基于非靶標(biāo)代謝組學(xué)技術(shù)探討慢性腎臟病3～4期濕濁證患者的特征

鄭 鑫 鄧躍毅 李 芳 嚴(yán)夢(mèng)婷 歸楚瀅 林 釤

(1上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,上海,200082; 2 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院腎病科,上海,200320; 3 上海中醫(yī)藥大學(xué),上海,200032)

中醫(yī)學(xué)中“證”的概念是疾病發(fā)展過程中某一階段的病理概括,可以反映疾病當(dāng)前情況的本質(zhì)。既往中醫(yī)對(duì)證的研究較為主觀,主要通過患者臨床表現(xiàn)及客觀體征,接診醫(yī)師進(jìn)行相對(duì)主觀的判定,且診斷依據(jù)較為局限。鑒于血清及尿液代謝組學(xué)指標(biāo)具有客觀性、先進(jìn)性、整體性和前瞻性等優(yōu)勢(shì)。本研究通過對(duì)慢性腎臟病(Chronic Kidney Disease,CKD)3～4期濕濁證患者血清及尿液代謝組學(xué)的研究,從整體代謝途徑的變化闡明CKD 3～4期濕濁證的本質(zhì)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年6月1日至2019年12月31日上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院腎病科門診或住院收治的CKD 3～4期濕濁證患者60例作為觀察組,健康體檢者10例作為對(duì)照組,觀察組中男29例,女31例,年齡31～59歲,平均年齡44.82歲;對(duì)照組中男5例,女5例,年齡33～59歲,平均年齡43.30歲。所有入組患者均經(jīng)臨床相關(guān)檢查確診,并自愿簽署知情同意書。本研究經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(倫理審批號(hào):2018LCSY026)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) CKD診斷標(biāo)準(zhǔn),參照K/DOQI(Kidney Disease Outcome Quality Initiative)指南。指任何原因所致的腎臟病理學(xué)異?；蜓?、尿、影像學(xué)檢查異常或腎小球?yàn)V過率(Glomerular Filtration Rate,GFR)的CKD-EPI公式:GFR<60 mL/(min·1.73 m2),并持續(xù)3個(gè)月,包括各類腎小球、腎小管間質(zhì)或腎血管疾病[11]。

1.2.2 中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn) 參照國(guó)家中醫(yī)藥管理局醫(yī)政司2010年制定的《22個(gè)專業(yè)95個(gè)病種中醫(yī)診療方案》慢性腎衰竭的診斷標(biāo)準(zhǔn)中濕濁證的辨證依據(jù)。主癥:惡心嘔吐,肢體困重,食少納呆。次癥:脘腹脹滿,口中黏膩,舌苔厚膩。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 1)CKD 3～4期,估算GFR 15～59 mL/min,CKD-EPI公式計(jì)算;2)年齡在18～65周歲,男女均可;3)符合中醫(yī)辨證屬慢性腎衰濕濁證;4)符合CKD的診斷標(biāo)準(zhǔn);5)自愿簽署知情同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 1)診斷為急性腎損傷;2)合并心、腦、肝和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病;3)CKD已經(jīng)開始腎臟替代治療的患者;4)有嚴(yán)重的心力衰竭及合并感染患者;5)妊娠或哺乳期婦女;6)無法合作,依從性差者,如精神病患者。

1.5 研究方法

對(duì)照組于2019年12月30日清晨,空腹晨尿樣品。收集的尿樣品于室溫,3 000 r/min,離心半徑15 cm,離心15 min,離心后提取3 mL上層尿液,分別裝于2支1.5 mL的EP管中,并滴入200 μL防腐劑,于-80 ℃冰箱中儲(chǔ)存。檢測(cè)前,樣品于冰水中解凍,在室溫下,3 000 r/min,離心半徑15 cm,離心15 min,取上層尿液供檢測(cè);同時(shí)留取血清樣品,對(duì)照組于2019年12月30日清晨,空腹采集全血樣品。收集的血樣品于室溫,3 000 r/min,離心半徑15 cm,離心15 min,離心后提取3 mL血清,分別裝于2支1.5 mL的Ep管中,置于-80 ℃冰箱中儲(chǔ)存。檢測(cè)前,樣品于冰水中解凍,在室溫下3 000 r/min,離心半徑15 cm,離心15 min,取上層血清供檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)由上海百趣生物醫(yī)學(xué)科技有限公司完成。見圖1。

