• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    北柴胡內(nèi)生真菌分離鑒定及其生防促生活性分析

    2023-07-17 07:36:30杜衎高德民孫燕馮筱涵曹海祿張穎穎
    山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年6期
    關(guān)鍵詞:內(nèi)生柴胡真菌

    杜衎,高德民,孫燕,馮筱涵,曹海祿,張穎穎

    (1. 山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院, 山東濟(jì)南 250355;2. 恒德本草(北京)農(nóng)業(yè)科技有限公司,北京 100071;3. 山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院, 山東濟(jì)南 250355)

    內(nèi)生真菌普遍存在于植物健康組織中,且顯著影響植物中代謝產(chǎn)物的形成。 內(nèi)生真菌作為生物肥料的重要來源,具有受外界環(huán)境影響小、對宿主防衛(wèi)反應(yīng)耐受度高等優(yōu)點(diǎn),探索植物和內(nèi)生真菌之間的相互作用是推動農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的一種有效策略[1-3]。 近10 年來,超過83 科212 種藥用植物被分離出376 屬以上的內(nèi)生真菌,其中一些內(nèi)生真菌已經(jīng)被利用于植物栽培、生防菌研發(fā)、土壤生態(tài)修復(fù)等[4]。 植物內(nèi)生真菌的生防和促生功能研究已成為一大熱點(diǎn),Chen 等[5]研究表明,內(nèi)生真菌卷葉毛霉(Mucor circinelloidesDF20)可顯著提高丹參酮生物合成途徑中某些重要酶基因(DXS、DXR、HMGR、GPPS)的表達(dá)水平,促進(jìn)根中丹參酮的生物合成和積累;Schmidt 等[6]發(fā)現(xiàn)混合接種內(nèi)生真菌能顯著促進(jìn)芒草在重金屬污染土壤上的生長;王海霞等[7]從燕麥中分離出的降解淀粉芽孢桿菌對炭疽病防治效果顯著。

    北柴胡(Bupleurum chinenseDC.)為《中國藥典》規(guī)定的柴胡基源植物,具有抗癌、抗炎、抗菌等藥理作用,是我國大宗藥材和國家重點(diǎn)保護(hù)野生藥材品種之一[8,9]。 隨著新型冠狀病毒肺炎防治的正?;凸残l(wèi)生要求的提高,北柴胡國內(nèi)外市場需求量和種植面積迅速增加[10]。 根腐病、銹病嚴(yán)重影響北柴胡品質(zhì)與產(chǎn)量[11]。 目前北柴胡病害的防治主要依靠化學(xué)方法,化學(xué)藥劑的長期使用導(dǎo)致農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染等問題突出。 因此,利用北柴胡有益內(nèi)生真菌發(fā)展北柴胡綠色、標(biāo)準(zhǔn)化栽培具有很大潛力[12]。 目前關(guān)于北柴胡內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)及功能菌株的研究未見報道,因此本試驗(yàn)以組織塊分離法對北柴胡內(nèi)生真菌進(jìn)行分離并鑒定,初步分析北柴胡內(nèi)生真菌多樣性,并對內(nèi)生菌株進(jìn)行抑菌活性及促生活性測定,篩選出11 株優(yōu)良菌株并進(jìn)行ITS 分子鑒定,以期為進(jìn)一步研究、開發(fā)與利用北柴胡內(nèi)生菌資源用于生物防治與植物促生研究奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 植物材料 北柴胡植株為一年生栽培品成熟期植株,生長地年均日照時數(shù)為2 446.6 h,年均氣溫14.4℃,年均降水量661.7 mm,土壤類型為棕壤土。 于2021 年8 月下旬采自山東中醫(yī)藥大學(xué)百草園(36°33′24.73″N,116°47′50.24″E),并經(jīng)山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)中心鑒定為北柴胡。 新鮮植株用冰袋低溫保存,在2 h 內(nèi)進(jìn)行內(nèi)生菌分離試驗(yàn)。

    1.1.2 培養(yǎng)基 PDA 培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、阿須貝氏(Ashby)培養(yǎng)基、沙氏液體培養(yǎng)基,參考周德慶和徐德強(qiáng)[12]的配制方法;無機(jī)磷、有機(jī)磷與解鉀菌篩選培養(yǎng)基均參考孫玉[13]的方法配制;產(chǎn)葡聚糖酶、幾丁質(zhì)酶、纖維素酶、蛋白酶活性篩選培養(yǎng)基配制參考李雪艷等[14]的配方。

    1.1.3 病原指示菌 大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)作為指示細(xì)菌,由山東中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室張穎穎教授提供;層生鐮刀菌(Fusarium proliferatum)、尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)、茄病鐮刀菌(Fusarium solain)作為指示真菌,由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院孫文研究員提供。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 內(nèi)生真菌分離和純化 參考柳靖婷[15]的方法,結(jié)合北柴胡組織特點(diǎn),采用組織塊分離法對北柴胡內(nèi)生真菌進(jìn)行分離。 主要消毒條件:75%乙醇浸泡(根、莖5 min,葉3 min)及5% NaClO 溶液浸泡(葉5 min,根、莖10 min)。

