酸堿脅迫對鱖存活率、組織結(jié)構(gòu)及解毒酶活性的影響

張成碩,趙 巖,王艷玲,曾萌冬,趙金良

( 1.上海海洋大學(xué),水產(chǎn)種質(zhì)資源發(fā)掘與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海 201306; 2.上海海洋大學(xué),水產(chǎn)動物遺傳育種中心上海市協(xié)同創(chuàng)新中心,上海 201306 )

水體pH是影響魚類生存、生長和繁殖的重要環(huán)境因素[1]。pH的高低也可以反應(yīng)水質(zhì)的變化情況(如水中藻類的活力、二氧化碳的存在狀態(tài)等)。因此,pH作為養(yǎng)殖水體的重要水質(zhì)指標(biāo)而被廣泛關(guān)注。淡水緩沖能力較差,養(yǎng)殖過程中飼料、藥物的使用極易引起pH的變化。此外,不可控因素(如廢水排放污染等)也會加劇水體的pH變化,進(jìn)而影響魚類生長或引起疾病的發(fā)生,甚至死亡。

鱖(Sinipercachuatsi)是我國傳統(tǒng)的淡水名特優(yōu)魚類。鱖自從實(shí)現(xiàn)人工繁殖以來,其養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大[2-3]。鱖對養(yǎng)殖水質(zhì)要求較高,目前關(guān)于水體環(huán)境因子脅迫對鱖影響的研究主要涉及氨氮脅迫[4-6]、低氧脅迫[7]和酸堿脅迫[8-9]方面。酸堿脅迫的研究表明,平均體質(zhì)量為25.0 g的鱖96 h耐受pH為4.1～9.1[8];鱖可以通過提高耗氧率來適應(yīng)

酸堿脅迫[9]。細(xì)胞色素P450酶(CYP450)、黃素單加氧酶(FMO)、尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)是常見的抵御外界有毒化合物侵入體內(nèi)的生物解毒酶[10]。酸堿脅迫可以引起上述解毒酶基因在鱖體內(nèi)的表達(dá)變化[9],但鱖對酸堿脅迫的適應(yīng)機(jī)制尚不清晰。鰓和肝臟是魚類機(jī)體適應(yīng)外界環(huán)境脅迫過程中重要的調(diào)節(jié)器官。環(huán)境脅迫通常會造成魚類鰓組織上皮細(xì)胞腫脹甚至脫落、肝細(xì)胞出現(xiàn)空泡化等現(xiàn)象,這些形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化也體現(xiàn)了組織的功能[11-13]。酸堿脅迫下鱖組織結(jié)構(gòu)變化特點(diǎn)尚無研究報(bào)道。

筆者觀察了酸堿脅迫下鱖的存活率,鰓和肝臟組織學(xué)結(jié)構(gòu)以及相關(guān)解毒酶的活性變化,旨在深入探究酸堿脅迫對鱖的影響及其相應(yīng)適應(yīng)機(jī)制,為其健康養(yǎng)殖及安全生產(chǎn)提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用鱖300尾,取自安徽省池州市秋浦特種水產(chǎn)開發(fā)有限公司,在實(shí)驗(yàn)室循環(huán)水族箱中至少暫養(yǎng)7 d,待其適應(yīng)新環(huán)境。其間每日投喂餌料魚,檢查魚的活動情況并及時清理殘餌和糞便。暫養(yǎng)結(jié)束后,分為大規(guī)格[體質(zhì)量(30.2±5.1) g]、小規(guī)格[體質(zhì)量(5.3±0.7) g]兩組。試驗(yàn)用水為曝氣48 h以上的自來水,水溫(24.6±0.5) ℃,pH 7.5±0.1,溶解氧(8.1±0.1) mg/L。試驗(yàn)容器為55.0 cm×40.0 cm×31.5 cm玻璃水族箱。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)液的配制

預(yù)試驗(yàn)中,以pH≤3、pH≥11為脅迫條件,發(fā)現(xiàn)大規(guī)格幼魚組存活時間不超過72 h,不能在72 h內(nèi)對活體進(jìn)行連續(xù)采樣,以pH 4.0、10.0脅迫,大規(guī)格幼魚可存活72 h。正式試驗(yàn)中用1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)試驗(yàn)液pH,設(shè)置pH分別為4.0、5.5、7.0、8.5、10.0的試驗(yàn)組。

