淺析色譜分析法在葡萄酒農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

朱 莉，王 娜，王小標(biāo)，馬 蘭

（昌吉市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心（園藝工作站），新疆昌吉 831100）

葡萄酒是新鮮葡萄經(jīng)壓榨、發(fā)酵、陳釀等過(guò)程制成的一種酒精性飲料，富含氨基酸、酚類等物質(zhì)，適量飲用有益于人體健康，備受消費(fèi)者青睞[1]。在種植過(guò)程中，釀酒葡萄受氣候環(huán)境等因素的影響容易發(fā)生病蟲害，如灰霉病、霜霉病等，果農(nóng)常噴灑大量農(nóng)藥保證葡萄健康生長(zhǎng)，以期提高葡萄酒品質(zhì)。部分農(nóng)藥會(huì)經(jīng)葡萄破碎、浸漬、發(fā)酵等過(guò)程轉(zhuǎn)移至葡萄酒中，給消費(fèi)者帶來(lái)安全隱患[2]。本文淺析了葡萄酒農(nóng)藥殘留色譜分析檢測(cè)技術(shù)，為進(jìn)一步提高葡萄酒農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)提供參考。

1 葡萄酒中農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀

為進(jìn)一步提高釀酒葡萄質(zhì)量、產(chǎn)量及葡萄酒品質(zhì)，殺菌劑、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、殺蟲劑等化學(xué)農(nóng)藥被廣泛運(yùn)用于釀酒葡萄栽培中。20 世紀(jì)90 年代初，世界葡萄酒主要產(chǎn)區(qū)國(guó)家對(duì)農(nóng)藥在葡萄酒成品和葡萄酒釀造過(guò)程中的變化展開研究，歐盟、美國(guó)、日本早已制定了嚴(yán)格的葡萄酒限量標(biāo)準(zhǔn)[3-7]，但我國(guó)對(duì)葡萄酒農(nóng)藥殘留的研究尚且不足。我國(guó)現(xiàn)行的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）[8]涉及釀酒葡萄農(nóng)藥殘留限量種類有216 種，與其他農(nóng)產(chǎn)品相比限量標(biāo)準(zhǔn)的制定嚴(yán)重滯后。目前，我國(guó)只有食品工業(yè)協(xié)會(huì)制定的《中國(guó)葡萄酒A 級(jí)產(chǎn)品認(rèn)定細(xì)則》中對(duì)農(nóng)藥殘留進(jìn)行了限定，但不等同于法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)產(chǎn)品不具有約束性[9]。

近年來(lái)，葡萄酒中農(nóng)藥殘留現(xiàn)象比較突出。HY?TYL?INEN 等[10]研究認(rèn)為葡萄酒在釀造過(guò)程中部分農(nóng)藥仍會(huì)保留。LIU 等[11]檢測(cè)出保健酒中存在機(jī)磷類農(nóng)藥；郭晶晶等[12]分析了黃埔口岸采集的葡萄酒樣品，農(nóng)藥殘留檢出率高達(dá)94.65%,有殘留的樣品占76%。DOS ANJOS 等[13]檢測(cè)了紅（白）葡萄酒中18 種農(nóng)藥殘留，11 種農(nóng)藥被檢出，部分樣品嘧菌酯檢出量達(dá)65.3 μg·kg-1；麥巧冰等[14]調(diào)查了超市銷售量較高的130 種葡萄酒樣品農(nóng)藥殘留情況，90%以上的葡萄酒樣品檢出了農(nóng)藥。

2 葡萄酒中農(nóng)藥殘留色譜分析法

2.1 氣相色譜法

氣相色譜法（Gas Chromatography，GC）是20 世紀(jì)50 年代建立的分析檢測(cè)技術(shù)，20 世紀(jì)60 年代在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中開始應(yīng)用，使用最普遍檢測(cè)器有7種，其中GC-ECD、GC-FPD 普遍用于果蔬、果汁、酒飲料等的農(nóng)藥殘留檢測(cè)[15-16]。氣相色譜具有高靈敏度、高效率、高準(zhǔn)確率、樣品用量少、檢出限低和熱穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn)，多用于穩(wěn)定性好、易揮發(fā)的化合物分析，此方法現(xiàn)已成為農(nóng)藥殘留分析的首選方法。王潔蓮等[17]采用乙腈提取，GC-ECD 法檢測(cè)葡萄酒中百菌清、三唑酮等8 種農(nóng)藥殘留，方法檢出限為0.000 3 ～0.003 0 mg·kg-1，定量限為0.001 ～0.010 mg·kg-1，線性關(guān)系良好，R2值＞0.990，回收率在70%～92%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜6%，方法靈敏度高、穩(wěn)定性好，可以作為葡萄農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法。HY?TYL?INEN 等[18]采用液液微萃取法結(jié)合氣相色譜分析檢測(cè)紅葡萄酒中硫丹等7 種農(nóng)藥殘留，該方法具有良好的線性和可重復(fù)性，除被測(cè)物異丙酮定量限為0.37 mg·L-1，其他分析物的定量限均優(yōu)于0.006 mg·L-1。胡媛等[19]發(fā)現(xiàn)，利用固相微萃取-氣相色譜-總光譜密度法檢測(cè)紅葡萄酒中絕大多數(shù)組分相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于5%，檢出限為0.005 ～0.380 μg·L-1，方法準(zhǔn)確，可以有效運(yùn)用于葡萄酒生產(chǎn)中農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)，但氣相色譜法對(duì)熱不穩(wěn)定性農(nóng)藥難以準(zhǔn)確分析，會(huì)產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，存在一定的局限性。