    1.2.2 內(nèi)生真菌鑒定 參考《真菌鑒定手冊》[16]進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。 將篩選的菌株純化后,在無菌狀態(tài)下挑取菌絲,置于研缽中用液氮充分研磨菌絲體至粉末狀,采用DNA 提取試劑盒提取菌株DNA,采用引物ITS4-R(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)和ITS5-1737F(5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′)擴(kuò)增北柴胡內(nèi)生真菌的5.8S rDNA-ITS 片段,擴(kuò)增體系(50 μL):10×PCR buffer 5 μL,MgCl2(25 mmol/L)3 μL,dNTPs(2 mmol/L)4 μL,正向和反向引物(5 μmol/L)各2 μL,Taq酶(2 U/μL) 1 μL,DNA 模板(10 ng/μL)2 μL,加ddH2O 至50 μL。 委托廣東美格基因科技有限公司進(jìn)行測序,在NCBI 網(wǎng)站的Genbank 數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行序列比對,分析內(nèi)生真菌多樣性。 通過MEGA 7.0 軟件中的鄰接法(neighbor-joining methods, NJ)、基于Kimura 2-parameter 距離構(gòu)建抑菌和促生活性菌株系統(tǒng)發(fā)育樹,并以自展法(bootstrap)進(jìn)行檢測,自展次數(shù)設(shè)為1 000次[17]。

    1.2.3 抑菌活性菌株篩選與測試 初篩選參考袁林等[18]的方法進(jìn)行。 北柴胡內(nèi)生真菌對細(xì)菌指示菌的抑菌活性測試采用瓊脂塊法,對真菌指示菌的抑菌活性測試采用平板對峙法。 參考趙龍飛等[19]的方法采用牛津杯法測定初期篩選的活性強(qiáng)的菌株的發(fā)酵培養(yǎng)物上清液抑制能力,菌株發(fā)酵上清液150 μL 注入牛津杯中,每平板放置3個無菌牛津杯,每菌株設(shè)置3 個重復(fù)。

    活性菌株產(chǎn)真菌細(xì)胞壁降解酶能力測試:采用平板透明圈法[14]測試拮抗菌產(chǎn)膠體幾丁質(zhì)酶、蛋白酶、葡聚糖酶、纖維素酶能力,分別將待測菌株瓊脂塊放置4 種酶測試平板上,每處理4 個重復(fù),以0.1%剛果紅溶液浸漬培養(yǎng)基上表面20 min后沖洗,測量透明圈大小。

    1.2.4 促生菌株篩選與測試 IAA 分泌能力菌株篩選:分泌植物生長素(IAA)能力測定所用PC 比色液和S2比色液的配制參考李振東等[20]的方法,北柴胡內(nèi)生真菌分泌IAA 能力的定性測定采用Salkowski 比色法[21]。 PC 比色液顯色則表明該菌液IAA 濃度為低濃度,S2比色液顯色則為高濃度。采用標(biāo)準(zhǔn)品繪制兩組IAA 標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量測試,第一組濃度梯度為2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 mg/L,第二組濃度梯度為25、50、75、100、125、150 mg/L。 各菌株菌液采用相應(yīng)顯色液顯色,在OD530波長條件下使用紫外-可見光分光光度計(jì)測量吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線最終確定其IAA分泌量。

    溶磷菌株篩選參考王貴生[22]的方法。 在無機(jī)磷篩選平板、有機(jī)磷篩選平板分別接種各待測菌株,觀察是否有溶磷透明圈產(chǎn)生,定性測試陽性菌株。 以鉬銻抗比色法于無機(jī)磷篩選液體培養(yǎng)基和有機(jī)磷篩選液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的發(fā)酵液中測定可溶性磷含量。 潛在固氮能力菌株篩選參考Viuar等[23]的方法,于阿須貝氏(Ashby)培養(yǎng)基固體平板接種各待測菌株,觀察菌株是否生長及產(chǎn)生暗白色光暈,采用綜合元素分析儀測定活性菌株于相應(yīng)液體培養(yǎng)基發(fā)酵液中的可溶性氮含量[23]。解鉀能力菌株篩選參考于發(fā)蓮[24]的方法,將待測菌株接種于解鉀固體培養(yǎng)基平板上,采用四苯硼酸鉀重量法測定活性菌株于相應(yīng)液體培養(yǎng)基發(fā)酵液中的可溶性鉀含量。 產(chǎn)鐵載體菌株篩選參考雷平等[25]的方法。