圖1 實(shí)驗(yàn)流程

1.5.1 試劑與儀器 甲氧銨鹽(貨號(hào):M0343)、核糖醇(貨號(hào):C10046500)、吡啶(貨號(hào):P111511)、甲醇(貨號(hào):4.000306.4000)、氯仿(貨號(hào):10071631)均購自阿達(dá)瑪斯試劑(中國(guó))公司。氣相色譜儀器(Agilent公司,美國(guó),型號(hào):7890A);質(zhì)譜儀(LECO公司,美國(guó),型號(hào):PEGASUS HT);色譜柱(30 m×250 μm×0.25 μm)(Agilent公司,美國(guó),型號(hào):DB-5MS);離心機(jī)(Thermo Fisher Scientific公司,德國(guó),型號(hào):Heraeus Fresco17);超低溫冰箱(Thermo Fisher Scientific公司,德國(guó),型號(hào):Forma 900 series);烘箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司,型號(hào):DHG-9023A);干燥儀(太倉市華美生化儀器廠,型號(hào):LNG-T98)。

1.5.2 代謝物提取與上機(jī)檢測(cè) 首先取100 μL樣本于1.5 mL EP管中,加入10 μL尿素酶,37 ℃孵育1 h,后加入350 μL甲醇及10 μL核糖醇,離心30 s(尿液),有效離心半徑15 cm;取樣本50 μL于1.5 mL EP管中,后加入200 μL預(yù)冷甲醇及5 μL核糖醇,離心30 s(血清),有效離心半徑16 cm;超聲10 min;再將樣本4 ℃,12 000 r/min,離心半徑15 cm,離心15 min;移取180 μL上清液于1.5 mL EP管中,每個(gè)樣本各取50 μL混合成質(zhì)控樣本;后干燥提取物;再向代謝物中加入50 μL甲氧明鹽試劑,混勻后,80 ℃孵育30 min;在每個(gè)樣品中加入70 μL BSTFA,將混合物70 ℃孵育1.5 h;冷卻至室溫后,向混合的樣本中添加5 μL FAMEs;最后進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)。檢測(cè)條件為:進(jìn)流量1 μL,Splitless Mode分流,3 mL/min隔墊吹掃流速,色譜柱:DB-5MS(30 m×250 μm×0.25 μm),1 mL/min柱流速,柱箱升溫50 ℃ 1 min,升至310 ℃(升高10 ℃/min)保持8 min,前進(jìn)樣口溫度、傳輸線溫度均為280 ℃,電壓-70 eV,掃描速率:12.5 spectra/s,溶劑延遲:6.3 min(尿液),4.8 min(血清),離子源溫度:250 ℃,質(zhì)量范圍m/z:50～500。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 基于氣相色譜——飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的代謝組學(xué)項(xiàng)目數(shù)據(jù)分析部分進(jìn)行基礎(chǔ)數(shù)據(jù)分析是對(duì)代謝組的定性定量結(jié)果進(jìn)行單變量統(tǒng)計(jì)分析和多元變量統(tǒng)計(jì)分析,篩選出現(xiàn)顯著差異的代謝物。數(shù)據(jù)分析內(nèi)容主要包括:單變量統(tǒng)計(jì)分析:t檢驗(yàn);多元變量統(tǒng)計(jì)分析:主成分分析(Principal Component Analysis,PCA)、正交偏最小二乘法-判別分析析(Orthogonal Partial least-squares Discriminant Analysis,OPLS-DA)、差異代謝物篩選和鑒定及個(gè)性化(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC)分析。數(shù)據(jù)處理采用ChromaTOF軟件(V 4.3x,LECO)對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。在物質(zhì)定性工作中,使用了LECO-Fiehn Rtx5數(shù)據(jù)庫,將(Quality Control,QC)樣本中檢出率50%以下或RSD>30%的峰去除。見表1。試驗(yàn)中使用的卡值標(biāo)準(zhǔn)是t檢驗(yàn)的P<0.05,并且OPLS-DA模型的第一個(gè)主要成分的投影中的變量重要性(Variable Importance in the Projection,VIP)值>1。

