不同檢測(cè)方法對(duì)念珠菌性陰道炎的診斷效能比較

孫園圓 趙建萍

（鄭州市婦幼保健院檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450000）

念珠菌性陰道炎是由念珠菌感染導(dǎo)致的一種陰炎癥性疾病，臨床表現(xiàn)為不同程度的外陰瘙癢、白帶增多、異味、外陰道及陰道內(nèi)有灼燒感等癥狀，影響患者的生活質(zhì)量。念珠菌性陰道炎患者若得不到及時(shí)診治會(huì)導(dǎo)致念珠菌長(zhǎng)期潛伏于外陰陰道褶皺處，后即使接受抗真菌藥物治療也容易復(fù)發(fā)而難以治愈，成為帶菌者，給患者精神和心理上造成巨大痛苦[1]。因此，早期發(fā)現(xiàn)并及早進(jìn)行有效治療十分必要。

目前，真菌培養(yǎng)是念珠菌性陰道炎診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，其可直接使用患者的白帶標(biāo)本進(jìn)行菌落培養(yǎng)，菌落形態(tài)直觀、顏色明顯，培養(yǎng)陽(yáng)性率幾乎均可達(dá)100%，可實(shí)現(xiàn)真菌菌屬的準(zhǔn)確檢測(cè)。但是，真菌培養(yǎng)時(shí)間偏長(zhǎng)，難以實(shí)現(xiàn)早期快速診斷[2]。乳膠凝集法、顯微鏡鏡檢法、熒光聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）核酸擴(kuò)增法現(xiàn)已經(jīng)廣泛用于臨床微生物檢驗(yàn)中，且均取得一定價(jià)值[3-4]。但上述檢測(cè)方法中哪種對(duì)念珠菌性陰道炎的診斷效能更為顯著仍需進(jìn)一步探究。鑒于此，本研究旨在比較乳膠凝集法、顯微鏡鏡檢法、熒光PCR核酸擴(kuò)增法對(duì)念珠菌性陰道炎的診斷效能。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究經(jīng)鄭州市婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，前瞻性納入2020年7月-2022年7月本院接收的130疑似念珠菌性陰道炎患者為研究對(duì)象。

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者疑似念珠菌性陰道炎，表現(xiàn)為陰道分泌物增多、稠厚、明顯外陰瘙癢、灼熱痛、排尿痛等癥狀；檢查前24h未進(jìn)行陰道用藥與沖洗；2d內(nèi)無(wú)性生活；患者情緒穩(wěn)定，依從性良好，可配合本次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并未控制的急性生殖道炎癥；嚴(yán)重意識(shí)障礙或精神疾?。缓喜盒哪[瘤；合并心、肝、腎器質(zhì)性病變；伴全身急慢性感染。

患者年齡23-34歲，平均年齡（29.85±2.01）歲；體重指數(shù)22.15-25.42 kg·m-2，平均（23.78±0.65）kg·m-2；病程3-7 m，平均（5.12±0.64） m；受教育程度：初中及以下87例，中專/高中及以上43例。患者均簽署研究知情同意書。

1.2 方法

患者取膀胱截石位，醫(yī)護(hù)人員在窺陰器的輔助下（禁止涂抹潤(rùn)滑劑，防止陰道分泌物樣品受到污染），將無(wú)菌棉拭子置入患者陰道后穹窿或陰道內(nèi)部，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3-5圈，用細(xì)胞保存液容器保存陰道側(cè)壁分泌物，同時(shí)做好標(biāo)識(shí)、記錄。

1.2.1 乳膠凝集法檢測(cè)

將收集的樣品安放在軟瓊脂試管底部作為凝集法檢驗(yàn)樣本，將其保存在-40℃低溫環(huán)境中培養(yǎng)12h后，采用凝集測(cè)定試劑盒對(duì)樣品進(jìn)行快速檢驗(yàn)，若樣本內(nèi)能夠觀察到紫色凝集顆粒，則診斷患者念珠菌性陰道炎陽(yáng)性，反之則診斷為陰性。試劑盒購(gòu)自購(gòu)自上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司。

1.2.2 顯微鏡鏡檢法檢測(cè)

