血清ANGPTL2、AMH、HSP70檢測在多囊卵巢綜合征患者妊娠情況預(yù)測中的應(yīng)用探究

劉滿

（商丘市長征人民醫(yī)院，河南 商丘 476000）

多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome,PCOS）是由內(nèi)分泌功能異常所致分泌代謝性疾病，月經(jīng)異常者發(fā)生率約為70%～80%，其中75%患者因排卵障礙導(dǎo)致不孕，臨床表現(xiàn)主要為閉經(jīng)、無排卵等［1］。血管生成素樣蛋白2（angiopoietin-like protein 2,ANGPTL2）屬于分泌型因子，可參與血管生成、糖脂代謝等生物學(xué)過程，并可調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞功能，促進(jìn)血管收縮痙攣，增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附能力，促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移［2］?？箍娎展芗に兀ˋMH）是由卵巢小濾泡顆粒層細(xì)胞分泌，可抑制卵泡活性，并可反映PCOS 患者卵巢儲備功能，其水平可反映早期卵泡數(shù)量，可影響卵泡周期募集［3］。熱激蛋白70（HSP70）可修復(fù)易化變性蛋白，促進(jìn)多肽鍵生理折疊或延伸，可參與免疫、細(xì)胞凋亡等生物學(xué)過程，研究表明HSP70 可介導(dǎo)炎性因子釋放，其水平升高可參與PCOS 發(fā)生過程［4］。但關(guān)于血清ANGPTL2、AMH、HSP70 與PCOS 患者妊娠結(jié)局是否有關(guān)尚未見報(bào)道，基于此，本研究分析不同妊娠情況患者血清中各指標(biāo)水平變化，及其對妊娠結(jié)局的預(yù)測價值，旨在為臨床治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021 年5 月至2022 年10 月商丘市長征人民醫(yī)院收治的65 例PCOS 患者為研究對象，根據(jù)治療3 個月經(jīng)周期后是否妊娠分為妊娠組22例、未妊娠組43 例。妊娠組年齡25～35 歲，平均（32.08±0.85）歲；身高 158～170 cm，平均（165.21±1.55）cm；體質(zhì)量指數(shù)18～26 kg/m2，平均（24.03±0.63）kg/m2。未妊娠組年齡25～36 歲，平均（32.10±0.86）歲；身高160～171 cm，平均（165.31±1.56）cm；體質(zhì)量指數(shù)19～27 kg/m2，平均（24.09±0.66）kg/m2。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者及其家屬知情且簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合PCOS 診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；近期未接受激素類治療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：庫欣綜合征等高雄激素疾病；合并子宮腺肌癥等激素依賴性疾??；青春期前、絕經(jīng)期后女性；合并免疫系統(tǒng)疾病者；合并甲亢等內(nèi)分泌疾病者。

1.3 方法

①促排卵方案：月經(jīng)周期/黃體酮撤退性出血第5 d 開始口服克羅米芬（CC）（上海衡山藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H31021107，規(guī)格：50 mg），50 mg/次，持續(xù)治療5 d，B 超檢測主導(dǎo)卵泡直徑達(dá)到18～20 mm，或兩個卵泡最大直徑為16 mm，皮下注射250 μg 重組人絨毛膜促性腺激素（默克雪蘭諾有限公司，國藥準(zhǔn)字S20130091，規(guī)格：250 μg/支），48 h 后使用B 超檢查確認(rèn)其是否排卵，連續(xù)治療3 個月經(jīng)周期，排卵35 d 后行B 超檢查確診宮內(nèi)孕囊即為臨床妊娠。②分別于入組時、治療2 個月經(jīng)周期后采集兩組空腹外周靜脈血5 mL，以3 000 r/min 離心10 min 取上清液待測。③采用指酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測血清ANGPTL2（上海信裕生物）、AMH（美國貝克曼庫爾特）、HSP70（上海晶抗生物）水平。④采用免疫化學(xué)發(fā)光法檢測內(nèi)分泌代謝指標(biāo)：卵泡刺激素（FSH）、黃體生成素（LH）、泌乳素（PRL）、睪酮（T）、孕酮（P）、雌二醇（E2），北京科瑞美科技有限公司提供檢測試劑盒。

1.4 觀察指標(biāo)