表1 保留時(shí)間指數(shù)

2 結(jié)果

2.1 CKD 3～4期濕濁證患者尿液差異代謝物的篩選

2.1.1 PCA樣本全部處于95%置信區(qū)間(Confidence Interval,CI)內(nèi)。見圖2。

圖2 全部樣本的PCA得分散點(diǎn)圖(散點(diǎn)數(shù)=70個(gè))注:k.對(duì)照組;ssz.觀察組

2.1.2 OPLS-DA得分散點(diǎn)圖 對(duì)照組和觀察組的尿液OPLS-DA模型得分散點(diǎn)圖顯示組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),組內(nèi)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖3。

圖3 全部樣本的OPLS-DA得分散點(diǎn)圖(散點(diǎn)數(shù)=70個(gè))注:k.對(duì)照組;ssz.觀察組;與對(duì)照組比較,P<0.05

2.1.3 OPLS-DA置換檢驗(yàn) 模型穩(wěn)健性為67%,模型預(yù)測(cè)值為43%。見圖4。

圖4 觀察組對(duì)對(duì)照組OPLS-DA模型的置換檢驗(yàn)結(jié)果

2.1.4 單變量統(tǒng)計(jì)分析,差異代謝物的篩選 進(jìn)行差異代謝物篩選后顯示CKD 3～4期濕濁證差異性代謝物為:熊果苷,水楊苷、4氧代脯氨酸、胍基乙酸及肌酸。見表2。

表2 差異性代謝物篩選

2.1.5 個(gè)性化ROC分析 通過對(duì)照組對(duì)比觀察組5種差異性代謝物共70例樣本,進(jìn)行個(gè)性化ROC分析,判定5種差異性代謝物對(duì)CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性分析。4氧代脯氨酸與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.69;胍基乙酸與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.757;肌酸與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.682;水楊酸與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.728;熊果苷與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.738。Total與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.940。見圖5。

圖5 5種差異性代謝物與CKD 3～4期濕濁證個(gè)性化ROC分析

2.2 CKD 3～4期濕濁證患者血清差異代謝物的篩選

2.2.1 PCA樣本全部處于95%CI內(nèi) 見圖6。

圖6 全部樣本的PCA得分散點(diǎn)圖(散點(diǎn)數(shù)=70個(gè))注:k.對(duì)照組;ssz.觀察組

2.2.2 正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)得分散點(diǎn)圖 對(duì)照組和觀察組的血清OPLS-DA模型得分散點(diǎn)圖所示:組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),組內(nèi)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖7。

圖7 全部樣本的OPLS-DA得分散點(diǎn)圖注:k.對(duì)照組;ssz.觀察組

2.2.3 OPLS-DA置換檢驗(yàn) 模型穩(wěn)健性為70%,模型預(yù)測(cè)值為50%。見圖8。

圖8 觀察組對(duì)對(duì)照組OPLS-DA模型的置換檢驗(yàn)結(jié)果

2.2.4 單變量統(tǒng)計(jì)分析,差異代謝物的篩選 進(jìn)行差異代謝物篩選后顯示CKD 3～4期濕濁證差異性代謝物為:丙酮酸(Pyruvic Acid)、琥珀酸半醛(Succinate Semialdehyde 2)、富馬酸(Fumaric Acid)、檸檬酸(Citric Acid)、蘋果酸(l-Malic Acid)及Α珀酮戊二酸(Alpha-Ketoglutaric Acid)。見表3。