    以上篩選試驗(yàn)均做4 個重復(fù),定量試驗(yàn)待測菌株接種量為0.1 mL(105~106cfu/mL),培養(yǎng)時間為5 d,以接種無菌PDA 培養(yǎng)基瓊脂塊為空白對照。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    抑菌率(%)=(對照菌落生長直徑-處理菌落生長直徑)/對照菌落生長直徑×100;分離率(%)=分離內(nèi)生真菌數(shù)/組織塊數(shù)×100;分離頻率(%)=樣本中分離到的某種內(nèi)生真菌數(shù)/分離到的總菌株數(shù)×100;多樣性指數(shù)(H′)=-ΣPi×lnPi,其中Pi是指特定部位某種真菌的菌株數(shù)占分離到真菌菌株總數(shù)的比值。

    采用SPSS 17.0 對試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,P<0.05 表示差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 內(nèi)生真菌組織分布

    從植株的345 個組織塊中共分離得到270 株菌株,其中從根、莖、葉中分別分離到87、122、61株內(nèi)生真菌,北柴胡內(nèi)生真菌在莖中的分離率(84.14%)與多樣性指數(shù)(1.31)最高(表1)。

    表1 植株內(nèi)生真菌分離結(jié)果

    結(jié)合形態(tài)學(xué)和顯微特征,270 株菌株共鑒定為17 屬(表2)。 從根中共分離得到10 屬,其中青霉屬(Penicillium)與生赤殼屬(Bionectria)為優(yōu)勢屬,分離頻率分別為9.26%和8.88%;莖中內(nèi)生真菌共12 屬,鏈格孢屬(Alternaria)和曲霉屬(Aspergillus)為優(yōu)勢屬,分離頻率分別為10.37%和10.00%,而根中并未分離得到這兩屬內(nèi)生真菌。葉中共分離到8 屬內(nèi)生真菌,青霉屬(Penicillium)和生赤殼屬(Bionectria)為優(yōu)勢屬,分離頻率分別為8.88%和5.92%。 內(nèi)生真菌與北柴胡組織器官長期共存,共同進(jìn)化形成一種穩(wěn)定的共生關(guān)系,內(nèi)生真菌根、莖、葉分布具有明顯的組織特異性與一定的相似性。

    表2 根、莖、葉內(nèi)生真菌屬組成

    2.2 抑菌活性菌株篩選

    2.2.1 初篩選結(jié)果 結(jié)合北柴胡內(nèi)生真菌形態(tài)與顯微特征,挑選出差異較大的54 株代表性菌株進(jìn)行活性篩選。 結(jié)果表明(表3),北柴胡內(nèi)生真菌具有抑菌活性的菌株比例較高,有46%的測試菌株對6 種指示菌中至少一種病原指示菌表現(xiàn)出抑菌活性,BCR-097、BCR-098、BCR-458、BCS-428、BCS-500、BCL-009、BCL-449、BCR-427、BCS-420、BCS-591 對5 種及5 種以上指示菌具有抑菌活性,抑菌譜較廣,其中BCS-428 抑菌活性最高,對3 種細(xì)菌指示菌抑菌圈直徑達(dá)到16 mm 以上,對兩種真菌指示菌抑菌率達(dá)到70%以上。

    表3 北柴胡內(nèi)生真菌抑菌活性篩選結(jié)果

    2.2.2 復(fù)篩選結(jié)果 對初篩試驗(yàn)中具有拮抗作用的菌株進(jìn)行液體發(fā)酵并通過離心取上清液進(jìn)行抑菌活性測試,結(jié)果表明(表4),對金黃色葡萄球菌抑菌活性最強(qiáng)的為BCR-458,對大腸桿菌、銅綠假單胞菌及茄病鐮刀菌抑菌活性最強(qiáng)的為BCS-428,對層生鐮刀菌抑菌活性最強(qiáng)的為BCL-449,對尖孢鐮刀菌抑菌活性最強(qiáng)的為BCR-097。

    表4 內(nèi)生真菌發(fā)酵液抑菌活性

    2.2.3 產(chǎn)真菌細(xì)胞壁降解酶能力測試 對初篩具較高抑菌活性的菌株進(jìn)行產(chǎn)真菌細(xì)胞壁降解酶能力測試,結(jié)果(表5)表明,BCR-097、BCR-098、BCR-458、BCS-420、BCS-500、BCL-009 能夠產(chǎn)生4 種酶,BCR-098 產(chǎn)蛋白酶和幾丁質(zhì)酶能力最強(qiáng),BCS-591 產(chǎn)葡聚糖酶能力最強(qiáng),BCL-449 產(chǎn)纖維素酶能力最強(qiáng)。

    表5 酶解透明圈外徑(mm)

