達(dá)氟沙星在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的研究進(jìn)展

楊芳，馬開立，楊帆

（河南科技大學(xué)動物科技學(xué)院，河南 洛陽 471003）

達(dá)氟沙星（Danofloxacin）屬于第三代動物專用氟喹諾酮類抗菌藥物，臨床常用甲磺酸達(dá)氟沙星。該藥作用于細(xì)菌的DNA 旋轉(zhuǎn)酶亞單位，抑制細(xì)菌DNA 復(fù)制及轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而產(chǎn)生殺菌作用。其抗菌譜廣，對大腸埃希菌（Escherichia coli）、沙門菌（Salmonella）、胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus Pleuropneumoniae）、變形桿菌（Proteussp.）、敗血波氏菌（Bordetella bronchiseptica）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、支原體（Mycoplasma）和衣原體（Chlamydia）等均有優(yōu)異的殺滅效果。

達(dá)氟沙星自上市以來，以其高效、廣譜、安全和動物專用等特點，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中得到了廣泛應(yīng)用?，F(xiàn)簡述我國水產(chǎn)養(yǎng)殖的用藥情況，以及達(dá)氟沙星在水產(chǎn)動物中的藥動學(xué)、藥效學(xué)、毒性和殘留消除規(guī)律等，擬為該藥在我國水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考。

1 我國水產(chǎn)養(yǎng)殖用藥概況

水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)品極大地豐富了居民的餐桌，提高了居民的生活質(zhì)量[1]。但隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，水產(chǎn)品群發(fā)性傳染病日益增多，且水質(zhì)惡化及富營養(yǎng)化等因素，更是加速了疾病的傳播速度，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。為了有效預(yù)防及治療水產(chǎn)養(yǎng)殖中的疾病，我國先后批準(zhǔn)在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用一些抗菌藥、殺蟲劑及消毒劑等[3-4]。根據(jù)《水產(chǎn)養(yǎng)殖用藥明白紙2022 年1 號和2 號》的規(guī)定，截止到2022 年9 月30 日，我國水產(chǎn)養(yǎng)殖中禁止使用的藥品或化合物共有21 種（或類），停止使用的獸藥有8 種，而批準(zhǔn)使用的獸藥共有126 種，具體種類為：中藥材和中成藥52 種、消毒劑25種、驅(qū)蟲和殺蟲藥16 種、抗生素13 種、生物制品8 種、激素類7 種、維生素類2 種、其他類2 種、抗真菌藥1 種。另外，水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)范用藥要求“六個不用”：不用禁停用藥品、不用假劣獸藥、不用原料藥、不用人用藥、不用化學(xué)農(nóng)藥、不用未批準(zhǔn)的水產(chǎn)養(yǎng)殖用獸藥。按照該用藥原則，達(dá)氟沙星等獸藥在執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師開具處方后，可應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中對感染性疾病的治療。

2 達(dá)氟沙星在水產(chǎn)動物中的藥動學(xué)特征

水產(chǎn)動物，尤其是魚類的藥動學(xué)與陸生動物有顯著差別，這主要是因為魚類均為變溫動物，其體溫會隨養(yǎng)殖水溫的變化而變化。因此，魚體中的藥動學(xué)受多種因素的影響，如水溫、鹽度和水流速度等。目前關(guān)于達(dá)氟沙星在水產(chǎn)動物體內(nèi)的藥動學(xué)研究報道相對較少，僅有關(guān)于大菱鲆（Scophthalmus maximus）、牙鲆（Paralichthys olivaceus）、鱘（Acipenseridae）、虹鱒（Oncorhynchus mykiss）和非洲鯰（Clarias gariepinus）的相關(guān)報道。