表3 差異性代謝物篩選

2.2.5 個(gè)性化ROC分析 通過對(duì)照組對(duì)比觀察組6種差異性代謝物共70例樣本進(jìn)行個(gè)性化ROC分析,判定6種差異性代謝物對(duì)CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性分析,蘋果酸與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.808;丙酮酸與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.888;關(guān)性酮戊二酸與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.812;檸檬酸與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.948;富馬酸與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.717;琥珀酸半醛與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.853。Total與CKD 3～4期濕濁證的相關(guān)性的AUC值為0.738。見圖9。

圖9 6種差異性代謝物與CKD 3～4期濕濁證個(gè)性化ROC分析結(jié)果

3 討論

3.1 尿液代謝組學(xué)在CKD中的應(yīng)用 代謝組學(xué)概念最早見于1999年由NICHOLSON等[1]提出。代謝組學(xué)的研究方法與中醫(yī)診治疾病的整體性、動(dòng)態(tài)性相一致,為中醫(yī)學(xué)中“同病異治”及“異病同治”的理念提供新的研究方向。代謝組學(xué)的研究近年來受到國(guó)內(nèi)外的密切關(guān)注,并已成為研究疾病變化的熱點(diǎn)。在腎病的領(lǐng)域中,代謝組學(xué)的應(yīng)用也逐漸增多,腎臟是影響人體代謝的重要臟器之一,且人體尿液樣本采集相對(duì)容易且無創(chuàng),并能較好反映腎臟病變情況,所以尿液代謝組學(xué)的研究在腎病的應(yīng)用越來越廣泛。目前中醫(yī)藥干預(yù)CKD的尿液代謝組學(xué)研究已經(jīng)進(jìn)展了一部分,錢鵬等[2]研究發(fā)現(xiàn),機(jī)體內(nèi)核糖酸、L-阿卓糖、肌醇、丙酸、己糖醇、2-甲氧羰基-3-甲基-3-丁烯酸甲酯、D-呋喃木糖、廿二烷等的變化與CKD的診斷具有相關(guān)性。李仁武[3]、陳明[4]通過超高效液相色譜串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜的代謝組學(xué)研究技術(shù)對(duì)CKD肝腎陰虛證與脾腎虧虛患者證尿液的研究發(fā)現(xiàn),2組證型患者體內(nèi)反-2-順-4-癸二烯酰肉毒堿、苯乙酸、N-乙酰胱硫醚、β-單酰甘油、4-羥基苯乙酰谷氨酰胺、α-羥基馬尿酸、N-庚酰甘氨酸、苯丙酮酸、L-β-天冬氨酰-L-丙氨酸、α-天冬氨酰-賴氨酸、丁酰肉毒堿、泛酸、戊酰肉堿、3-氧代十六烷酸、N-乙酰-a-神經(jīng)氨酸、9-癸烯酰肉毒堿、法尼半胱氨酸、S-羥甲基谷胱甘肽的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可以用來診斷CKD的2個(gè)不同的中醫(yī)證型。馮琴等[5]通過應(yīng)用磁共振成像(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)對(duì)CKD晚期患者尿液的代謝組學(xué)研究發(fā)現(xiàn):在CKD患者尿液中?；撬帷㈣蹤此猁}、5-羥脯氨酸顯著下降,鳥苷酸乙酸酯、谷氨酸、N-氧化三甲胺和α化苯乙酰谷氨酰胺顯著增高。對(duì)慢性腎衰竭動(dòng)物模型尿液的研究發(fā)現(xiàn),模型尿液中富馬酸、蘋果酸、檸檬酸、琥珀酸等的水平較對(duì)照組明顯增高[6-7]。