    2.3 促生活性菌株篩選

    2.3.1 內(nèi)生真菌分泌IAA 能力定性與定量分析通過繪制IAA 標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1),得到IAA 分泌量測定公式為y =0.0393x-0.0051(R2=0.9947)和y =0.0224x+0.0960(R2=0.9956)。 本試驗(yàn)結(jié)果表明(表6),在54 株測試菌株中,具有分泌IAA 能力的菌株共有18 株,占總測試北柴胡內(nèi)生菌株的33%,其中11 株合成IAA 為色氨酸途徑,BCS-493 在沒有添加色氨酸和添加色氨酸兩種情況下都發(fā)生了顏色反應(yīng),證明其可通過兩種途徑合成IAA。 在所有測試菌株中BCS-591、BCS-500 IAA分泌量較高,分別為59.55 mg/L 和76.16 mg/L,具有較高的植物促生研究價值。

    圖1 IAA 分泌量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線

    表6 內(nèi)生真菌IAA 分泌定性與定量篩選結(jié)果

    2.3.2 內(nèi)生真菌固氮、溶磷、解鉀、產(chǎn)鐵載體活性菌株篩選 在54 株待測菌株中,共12 株在解鉀固體平板上產(chǎn)生黃色光暈。 對12 株解鉀活性菌株進(jìn)行定量測試,結(jié)果表明(圖2A),測試菌株BCR-513 與BCR-098 菌液所產(chǎn)可溶性鉀含量最高,相比空白培養(yǎng)液,增量分別為26.76 mg/L 和20.90 mg/L。 在BCS-420 與BCS-467 菌液培養(yǎng)過程中,顯微鏡發(fā)現(xiàn)兩菌株菌絲能有效吸附鉀長石礦粉顆粒形成真菌-礦物聚集體,產(chǎn)生動態(tài)溶解-吸收過程[26],當(dāng)菌株吸收量大于溶解量時導(dǎo)致菌液中可溶性鉀含量反而低于空白菌液,這種現(xiàn)象在固氮與溶磷菌株定量測試過程中也被發(fā)現(xiàn)。

    圖2 北柴胡內(nèi)生真菌解鉀(A)、固氮(B)、溶磷(C)、產(chǎn)鐵載體(D)活性測定

    共9 株測試菌株在阿須貝氏(Ashby)培養(yǎng)基上生長并產(chǎn)生暗色圈,顯示出固氮活性,其BCS-467、BCS-500 與BCL-449 在定量測試過程中菌液可溶性氮含量增加量較高,具有較強(qiáng)的固氮活性,其中BCL-449 增量最高,為111.51 mg/L(圖2B)。

    共8 株菌株在無機(jī)磷篩選固體平板和有機(jī)磷篩選固體平板上產(chǎn)生透明圈,BCS-420、BCR-513與BCR-427 在溶解無機(jī)磷活性篩選定量測試中菌液可溶性磷含量增加量較高,具有較強(qiáng)的無機(jī)磷溶解活性,其中BCS-420 較空白培養(yǎng)液增量最大,為55.79 mg/L。 BCR-427、BCR-513、BCS-420、BCL-436 與BCL-449 在溶解有機(jī)磷活性篩選定量測試中菌液可溶性磷含量增量較大,具有較強(qiáng)的有機(jī)磷溶解活性,其中BCR-427 較空白培養(yǎng)液增量最大,為72.18 mg/L(圖2C)。

    共10 株待測真菌在CAS 平板上產(chǎn)生橙黃色光暈即噬鐵圈,其中BCS-420、BCL-009、BCL-499 噬鐵圈直徑較大,分別為23.50、24.88 mm 及24.56 mm,具有較高產(chǎn)鐵載體活性(圖2D)。

    2.4 分子鑒定及系統(tǒng)進(jìn)化分析

    綜合抑菌活性及促生活性篩選結(jié)果,將高活性菌株5.8S rDNA-ITS 擴(kuò)增片段在NCBI 網(wǎng)站GenBank 數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行序列比對,主要功能菌株鑒定結(jié)果如表7 所示,挑選出吻合度超過99%的序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖3)。 活性菌株根據(jù)組群親緣關(guān)系可以將除去Coprinus arachnoideus及Coprinellus xanthothrix剩余的菌株分成3 個種群,自檢支持率分別為30%、81%和54%。

    圖3 基于5.8S rDNA-ITS 序列由鄰近法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹

    表7 主要功能菌株鑒定結(jié)果

    3 討論與結(jié)論

    內(nèi)生真菌一般存在于藥用植物組織和器官中,具有產(chǎn)生植物生長調(diào)節(jié)劑類物質(zhì)、提高宿主植物生理活性和抗逆性等功能,在植物生長發(fā)育中發(fā)揮重要作用[27]。 本研究從大田栽培北柴胡根、莖、葉中分離得到270 株內(nèi)生真菌,青霉屬(Penicillium)與生赤殼屬(Bionectria)為根、葉部內(nèi)生真菌優(yōu)勢屬,鏈格孢屬(Alternaria)和曲霉屬(Aspergillus)為莖部內(nèi)生真菌優(yōu)勢屬,這與野生柴胡內(nèi)生真菌根、莖、葉內(nèi)生真菌分布具有一定的差異性[28]。