1.2.2 酸堿脅迫試驗(yàn)

試驗(yàn)時,將試驗(yàn)魚從水族箱內(nèi)取出,直接放入試驗(yàn)組中。每組試驗(yàn)各放10尾同規(guī)格魚,設(shè)3個平行。發(fā)現(xiàn)死魚及時撈出,并記錄死亡時間和尾數(shù),統(tǒng)計(jì)不同時間段內(nèi)存活率,最短、最長以及平均存活時間。由于小規(guī)格幼魚組難以進(jìn)行組織采樣,所以僅對大規(guī)格幼魚組進(jìn)行組織采樣。脅迫72 h后對試驗(yàn)魚采樣用于組織切片觀察,并分別在脅迫后3、12、24、48 h和72 h采樣用于酶活性測定。采樣在滅菌操作臺上操作,解剖后快速將試驗(yàn)魚鰓、肝組織放入波恩氏液中或-80 ℃超低溫冰箱保存。每組隨機(jī)取2尾。試驗(yàn)期間不投喂餌料,試驗(yàn)開始后,每隔5 h調(diào)整試驗(yàn)液1次,充氧1 h,每隔24 h更換試驗(yàn)液。

1.2.3 組織切片

將試驗(yàn)魚鰓、肝臟組織用0.9%生理鹽水清洗后放入波恩氏液(福建飛凈科研試劑)中固定24 h,用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)對組織進(jìn)行脫水45 min,使組織由黃色變?yōu)闇\色后再分別用體積分?jǐn)?shù)80%、90%、100%乙醇脫水40 min。脫水完成后先浸入二甲苯與乙醇體積比為1∶1的混合液中15 min,浸入純二甲苯溶液中20 min直至透明完成。使用石蠟溶液浸入組織,進(jìn)行包埋。使用Leica RM 2016輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)連續(xù)切片,厚度為5 μm,切好的組織切片烘干后經(jīng)蘇木精-伊紅(上海索萊寶生物科技有限公司)染色,用中性樹膠進(jìn)行封片,在Olympus顯微鏡下觀察成像。

1.2.4 酶活性測定

稱量試驗(yàn)魚鰓、肝樣品約0.05 g,按照m(組織質(zhì)量,g)∶V(溶液體積,mL)=1∶9比例加入磷酸緩沖鹽溶液,離心管置于冰上操作,使用勻漿器充分勻漿后獲得組織勻漿液,于4 ℃下以2500 r/min(離心半徑7 cm)離心8 min后,移液槍吸取上清液測定酶活性。使用上海酶聯(lián)生物科技有限公司的試劑盒,在BioTek Synergy 酶標(biāo)儀中450 nm波長下檢測組織中細(xì)胞色素P450酶、黃素單加氧酶、尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的活性。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)進(jìn)行分析,單因素方差分析進(jìn)行顯著性檢驗(yàn),鄧肯多重比較檢測各測量指標(biāo)的差異,P<0.05認(rèn)為具有顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 酸堿脅迫對鱖存活率的影響

各時間段內(nèi)鱖存活率,最短、最長以及平均存活時間見表1。大規(guī)格幼魚除取樣外,在各試驗(yàn)組中72 h內(nèi)無死亡個體,因此未統(tǒng)計(jì)開始取樣(3 h)后的存活率。小規(guī)格幼魚,在pH 5.5、7.0、8.5的試驗(yàn)組中72 h內(nèi)存活率分別為93.3%、100%、100%,在pH 4.0、10.0中1 h內(nèi)全部死亡,平均存活時間分別為(53.60±4.65) min和(49.30±5.34) min。