3.2 CKD 3～4期濕濁證患者尿液潛在生物標(biāo)志物的關(guān)系 本研究結(jié)果提示CKD 3～4期濕濁證患者尿液潛在生物標(biāo)志物包括熊果苷、肌酸、水楊苷、胍基乙酸和4氧代脯氨酸。既往研究證實(shí)熊果苷具有多種臨床作用,如止咳化痰,降低血糖,提高免疫力,抗菌、美白等功效,在臨床上廣為應(yīng)用[8-10]。機(jī)體尿液中熊果苷表達(dá)過高,會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)倦怠乏力、少氣懶言、面色萎黃、眩暈等癥狀[11]。水楊苷在機(jī)體尿液中表達(dá)過高是由于機(jī)體糖酵解的異常,水楊苷是蜂膠的有效成分,具有抗炎降糖、解熱鎮(zhèn)痛、提高機(jī)體免疫力及抗氧化等功效[12-14]。機(jī)體尿液中水楊苷表達(dá)過高,臨床可表現(xiàn)為:低熱,肢體困重,口渴等癥狀[15]。胍基乙酸經(jīng)研究證實(shí)具有多種生理作用,如調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)、抗氧化,促進(jìn)胰島素分泌、平衡精氨酸和脯氨酸代謝等[16-19]。機(jī)體尿液中表達(dá)量過高,可能出現(xiàn)頭重如裹,小便量增加,口干等癥狀。肌酸最早見于骨骼肌中。肌酸可以促進(jìn)成骨細(xì)胞分化、抑制脂肪細(xì)胞的分化,提高肌肉細(xì)胞的分化[20-22]。此外,提高機(jī)體內(nèi)肌酸的表達(dá)量,可以抑制氧化應(yīng)激反應(yīng),恢復(fù)成肌細(xì)胞的分化能力,且在能量代謝中起到重要作用。機(jī)體尿液中表達(dá)量過高,可能出現(xiàn)肢體困重、倦怠乏力、體型肥胖、胸悶心悸等癥狀。4氧代脯氨酸具有促體內(nèi)器官纖維化的作用,機(jī)體尿液中4氧代脯氨酸表達(dá)量的下降會(huì)導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)小便量少、下肢浮腫、惡心嘔吐、胸悶心悸、皮膚瘙癢、面色萎黃等尿毒癥癥狀[23]。中醫(yī)濕濁證主要表現(xiàn)為倦怠乏力、口中黏膩、惡心嘔吐、食少納呆、肢體困重、頭重如裹、脘腹脹滿、小便渾濁、大便溏薄、舌苔厚膩等。

3.3 血清代謝組學(xué)在CKD中的應(yīng)用 目前有關(guān)中醫(yī)藥干預(yù)CKD的代謝組學(xué)研究已經(jīng)取得一些進(jìn)展,例如,魯瑩等[24]應(yīng)用代謝組學(xué)技術(shù)研究發(fā)現(xiàn),昆仙膠囊可以降低狼瘡性腎炎小鼠24小時(shí)尿蛋白水平,抗雙鏈DNA抗體水平及抗ANA抗體,同時(shí)小鼠血清中檸檬酸、α-酮戊二酸、乳酸、谷氨酰胺、肌酐、葡萄糖、丙氨酸降低,馬尿酸鹽明顯升高。梁琦等[25]應(yīng)用代謝組學(xué)技術(shù)研究發(fā)現(xiàn),漢防己可造成腎功能的下降,但是通過配伍黃芪后,腎功能損傷有所下降。李春雨等[26]應(yīng)用代謝組學(xué)技術(shù)研究發(fā)現(xiàn),大黃可以通過降低慢性腎衰竭大鼠血液中的磷酸酯類物質(zhì)分解、兒茶酚胺類物質(zhì)的生成及炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生,從而具有治療慢性腎衰竭的作用。HUANG等[27]通過對(duì)CKD患者血清研究發(fā)現(xiàn),淫羊藿具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗氧化、調(diào)節(jié)腸道菌群紊亂等作用。這些研究說明,代謝組學(xué)的研究方法具有整體性、系統(tǒng)性、動(dòng)態(tài)性,能夠全面地揭示中醫(yī)藥在治療疾病過程中,生物體系內(nèi)所發(fā)生的一系列變化,最終更好評(píng)價(jià)藥效和發(fā)現(xiàn)藥物作用機(jī)制。

