超活化血小板裂解液和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用對大鼠上頜快速擴(kuò)弓后前腭縫骨改建影響的實(shí)驗(yàn)研究

李佳楠 劉瀟遙 劉 洋 蘆慧穎 王培軍 張 怡

上頜快速擴(kuò)弓（rapid maxillary expansion，RME）快速打開腭中縫，增加上頜骨寬度，廣泛應(yīng)用于上頜牙弓狹窄、后牙對刃或反牙合、輕度牙列擁擠等錯(cuò)牙合畸形的矯治。RME 的擴(kuò)弓效果值得肯定，但多數(shù)患者在治療后常發(fā)生較為明顯的復(fù)發(fā)，影響RME 的長期穩(wěn)定性，甚至導(dǎo)致擴(kuò)弓失敗[1]。RME 后腭中縫內(nèi)新骨形成不足是復(fù)發(fā)的主要原因之一，因此，如何促進(jìn)RME 后腭中縫骨改建，增加骨縫內(nèi)新骨形成成為了研究熱點(diǎn)[2]。

超活化血小板裂解液（super-activated platelet lysate, sPL）是一種新型血小板濃縮物，富含高濃度的生物活性因子，可促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和凋亡修復(fù)，加速骨組織再生[3]。sPL 可以注射的方式作用于局部，操作簡單、創(chuàng)傷小，可調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠炎癥小體和細(xì)胞因子的表達(dá)，具有明顯的緩解炎癥的作用[4]，可促進(jìn)拔牙窩內(nèi)新骨形成和軟組織愈合[5]，但尚未見其在口腔正畸領(lǐng)域的應(yīng)用研究。骨髓間充質(zhì) 干 細(xì) 胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）是成骨細(xì)胞的重要來源，能夠有效促進(jìn)骨折愈合和軟骨損傷的修復(fù)，是骨再生研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。

本研究通過擴(kuò)弓裝置快速擴(kuò)張大鼠的前腭縫，評估sPL 和BMSCs 聯(lián)合應(yīng)用對大鼠RME 后前腭縫骨改建的影響，從而為正畸臨床中提高RME 的長期穩(wěn)定性，縮短保持時(shí)間，提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

資料和方法

1.主要實(shí)驗(yàn)材料和儀器

SD 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基、胎牛血清（廣州賽業(yè)生物科技有限公司）；胰蛋白酶（美國Gibco 公司）；水合氯醛（美國Sigma 公司）；酸蝕劑、粘接劑、光固化樹脂（美國3M公司）；多聚甲醛（廣州碩譜生物科技有限公司）；EDTA（北京索萊寶科技有限公司）；蘇木素染色液、伊紅染色液（賽默瑞特科技有限公司）；倒置相差顯微鏡、正置顯微鏡及彩色照相系統(tǒng)（日本Nikon 公司）；全自動組織處理機(jī)、組織包埋機(jī)、組織切片機(jī)（美國Thermo Fisher Scientific 公司）；小動物Micro-CT 機(jī)（瑞士Scanco Medical 公司）；VG Studio Max 軟件（德國Volume Graphics公司）。

2.動物分組及處理

選用16 只6 周齡Sprague-dawley（SD）雄性大鼠，平均體重200±10 g。動物來源于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動物中心。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院動物實(shí)驗(yàn)倫理委員會審查批準(zhǔn)。嚴(yán)格遵循《實(shí)驗(yàn)動物保護(hù)條例》，所有大鼠統(tǒng)一自由進(jìn)食水,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后分組實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分為4 組：對照組（A 組）；sPL 注射組（B 組）；BMSCs 注射組（C 組）；BMSCs+sPL 注射組（D 組），每組4只，正常飲食，分籠喂養(yǎng)，每2～3 天更換墊料，保持鼠籠內(nèi)干燥衛(wèi)生。