    內(nèi)生真菌分布不僅受宿主種類的影響,表現(xiàn)出宿主的特異性和組織的特異性,還受宿主植物生長環(huán)境、生長年限、生長階段等因素的影響[29,30]。 如石斛內(nèi)生真菌豐富度隨石斛生長年限的增加而增加,不同地區(qū)的丹參內(nèi)生真菌群落具有顯著差異[31,32];單葉蔓荊在沿海地區(qū)內(nèi)生真菌腐生菌豐富度較大,這種變化能促進(jìn)宿主在沙子掩埋期間增加營養(yǎng)吸收[33];Martin 等[34]發(fā)現(xiàn)從自然發(fā)生病害的植物系統(tǒng)中更容易發(fā)現(xiàn)有效生防與促生作用菌株;內(nèi)生真菌與宿主植物屬于長期協(xié)同進(jìn)化的共生關(guān)系,當(dāng)宿主植物受到環(huán)境應(yīng)激時,釋放信號類似物可吸引某種微生物。 在制備內(nèi)生真菌分離菌株材料時,可以以目標(biāo)活性為導(dǎo)向選擇或制造特定的應(yīng)激環(huán)境。

    北柴胡栽培生長過程中易感染多種疾病,尤以根腐病最為嚴(yán)重[35]。 研究發(fā)現(xiàn)非致病性的尖孢鐮刀菌是天然真菌拮抗劑,也是潛在的生物防治劑,其釋放的揮發(fā)性物質(zhì)β-Caryophyllene 經(jīng)研究證明具有促進(jìn)植物生長的作用[36,37]。 茄腐鐮刀菌代謝產(chǎn)生的多糖類物質(zhì)是發(fā)揮抑菌性作用的物質(zhì)基礎(chǔ),接種茄腐鐮刀菌的番茄對病原微生物的防御作用明顯增強(qiáng)[38,39],其發(fā)酵產(chǎn)物具有作為生物技術(shù)應(yīng)用的拮抗劑和抗菌劑的潛力。 本研究中BCR-097(茄腐鐮刀菌)表現(xiàn)出較強(qiáng)抑菌活性,BCS-591(尖孢鐮刀菌)則同時表現(xiàn)出較強(qiáng)的IAA分泌活性,這與以上研究存在相同點(diǎn)。

    產(chǎn)生IAA 等植物生長激素和促進(jìn)植物對氮、磷等營養(yǎng)元素的吸收是內(nèi)生真菌促進(jìn)植物生長主要作用方式[40]。 深綠木霉與哈茨木霉已被證明除生防作用外也具有較高促生活性,被廣泛用于生物菌肥的開發(fā)[41],但作為北柴胡內(nèi)生菌,哈茨木霉與深綠木霉與北柴胡之間的作用機(jī)制仍值得進(jìn)一步探索。 本研究中BCS-500(草酸青霉)、BCR-513(嗜松籃狀菌)、BCR-098(輻毛小鬼傘菌)等表現(xiàn)出較強(qiáng)的促生活性。 有研究證明草酸青霉可顯著提高水稻的抗旱能力[42]。 嗜松籃狀菌具有產(chǎn)生β-葡聚糖酶、幾丁質(zhì)酶、鐵載體及吲哚乙酸等活性,是近年來除木霉屬真菌可用作生物增強(qiáng)劑的新型真菌[43]。 研究證明Coprinellus radians可有效降解鄰苯二甲酸二丁酯及鄰苯二甲酸二辛酯,可對污染土壤進(jìn)行修復(fù)[44]。 綜上,開發(fā)本研究中內(nèi)生真菌用于北柴胡生物菌肥具有巨大潛力。

    目前植物內(nèi)生真菌用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)仍面臨諸多挑戰(zhàn),主要表現(xiàn)在微生物接種劑持久性短、適用面窄、波動性大等,而栽培管理措施、土壤條件、本土微生物菌落的拮抗作用都會對微生物接種劑效果產(chǎn)生影響[45]。 下一步應(yīng)加強(qiáng)待開發(fā)菌株宿主相關(guān)昆蟲影響的研究、組合不同優(yōu)良菌株等措施進(jìn)一步提高菌株開發(fā)水平和田間作用效果。