2.2 氣相色譜-質(zhì)譜法

氣相色譜-質(zhì)譜法（Gas Chromatography-Mass Spectrometer，GC-MS）是用氣相色譜法分離、用質(zhì)譜法定性的分析方法，在多組分農(nóng)藥殘留分析方面有一定優(yōu)勢(shì)，具有良好的選擇性和高靈敏度，普遍應(yīng)用于果蔬農(nóng)藥殘留檢測(cè)中。相關(guān)現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)有41 種，如《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 蜂蜜、果汁和果酒中497 種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法》（GB 23200.7—2016）[20]、《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 水果和蔬菜中500 種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法》（GB 23200.8—2016）[21]等。近年來(lái)，此方法在葡萄酒檢測(cè)中的應(yīng)用研究也逐漸增多，薛潔等[22]利用GC-MS 分析了28 個(gè)白葡萄酒和紅葡萄酒樣品中40 種農(nóng)藥殘留，檢測(cè)率＞5%的農(nóng)藥有13 種，均未超過(guò)歐盟限定的最大殘留限量值，白葡萄酒農(nóng)藥殘留平均含量為0.359 mg·L-1，紅葡萄酒農(nóng)藥殘留平均含量為0.622 mg·L-1，此方法線性良好，相關(guān)系數(shù)R2＞0.99，平均加標(biāo)回收率在79.7%～112.4%，樣品間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.962%～7.429%。郭亞蕓等[23]采用超聲波輔助-分散液液微萃取、提取、凈化葡萄酒中三唑類農(nóng)藥，用GC-MS 分析得出檢出限為0.019 ～0.039 μg·L-1，R2＞0.999，相對(duì)偏差在2.8%～7.5%，回收率為87.3%～107.5%，該方法有較好的穩(wěn)定性。GC-MS 在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中應(yīng)用逐漸成熟，但相較于氣相色譜法前處理煩瑣，成本高[24]。

2.3 氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(Gas Chromatography-Mass Spectrometer/Mass Spectrometer，GC-MS/MS) 比GC-MS 法能更有效地避免基質(zhì)效應(yīng)和共流峰干擾，響應(yīng)值高、減少了假陽(yáng)性風(fēng)險(xiǎn)，檢出限較低，可以滿足目前世界上對(duì)葡萄酒中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)要求[25]。MARTINS 等[26]利用固相微萃取和GC-MS/MS 分析了葡萄酒中24 種農(nóng)藥殘留，該方法線性良好，相關(guān)系數(shù)R2＞0.989,檢出限0.05 ～72.35 μg·L-1，定量限0.16 ～219.23 μg·L-1，均低于歐洲葡萄法規(guī)規(guī)定的最大殘留水平。鹿?jié)蓡⒌萚27]以葡萄酒中所含的乙醇作為萃取劑，結(jié)合GC-MS/MS 法對(duì)葡萄酒中農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，方法回收率為78%～112%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.9%～11.0%，檢出限為0.9 ～8.0 μg·kg-1。申中蘭等[28]運(yùn)用便捷高效的分散固相萃 ?。≦uick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe，QuEChERS）前處理方法，結(jié)合氣相色譜三重四極質(zhì)譜/質(zhì)譜（GC-QqQ-MS/MS）法檢測(cè)葡萄酒中4 種殺菌劑殘留，4 種農(nóng)藥在0.01 ～6.00 mg·kg-1呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，R2＞0.999，方法檢出限為0.006 3 ～0.020 0 mg·kg-1，方法滿足葡萄酒中殺菌劑殘留物定性、定量的檢測(cè)要求，高效、環(huán)保、操作簡(jiǎn)單。