表1 pH脅迫鱖的存活率和存活時間Tab.1 Survival rate and time of S. chuatsi upon pH stress

2.2 酸堿脅迫對鱖鰓組織結(jié)構(gòu)的影響

72 h后,pH 7.0組中,鱖鰓組織血細(xì)胞分布均勻,胞核明顯,排列整齊,鰓小片結(jié)構(gòu)完整清晰,長度、粗細(xì)均勻一致,黏液細(xì)胞胞體較大且明顯,排列規(guī)則,層間細(xì)胞團(tuán)與鰓小片之間無明顯間隙,上皮細(xì)胞緊密包裹在鰓小片外圍(圖1a);pH 4.0組中,鱖鰓小片出現(xiàn)顯著變化,變短變粗呈彎曲腫大狀態(tài),鰓絲處毛細(xì)血管破碎,血細(xì)胞沉積,血細(xì)胞排列密集且胞核較小,上皮細(xì)胞水腫甚至脫落(圖1b);pH 5.5組中,鱖鰓絲血細(xì)胞排列雜亂無章,鰓小片之間的層間細(xì)胞團(tuán)明顯變薄,上皮細(xì)胞增生腫大(圖1c);pH 8.5組中,鱖鰓絲上血細(xì)胞數(shù)目減少,鰓小片腫大變粗或萎縮變細(xì),并出現(xiàn)明顯的細(xì)胞質(zhì)空泡化,黏液細(xì)胞排列松散,間隙較大(圖1d);pH 10.0組中,鱖絲正常細(xì)胞數(shù)量減少,鰓小片萎縮嚴(yán)重,層間細(xì)胞團(tuán)消融,上皮細(xì)胞大部分脫落,黏液細(xì)胞胞膜不明顯,細(xì)胞質(zhì)空泡化愈加明顯(圖1e)。

2.3 酸堿脅迫對鱖肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響

72 h后,pH 7.0組中,鱖肝細(xì)胞呈較為規(guī)則的卵圓形,排列有序,分布均勻,胞質(zhì)內(nèi)含物明顯,細(xì)胞核多數(shù)表現(xiàn)為正常形態(tài),且位置居中,肝索緊密,肝血竇清晰不規(guī)則,細(xì)胞間脂肪分布均勻(圖2a);pH 4.0組中,鱖肝細(xì)胞數(shù)目明顯減少,細(xì)胞膜不明顯,血細(xì)胞排列無序且密集,細(xì)胞核著色深、發(fā)生變形,肝索紊亂,肝血竇擴(kuò)張,細(xì)胞間脂肪呈彌散狀(圖2b);pH 5.5組中,鱖肝細(xì)胞腫大,松散,肝血竇出現(xiàn)融合現(xiàn)象,肝索排列較紊亂(圖2c);pH 8.5組中,鱖肝細(xì)胞數(shù)目多,腫大,肝血竇伸長(圖2d);pH 10.0組中,鱖肝細(xì)胞核著色較深,血細(xì)胞發(fā)生變形,細(xì)胞核呈長條狀,肝血竇擴(kuò)張(圖2e)。

圖2 酸堿脅迫72 h對鱖肝臟組織結(jié)構(gòu)形態(tài)的影響Fig.2 Effect of pH stress on the liver histological structure of S. chuatsi after 72 ha.pH 7.0組(×200);b. pH 4.0組(×200);c. pH 5.5組(×200);d. pH 8.5組(×200);e.pH 10.0組(×200);H. 肝細(xì)胞;BC. 血細(xì)胞;N. 細(xì)胞核; HS. 肝血竇; FG. 細(xì)胞間脂肪; HeC.肝索.a.pH 7.0 group (×200); b. pH 4.0 group (×200); c. pH 5.5 group (×200); d. pH 8.5 group (×200); e. pH 10.0 group (×200); H. hepatocyte; BC. blood cell; N. nuclear; HS. hepatic sinusoid; FG. f-granule; HeC.hepatic cord.

2.4 酸堿脅迫對鱖鰓組織中解毒酶活性的影響

pH 7.0組,鱖鰓組織中各解毒酶的活性變化不顯著(P>0.05),而其余各試驗(yàn)組解毒酶的活性均呈先升后降的變化趨勢(圖3)。酸堿脅迫后3 h,尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的活性開始升高;脅迫12 h后,pH 4.0、5.5、8.5試驗(yàn)組鱖鰓中尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶的活性達(dá)到最高值,隨后開始降低;脅迫24 h后,黃素單加氧酶的活性達(dá)到最高值,此時pH 10.0組中細(xì)胞色素P450酶的活性和pH 5.5組中谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的活性均達(dá)到最高且顯著高于其他試驗(yàn)組(P<0.01);脅迫至72 h后,各試驗(yàn)組中細(xì)胞色素P450酶和黃素單加氧酶的活性差異不大,pH 4.0、8.5、10.0組中尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶的活性低于pH 7.0組,而谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的活性顯著高于pH 7.0組(P<0.05)。

