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    湖南省精液常規(guī)檢驗(yàn)室間質(zhì)量評價(jià)體系的初步建立*

    2023-08-02 10:58:16伍細(xì)言李維娜賀景亮吳慧蘭朱文兵陸金春湖南省婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心長沙0008中信湘雅生殖與遺傳??漆t(yī)院男科學(xué)部人類精子庫長沙022中南大學(xué)湘雅醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心長沙0008東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心南京2007
    臨床檢驗(yàn)雜志 2023年4期
    關(guān)鍵詞:檢驗(yàn)室離群精液

    伍細(xì)言,李維娜,賀景亮,吳慧蘭,朱文兵,陸金春(.湖南省婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心,長沙0008;2.中信湘雅生殖與遺傳專科醫(yī)院 a.男科學(xué)部,b.人類精子庫,長沙022;.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心,長沙 0008;.東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心,南京2007)

    精液檢驗(yàn)是評估男性生育力的基本項(xiàng)目,通過精液檢驗(yàn)室間質(zhì)量評價(jià)(質(zhì)評)可提高精液分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。有專家呼吁建立各省市的精液檢驗(yàn)質(zhì)量管理機(jī)構(gòu)或者在全國范圍內(nèi)建立精液檢驗(yàn)的質(zhì)量管理中心[1-2],但由于男性精液樣本及檢驗(yàn)過程的特殊性,目前國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評項(xiàng)目中無精液檢驗(yàn)項(xiàng)目,僅有少數(shù)地區(qū)如四川省[2]、廣東省[3]等進(jìn)行了部分精液檢驗(yàn)項(xiàng)目的室間質(zhì)評的初步探索。精液檢驗(yàn)室間質(zhì)評未形成有效方案,缺乏權(quán)威的精液檢驗(yàn)室間質(zhì)評機(jī)構(gòu),精液檢驗(yàn)?zāi)芰ι行杓訌?qiáng)。研究顯示,我國參加精液檢驗(yàn)室間質(zhì)評的實(shí)驗(yàn)室比例小,絕大多數(shù)精液檢驗(yàn)項(xiàng)目缺乏有效的質(zhì)控措施,質(zhì)控品與實(shí)際檢驗(yàn)樣本差異較大,質(zhì)控品和實(shí)際檢驗(yàn)流程明顯不同,各實(shí)驗(yàn)室參評結(jié)果偏倚大等問題[2-5]。

    精液檢驗(yàn)項(xiàng)目包括精液常規(guī)、精子形態(tài)學(xué)、精漿生化、精子功能以及泌尿生殖道感染、脫落細(xì)胞、遺傳學(xué)檢驗(yàn)等[4],其中精液常規(guī)檢驗(yàn)主要包括精子濃度和活力,是目前男性不育診斷及治療的最經(jīng)典項(xiàng)目??紤]到湖南省是第一次進(jìn)行精液檢驗(yàn)室間質(zhì)評,經(jīng)湖南省醫(yī)學(xué)會(huì)男科學(xué)組會(huì)議討論,決定通過開展精液常規(guī)檢驗(yàn)室間質(zhì)評活動(dòng),探索建立湖南地區(qū)精液常規(guī)檢驗(yàn)室間質(zhì)評體系,從而提高湖南地區(qū)整體精液常規(guī)檢驗(yàn)水平。

    1 資料與方法

    1.1參評實(shí)驗(yàn)室 湖南省醫(yī)學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)生殖男科學(xué)組組成單位共20家生殖男科實(shí)驗(yàn)室參與本次室間質(zhì)評,涵蓋湖南地區(qū)9個(gè)市(長沙市、株洲市、湘潭市、常德市、衡陽市、岳陽市、郴州市、婁底市及邵陽市)。

    1.2精子濃度評價(jià) 精子濃度質(zhì)控品為乳膠質(zhì)控珠(廣州華粵行醫(yī)療科技公司提供),批內(nèi)變異系數(shù)(coefficient variation,CV)、批間CV經(jīng)參比實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證,批號分別為 C202201~C202204。各實(shí)驗(yàn)室收到質(zhì)控品后室溫保存,使用前混勻,取樣后及時(shí)加蓋蓋好,精子濃度統(tǒng)一以n×106/mL回報(bào)。