①分析兩組入組時、治療2 個月經(jīng)周期后血清ANGPTL2、AMH、HSP70 水平，及其與內(nèi)分泌代謝指標(biāo)相關(guān)性。②分析血清各指標(biāo)對妊娠結(jié)局的預(yù)測價值，及不同表達(dá)患者未妊娠的危險(xiǎn)度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 24.0 處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；Pearson 法分析血清各指標(biāo)與內(nèi)分泌代謝指標(biāo)相關(guān)性；采用受試者工作特征曲線（ROC）分析血清各指標(biāo)對妊娠情況的預(yù)測價值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清ANGPTL2、AMH、HSP70 水平比較

入組時兩組血清ANGPTL2、AMH、HSP70 水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與入組時比較，治療2 個月經(jīng)周期后兩組血清ANGPTL2、AMH、HSP70 水平降低，且妊娠組低于未妊娠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組血清ANGPTL2、AMH、HSP70 水平比較 （）

表1 兩組血清ANGPTL2、AMH、HSP70 水平比較 （）

注：?與同組入組時比較，P＜0.05。

2.2 兩組內(nèi)分泌代謝指標(biāo)比較

入組時兩組內(nèi)分泌代謝指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與入組時比較，治療2 個月經(jīng)周期后妊娠組FSH、LH、PRL、T、P、E2 水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），未妊娠組PRL、T 水平降低，且妊娠組低于未妊娠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組內(nèi)分泌代謝指標(biāo)比較 （）

表2 兩組內(nèi)分泌代謝指標(biāo)比較 （）

注：?與同組入組時比較，P＜0.05。

2.3 血清各指標(biāo)與內(nèi)分泌代謝指標(biāo)相關(guān)性分析

ANGPTL2 與LH、PRL、T、P 呈正相關(guān)，AMH 與PRL、T、P、E2 呈正相關(guān)，HSP70 與FSH、T、P、E2 呈正相關(guān)（P＜0.05），見表3。

表3 血清各指標(biāo)與內(nèi)分泌代謝指標(biāo)相關(guān)性分析

2.4 ROC 分析血清各指標(biāo)對PCOS 患者妊娠情況的預(yù)測價值

以未妊娠組43 例為陽性樣本，妊娠組22 例為陰性樣本，繪制ROC 曲線，結(jié)果顯示。聯(lián)合預(yù)測PCOS 患者妊娠情況的曲線下面積（AUC）大于單項(xiàng)預(yù)測，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

表4 ROC 分析血清各指標(biāo)對PCOS 患者妊娠情況的預(yù)測價值

2.5 血清各指標(biāo)不同表達(dá)患者未妊娠發(fā)生的危險(xiǎn)度分析

以cut-off 值為分界將患者分為高表達(dá)、低表達(dá)，結(jié)果顯示，ANGPTL2、AMH、HSP70 高表達(dá)患者發(fā)生未妊娠的危險(xiǎn)度分別是低表達(dá)患者的1.633 倍、1.708 倍、1.830 倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表5。

表5 血清各指標(biāo)不同表達(dá)患者未妊娠發(fā)生的危險(xiǎn)度分析（例）

3 討論

PCOS 本質(zhì)上屬于卵泡發(fā)育障礙性疾病，患者雙側(cè)卵巢中可見小卵泡（≥12 個），該卵泡難以發(fā)育成為成熟卵泡或優(yōu)勢卵泡，糖脂代謝異常、胰島素抵抗等可增加活性氧生成量，致使卵泡局部微環(huán)境氧化反應(yīng)加劇，抑制卵母細(xì)胞發(fā)育能力，進(jìn)而導(dǎo)致卵巢未能正常排卵［6］。目前大多數(shù)PCOS患者可通過促排卵獲得妊娠，但懷孕后出現(xiàn)妊娠期高血壓、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)較高，其可能原因與高胰島素血癥、卵泡發(fā)育微環(huán)境紊亂有關(guān)。