圖3 酸堿脅迫對鱖鰓組織中幾種解毒酶活性的影響Fig.3 Effect of pH stress on activity of detoxification enzymes in gill of S. chuatsi*表示同一處理組不同時間點(diǎn)間差異顯著(P<0.05);**表示差異極顯著(P<0.01);下同.*represented significant differences within the same treatment among different times (P<0.05); **represented very significant differences(P<0.01); et sequentia.

2.5 酸堿脅迫對鱖肝組織中解毒酶活性的影響

在pH 7.0組中,肝組織中各解毒酶的活性變化不顯著(P>0.05),而其余各試驗(yàn)組細(xì)胞色素P450酶、黃素單加氧酶的活性呈先升高后降低的變化趨勢,谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的活性在72 h內(nèi)呈逐漸上升的趨勢,尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶活性在72 h脅迫過程中雖有所波動,但整體上呈先升后降的變化趨勢(圖4)。脅迫后3 h,細(xì)胞色素P450酶和尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶的活性開始升高,pH 8.5組中尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶的活性在12 h時達(dá)到峰值,隨后開始下降;pH 4.0、8.5、10.0組中肝細(xì)胞色素P450酶的活性在脅迫后24 h達(dá)到最高值,至脅迫72 h活性下降;除pH 7.0組外,各試驗(yàn)組肝黃素單加氧酶的活性均在48 h到達(dá)峰值,隨后開始下降;谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的活性在脅迫72 h后達(dá)到最高值并且顯著高于pH 7.0組(P<0.05)。

圖4 酸堿脅迫對鱖肝組織中幾種解毒酶活性的影響Fig.4 Effect of pH stress on activity of detoxification enzymes in liver of S.chuatsi

3 討 論

3.1 鱖酸堿耐受性

小規(guī)格魚對環(huán)境脅迫的耐受性通常比大規(guī)格魚弱,如體長約2 cm的異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)對鹽度和碳酸鹽堿的安全濃度(2.98 mol/L和13.20 mol/L)低于體長約9 cm的異育銀鯽(4.63 mol/L和20.33 mol/L)[14];但是當(dāng)環(huán)境脅迫達(dá)到一定極值時,不同規(guī)格的魚在脅迫后的死亡統(tǒng)計(jì)情況趨于一致,如水溫25～30 ℃時,體長約8 cm和16 cm的褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)在生長性能上存在差異,當(dāng)水溫達(dá)到32 ℃時,兩種規(guī)格魚的成活率無顯著差異[15]。本試驗(yàn)中,在pH 4.0和pH 10.0環(huán)境下,體質(zhì)量(5.3±0.7) g的小規(guī)格幼魚平均存活時間小于1 h,體質(zhì)量(30.2±5.1) g的大規(guī)格幼魚至少存活72 h。這樣的差別可能由以下原因引起:(1)不同規(guī)格的試驗(yàn)魚對酸堿耐受能力不同,尚未達(dá)到可使大規(guī)格幼魚迅速致死的酸堿極值;(2)酸堿度的改變主要是離子濃度的改變,離子脅迫和溫度脅迫對魚的致死性不同。