3.大鼠RME模型的建立

使用0.016 英寸不銹鋼絲彎制大鼠上頜快速擴(kuò)弓器，調(diào)整雙側(cè)擴(kuò)張臂打開角度以提供100±5 g的擴(kuò)弓力。大鼠經(jīng)腹腔注射8%水合氯醛溶液（4 mL∕kg體重）麻醉后，將擴(kuò)弓器加載于上頜切牙，使用結(jié)扎絲進(jìn)行結(jié)扎固位后，再使用光固化復(fù)合樹脂進(jìn)行粘接固定，建立大鼠RME 模型（圖1）。擴(kuò)弓7 天后拆除擴(kuò)弓裝置，使用游標(biāo)卡尺測量上頜中切牙間距離，在中切牙間放置相應(yīng)長度的0.018×0.025 不銹鋼方絲，并用光固化復(fù)合樹脂固定，進(jìn)入21 天的保持期（圖2）。

圖1 大鼠RME裝置的安放

圖2 大鼠RME后保持

4.sPL的制備

sPL 由天晴干細(xì)胞股份有限公司提供，具體制備方法參考先前的研究[4]：在麻醉下通過心臟穿刺從12只健康SD大鼠中采集血液80 mL，血液用3.8%的檸檬酸鈉抗凝?？鼓簶悠吩谑覝叵?000 rpm離心10 分鐘，去除下層紅細(xì)胞；然后將剩余血液混合均勻，再在18～20℃、2300～3300 rpm 條件下離心15 分鐘，將上層血漿轉(zhuǎn)移至新的離心管中留存，將底層的血小板血漿顛倒混勻、計(jì)數(shù)，利用留存的上層血漿，將富血小板血漿中的血小板濃度調(diào)整至1×1012個(gè)∕L；為激活血小板并釋放生長因子，將富血小板血漿與CaCl2和低分子量肝素鈉在CO2培養(yǎng)箱中37℃孵育1～2小時(shí)，然后將混合物凍存于-80℃冰箱內(nèi)1～2小時(shí)。最后，混合物在37℃下解凍5分鐘，并在4℃下冷卻1 小時(shí)，以允許纖維蛋白聚結(jié)。在4℃下離心后，過濾上清液，最終獲得約20 mL sPL。

5.BMSCs的復(fù)蘇、培養(yǎng)和傳代

SD 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞購于廣州賽業(yè)生物科技有限公司。按照說明書進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)和傳代，使用生長狀態(tài)良好的第三代細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

6.生理鹽水、sPL及BMSCs的注射

（1）注射方法

在異氟烷吸入麻醉下，將大鼠仰臥固定四肢，用碘伏消毒注射區(qū)域，于齦乳頭腭側(cè)2 mm 處進(jìn)針，方向呈約30±5°銳角朝向口內(nèi)，進(jìn)針深度約2 mm。將100μL 的生理鹽水、sPL 或BMSCs 細(xì)胞懸液注入大鼠前腭縫區(qū)域。

（2）動物分組及注射:①對照組（A 組）：在保持期間，每只大鼠每隔一天注射100 μL 生理鹽水，共注射11 次。②sPL 注射組（B 組）：在保持期間，每只大鼠每隔一天注射sPL100 μL，共注射11 次。③BMSCs 注射組（C 組）：在保持期的第1 天（即實(shí)驗(yàn)第8 天），每只大鼠注射100μL 細(xì)胞密度為1×107 個(gè)∕L的BMSCs+生理鹽水懸液（含1×106個(gè)細(xì)胞）；在隨后的保持期間，每只大鼠每隔一天注射100 μL 生理鹽水，共注射10 次。④BMSCs+sPL 注射組（D 組）：在保持期的第1 天（即實(shí)驗(yàn)第8 天），每只大鼠注射100 μL細(xì)胞密度為1×107個(gè)∕L的BMSCs+sPL懸液（含1×106 個(gè)細(xì)胞）；在隨后的保持期間，每只大鼠每隔一天注射sPL100 μL，共注射10次。

7.大鼠處死及上頜標(biāo)本的制備

保持21 天后，使用過量麻藥處死所有大鼠，去除大鼠口內(nèi)裝置，測量大鼠上頜中切牙間距離，取出上頜骨樣本，去除軟組織，立即置于4%多聚甲醛中固定48小時(shí)，進(jìn)行后續(xù)的影像學(xué)和組織學(xué)檢查。