文獻(xiàn)[5]進(jìn)行了經(jīng)單次灌胃、肌內(nèi)和靜脈注射后，達(dá)氟沙星在虹鱒體內(nèi)的藥動學(xué)研究，給藥劑量均為10 mg/kg，同時還開展了持續(xù)藥浴（時間為2 h，藥浴中達(dá)氟沙星質(zhì)量濃度為10 mg/L）后達(dá)氟沙星在虹鱒體內(nèi)的藥動學(xué)研究。以上研究中，虹鱒的飼養(yǎng)水溫均為（11.7±0.8）℃。結(jié)果表明，經(jīng)靜脈注射、肌內(nèi)注射、灌胃和藥浴后，達(dá)氟沙星的消除半衰期分別為25.97，42.43，41.04 和40.41 h；以上3 種血管外給藥后，達(dá)氟沙星的峰濃度分別為（3.64±0.12），（2.93±0.23）和（0.36±0.02）mg/L，達(dá)峰時間分別為0.5、4.0 和4.0 h，而達(dá)氟沙星的生物利用度則分別為105.87%、96.92%和10.09%[5]。該研究結(jié)果表明，肌內(nèi)注射后，達(dá)氟沙星的吸收快且完全，灌胃給藥后吸收完全，但吸收速度減慢，而藥浴給藥后吸收慢且效果差。提示藥浴給藥可能并非水產(chǎn)養(yǎng)殖中達(dá)氟沙星的最優(yōu)給藥途徑。文獻(xiàn)[6]比較了達(dá)氟沙星在健康及嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）感染的史氏鱘（Acipenser schrenckii）體內(nèi)的藥動學(xué)差異，給藥方式為單次口灌和靜注，劑量均為10 mg/kg，鱘的飼養(yǎng)水溫為（23±1）℃，結(jié)果表明，感染組中達(dá)氟沙星的吸收速度減慢，分布范圍縮小，消除速度加快，但口灌后的生物利用度差異不大。提示在應(yīng)用達(dá)氟沙星治療鱘嗜水氣單胞菌感染時，應(yīng)考慮感染導(dǎo)致的藥動學(xué)特征的變化。潘玉善等[7]開展了達(dá)氟沙星在鯽（Carassius auratus）體內(nèi)的藥動學(xué)研究，在20 ℃水溫下鯽以10 mg/kg 劑量單次灌胃后，藥物吸收和分布迅速，但消除速度緩慢，吸收、分布和消除半衰期分別為0.63，4.96 和47.79 h。梁俊平等[8]開展了達(dá)氟沙星在健康大菱鲆體內(nèi)的藥動學(xué)研究，給藥途徑包括單次靜脈注射及口灌，給藥劑量均為20 mg/kg體質(zhì)量，大菱鲆的飼養(yǎng)水溫均為（16.0±0.6）℃。結(jié)果顯示，大菱鲆口灌達(dá)氟沙星后，藥物吸收速度緩慢，吸收半衰期為6.299 h，藥物的達(dá)峰時間為12 h，峰質(zhì)量濃度為5.312 mg/L，生物利用度為66%，而消除半衰期更長，達(dá)129 h。表明達(dá)氟沙星在大菱鲆體內(nèi)的吸收速度緩慢且不充分，分布較廣泛，但消除速度緩慢[8]。劉彥等[9-10]比較了達(dá)氟沙星在健康及鰻弧菌（Vibrio anguillarum）感染牙鲆體內(nèi)的藥動學(xué)差異，表明與健康牙鲆相比，達(dá)氟沙星在感染牙鲆體內(nèi)的藥時曲線下面積、峰濃度及生物利用度均有所下降，但消除半衰期有所延長。Aboubakr等[11]研究了在單次靜脈和肌內(nèi)注射（10 mg/kg）給藥途徑下，達(dá)氟沙星在非洲鯰體內(nèi)的藥動學(xué)，結(jié)果顯示，達(dá)氟沙星的消除半衰期為24.49 h，表觀穩(wěn)態(tài)分布容積達(dá)1.07 L/kg，肌內(nèi)注射后達(dá)氟沙星的峰濃度和達(dá)峰時間分別為5.22 mg/L 和1 h，而生物利用度為67.12%。表明在非洲鯰體內(nèi)，達(dá)氟沙星吸收較快，分布廣泛，但消除速度較慢。

3 對水產(chǎn)疾病的藥效學(xué)特征

文獻(xiàn)[5]測定了達(dá)氟沙星對分離自虹鱒的魯氏耶爾森氏菌（Yersinia ruckeri）、假單胞菌（Pseudomonasspp.）和嗜水氣單胞菌的最小抑菌濃度（MIC），在12 ℃水溫下，達(dá)氟沙星對以上3 種病原菌的MIC 值分別為0.02，3.20 和8.00 mg/L。盧彤巖等[12]開展了達(dá)氟沙星對感染嗜水氣單胞菌史氏鱘的藥效學(xué)研究，結(jié)果表明，達(dá)氟沙星對魚類嗜水氣單胞菌的MIC 和最小殺菌濃度（MBC）分別為0.05 和0.10 mg/L。也有研究人員開展了體內(nèi)治療試驗[12]，比較了4 種藥物（達(dá)氟沙星、氟苯尼考、恩諾沙星和新諾明）的治療效果。結(jié)果顯示，達(dá)氟沙星以2.5，10.0 和20.0 mg/kg 劑量連續(xù)口灌給藥4 次，感染鱘的死亡率分別為15%，0 和0；而氟苯尼考、恩諾沙星和新諾明分別以50，10 和100 mg/kg 劑量給藥后，死亡率也均為0。結(jié)果表明，中、高劑量的達(dá)氟沙星對感染嗜水氣單胞菌的史氏鱘的治療效果與恩諾沙星（10 mg/kg）相近，但優(yōu)于氟苯尼考（50 mg/kg）和新諾明（100 mg/kg）。