3.2 酸堿脅迫對鱖鰓、肝組織結(jié)構(gòu)的影響

鰓主要參與魚類呼吸的同時還參與調(diào)節(jié)機(jī)體滲透壓和酸堿平衡的過程。鰓的表面積大且與外界水環(huán)境直接接觸,極易受到有毒物質(zhì)的侵害,進(jìn)而損害機(jī)體健康[16]。環(huán)境脅迫對鰓造成的損傷主要有兩種,一種是細(xì)胞死亡、脫落等直接性損傷,另一種是鰓小片變粗變大、上皮細(xì)胞增生等防御性損傷[17]。在低氧脅迫下,卵形鯧鲹(Trachinotusovatus)的鰓上皮細(xì)胞會脹大、鰓小片會脫落[18],團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)的鰓小片長度會增加[19];大口黑鱸(Micropterussalmoides)在氨氮脅迫下部分鰓小片結(jié)構(gòu)消失,泌氯細(xì)胞數(shù)目增加[20];花鱸(Lateolabraxmaculatus)幼魚在高鹽度環(huán)境下,鰓絲變粗并且出現(xiàn)斷裂脫落現(xiàn)象[21]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,酸堿脅迫導(dǎo)致鱖的鰓小片變形、層間細(xì)胞團(tuán)厚度減少、外部上皮細(xì)胞腫大甚至脫落、正常細(xì)胞數(shù)量減少、血細(xì)胞排列紊亂和細(xì)胞質(zhì)空泡化等。在pH 4.0的環(huán)境下,鰓絲毛細(xì)血管破裂、血細(xì)胞堆積現(xiàn)象突出明顯,意味著血液運(yùn)輸氣體的能力(即鰓的呼吸作用)受到影響,這與鱖在此pH下耗氧率低的研究結(jié)果相符[9],也和低pH下草魚(Ctenopharyngodonidella)鰓上皮滲血導(dǎo)致血氧交換困難的現(xiàn)象相似[22]。推測這一現(xiàn)象與在酸性條件下水體中H+增多,鰓上皮細(xì)胞對H+的通透性較大有關(guān),H+通過鰓進(jìn)入體內(nèi),改變血液化學(xué)成分,使血球比容升高、血液黏滯性增加[23-24]。pH 10.0環(huán)境下的上皮細(xì)胞大量脫落現(xiàn)象突出明顯,上皮細(xì)胞附近有大量離子通道存在,預(yù)示著細(xì)胞膜通透性會受到嚴(yán)重破壞,影響機(jī)體離子交換體系和酸堿緩沖體系,進(jìn)而影響體內(nèi)NH3等產(chǎn)物的代謝,這與鹽堿脅迫對青海湖裸鯉(Gymnocyprisprzewalskiissp.przewalskii)鰓影響的研究一致[25]。綜上,酸堿脅迫對鰓的影響會有一定的差別,酸脅迫對鰓的呼吸作用損壞較強(qiáng),堿脅迫對鰓的離子交換作用損壞較強(qiáng)。

肝臟是魚類重要的代謝和免疫器官。新陳代謝、蛋白質(zhì)合成和體內(nèi)有毒物質(zhì)的排泄等均離不開肝臟[26]。外界有毒物質(zhì)的侵入容易對肝臟造成嚴(yán)重?fù)p害[27]。研究表明:低鹽脅迫會造成紅鰭東方鲀(Takifugurubripes)肝細(xì)胞腫大膨脹[28];亞硝態(tài)氮脅迫下鳙(Aristichthysnobilis)的肝細(xì)胞核腫大且數(shù)量增多[29];草魚和革胡子鲇(Clariasgariepinus)在亞硝態(tài)氮含量高的環(huán)境中,肝組織處空泡化嚴(yán)重,細(xì)胞核發(fā)生固縮[30-31];多氯聯(lián)苯1242對鯉(Cyprinuscarpio)脅迫嚴(yán)重時,鯉會出現(xiàn)肝細(xì)胞膜溶解,細(xì)胞核固縮甚至丟失現(xiàn)象[32];亞致死濃度溴氰菊酯(殺蟲劑)脅迫食蚊魚(Gambusiaaffinis)后會導(dǎo)致其細(xì)胞核萎縮,組織壞死[33]。本試驗(yàn)中,pH 5.5與pH 8.5組中鱖肝細(xì)胞腫大,推測可能是由于酸堿脅迫激發(fā)了肝細(xì)胞的活性,位于肝細(xì)胞的相關(guān)酶類參與反應(yīng),表現(xiàn)為肝細(xì)胞趨于腫大[34]。pH 4.0和pH 10.0組中出現(xiàn)鱖肝細(xì)胞排列紊亂、細(xì)胞核變形、肝血竇擴(kuò)張和細(xì)胞間脂肪堆積等現(xiàn)象。與其他常見離子或化學(xué)試劑脅迫結(jié)果比較發(fā)現(xiàn),肝組織在結(jié)構(gòu)形態(tài)方面的變化比較相近[28-33]。這表明造成脅迫壓力的離子或試劑成分不同,相應(yīng)代謝轉(zhuǎn)運(yùn)的路徑不同,但肝臟在結(jié)構(gòu)形態(tài)上的應(yīng)答表現(xiàn)相似。低強(qiáng)度脅迫會引起肝細(xì)胞腫大或數(shù)量增多,高強(qiáng)度脅迫會導(dǎo)致細(xì)胞核變形等損傷。

