纖維膠凝蛋白與冠狀動(dòng)脈狹窄程度相關(guān)性及其對(duì)預(yù)后的影響

劉首宏，張永全，王俏

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┰缙谂R床癥狀不明顯，嚴(yán)重時(shí)可致患者休克甚至死亡［1］。及時(shí)診斷冠心病并評(píng)估冠狀動(dòng)脈狹窄程度，預(yù)測(cè)主要不良心臟事件（major adverse cardiac events，MACEs）發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有助于精準(zhǔn)治療方案的制定和預(yù)后干預(yù)。冠狀動(dòng)脈造影（coronary angiography，CAG）檢查是評(píng)估冠狀動(dòng)脈狹窄的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但該檢查屬有創(chuàng)性且費(fèi)用高。血液標(biāo)志物的獲取具有簡(jiǎn)便、快捷、無創(chuàng)等優(yōu)點(diǎn)，故尋找敏感度高、特異度好的指標(biāo)以輔助判斷冠心病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度及預(yù)后預(yù)測(cè)具有潛在價(jià)值。炎癥反應(yīng)貫穿冠心病始終，長(zhǎng)期炎癥浸潤(rùn)血管壁可導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷，進(jìn)而引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化［2-3］。研究顯示，補(bǔ)體系統(tǒng)中的C4a、C5a為中性粒細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞的趨化因子，可趨化和激活這些吞噬細(xì)胞聚集到炎癥部位，誘發(fā)炎癥反應(yīng)并促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成［4］。纖維凝膠蛋白（Ficolin）是人血清補(bǔ)體凝集素，可識(shí)別并結(jié)合病原微生物表面的病原相關(guān)模式分子（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs），通過激活補(bǔ)體系統(tǒng)的凝集素途徑吞噬和溶解病原體，進(jìn)而介導(dǎo)天然免疫應(yīng)答過程［5-6］。Ficolin-2、Ficolin-3 是Ficolin 家族關(guān)鍵因子，與PAMPs特異性結(jié)合后通過凝集素途徑激活并活化補(bǔ)體，啟動(dòng)免疫學(xué)效應(yīng)而參與肺結(jié)核［7］、非酒精性脂肪肝［8］等疾病的發(fā)生、發(fā)展過程。本研究旨在探討Ficolin-2、Ficolin-3 與冠心病冠狀動(dòng)脈狹窄程度的關(guān)系及對(duì)MACEs的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月—2021年12月大連大學(xué)附屬新華醫(yī)院收治的137例穩(wěn)定期冠心病患者（冠心病組）137例，男75例，女62 例，年齡57～73 歲，平均（63.52±8.19）歲，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）21～26 kg/m2，平均（22.38±1.56）kg/m2；符合穩(wěn)定型冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)［9］。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18 歲；能完成血清Ficolin-2、Ficolin-3 檢測(cè)；隨訪配合度較好且重要臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期及哺乳期；伴肝、腎功能嚴(yán)重?fù)p傷；合并甲狀腺疾病或者結(jié)締組織病變者；伴急、慢性炎癥反應(yīng)性疾??；伴自身免疫性疾??；合并其他心臟疾病患者；需要行急診冠狀動(dòng)脈支架植入術(shù)者；凝血功能障礙者；對(duì)對(duì)比劑或碘過敏者；惡性腫瘤及精神疾病者。

選取同期性別、年齡與冠心病患者相近的健康體檢者60例為對(duì)照組，男33 例，女27 例，年齡53～76 歲，平均（61.30±8.75）歲，BMI 22～26 kg/m2，平均（22.13±2.02）kg/m2。對(duì)照組經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查證實(shí)無心臟疾病，近期內(nèi)也無其他急慢性疾病史和外傷史，未服用任何藥物。2組性別（χ2=0.001）、年齡（t=1.172）及BMI（t=0.945）比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），具有可比性。患者及家屬均在知情同意書上簽字，本研究得到醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)（201811004）。