8.Micro-CT分析前腭縫成骨情況

樣本置于Micro-CT 掃描管中，在高分辨率Micro-CT 掃描儀載物臺上進(jìn)行掃描，相關(guān)掃描參數(shù)為：電壓90 kV，電流200 μA，分辨率15 μm。使用VG Studio Max 軟件對圖像進(jìn)行三維重建和分析。研究分析的感興趣區(qū)域（region of interest，ROI）位于大鼠上頜前腭孔近中4 mm 的前腭縫區(qū)域，厚度為0.6 mm，橫向延伸至前腭縫兩側(cè)各0.75 mm 的范圍（圖3）。測量ROI 內(nèi)前腭縫的三維整體寬度，將與ROI內(nèi)前腭縫體積相等的球體直徑定義為前腭縫的三維整體寬度，等效直徑計(jì)算式為：Deq=。測量骨體積分?jǐn)?shù)（BV∕TV）、骨小梁數(shù)目（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）和骨小梁分離度（Tb.Sp）評價(jià)大鼠前腭縫成骨情況。

圖3 Micro-CT感興趣區(qū)域（ROI）

9.組織學(xué)染色

樣本置于EDTA 脫鈣液中室溫脫鈣1.5 個(gè)月，每三天換用新鮮脫鈣液，期間使用針刺法判斷脫鈣的程度。對脫鈣后的樣本進(jìn)行脫水、透明、浸蠟、包埋、切片處理，切片厚度5 μm。將樣本脫蠟至水，自來水沖洗后染色。蘇木素染液染色8～15 分鐘，流水沖洗1～2 分鐘，鹽酸乙醇分化數(shù)秒，流水沖洗返藍(lán)30～60 分鐘，伊紅染液染色2～5 分鐘，然后流水沖洗、二甲苯透明、中性樹膠封片。正置顯微鏡下觀察染色結(jié)果并拍照。每張切片先于低倍鏡下觀察全部組織，選擇前腭縫區(qū)域采集3 張400 倍圖片，測量單位骨小梁周長成骨細(xì)胞數(shù)(osteoblast number∕unit trabecular perimeter, Ob.N∕Tb.Pm)和新生血管數(shù)量。

10.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS25.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示，進(jìn)行單因素方差分析和最小差異顯著法（LSD）檢驗(yàn)，P＜0.05 為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.動物模型建立結(jié)果

實(shí)驗(yàn)期間，4 組大鼠均未出現(xiàn)裝置脫落、體重明顯下降、感染等意外情況，生長狀態(tài)良好，全部納入實(shí)驗(yàn)。

（1）大鼠的體重變化情況：由于對擴(kuò)弓裝置的不適應(yīng)，4組大鼠在擴(kuò)弓的第1、2天出現(xiàn)明顯的體重下降，從第3 天起進(jìn)食量增加，體重開始穩(wěn)步增長，整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，4 組大鼠平均體重的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，表1）。

表1 實(shí)驗(yàn)期間大鼠體重變化 g，±s

表1 實(shí)驗(yàn)期間大鼠體重變化 g，±s

A 組，對照組；B 組，sPL 注射組；C 組，BMSCs 注射組；D 組，BMSCs+sPL 注射組；P＞0.05

時(shí)間∕天0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 A組201.75±3.86 183.75±4.03 194.00±6.58 208.25±7.27 219.25±5.56 232.50±5.26 243.50±5.07 255.50±5.07 269.75±5.68 282.75±6.18 294.75±5.85 305.75±5.85 318.00±4.40 330.00±2.94 B組202.50±6.81 185.75±7.41 193.75±5.74 208.25±6.13 220.75±7.50 231.75±7.68 244.25±7.76 257.75±8.06 270.25±7.80 283.00±8.98 294.75±8.34 307.00±8.83 318.50±9.33 329.00±9.59 C組201.00±4.55 182.50±5.45 193.00±3.56 206.75±5.56 219.75±6.80 232.50±7.33 246.00±9.20 257.50±8.58 269.25±7.93 282.25±8.54 294.75±8.06 307.50±8.10 319.75±7.59 331.25±7.14 D組199.75±4.43 184.75±2.63 197.75±5.91 209.50±6.76 221.50±6.76 234.50±7.55 247.50±9.47 262.50±9.88 275.25±9.18 288.50±9.47 302.75±8.10 314.00±7.35 325.75±6.75 337.25±6.65