將收集的樣本進(jìn)行涂片處理，向涂片中滴加2滴氫氧化鉀溶液（濃度控制在10%），當(dāng)樣本于溶液混合均勻時(shí)，采用顯微鏡高倍視野（×200）對(duì)樣本進(jìn)行觀察，當(dāng)檢測(cè)出涂片中是存在真菌孢子、菌絲或假菌絲則診斷患者念珠菌性陰道炎陽(yáng)性，反之則診斷為陰性。

1.2.3 熒光PCR核酸擴(kuò)增法檢測(cè)

以離心柱法對(duì)收集的樣本進(jìn)行處理，獲取陰道分泌物DNA，每次將5μL的提取液加入念珠菌性陰道炎相關(guān)菌群核酸特異性Taqman探針PCR反應(yīng)液管中（NCBI genbank序列），經(jīng)美國(guó)ABI熒光定量QSDX儀擴(kuò)增后記錄反應(yīng)結(jié)果，并將反應(yīng)結(jié)果與對(duì)照樣本進(jìn)行比較。

陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：條帶寬度≤1 mm，并在預(yù)期堿基范圍內(nèi)，背景無(wú)藥斑或引物二聚體。其余情況則診斷為陰性。

1.2.4 真菌培養(yǎng)方法

將采集的患者陰道分泌物接種于培養(yǎng)皿中，提供適量的細(xì)菌培養(yǎng)液并將培養(yǎng)皿置于培養(yǎng)箱中（溫度控制在32℃，濕度控制自50%），于培養(yǎng)5d后使用微生物鑒定質(zhì)譜系統(tǒng)（上海復(fù)星診斷科技有限公司，型號(hào)：MicroIDSys）進(jìn)行細(xì)菌鑒定。當(dāng)鑒定培養(yǎng)皿內(nèi)出現(xiàn)典型念珠菌落則確診患者為念珠菌性陰道炎陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 25.0軟件處理數(shù)據(jù)，全部計(jì)量資料均經(jīng)Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的資料以±SD表示，計(jì)數(shù)資料用n和%表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Kappa進(jìn)行一致性檢驗(yàn)，Kappa＜0.4，一致性較差；0.4≤Kappa＜0.75，一致性一般；Kappa≥0.75時(shí)一致性較好。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 真菌培養(yǎng)結(jié)果

真菌培養(yǎng)結(jié)果顯示，130例疑似念珠菌性陰道炎患者中確診念珠菌性陰道炎101例，占比77.69%（101/130）；非念珠菌性陰道炎29例，占比22.31%（29/130）。

2.2 不同檢測(cè)方法檢查念珠菌性陰道炎結(jié)果與真菌培養(yǎng)結(jié)果分析

以真菌培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)Kappa一致性度量，乳膠凝集法檢查念珠菌性陰道炎結(jié)果與真菌培養(yǎng)結(jié)果的一致性一般（Kappa=0.433，P＜0.001），見表1。

表1 乳膠凝集法檢查念珠菌性陰道炎結(jié)果與真菌培養(yǎng)結(jié)果分析（n）

顯微鏡鏡檢法檢查念珠菌性陰道炎結(jié)果與真菌培養(yǎng)結(jié)果的一致性一般（Kappa=0.589，P＜0.001），見表2。

表2 顯微鏡鏡檢法檢查念珠菌性陰道炎結(jié)果與真菌培養(yǎng)結(jié)果分析（n）

熒光PCR核酸擴(kuò)增法檢查念珠菌性陰道炎結(jié)果與真菌培養(yǎng)結(jié)果的一致性較好（Kappa=0.888，P＜0.001）。見表3。

表3 熒光PCR核酸擴(kuò)增法檢查念珠菌性陰道炎結(jié)果與真菌培養(yǎng)結(jié)果分析（n）

2.3 不同檢測(cè)方法對(duì)念珠菌性陰道炎的診斷價(jià)值

以真菌培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，熒光PCR核酸擴(kuò)增法檢查念珠菌性陰道炎的準(zhǔn)確度、靈敏度均高于乳膠凝集法、顯微鏡鏡檢法檢查，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 不同檢測(cè)方法對(duì)念珠菌性陰道炎的診斷價(jià)值%（n）