    猜你喜歡
    內(nèi)生柴胡真菌
    核桃柴胡間作技術(shù)
    河北果樹(2020年4期)2020-11-26 06:05:18
    高等大型真菌與人類
    科學(xué)(2020年2期)2020-08-24 07:56:56
    植物內(nèi)生菌在植物病害中的生物防治
    內(nèi)生微生物和其在作物管理中的潛在應(yīng)用
    “黨建+”激活鄉(xiāng)村發(fā)展內(nèi)生動力
    HPLC法同時測定柴胡桂枝湯中6種成分
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:02
    授人以漁 激活脫貧內(nèi)生動力
    真菌造房子
    10 種中藥制劑中柴胡的定量測定
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    柴胡治療豬感冒癥的臨床觀察
    亚洲图色成人| 亚洲怡红院男人天堂| 国产成年人精品一区二区| 一级二级三级毛片免费看| 嫩草影院入口| 欧美成人精品欧美一级黄| 真实男女啪啪啪动态图| 老司机影院毛片| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲最大成人手机在线| 丝袜喷水一区| 99精国产麻豆久久婷婷| 免费av毛片视频| 一级毛片久久久久久久久女| a级毛色黄片| 国产日韩欧美在线精品| 一个人看的www免费观看视频| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲欧洲国产日韩| 欧美zozozo另类| 亚洲精品成人av观看孕妇| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 日韩欧美一区视频在线观看 | 久久久久性生活片| 久热这里只有精品99| 成人亚洲精品一区在线观看 | 日本午夜av视频| 九色成人免费人妻av| 好男人视频免费观看在线| 热re99久久精品国产66热6| 涩涩av久久男人的天堂| 久久久久国产网址| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 伦理电影大哥的女人| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲最大成人av| 大香蕉97超碰在线| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产免费福利视频在线观看| 精品午夜福利在线看| 国产精品久久久久久av不卡| 九九爱精品视频在线观看| 国产毛片在线视频| 国产精品成人在线| 深爱激情五月婷婷| 热re99久久精品国产66热6| 波多野结衣巨乳人妻| 成年版毛片免费区| 黄色日韩在线| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产黄a三级三级三级人| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产精品蜜桃在线观看| 岛国毛片在线播放| 久久久久精品久久久久真实原创| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲在久久综合| 久久99精品国语久久久| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 成人欧美大片| 久久精品人妻少妇| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 麻豆成人午夜福利视频| 另类亚洲欧美激情| av在线观看视频网站免费| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产在视频线精品| 在线观看一区二区三区激情| av在线蜜桃| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 六月丁香七月| 国产综合懂色| 欧美三级亚洲精品| 啦啦啦在线观看免费高清www| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 色网站视频免费| 在线观看一区二区三区| 好男人视频免费观看在线| 男人爽女人下面视频在线观看| 简卡轻食公司| 熟女人妻精品中文字幕| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产美女午夜福利| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 精品一区二区三卡| 22中文网久久字幕| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久精品国产亚洲网站| 麻豆成人av视频| 精品人妻视频免费看| 国产精品女同一区二区软件| 中文字幕亚洲精品专区| 国产欧美亚洲国产| 亚洲国产av新网站| 在现免费观看毛片| 美女被艹到高潮喷水动态| 两个人的视频大全免费| 我要看日韩黄色一级片| 国产精品蜜桃在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看 | 亚洲国产av新网站| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产成年人精品一区二区| 亚洲四区av| 青春草视频在线免费观看| 高清午夜精品一区二区三区| 亚洲av免费在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 一级爰片在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| av国产精品久久久久影院| 直男gayav资源| 最近中文字幕2019免费版| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲四区av| 日韩欧美一区视频在线观看 | 交换朋友夫妻互换小说| av在线天堂中文字幕| av线在线观看网站| 成人毛片60女人毛片免费| 欧美国产精品一级二级三级 | 亚洲国产色片| 日韩国内少妇激情av| 少妇被粗大猛烈的视频| 热99国产精品久久久久久7| 成年女人在线观看亚洲视频 | 直男gayav资源| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 成人二区视频| 国内精品美女久久久久久| 97在线视频观看| 亚洲精品第二区| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲精品色激情综合| 久久久久精品性色| 亚洲色图av天堂| 亚洲精品乱久久久久久| 精品一区二区三区视频在线| 麻豆成人av视频| 少妇人妻 视频| 婷婷色综合www| 男人添女人高潮全过程视频| 日日啪夜夜撸| 97热精品久久久久久| 国产成人精品一,二区| 男的添女的下面高潮视频| 国产精品女同一区二区软件| 国产高清三级在线| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲精品国产成人久久av| 成人二区视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 激情 狠狠 欧美| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 精品国产三级普通话版| 波多野结衣巨乳人妻| 九草在线视频观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 嫩草影院入口| 亚洲精品国产av蜜桃| 插逼视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 黄色视频在线播放观看不卡| 天堂俺去俺来也www色官网| 日韩国内少妇激情av| 免费观看a级毛片全部| 综合色av麻豆| 免费黄网站久久成人精品| 五月开心婷婷网| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 麻豆乱淫一区二区| 