（2）擴(kuò)弓7 天后大鼠上頜中切牙間寬度測量結(jié)果：在擴(kuò)弓力作用下，大鼠上頜中切牙之間從緊密接觸變?yōu)閷捈s2.2 mm 左右的間隙，且4 組大鼠中切牙間寬度無顯著差異（P＞0.05，表2），擴(kuò)弓量基本一致，成功建立大鼠RME 模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)束拆除保持裝置時(shí)，保持鋼絲無脫落、無形變、無移位，間隙無縮窄。

表2 擴(kuò)弓7天后大鼠上頜中切牙間寬度變化 mm，±s

表2 擴(kuò)弓7天后大鼠上頜中切牙間寬度變化 mm，±s

A 組，對照組；B 組，sPL 注射組；C 組，BMSCs 注射組；D 組，BMSCs+sPL 注射組；P＞0.05

時(shí)間∕天0 7 A組0 2.23±0.13 B組0 2.28±0.15 C組0 2.23±0.96 D組0 2.26±0.11

2.Micro-CT三維重建與測量分析結(jié)果

（1）前腭縫寬度測量分析：與A 組相比，B、C、D組大鼠前腭縫寬度均縮窄，其中B 組和C 組的前腭縫寬度與A 組無顯著性差異，D 組前腭縫寬度顯著窄于A組（P＜0.05，圖4）。

圖4 Micro-CT前腭縫寬度測量分析

（2）Micro-CT 三維重建和骨組織參數(shù)測量分析：從Micro-CT三維重建圖中可見，D組前腭縫處骨表面修復(fù)效果最好。骨組織參數(shù)測量結(jié)果顯示，B組和D 組BV∕TV 均顯著高于A 組（P＜0.05）；C 組BV∕TV與A組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與D組相比，C組BV∕TV 顯著降低（P＜0.05）。D 組Tb.N 測量值與A組相比顯著增加（P＜0.05），B 組和C 組Tb.N 測量值與A 組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4 組間的Tb.Th 測量值差異無顯著性。A 組Tb.Sp 測量值顯著高于B 組（P＜0.05）和D組（P＜0.01）（圖5）。

圖5 Micro-CT三維重建及骨組織參數(shù)測量分析

3.大鼠前腭縫HE染色的組織學(xué)表現(xiàn)

鏡下觀察可見多呈立方形的成骨細(xì)胞呈帶狀或散在分布于前腭縫近骨邊緣處，周圍骨質(zhì)部分區(qū)域呈現(xiàn)出齒狀不齊的外觀。前腭縫區(qū)可見大量的間質(zhì)樣細(xì)胞及紅染的纖維組織，被拉長的纖維組織排列方向與擴(kuò)弓力基本平行，亦見數(shù)量不等的新生血管（圖6）。Ob.N∕Tb.Pm 測量結(jié)果顯示，與A 組相比，B、C、D 組大鼠Ob.N∕Tb.Pm 均有增加，其中B、C 組與A組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），D 組大鼠Ob.N∕Tb.Pm 顯著高于A 組和C 組大鼠（P＜0.05，圖7）。B 組大鼠新生血管數(shù)量顯著高于A 組大鼠（P＜0.05），D 組大鼠新生血管數(shù)量顯著高于A 組大鼠（P＜0.01）和C組大鼠（P＜0.05）（圖8）。

圖6 4組大鼠前腭縫組織學(xué)觀察

圖7 4組大鼠單位骨小梁周長成骨細(xì)胞數(shù)

圖8 4組大鼠新生血管數(shù)