    1.3精子活力評價(jià) 精子活力質(zhì)控品為精液活力視頻,選取4份(No.1~No.4)不同活力級別的精液標(biāo)本,采用計(jì)算機(jī)輔助精子分析(computer-aided sperm analysis,CASA)分別錄制數(shù)個(gè)30 s的視頻,錄制視頻數(shù)(即采集視野數(shù))以能評估到至少200個(gè)精子為限,每個(gè)質(zhì)評樣本包括有帶Makler網(wǎng)格和不帶網(wǎng)格兩種,采用CASA的參評實(shí)驗(yàn)室分析不帶網(wǎng)格的M202201、M202203、M202205、M202207視頻,采用手工法的參評實(shí)驗(yàn)室分析帶網(wǎng)格的M202202、M202204、M202206、M202208視頻。精子活力以《WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen》第5版方法為標(biāo)準(zhǔn)分成以下3類:(1)前向運(yùn)動(dòng)型(progressive motility,PR):精子運(yùn)動(dòng)活躍、線性運(yùn)動(dòng)或者在較大的范圍內(nèi)運(yùn)動(dòng)(不考慮運(yùn)動(dòng)的速度);(2)非前向運(yùn)動(dòng)型(non-progressive motility,NP):精子運(yùn)動(dòng)但不活躍,如精子在較小的范圍內(nèi)運(yùn)動(dòng),精子頭部輕微移位或僅有鞭毛擺動(dòng);(3)不活動(dòng)型(immotility,IM):精子完全不動(dòng)[6]。精子活力結(jié)果以各類型精子PR、NP和IM的百分率(%)回報(bào)。

    1.4質(zhì)控品發(fā)放 全年8個(gè)批號(濃度及活力各4個(gè))的質(zhì)控品分2次發(fā)放,將精子濃度質(zhì)控品乳膠珠統(tǒng)一通過快遞形式發(fā)放給參評單位,精子活力視頻通過學(xué)組質(zhì)評微信群網(wǎng)絡(luò)發(fā)放,在收到質(zhì)控品的1周內(nèi)按照各自實(shí)驗(yàn)室日常精液常規(guī)檢驗(yàn)方法分析并反饋結(jié)果。

    2 結(jié)果

    2.1檢驗(yàn)方法比較 各實(shí)驗(yàn)室中精子濃度和活力檢驗(yàn)使用最多的方法均為CASA檢驗(yàn),見表1。

    表1 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方法及計(jì)數(shù)板類型結(jié)果比較[n(%)]

    2.2精子濃度及活力基本參數(shù) 各實(shí)驗(yàn)室精子濃度及精子活力結(jié)果經(jīng)Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn),大部分不符合正態(tài)分布,因而各計(jì)量數(shù)據(jù)統(tǒng)一以M(P25,P75)表示。精子濃度及活力結(jié)果見表2。

    表2 精子濃度及活力基本參數(shù)

    2.3精子濃度結(jié)果比較 4個(gè)精子濃度質(zhì)控品檢驗(yàn)結(jié)果基本統(tǒng)計(jì)參數(shù)見表2。精子濃度滿意結(jié)果為13家(13/20,65%);可疑結(jié)果2家(2/20,10%);離群結(jié)果共5家(5/20,25%)。在不同的方法對比中,CASA法1家(1/14,7.14%)可疑,3家(3/14,21.43%)離群;優(yōu)于手工法1家(1/6,16.67%)可疑,2家(2/6,33.33%)離群,見表3。

    表3 實(shí)驗(yàn)室精子濃度能力驗(yàn)證結(jié)果

    2.4精子活力結(jié)果比較 4個(gè)精子活力質(zhì)控品檢驗(yàn)結(jié)果基本統(tǒng)計(jì)參數(shù)見表2。其中滿意結(jié)果為6家(6/20,30%),可疑7 家(7/20,35%),離群結(jié)果共6家(6/20,30%),1家(1/20,5%)未回報(bào)第一次活力結(jié)果。分方法來看,CASA法可疑50%(5/10),離群40%(4/10),劣于手工法的可疑20%(2/10),離群20%(2/10)。見表4。