日韩欧美一区视频在线观看 | 国产一区有黄有色的免费视频| 国产探花在线观看一区二区| 黄色欧美视频在线观看| 18+在线观看网站| 欧美激情国产日韩精品一区| 成人毛片a级毛片在线播放| 精品少妇黑人巨大在线播放| 色综合色国产| av网站免费在线观看视频| 国产精品偷伦视频观看了| 少妇被粗大猛烈的视频| 日韩三级伦理在线观看| 大片电影免费在线观看免费| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 麻豆成人午夜福利视频| 51国产日韩欧美| 99热这里只有精品一区| 联通29元200g的流量卡| 大香蕉久久网| 久久精品人妻少妇| 国产极品天堂在线| 一区二区av电影网| 丰满少妇做爰视频| 国产爽快片一区二区三区| 看免费成人av毛片| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 色视频在线一区二区三区| 国产淫片久久久久久久久| 国产成人精品一,二区| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 免费av观看视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久ye,这里只有精品| 最近的中文字幕免费完整| 欧美97在线视频| 亚洲天堂av无毛| 午夜免费鲁丝| av黄色大香蕉| 身体一侧抽搐| 久久韩国三级中文字幕| 青春草视频在线免费观看| 在线观看一区二区三区| av女优亚洲男人天堂| 91狼人影院| av免费观看日本| 国产黄片视频在线免费观看| 秋霞伦理黄片| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| videossex国产| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 中文欧美无线码| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产精品三级大全| 天美传媒精品一区二区| 大香蕉97超碰在线| 最近最新中文字幕大全电影3| 黄片无遮挡物在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产成人免费观看mmmm| 国产视频内射| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 嫩草影院新地址| 精品久久久精品久久久| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 精品国产乱码久久久久久小说| 91在线精品国自产拍蜜月| av黄色大香蕉| 身体一侧抽搐| 91久久精品国产一区二区成人| 99久久人妻综合| 日本黄大片高清| 激情五月婷婷亚洲| 色婷婷久久久亚洲欧美| 不卡视频在线观看欧美| 黑人高潮一二区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 精品熟女少妇av免费看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产精品偷伦视频观看了| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 欧美极品一区二区三区四区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 一本久久精品| 免费av观看视频| 欧美日韩在线观看h| 下体分泌物呈黄色| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 日韩一区二区视频免费看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产精品久久久久久av不卡| 免费看光身美女| 久久久久久国产a免费观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 成人毛片a级毛片在线播放| 日本av手机在线免费观看| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 少妇人妻 视频| 欧美丝袜亚洲另类| 黄色配什么色好看| 免费电影在线观看免费观看| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲精品,欧美精品| 97热精品久久久久久| 日韩国内少妇激情av| 午夜激情久久久久久久| 国产乱来视频区| 永久网站在线| 久久久久久久精品精品| 可以在线观看毛片的网站| 久久国产乱子免费精品| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲av男天堂| 国产黄色视频一区二区在线观看| 最近中文字幕2019免费版| 欧美少妇被猛烈插入视频| 成年av动漫网址| 边亲边吃奶的免费视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲最大成人中文| 精品久久久久久久久av| 晚上一个人看的免费电影| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产综合懂色| 最近中文字幕2019免费版| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 久久精品人妻少妇| 大香蕉97超碰在线| 最近中文字幕2019免费版| 久久影院123| 亚洲不卡免费看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 色视频在线一区二区三区| 亚洲天堂国产精品一区在线| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲综合精品二区| 可以在线观看毛片的网站| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产精品.久久久| 天美传媒精品一区二区| 国产在线男女| 国产成人91sexporn| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产免费一级a男人的天堂| 久久6这里有精品| 日日啪夜夜爽| 免费av毛片视频| 色视频www国产| 高清午夜精品一区二区三区| 国产av国产精品国产| 免费看光身美女| 亚洲欧洲日产国产| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产亚洲av嫩草精品影院| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 久久久久久九九精品二区国产| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 观看免费一级毛片| 国产精品无大码| 久久久久九九精品影院| 男女无遮挡免费网站观看| 99热网站在线观看| 51国产日韩欧美| 免费av不卡在线播放| 九色成人免费人妻av| 亚洲av不卡在线观看| av国产免费在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 大香蕉久久网| 欧美国产精品一级二级三级 | 一区二区三区四区激情视频| 三级国产精品片| 色网站视频免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产成人精品一,二区| 亚洲精品乱久久久久久| a级毛色黄片| 熟女电影av网| av一本久久久久| 亚洲av不卡在线观看| 日韩中字成人| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 国产黄片美女视频| 舔av片在线| 国产成人午夜福利电影在线观看| 一级片'在线观看视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲欧美清纯卡通| 在线精品无人区一区二区三 | 中文字幕av成人在线电影| 亚洲,一卡二卡三卡| 特大巨黑吊av在线直播| 久久久午夜欧美精品| 美女cb高潮喷水在线观看| h日本视频在线播放| 