討 論

1.大鼠RME模型的建立

相關(guān)研究中，常采用前腭縫快速擴(kuò)張和腭中縫快速擴(kuò)張兩種模型對RME 進(jìn)行研究。腭中縫快速擴(kuò)張即后牙擴(kuò)弓法，雖然與臨床中RME 更相似，但其存在一定的弊端。如在安放擴(kuò)弓裝置時(shí)易受口腔空間限制，使大鼠個(gè)體間擴(kuò)弓力值不一致，且使用光固化樹脂粘接于后牙的擴(kuò)弓裝置會影響大鼠的咬合，易造成大鼠進(jìn)食困難、體重下降或裝置脫落等問題，進(jìn)而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。相比之下，前腭縫快速擴(kuò)張有明顯的優(yōu)勢：操作簡單，不受限制；擴(kuò)弓力大小一致，可重復(fù)性強(qiáng)；擴(kuò)弓裝置對機(jī)體影響較小，較為安全、有效。因此，本實(shí)驗(yàn)采用前腭縫快速擴(kuò)張對RME 進(jìn)行研究。文獻(xiàn)報(bào)道中，常采用100～200 g 擴(kuò)弓力進(jìn)行前腭縫擴(kuò)張研究[6,7]，力值過大易導(dǎo)致牙周組織損傷和細(xì)胞增殖下降，力值過小則不足以擴(kuò)開前腭縫。本實(shí)驗(yàn)參考張蕾等[8]的研究，使用直徑0.016英寸的不銹鋼絲彎制前腭縫擴(kuò)弓裝置，提供初始力值為100±5 g，擴(kuò)弓7 天后大鼠兩切牙平行分開約2.2 mm，組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），擴(kuò)弓量較為一致。

2.BMSCs對前腭縫骨改建的影響

BMSCs 是存在于骨髓中的非造血干細(xì)胞，具有多種分化潛能，在微環(huán)境因素的刺激下，BMSCs能夠分化為成骨細(xì)胞，參與注射部位的新骨形成。BMSCs 還可以通過分泌骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2 或血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子等生長因子來調(diào)節(jié)新骨的形成。作為一種理想的組織工程種子細(xì)胞，BMSCs 常與支架材料聯(lián)合應(yīng)用于頜骨缺損修復(fù)[9]、牙周組織再生[10]、顳下頜關(guān)節(jié)疾病治療[11]等口腔醫(yī)學(xué)研究中。RME 結(jié)束時(shí)，擴(kuò)張的前腭縫中具有成骨潛能的細(xì)胞數(shù)量處于較低水平，本研究在此時(shí)進(jìn)行BMSCs 單次局部注射，以期促進(jìn)前腭縫處骨改建。但目前的研究結(jié)果顯示，BMSCs 注射組大鼠Micro-CT 各項(xiàng)測量指標(biāo)及Ob.N∕Tb.Pm 與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），僅在前腭縫內(nèi)單次局部注射BMSCs不能顯著促進(jìn)骨再生，與Mohaghegh 等[12]和Ebadifar 等[13]的研究結(jié)果相似。與本研究結(jié)果相反，Ekizer 等[14]發(fā)現(xiàn)，注射BMSCs增加了RME后腭中縫處新骨的形成和血管化，認(rèn)為將BMSCs 應(yīng)用于腭中縫可能是提高RME 長期穩(wěn)定性的有效方法。研究結(jié)果不同的原因可能是，Ekizer 等在擴(kuò)弓后24 小時(shí)就進(jìn)行BMSCs局部注射，促進(jìn)了RME早期前腭縫內(nèi)的新骨形成。

3.sPL對前腭縫骨改建的影響

sPL 是一種新型血小板濃縮物，富含對干細(xì)胞增殖、分化具有促進(jìn)作用的高濃度生長因子，包括血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（platelet-derived endothelial cell growth factor，PD-ECGF）、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、胰島素樣生長因子（insulin like growth factor，IGF）、表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（fibroblast growth factor，F(xiàn)GF）、TGF-β、BMP-2、BMP-4、BMP-6、白細(xì)胞介素-1等[3]。