1.2 冠脈狹窄程度積分法（Gensini）評(píng)估冠狀動(dòng)脈狹窄程度

參照文獻(xiàn)［10］，Gensini評(píng)分總分165分，評(píng)分越高，冠狀動(dòng)脈狹窄程度越嚴(yán)重。根據(jù)Gensini 評(píng)分，將冠心病患者分為輕度組（0～20分）56例、中度組（21～60分）49例和重度組（≥61分）32例。

1.3 臨床資料收集

收集患者冠心病病程、吸煙史（吸煙＞1 支/d，且超過1年）、飲酒史（＞1次/周，且連續(xù)或累積時(shí)間＞6個(gè)月）、心血管病家族史、糖尿病史，冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)。入院時(shí)的實(shí)驗(yàn)室生化指標(biāo)水平包括空腹血糖（FBG）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。FBG采用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)，TG、TC、HDL-C、LDL-C 采用AU5800 全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)貝克曼庫爾特公司）檢測(cè)。

1.4 血清Ficolin-2、Ficolin-3檢測(cè)

收集各組入院次日清晨空腹肘正中靜脈血4 mL，室溫下于含EDTA抗凝試管中靜置1 h，3 000 r/min離心10 min，離心半徑12 cm，留取血清置于-70 ℃冰箱中保存，留待檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清Ficolin-2、Ficolin-3 水平，試劑盒購自于武漢菲恩生物科技有限公司，檢測(cè)儀器為Bio-Rad 680酶標(biāo)儀。操作過程嚴(yán)格按照試劑盒上說明進(jìn)行。

1.5 隨訪

冠心病患者出院后均隨訪3個(gè)月，隨訪方式為門診隨訪，隨訪終點(diǎn)為MACEs，包括靶血管再次血運(yùn)重建、非致死性心肌梗死、心源性死亡。未發(fā)生MACEs 者為預(yù)后良好組（108例），反之為預(yù)后不良組（29例）。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SAS 9.4軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，多組比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用Dunnett-t檢驗(yàn)，2組比較采用2獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)，影響因素分析采用Logistic回歸，繪制受試者工作特征（ROC）曲線，并計(jì)算曲線下面積（AUC）評(píng)估血清Ficolin-2、Ficolin-3對(duì)預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值，采用Z檢驗(yàn)對(duì)各指標(biāo)間的效能進(jìn)行比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 冠心病組與對(duì)照組血清Ficolin-2、Ficolin-3 水平比較

冠心病組血清Ficolin-2、Ficolin-3 水平低于對(duì)照組（P＜0.01），見表1。

Tab.1 Comparison of serum Ficolin-2 and Ficolin-3 levels between the coronary heart disease group and the control group表1 冠心病組與對(duì)照組血清Ficolin-2、Ficolin-3水平比較（mg/L，±s）

Tab.1 Comparison of serum Ficolin-2 and Ficolin-3 levels between the coronary heart disease group and the control group表1 冠心病組與對(duì)照組血清Ficolin-2、Ficolin-3水平比較（mg/L，±s）

＊＊P＜0.01。

組別對(duì)照組冠心病組t n 60 137 Ficolin-2 15.39±3.17 8.76±2.52 9.062＊＊Ficolin-3 22.64±4.83 13.09±4.11 14.219＊＊

2.2 不同冠脈狹窄嚴(yán)重程度冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3水平比較

輕、中、重度組血清Ficolin-2、Ficolin-3 水平依次降低（P＜0.05），見表2。

Tab.2 Comparison of serum Ficolin-2 and Ficolin-3 levels between coronary artery disease patients with different severity of coronary artery stenosis表2 不同冠脈狹窄嚴(yán)重程度冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3水平比較（mg/L，±s）

Tab.2 Comparison of serum Ficolin-2 and Ficolin-3 levels between coronary artery disease patients with different severity of coronary artery stenosis表2 不同冠脈狹窄嚴(yán)重程度冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3水平比較（mg/L，±s）

＊＊P＜0.01；a與輕度組比較，b與中度組比較，均P＜0.05。

組別輕度組中度組重度組F n 56 49 32 Ficolin-2 10.25±1.98 8.37±2.05a 6.80±1.53ab 34.832＊＊Ficolin-3 15.61±2.78 12.59±2.34a 10.46±2.80ab 41.853＊＊