偷拍熟女少妇极品色| 成年女人在线观看亚洲视频 | 99热这里只有是精品50| 日韩欧美精品v在线| 成年人午夜在线观看视频| 黄色一级大片看看| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲国产精品专区欧美| 国产精品伦人一区二区| 男女边摸边吃奶| 精品久久久久久久末码| 高清视频免费观看一区二区| 深爱激情五月婷婷| 另类亚洲欧美激情| 夫妻午夜视频| 国产免费又黄又爽又色| 久久久成人免费电影| 欧美3d第一页| 在线观看av片永久免费下载| 久久精品久久精品一区二区三区| 精品酒店卫生间| 久久久精品94久久精品| 日韩电影二区| 免费电影在线观看免费观看| 天堂网av新在线| 精品一区二区免费观看| 久热久热在线精品观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产视频内射| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 成年人午夜在线观看视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲高清免费不卡视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产男人的电影天堂91| 亚洲欧美清纯卡通| 国产综合懂色| 日韩电影二区| 中文资源天堂在线| 国产精品国产av在线观看| 色5月婷婷丁香| 伊人久久国产一区二区| 亚洲国产日韩一区二区| 免费高清在线观看视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 亚洲内射少妇av| 在线 av 中文字幕| 国产91av在线免费观看| 少妇高潮的动态图| 中文欧美无线码| 久久ye,这里只有精品| 国模一区二区三区四区视频| 国产精品三级大全| 国产免费又黄又爽又色| 成人一区二区视频在线观看| 国产成人一区二区在线| kizo精华| 亚洲国产日韩一区二区| 欧美日韩综合久久久久久| 日本免费在线观看一区| 国产精品成人在线| 午夜免费鲁丝| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲国产精品成人综合色| 久久久久久久国产电影| 久久久欧美国产精品| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 777米奇影视久久| 久久人人爽人人片av| 日本黄大片高清| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美xxⅹ黑人| 男人和女人高潮做爰伦理| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲国产日韩一区二区| 天美传媒精品一区二区| 久久鲁丝午夜福利片| 久久久久久久午夜电影| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美精品国产亚洲| 成人综合一区亚洲| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 韩国高清视频一区二区三区| 国产精品成人在线| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲国产精品成人久久小说| 麻豆久久精品国产亚洲av| 在现免费观看毛片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久久精品94久久精品| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| kizo精华| 在线观看国产h片| 麻豆成人av视频| 午夜亚洲福利在线播放| 可以在线观看毛片的网站| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 91久久精品国产一区二区三区| 看免费成人av毛片| 国精品久久久久久国模美| 黄色配什么色好看| 禁无遮挡网站| 免费观看av网站的网址| 简卡轻食公司| 制服丝袜香蕉在线| 久久精品久久久久久久性| 免费看a级黄色片| 久久人人爽人人片av| 日韩中字成人| 别揉我奶头 嗯啊视频| 日韩精品有码人妻一区| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久久国产一区二区| 精品一区二区三卡| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 好男人在线观看高清免费视频| 亚洲三级黄色毛片| 交换朋友夫妻互换小说| 午夜免费鲁丝| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲精品,欧美精品| 久久综合国产亚洲精品| 色视频www国产| 老司机影院毛片| 一级片'在线观看视频| 99热全是精品| 波野结衣二区三区在线| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲美女搞黄在线观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 别揉我奶头 嗯啊视频| 久久久久久九九精品二区国产| 欧美激情在线99| av专区在线播放| 精品人妻视频免费看| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 免费观看a级毛片全部| 日韩亚洲欧美综合| 免费看光身美女| 亚洲欧洲日产国产| 中文字幕亚洲精品专区| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 一级a做视频免费观看| 嘟嘟电影网在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 久久久久久久精品精品| 99久久人妻综合| 精品国产露脸久久av麻豆| 青青草视频在线视频观看| 欧美97在线视频| av国产免费在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 一个人看的www免费观看视频| 国产成人91sexporn| 下体分泌物呈黄色| 成年女人在线观看亚洲视频 | 久久久久精品久久久久真实原创| 日本一二三区视频观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| av免费在线看不卡| 黄片无遮挡物在线观看| 国产视频首页在线观看| 亚洲图色成人| 国产成人精品久久久久久| 亚洲国产精品专区欧美| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 97在线视频观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产免费一级a男人的天堂| 69人妻影院| 人人妻人人看人人澡| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 亚洲人成网站在线播| 中文字幕av成人在线电影| 卡戴珊不雅视频在线播放| 午夜免费男女啪啪视频观看| 日本色播在线视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 精品一区二区三卡| 大话2 男鬼变身卡| 国产男女内射视频| 国产精品蜜桃在线观看| 色综合色国产| 亚洲自偷自拍三级| 成年人午夜在线观看视频| 国产成人一区二区在线| 激情五月婷婷亚洲| 日韩视频在线欧美| 亚洲综合色惰| 国产乱人偷精品视频| 日韩欧美精品v在线| 精品人妻熟女av久视频| 两个人的视频大全免费| av在线播放精品| 不卡视频在线观看欧美| 精品一区在线观看国产| a级一级毛片免费在线观看| av免费在线看不卡| 久久久久久久国产电影| 熟女电影av网| 久久久国产一区二区| 内地一区二区视频在线| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 久久久久国产精品人妻一区二区| 免费观看av网站的网址| 超碰av人人做人人爽久久| 精品一区二区三卡| xxx大片免费视频|