4 在水產(chǎn)動物中的毒性研究

目前關(guān)于達(dá)氟沙星對水產(chǎn)動物的毒性研究主要集中于鱘。文獻(xiàn)[13]采用口灌和腹腔注射2 種途徑給藥，觀察記錄試驗魚的行為及死亡情況。結(jié)果表明，達(dá)氟沙星對鱘的半數(shù)致死量（LD50）分別為1 502.10 mg/kg 和419.47 mg/kg，對鱘的損傷主要表現(xiàn)在肝臟，通過組織切片及電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞索狀結(jié)構(gòu)消失，肝組織呈彌漫性壞死，肝細(xì)胞腫脹，核腫脹變形，竇狀隙腔變窄，并且肝細(xì)胞內(nèi)充滿脂滴，線粒體脊斷裂，線粒體破裂，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)疏松有斷裂，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量明顯減少，溶酶體破裂。徐連偉等[14]研究了達(dá)氟沙星對施氏鱘非特異性免疫功能的影響，結(jié)果表明，達(dá)氟沙星對肝臟和血清溶菌酶含量具有抑制作用，同時使白細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞吞噬百分比降低。表明該藥能夠顯著降低施氏鱘的非特異性免疫能力。盧彤巖等[15]研究了達(dá)氟沙星對施氏鱘肝臟抗氧化功能和轉(zhuǎn)氨酶活性的影響，發(fā)現(xiàn)在高劑量（50或100 mg/kg）下，達(dá)氟沙星對肝臟的抗氧化損傷顯著；20 mg/kg 劑量下，達(dá)氟沙星對施氏鱘的肝臟沒有明顯的氧化功能損傷，且對肝臟的毒性作用也很小[15]。盧彤巖等[16]研究了達(dá)氟沙星對史氏鱘紅細(xì)胞抗氧化功能及微核形成的影響，發(fā)現(xiàn)達(dá)氟沙星在試驗劑量內(nèi)（20~100 mg/kg），對史氏鱘紅細(xì)胞核微核率沒有明顯的影響，但紅細(xì)胞的核異常率呈明顯升高[16]。徐連偉等[17]還考察了達(dá)氟沙星對史氏鱘血漿及肝臟蛋白含量的影響，發(fā)現(xiàn)達(dá)氟沙星對史氏鱘血漿蛋白含量無顯著影響，但對肝臟蛋白含量有一定的影響，具體表現(xiàn)為各劑量組（20，50 和100 mg/kg）肝臟蛋白含量均低于空白對照組。

5 在水產(chǎn)動物及水產(chǎn)品中的殘留情況

《食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）中規(guī)定，達(dá)氟沙星的殘留標(biāo)志物為原型藥物，在魚中的殘留靶組織為皮+肉，其中的最大殘留限量（MRL）為100 μg/kg。為了有效監(jiān)測水產(chǎn)品及水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中的達(dá)氟沙星濃度，研究人員建立了多種檢測方法，包括高效液相色譜法[7，18-19]、超高效液相色譜法[20]、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[21]和膠體金免疫層析法[22]，涉及到魚[7，18]、對蝦[21]、養(yǎng)殖水體[23]和池塘底泥[24-25]等。利用這些檢測方法，研究人員對水產(chǎn)品中達(dá)氟沙星的殘留量進(jìn)行了監(jiān)測。董峰光等[26]收集了煙臺地區(qū)806 份動物源性食品，其中水產(chǎn)品、甲殼類和雙殼類食品共計317 份，利用國標(biāo)監(jiān)測方法，在這些水產(chǎn)品中均未檢出達(dá)氟沙星。劉少穎等[27]在杭州市隨機(jī)采集了包括河蝦和小龍蝦在內(nèi)的88 份動物性食品，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，檢測了其內(nèi)多種氟喹諾酮類藥物的殘留情況，發(fā)現(xiàn)氟喹諾酮類獸藥的總檢出率為19.4%，其中恩諾沙星被檢出的比例最高，達(dá)68.4%；達(dá)氟沙星未被檢出[27]。

目前有關(guān)達(dá)氟沙星在水產(chǎn)動物體內(nèi)的殘留消除規(guī)律的研究報道較少，現(xiàn)有的研究多集中于水產(chǎn)品中達(dá)氟沙星的濃度篩查監(jiān)測。潘玉善等[7]報道了鯽單次灌胃達(dá)氟沙星（10 mg/kg）后，藥物在其各組織中的殘留消除規(guī)律，發(fā)現(xiàn)達(dá)氟沙星在鯽皮膚中消除速度最慢，消除半衰期長達(dá)177 h，其次為肌肉（51 h）、肝胰臟（44 h）和腎臟（33 h）；以皮膚作為殘留靶組織，該給藥方案下，達(dá)氟沙星的殘留休藥期不應(yīng)短于23 d[7]。

6 結(jié)語

與早期的喹諾酮類藥物相比，達(dá)氟沙星具有高效、低毒的優(yōu)點，在水產(chǎn)動物疾病防治方面發(fā)揮了非常重要的作用。但隨著使用時間的延長，一些致病菌可能會對達(dá)氟沙星逐漸產(chǎn)生耐藥性，且達(dá)氟沙星在高濃度下有一定的肝臟毒性。因此，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，一定要合理規(guī)范使用達(dá)氟沙星，同時還要進(jìn)一步加強(qiáng)藥動學(xué)、殘留消除和檢測技術(shù)開發(fā)等方面的研究，以有效保證達(dá)氟沙星在水產(chǎn)病害防治中的科學(xué)性，以及在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用的安全性。