2.3 冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3與Gensini評(píng)分的關(guān)系

冠心病組Gensini 評(píng)分為（42.70±8.41）分，冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3 與Gensini 評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（r分別為-0.708和-0.722，P＜0.05）。

2.4 預(yù)后良好組和預(yù)后不良組一般資料比較

出院后3 個(gè)月內(nèi)9 例患者需要靶血管再次血運(yùn)重建，19 例出現(xiàn)非致死性心肌梗死，1 例心源性死亡。與預(yù)后不良組比較，預(yù)后良好組冠狀動(dòng)脈單支病變構(gòu)成比，血清Ficolin-2、Ficolin-3水平較高（P＜0.05），其他指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

Tab.3 Comparison of clinical data of patients with coronary heart disease between the good prognosis group and the poor prognosis group表3 預(yù)后良好組和預(yù)后不良組冠心病患者臨床資料比較

2.5 冠心病患者預(yù)后不良影響因素分析

以冠心病患者是否發(fā)生預(yù)后不良為因變量（是=1，否=0），冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)（單支＝0，多支＝1）、Ficolin-2、Ficolin-3 為自變量，多因素Logistic 回歸結(jié)果顯示，冠狀動(dòng)脈多支病變是冠心病患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素，較高水平Ficolin-2、Ficolin-3是其保護(hù)因素，見表4。

Tab.4 Multivariate Logistic regression analysis of poor prognosis in patients with coronary heart disease表4 冠心病患者預(yù)后不良的多因素Logistic回歸分析

2.6 血清Ficolin-2、Ficolin-3 對(duì)冠心病患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值

Ficolin-2、Ficolin-3 對(duì)冠心病患者預(yù)后聯(lián)合檢測(cè)方程為logit（Y）=-8.759+0.372×（冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)）-0.205×（Ficolin-2）-1.759×（Ficolin-3），指標(biāo)聯(lián)合的AUC 高于單一指標(biāo)（Z分別為3.186 和2.953，P＜0.05），見圖1、表5。

Fig.1 ROC curves of serum Ficolin-2 and Ficolin-3 in predicting poor prognosis in patients with coronary heart disease圖1 血清Ficolin-2、Ficolin-3預(yù)測(cè)冠心病患者預(yù)后不良的ROC曲線