3.3 酸堿脅迫對鱖鰓、肝組織中解毒相關(guān)酶活性的影響

生物可以通過多種方式抵御環(huán)境脅迫和保持體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,其一是在各類解毒酶(生物轉(zhuǎn)化酶)的作用下,將疏水性化合物轉(zhuǎn)化為更易從生物體中排出的親水性衍生物。通常,細(xì)胞色素P450酶和黃素單加氧酶等作為Ⅰ相解毒酶參與氧化、還原及水解反應(yīng),尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶等作為Ⅱ相解毒酶參與結(jié)合反應(yīng)[10]。長期適應(yīng)高溫的魚體內(nèi)細(xì)胞色素P450酶的活性比低溫的魚要高[35];四鼻須鯉肝臟中谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性隨氨氮濃度的升高而不斷升高[36]。本試驗(yàn)中,pH 7.0組的相關(guān)解毒酶(細(xì)胞色素P450酶、黃素單加氧酶、尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶)在鰓和肝組織中的活性始終無顯著變化。其余各試驗(yàn)組中,酸堿脅迫3 h或6 h后,細(xì)胞色素P450酶、黃素單加氧酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的活性均開始升高;脅迫48 h,上述解毒酶的活性顯著高于pH 7.0組和初始水平(對照);72 h后細(xì)胞色素P450酶和黃素單加氧酶回落接近對照組,谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性仍然顯著高于對照組。尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶的活性在72 h內(nèi)波動較大;酸堿脅迫12 h,尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶活性顯著高于對照;脅迫48 h,其活性下降接近甚至顯著低于對照組。這與其他解毒酶不同。上述結(jié)果表明,盡管在酸堿脅迫(pH 4.0～10.0)下鰓和組織結(jié)構(gòu)會發(fā)生一定變化,但鱖仍能夠啟動生物體化學(xué)防御機(jī)制,提高解毒酶活性,通過生物轉(zhuǎn)化將體內(nèi)毒物排出體外。同時,不同酶的表達(dá)趨勢也反映了其作用機(jī)制存在時間效應(yīng)等方面的差異。細(xì)胞色素P450酶和黃素單加氧酶同屬于Ⅰ相酶,表達(dá)趨勢接近。尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶雖然都是Ⅱ相酶,但表達(dá)趨勢不同,尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶較早達(dá)到高峰而后下降,表明尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶主要在前期起作用。

4 結(jié) 論

pH 4.0、10.0組內(nèi)小規(guī)格鱖幼魚(5.3±0.7) g在1 h內(nèi)全部死亡。酸堿脅迫(pH 4.0～10.0)會對鱖組織器官造成變化或損傷。酸脅迫引起的鰓毛細(xì)血管破裂、血細(xì)胞堆積現(xiàn)象突出明顯,對鰓的呼吸作用損害較強(qiáng)。堿脅迫引起的鰓上皮細(xì)胞的大量脫落現(xiàn)象突出明顯,對鰓的離子交換作用損害較強(qiáng)。肝臟在結(jié)構(gòu)形態(tài)上的變化與由其他離子脅迫引起的變化相類似,低強(qiáng)度脅迫會引起肝細(xì)胞腫大或數(shù)量增多,高強(qiáng)度脅迫會導(dǎo)致細(xì)胞核變形等損傷。盡管組織結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,細(xì)胞色素P450酶、黃素單加氧酶、尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶仍參與了鱖在酸堿脅迫下的適應(yīng)過程,其作用機(jī)制存在時間和效應(yīng)等方面的差異。細(xì)胞色素P450酶和黃素單加氧酶表達(dá)趨勢接近,尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶和其他解毒酶相比主要在前期起作用。研究結(jié)果豐富了鱖應(yīng)答和耐受酸堿脅迫的基礎(chǔ)理論數(shù)據(jù)。