ANGPTL2 是由內(nèi)臟脂肪細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞分泌，可促進(jìn)血管生成、遷移，且與脂肪組織炎性反應(yīng)有關(guān)，研究表明ANGPTL2 可促進(jìn)血小板聚集，促使血管炎性反應(yīng)惡化［7］。ANGPTL2 水平變化與冠脈粥樣硬化等代謝性疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，并可能作為預(yù)測2 型糖尿病患者發(fā)生動脈粥樣硬化的潛在指標(biāo)［8］。推測ANGPTL2 在代謝性疾病中表達(dá)異常，并可能作為預(yù)測疾病進(jìn)展的潛在血清學(xué)指標(biāo)。本研究顯示治療2 個月經(jīng)周期后妊娠組血清ANGPTL2 水平低于未妊娠組，表明ANGPTL2 水平變化可能作為監(jiān)測妊娠結(jié)局的潛在指標(biāo)。ANGPTL2 水平升高可激活細(xì)胞核因子κB（NF-κB）信號通路，增加促炎細(xì)胞因子生成量，其與整合素β3/α4 結(jié)合誘導(dǎo)單核細(xì)胞滲出，并可促使白細(xì)胞黏附于血管壁，促進(jìn)炎性反應(yīng)進(jìn)程［9］。本研究結(jié)果顯示ANGPTL2 與LH、PRL、T、P 呈正相關(guān)，提示卵巢內(nèi)卵泡發(fā)育、內(nèi)分泌代謝異?？赡艽龠M(jìn)新生血管生成，進(jìn)一步促使ANGPTL2 水平升高。由此推測ANGPTL2 水平升高可能通過激活NF-κB，繼而促使卵巢微環(huán)境炎性反應(yīng)加劇，進(jìn)一步影響卵泡發(fā)育，內(nèi)分泌代謝指標(biāo)變化與ANGPTL2 水平變化呈正相關(guān)，并可形成惡性循環(huán)，繼而加重病情發(fā)展進(jìn)程。

PCOS 患者血清AMH 水平升高，其水平變化可反映PCOS 病情嚴(yán)重程度，研究報(bào)道指出AMH可反映原始卵泡質(zhì)量，可抑制卵巢過早發(fā)育，其水平反映卵巢功能狀態(tài)［10］。本研究結(jié)果顯示治療2 個月經(jīng)周期后妊娠組血清AMH 水平低于未妊娠組，AMH 在PCOS 患者血清中表達(dá)趨勢與姜玲等［11］研究結(jié)果相似，表明AMH 水平可反映患者妊娠結(jié)局。AMH 水平升高可介導(dǎo)無排卵性不育等病理過程，可影響卵泡數(shù)量、質(zhì)量，降低其表達(dá)量可能促進(jìn)卵泡發(fā)育，促使優(yōu)勢卵泡形成，進(jìn)而改善妊娠結(jié)局。本研究發(fā)現(xiàn)AMH 水平與PRL、T、P、E2 呈正相關(guān)，表明內(nèi)分泌代謝異?？纱偈孤雅菥植啃奂に囟逊e，引起血糖代謝紊亂，進(jìn)一步影響竇前、小竇卵泡數(shù)量，進(jìn)而增強(qiáng)顆粒細(xì)胞合成/分泌AMH 能力，最終影響卵巢功能。研究表明AMH 分泌異?？勺鳛轭A(yù)測PCOS 的臨床指標(biāo)［12］。本研究顯示AMH 預(yù)測PCOS 患者妊娠結(jié)局的AUC 為0.763，具有一定預(yù)測價值，但單項(xiàng)檢測存在假陽性或假陰性。PCOS 患者血清HSP70 水平升高，可參與氧化應(yīng)激、炎性細(xì)胞浸潤過程，并可調(diào)節(jié)細(xì)胞生物酶活性，且與性激素代謝紊亂有關(guān)［13-14］。本研究結(jié)果與之相似，HSP70 與FSH、T、P、E2 呈正相關(guān)，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)HSP70 水平升高與妊娠結(jié)局密切相關(guān)。HSP70 水平升高與糖代謝紊亂、炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)，可參與PCOS 發(fā)生發(fā)展過程［15］。結(jié)合本研究結(jié)果可知脂肪組織中炎性細(xì)胞浸潤或氧化應(yīng)激損傷，可促進(jìn)HSP70 水平升高，繼而影響性激素代謝，破壞卵巢微環(huán)境穩(wěn)定性，抑制卵泡發(fā)育，進(jìn)而影響妊娠結(jié)局。同時本研究發(fā)現(xiàn)ANGPTL2、AMH、HSP70 聯(lián)合預(yù)測PCOS 患者妊娠結(jié)局的AUC 大于單項(xiàng)預(yù)測，且血清指標(biāo)高表達(dá)患者未妊娠發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)高于低表達(dá)患者，表明ANGPTL2、AMH、HSP70 與PCOS 患者妊娠結(jié)局關(guān)系密切，可能成為預(yù)測治療方案有效性的潛在生物標(biāo)志物。

綜上所述，PCOS 患者采用促排卵治療時，血清ANGPTL2、AMH、HSP70 水平越低其妊娠結(jié)局越好，聯(lián)合檢測其水平可提高其對妊娠結(jié)局預(yù)測的準(zhǔn)確性，對治療方案制定具有重要參考價值。