肟菌酯質(zhì)量濃度為橫坐標，肟菌酯峰面積為縱坐標，得肟菌酯線性方程為y=43 183x-7 091，R2=0.999 9。表明戊唑醇和肟菌酯在對應的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.3 分析方法的精密度

從同一懸浮劑產(chǎn)品中準確稱取5 個試樣，按1.3節(jié)儀器操作條件進行分析測定，測得戊唑醇和肟菌酯的變異系數(shù)分別為0.48%和0.50%，表明分析方法的精密度良好，見表1。

表1 分析方法的精密度測定

2.4 分析方法的準確度

從已知質(zhì)量分數(shù)的30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑中稱取5 個試樣，分別加入一定量的戊唑醇和肟菌酯標樣，按1.3 節(jié)儀器操作條件進行分析測定，測得戊唑醇和肟菌酯的平均回收率分別為100.4%和100.3%，表明分析方法的準確度良好，見表2、3。

表2 戊唑醇準確度測定

表3 肟菌酯準確度測定

3 結(jié) 論

本文建立了一種同時檢測30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑中有效成分的分析方法。戊唑醇和肟菌酯在測試質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法精密度和準確度高，說明該方法具有操作簡單、靈敏度高、快速準確等特點，是檢測30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑中有效成分含量的理想方法。