    表4 實(shí)驗(yàn)室精子活力能力驗(yàn)證結(jié)果

    2.5精液常規(guī)室間質(zhì)評結(jié)果 參評實(shí)驗(yàn)室PT綜合得分及年度評價(jià)結(jié)果見表5,合格率(PT≥80%)為55%(11/20),不合格率(PT<80%)為45%(9/20)。

    表5 參評實(shí)驗(yàn)室年度PT評價(jià)結(jié)果

    3 討論

    男性精液常規(guī)檢驗(yàn)作為評估男性生育力最基本的檢驗(yàn)項(xiàng)目,在男性不育的診斷、治療和科研中具有極其重要的作用[9-10]。與其他檢驗(yàn)項(xiàng)目比較,精液樣本為男性性活躍后的產(chǎn)物,具有收集困難、黏稠度高、非勻質(zhì)特點(diǎn),且精子的活動(dòng)能力受溫度及排出時(shí)間的影響,導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果CV值大,實(shí)驗(yàn)室間可比性差[11-13]。

    20個(gè)參評實(shí)驗(yàn)室精子濃度CV值分別為13.47%~21.79%,與比利時(shí)文獻(xiàn)中的19.2%[14]較接近,較四川省的29.84%[2]、廣東省的34.09%[3]降低,可能與其采用混合精液作為精子濃度質(zhì)控物,在制備和分裝及檢驗(yàn)過中程存在非特異性聚集、分布不均有關(guān)。

    4個(gè)活力質(zhì)控品中PR-CV值分別為5.65%~20.76%,IM-CV值分別為5.50%~8.80%,與吳應(yīng)碧等[2]的18.30%和12.97%、周芳等[11]的8.36%~21.78%較接近,這可能與本研究均采用視頻作活力質(zhì)評,無需分析前處理,降低了檢驗(yàn)誤差有關(guān)。NP-CV值分別達(dá)31.36%~59.30%,正常情況下精液樣本中該部分精子所占比例較低,可能與取樣誤差以及檢驗(yàn)人員誤識(shí)別有關(guān)。NP作為非前向運(yùn)動(dòng)精子,其定義為精子運(yùn)動(dòng)但不活躍,如以小圓周泳動(dòng),尾部動(dòng)力幾乎不能驅(qū)使頭部移動(dòng),或者只能觀察到尾部擺動(dòng)[6],因而亟需對實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化培訓(xùn),提高湖南地區(qū)各實(shí)驗(yàn)室精液分析水平。

    參評實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證結(jié)果中同一項(xiàng)目偏倚方向可提示該實(shí)驗(yàn)室是否存在系統(tǒng)誤差,比如3、6、11實(shí)驗(yàn)室分別只有1個(gè)濃度的結(jié)果離群,可能存在樣本混均、取樣的隨機(jī)誤差,建議工作人員仔細(xì)混均樣本,定量取樣,保證計(jì)數(shù)池的均一性和代表性;1、10、18高低濃度偏倚方向一致,可能存在系統(tǒng)誤差,應(yīng)在計(jì)數(shù)板、CASA參數(shù)設(shè)置等方面查找離群或可疑的原因并制定措施糾正。CASA較手工法NP、IM可疑及離群結(jié)果較多,可能與各實(shí)驗(yàn)室使用的CASA分析原理[15]、去除雜質(zhì)能力,精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)設(shè)置,以及CASA視頻幀率和放大倍率,質(zhì)控視頻清晰度、錄制格式是否通用等有關(guān)。

    作為湖南地區(qū)首次開展精液常規(guī)的室間質(zhì)評活動(dòng),雖然參評實(shí)驗(yàn)室規(guī)模有限、項(xiàng)目也局限于精液常規(guī),PT評價(jià)合格率較低,但驗(yàn)證了通過Robust穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)法評價(jià)生殖男科實(shí)驗(yàn)室的精液常規(guī)檢驗(yàn)?zāi)芰尚?為全面推廣精液檢驗(yàn)室間質(zhì)評做出了有益嘗試。

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