2.4 高效液相色譜法

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）已成為農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)、獸藥殘留檢測(cè)的常用方法之一。與氣相色譜法相比，其不發(fā)生氣化過(guò)程，對(duì)待測(cè)物結(jié)構(gòu)破壞小，適用范圍廣，對(duì)非揮發(fā)性及熱穩(wěn)定性較差的農(nóng)藥檢測(cè)效果較好，如氨基甲酸酯類農(nóng)藥、氟蟲腈等[29]。HPLC 價(jià)格便宜，操作簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)室可以普及使用，在葡萄酒中農(nóng)藥殘留檢測(cè)應(yīng)用普遍。周建科等[30]建立了分散液液萃取結(jié)合高效液相色譜分析白葡萄酒中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的方法，方法線性良好，相關(guān)系數(shù)R2＞0.999，方法檢出限為1.00 ～2.00 μg·L-1，平均回收率83.20%～102.71%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1.47%～3.24%。郭亞蕓等[31]利用表面活性劑輔助-凝固-漂浮分散液液微萃取-高效液相色譜法檢測(cè)葡萄酒中西瑪津、莠去津、特丁津和撲草凈4 種三嗪類除草劑殘留情況，方法線性關(guān)系良好，檢出限1.80 ～2.81 μg·L-1，回收率84%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.1%～6.9%；LIKAS 等[32]采用液相色譜分析方法測(cè)定蘋果、葡萄、葡萄酒樣品中7 種不同農(nóng)藥殘留情況，方法相關(guān)系數(shù)R2＞0.999，回收率87%～108%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差5%～12%，待測(cè)物的定量限制均小于歐盟法規(guī)規(guī)定的最大殘留限量值，此方法在葡萄酒農(nóng)藥殘留檢測(cè)中可靠有效。

2.5 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

HPLC 法在針對(duì)復(fù)雜的農(nóng)藥殘留檢測(cè)時(shí)存在一定的局限性，高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometer/Mass Spectrometer，HPLC-MS/MS）具有色譜分離能力和質(zhì)譜鑒定功能，前處理過(guò)程簡(jiǎn)單，對(duì)復(fù)雜樣品分析便捷高效[33]。PéREZ-MAYáN等[34]采用固相萃取法，結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)葡萄酒中48 種農(nóng)藥殘留，方法回收率為70%～120%。王岑等[35]建立了液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定葡萄酒中69 種農(nóng)藥多殘留分析法，采用乙腈提取，固相萃取凈化，該方法在1.000 ～0.001 g·mL-1線性關(guān)系良好，R2＞0.99，絕大部分農(nóng)藥回收率達(dá)70%～120%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%，檢出限為0.001 ～0.010 g·mL-1，方法簡(jiǎn)單、快捷，適用于葡萄酒農(nóng)藥多殘留分析。ZHANG 等[36]對(duì)比QuEChERS、固相萃取（Solid-Phase Extraction，SPE）、 分 散 式 移 液 管 萃 ?。―ispersed-Pipette Extraction，DPX）提取、凈化方法，發(fā)現(xiàn)DPX 結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（Liquid Chromatography-Mass Spectrometer/Mass Spectrometer，LC-MS/MS）測(cè)定葡萄酒樣品中28 種農(nóng)藥的多殘留分析方法更高效、簡(jiǎn)便，線性范圍良好，R2＞0.99，28 種農(nóng)藥回收率在71%～109%。檢測(cè)限和定量限分別為1.5 ～3.0 μg·L-1和5 ～10 μg·L-1。

2.6 氣/液相色譜-高分辨質(zhì)譜法

低分辨質(zhì)譜在痕量分析中具有一定的局限性，高分辨質(zhì)譜具有高選擇性、高靈敏性、高精確度和寬動(dòng)態(tài)范圍的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)未知化合物具有篩查優(yōu)勢(shì)，已在葡萄酒農(nóng)藥檢測(cè)中應(yīng)用[37]。陳達(dá)煒等[38]通過(guò)超高效液相色譜-同位素稀釋高分辨質(zhì)譜法(Ultra High Performance Liquid Chromatography-Isotope Dilution High Resolution Mass Spectrometry，HPLC-IDMS)法檢測(cè)了紅葡萄酒中18 種農(nóng)藥殘留，待測(cè)物在0.5 ～50.0 μg·L-1呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，18 種農(nóng)藥檢出限和定量限分別為0.5 μg·kg-1、1.0 μg·kg-1，回收率達(dá)85.4%～117.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.5%～6.1%，高分辨質(zhì)譜有效提高了分析速率，確保了方法的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性；DASGUPTA 等[39]采用氣相色譜/飛行時(shí)間-質(zhì)譜（Gas Chromatography/Time-of-Flight-Mass Spectrometry，GC/TOF-MS）分析技術(shù)，用分散固相萃取提取葡萄酒中135 種農(nóng)藥，結(jié)果表明R2＞0.99，絕大部分農(nóng)藥定量限為10 ng·g-1。

3 結(jié)語(yǔ)

隨著生活品質(zhì)的提高，人們對(duì)葡萄酒質(zhì)量安全的要求越來(lái)越嚴(yán)苛，需要檢測(cè)的農(nóng)藥種類在不斷增加，色譜和質(zhì)譜法在葡萄酒農(nóng)藥殘留檢測(cè)中應(yīng)用更加廣泛，高效、準(zhǔn)確、選擇性好和穩(wěn)定性好的農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)在保障葡萄酒品質(zhì)及質(zhì)量安全方面十分重要。