3.4 CKD 3～4期濕濁證患者血清潛在生物標(biāo)志物的關(guān)系 本研究結(jié)果提示CKD 3～4期濕濁證患者潛在生物標(biāo)志物包括蘋果酸、富馬酸、α果酮戊二酸、檸檬酸、丙酮酸及琥珀酸半醛。既往研究證實(shí)蘋果酸是三羧酸循環(huán)的中間體,體內(nèi)水平增多可導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)多種代謝途徑的紊亂,例如脂質(zhì)代謝紊亂,能量代謝紊亂,故表現(xiàn)為倦怠乏力、四肢困重[28]。富馬酸在體內(nèi)水平表達(dá)過高可導(dǎo)致患者能量代謝紊亂,出現(xiàn)食少納呆,口中黏膩[29]。既往研究證實(shí)α2酮戊二酸為腎小管損傷的標(biāo)志物,其濃度在體內(nèi)表達(dá)的增加,導(dǎo)致腎小管濃縮功能障礙,繼而出現(xiàn)小便渾濁等臨床癥狀[30]。檸檬酸在體內(nèi)的積蓄會(huì)導(dǎo)致機(jī)體腸道菌群的紊亂,繼而出現(xiàn)腹脹便秘,大便溏薄,惡心嘔吐等消化道癥狀[31]。琥珀酸半醛在體內(nèi)表達(dá)的增多會(huì)導(dǎo)致4-羥基丁酸的升高,繼而影響人體的神經(jīng)系統(tǒng),導(dǎo)致多種神經(jīng)遞質(zhì)遭到破壞,繼而出現(xiàn)頭暈頭痛[32]。丙酮酸在機(jī)體能量代謝中也起到重要作用,是糖酵解的終產(chǎn)物,糖代謝障礙,導(dǎo)致機(jī)體能量的供給受阻,繼而出現(xiàn)一系列代謝異常,導(dǎo)致多方位的代謝紊亂。而這些代謝途徑的紊亂相互作用,相互影響,最終導(dǎo)致患者出現(xiàn)一系列相關(guān)癥狀,例如口干、乏力、小便渾濁、肢體肥胖等。而中醫(yī)濕濁證主要表現(xiàn)為惡心嘔吐、倦怠乏力、肢體困重、頭重如裹、食少納呆、脘腹脹滿、口中黏膩、小便渾濁、大便溏薄、舌苔厚膩等。

綜上所述,可將CKD 3～4期濕濁證患者尿液中熊果苷、肌酸、水楊苷、胍基乙酸和4氧代脯氨酸的表達(dá)量的變化作為診斷的潛在生物標(biāo)志物;將CKD 3～4期濕濁證患者血清中蘋果酸、富馬酸、α果酮戊二酸、檸檬酸、丙酮酸及琥珀酸半醛的表達(dá)量的變化作為診斷的潛在生物標(biāo)志物。

在今后的研究中可以通過擴(kuò)大樣本量及去除年齡、原發(fā)病、性別、病理類型等干擾因素,以明確濕濁證與其他證候的差異,充分發(fā)揮血清及尿液代謝組學(xué)的整體性、預(yù)知性、前瞻性的優(yōu)勢(shì),對(duì)每種中醫(yī)證型的研究和中醫(yī)證型的本質(zhì)探索具有深遠(yuǎn)的應(yīng)用前景。

利益沖突聲明:無。