3 討論

念珠菌性陰道炎患者若得不到及時(shí)診治會(huì)導(dǎo)致念珠菌長(zhǎng)期潛伏于外陰陰道褶皺處，后即使接受抗真菌藥物治療也容易復(fù)發(fā)而難以治愈，成為帶菌者，給患者精神和心理上造成巨大痛苦[1-3]。對(duì)疑似為念珠菌陰道炎的患者多采用真菌培養(yǎng)法進(jìn)行檢查，其優(yōu)點(diǎn)是可直接使用患者的白帶標(biāo)本進(jìn)行菌落培養(yǎng)，菌落形態(tài)直觀、顏色明顯，培養(yǎng)陽(yáng)性率幾乎均可達(dá)100%[2,3]。但真菌培養(yǎng)時(shí)間偏長(zhǎng)，部分患者得到檢測(cè)結(jié)果需5-7d，難以實(shí)現(xiàn)早期快速診斷。現(xiàn)階段，乳膠凝集法、顯微鏡鏡檢法、熒光PCR核酸擴(kuò)增法臨床檢查人體微生物感染常用檢測(cè)方法，但具體采用何種檢查效果更好仍存在諸多爭(zhēng)議。本研究結(jié)果顯示，乳膠凝集法、顯微鏡鏡檢法檢測(cè)念珠菌性陰道炎結(jié)果與真菌培養(yǎng)結(jié)果的一致性一般，熒光PCR核酸擴(kuò)增法檢測(cè)結(jié)果與真菌培養(yǎng)結(jié)果的一致性較好；三者中，熒光PCR核酸擴(kuò)增法檢查念珠菌性陰道炎的準(zhǔn)確度、靈敏度高。乳膠凝集法是利用在電解質(zhì)協(xié)助下顆粒性抗原和相關(guān)抗體出現(xiàn)結(jié)合現(xiàn)象的一種檢查方法，可用肉眼觀察到凝聚狀況，進(jìn)而判斷陰道局部念珠菌感染狀況。但其對(duì)反應(yīng)條件的要求較高，抗體特異性一般，導(dǎo)致其診斷的準(zhǔn)確度、靈敏度受到諸多負(fù)面影響[4-7]。

顯微鏡鏡檢法利用顯微鏡的顯微放大效果對(duì)經(jīng)過(guò)氫氧化鉀溶液溶解的念珠菌菌株進(jìn)行實(shí)時(shí)觀測(cè)，當(dāng)檢出真菌孢子、菌絲或假菌絲等念珠菌菌株時(shí)則確診為陽(yáng)性。但鏡檢法隸屬于一種人為的操作方法具有較強(qiáng)的主觀性，易受到檢測(cè)醫(yī)師自身經(jīng)驗(yàn)、技術(shù)等外界因素影響，可能會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性或者假陰性的概率增加，出現(xiàn)漏診、誤診[4-7]。

熒光PCR核酸擴(kuò)增法在傳統(tǒng)的PCR反響體系中參加熒光染料或熒光基團(tuán)，免除PCR后續(xù)操作流程，可降低產(chǎn)物污染的風(fēng)險(xiǎn)性；且熒光物質(zhì)有其特定的波長(zhǎng)，對(duì)不同的細(xì)菌可呈不同熒光信號(hào)。目前熒光PCR核酸擴(kuò)增法已經(jīng)有數(shù)千種細(xì)菌的熒光對(duì)照譜，檢測(cè)人員通過(guò)將反應(yīng)結(jié)果與對(duì)照樣本進(jìn)行比較，即可準(zhǔn)確檢測(cè)出患者是否患有念珠菌性陰道炎[4-7]。

綜上所述，乳膠凝集法、顯微鏡鏡檢法、熒光PCR核酸擴(kuò)增法對(duì)念珠菌性陰道炎具有一定的診斷效能，但與前二者比較，熒光PCR核酸擴(kuò)增法檢查念珠菌性陰道炎的準(zhǔn)確度、靈敏度更高。對(duì)于有臨床表現(xiàn)而乳膠凝集法或顯微鏡鏡檢結(jié)果為陰性的患者，可行熒光PCR核酸擴(kuò)增法檢查來(lái)實(shí)現(xiàn)念珠菌性陰道炎有效診斷。