Tab.5 The predictive value of serum Ficolin-2 and Ficolin-3 on poor prognosis of patients with coronary heart disease表5 血清Ficolin-2、Ficolin-3對(duì)冠心病患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是冠心病發(fā)病的基礎(chǔ)，動(dòng)脈粥樣硬化引起血管狹窄甚至堵塞導(dǎo)致血供不足，使心臟功能下降而出現(xiàn)各種臨床癥狀［11-13］。補(bǔ)體是人體固有的免疫組成部分，生理狀態(tài)下以無活性的酶前體形式存在，炎癥反應(yīng)可以誘發(fā)補(bǔ)體生成，而補(bǔ)體系統(tǒng)激活產(chǎn)生的C3a 和C5a 等具有活性的片段可以趨化平滑肌收縮，引起并加重炎癥反應(yīng)，損傷組織而誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化［14］。因此，補(bǔ)體系統(tǒng)激活介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化具有促進(jìn)作用［15］。Ficolin編碼基因在人第9 號(hào)染色體上，含8 個(gè)外顯子，F(xiàn)icolin主要在肝臟內(nèi)合成，并在人體內(nèi)廣泛分布，其結(jié)構(gòu)與甘露聚糖結(jié)合凝集素類似。Ficolin與乙酰葡萄糖以及細(xì)菌、病毒等病原體結(jié)合后，通過激活補(bǔ)體的凝聚素途徑介導(dǎo)人體感染早期的免疫過程，同時(shí)，F(xiàn)icolin 與病原體表面PAMPs 特異性結(jié)合后可激活甘露糖結(jié)合凝集素相關(guān)的絲氨酸蛋白酶，使其裂解為補(bǔ)體而參與吞噬和清除病原體［16-17］。目前發(fā)現(xiàn)的3 類Ficolin 包括Ficolin-1、Ficolin-2 和Ficolin-3，其中Ficolin-2 在3 種亞型中最先最被克隆，是由三鏈亞單位組成的寡聚體，每一條肽鏈的相對(duì)分子量為35 000，結(jié)構(gòu)與甘露糖結(jié)合凝集素相似。在感染早期，炎癥反應(yīng)促進(jìn)炎性細(xì)胞因子釋放，刺激肝細(xì)胞大量合成和分泌Ficolin-2，并與其配體PAMPs 特異性結(jié)合后激活甘露糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶，使之活化為具有水解補(bǔ)體活性的酶，進(jìn)而裂解C4和C2 形成C3 轉(zhuǎn)化酶（C4b2b）并啟動(dòng)抗感染機(jī)制［18］。然而，補(bǔ)體系統(tǒng)過度激活會(huì)抑制Ficolin-2的表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致炎癥反應(yīng)。研究顯示，F(xiàn)icolin-2 表達(dá)降低通過下調(diào)機(jī)體細(xì)胞免疫功能，從而加速結(jié)核分枝桿菌的致病進(jìn)程［7］。Ficolin-3 是由FCN3 基因編碼的寡聚糖，在識(shí)別糖類以及調(diào)理吞噬等過程中發(fā)揮重要功能，并通過介導(dǎo)補(bǔ)體系統(tǒng)的凝集素途徑啟動(dòng)并增強(qiáng)炎癥反應(yīng)［19］。賈耀輝等［20］研究表明，F(xiàn)icolin-3 表達(dá)下調(diào)加快了腦損傷患者的炎癥過程，其表達(dá)水平與病情嚴(yán)重程度及預(yù)后關(guān)系密切。Troldborg等［21］發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)icolin-3 低水平表達(dá)可以激活補(bǔ)體系統(tǒng)并使其異?；钴S，進(jìn)而增加2 型糖尿病患者頸動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。本研究發(fā)現(xiàn)，冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3 水平較健康體檢者明顯降低，提示該指標(biāo)參與了冠心病的發(fā)病過程。炎癥反應(yīng)初期，肝臟合成并釋放Ficolin-2、Ficolin-3 激活補(bǔ)體凝集素途徑發(fā)揮天然免疫功能，但是隨著炎癥的不斷增強(qiáng)，F(xiàn)icolin-2、Ficolin-3過度消耗，同時(shí)炎癥過度激活補(bǔ)體系統(tǒng)會(huì)加速動(dòng)脈粥樣硬化形成［19，22］。本研究進(jìn)一步分析顯示，冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3水平與Gensini評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，表明該指標(biāo)可以評(píng)估冠心病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度，從而為臨床制定針對(duì)性治療方案提供參考。

冠心病患者出院后易出現(xiàn)MACEs，嚴(yán)重影響患者預(yù)后，如能早期預(yù)測(cè)患者預(yù)后不良，對(duì)臨床實(shí)施干預(yù)措施具有重要價(jià)值。本研究發(fā)現(xiàn)，預(yù)后不良患者血清Ficolin-2、Ficolin-3水平低于預(yù)后良好組，多因素Logistic 回歸結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ficolin-2、Ficolin-3 升高是冠心病患者預(yù)后不良的保護(hù)因素。ROC曲線結(jié)果顯示，血清Ficolin-2、Ficolin-3可預(yù)測(cè)冠心病患者預(yù)后不良發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，而聯(lián)合檢測(cè)對(duì)預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值尤其是敏感度明顯提高。

綜上所述，冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3水平降低，并與冠狀動(dòng)脈狹窄程度密切相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)兩指標(biāo)對(duì)冠心病患者預(yù)后不良具有較好的預(yù)測(cè)價(jià)值。本研究為單中心的小樣本研究，所得結(jié)果有待通過多中心、前瞻性隊(duì)列研究進(jìn)一步證實(shí)。