PD-ECGF 通過間充質(zhì)干細(xì)胞和結(jié)締組織細(xì)胞的趨化和有絲分裂啟動傷口愈合，產(chǎn)生細(xì)胞粘附分子纖維連接蛋白，并通過促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖參與血管生成[15]。VEGF 與內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)的相關(guān)受體結(jié)合，誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)，釋放基質(zhì)金屬蛋白酶，消化周圍的細(xì)胞外基質(zhì)，允許血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和增殖，促進(jìn)新生內(nèi)膜形成[16]。IGF 來源于骨細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和血小板，在骨成熟和骨重塑的后期發(fā)揮作用，其分泌可能受到BMP的刺激[17]。FGF刺激骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨通路的信號傳遞，特別是成骨細(xì)胞的形成[18]。TGF-β1 和TGF-β2 刺激成纖維細(xì)胞趨化，產(chǎn)生膠原蛋白和纖維連接蛋白，通過降低蛋白酶和增加蛋白酶抑制劑抑制膠原降解，參與破骨細(xì)胞凋亡和抑制，加速骨再生[19]。

在本研究中，使用專利方法(專利號：CN 111686305 A)制備了sPL，并使用生物因子培養(yǎng)技術(shù)誘導(dǎo)和激活sPL。與PRP 或血小板裂解液（platelet lysate，PL）相比，sPL 含有更高純度的生物活性因子，且去除了白細(xì)胞、血小板片段和免疫球蛋白，降低了免疫原性，允許異體應(yīng)用。與PRP 相似，sPL 在前12 小時(shí)內(nèi)生長因子釋放明顯，約占總釋放量的25%，24 小時(shí)后生長因子釋放量約為初始釋放量的一半。因此，在本研究中，需要在保持期間每隔1 天局部注射sPL，以保持局部sPL的持續(xù)有效釋放。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與對照組大鼠相比，sPL 注射組大鼠BV∕TV 顯著增高（P＜0.05），Tb.Sp 測量值顯著降低（P＜0.05），說明sPL 注射組大鼠前腭縫處骨合成代謝大于分解代謝，骨量增加，骨小梁排列更緊密。由于反復(fù)向前腭縫處注射sPL，外源性生長因子濃度保持在較高水平，持續(xù)促進(jìn)RME后前腭縫處新骨形成。

4.BMSCs+sPL 對前腭縫骨改建的協(xié)同促進(jìn)作用

本研究比較了sPL、BMSCs 單獨(dú)注射和BMSCs+sPL 聯(lián)合注射對大鼠RME 后前腭縫骨改建的影響。BMSCs+sPL 聯(lián)合應(yīng)用在促進(jìn)前腭縫骨改建中具有協(xié)同作用，能夠更有效地促進(jìn)新骨形成。在本研究中，除了內(nèi)源性生長因子參與前腭縫處成骨活動外，外源性sPL 中含有多種生長因子和細(xì)胞因子，為移植的BMSCs 增殖、分化提供良好的細(xì)胞外環(huán)境，促進(jìn)BMSCs 分化為成骨細(xì)胞。sPL 還可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的激活，增加細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子的表達(dá)，加速進(jìn)入細(xì)胞周期，增強(qiáng)成骨細(xì)胞增殖、分化和新骨形成。相關(guān)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了上述分析，崔同等[3]將成骨細(xì)胞接種至含sPL的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，sPL能明顯促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和凋亡修復(fù)。Guo 等[5]的動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，sPL 治療組大鼠成骨相關(guān)因子ALP、OCN、COL-1、Runx2、BMP-2、Osterix 的mRNA 相對表達(dá)量均高于對照組。sPL 聯(lián)合BMSCs 移植有利于BMSCs的存活、增殖和分化，從而提高干細(xì)胞移植治療的有效率。

綜上所述，sPL 單獨(dú)應(yīng)用或BMSCs+sPL 聯(lián)合應(yīng)用均能促進(jìn)大鼠上頜快速擴(kuò)弓后前腭縫骨改建，促進(jìn)骨質(zhì)形成。為其在正畸臨床中的應(yīng)用提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。