青黛表面改性對口腔潰瘍雙層膜質(zhì)量與藥效的影響

黃勝杰，鐘婧娉，謝 錦，賀亞男，郭治平，劉雪梅，楊 明，張定堃*，韓 麗*

·藥劑與工藝·

青黛表面改性對口腔潰瘍雙層膜質(zhì)量與藥效的影響

黃勝杰1，鐘婧娉1，謝 錦1，賀亞男1，郭治平2，劉雪梅1，楊 明3，張定堃1*，韓 麗1*

1. 成都中醫(yī)藥大學(xué) 西南特色中藥資源省部共建國家重點實驗室，四川 成都 611137 2. 四川厚德醫(yī)藥科技有限公司，四川 成都 610041 3. 江西中醫(yī)藥大學(xué) 現(xiàn)代中藥制劑教育部重點實驗室，江西 南昌 330004

采用溶劑澆鑄法制備口腔潰瘍雙層膜劑，研究青黛表面改性前后對膜劑質(zhì)量與藥效的影響。通過單因素實驗設(shè)計和響應(yīng)面優(yōu)化法優(yōu)選膜劑最佳處方，并對膜劑表面形貌、黏附時間、抗拉強度、含量測定以及體外藥物釋放等性能進行評估。進一步采用化學(xué)灼燒法建立大鼠口腔潰瘍模型，考察膜劑對潰瘍組織腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6以及口腔潰瘍組織形態(tài)的影響?？瞻赘綦x層確定為25 mg/mL的乙基纖維素乙醇溶液，載藥膜最佳處方為63 mg/mL PVA17-88、55 mg/mL PVP K30、3.0 mg/mL明膠與0.047 mL/mL甘油。青黛表面改性后，雙層膜劑比未改性雙層膜劑具有更加光滑均一的外觀、更高的含量均勻性和有效成分靛藍釋放率。藥效學(xué)結(jié)果表明，與模型組相比，陽性組與青黛改性膜劑組顯著降低了潰瘍組織TNF-α、IL-1β、IL-6的含量（＜0.05），并減少了炎癥細胞的浸潤，潰瘍組織愈合程度較高。青黛改性之后的口腔潰瘍雙層膜劑具有更好的質(zhì)量與更佳的療效，具有較好的應(yīng)用前景。

青黛；粉體表面改性；口腔潰瘍散；雙層膜劑；藥效評價；靛藍；靛玉紅

口腔潰瘍是一種發(fā)生于舌頭、牙齦、嘴唇內(nèi)部等部位的潰瘍性損傷，其發(fā)病機制和促炎因子與抗炎因子的失衡以及維生素與鐵元素的缺乏有關(guān)[1-2]。目前常通過減輕患者疼痛、抗炎以及免疫調(diào)節(jié)等方面進行治療?？谇粷兩⑹侵嗅t(yī)五官科治療口腔潰瘍的基礎(chǔ)方，被收載入《中國藥典》2015年版一部?？谇粷兩⒂汕圜?、白礬、冰片按照10∶10∶1配伍而成，可用于火熱內(nèi)蘊所致的口舌生瘡、黏膜破潰、紅腫止痛[3]。由于口腔生理結(jié)構(gòu)的特殊性以及散劑用藥特點，口腔潰瘍散易被唾液沖散，進入消化道，難以在潰瘍患處固定并保持藥物有效濃度[4]。

膜劑是常見的用于口腔疾病的劑型，可通過頰黏膜局部給藥直接作用于病灶部位[5]。與散劑相比，膜劑具有免被唾液沖散、劑量準確、提高藥物局部濃度以及保護創(chuàng)面等優(yōu)點[6-7]，因此，將口腔潰瘍散制備成口腔潰瘍膜劑可增加其臨床適用性。膜劑常用的制備方法為溶劑澆鑄法，該法要求藥物在成膜材料溶液中溶解或分散均勻，否則難以制備含量均勻且外觀良好的膜狀制劑[8]。口腔潰瘍散中的青黛表面由靛藍、靛玉紅等疏水性有機物組成[9]，該結(jié)構(gòu)決定了青黛親水性差的宏觀物理性質(zhì)。在膜劑制備過程中，青黛常呈自聚集狀態(tài)，不能均勻分散于成膜材料溶液中，且在靜置脫氣泡過程中容易沉降，導(dǎo)致鋪膜不均。因青黛在口腔潰瘍散中占比較大（47.6%），其疏水性及沉降性明顯影響了膜劑的制備與質(zhì)量。

粉體改性技術(shù)可有目的地改善粉末物理化學(xué)性質(zhì)[10]，課題組前期采用粉體表面改性技術(shù)研究了親水性青黛的制備工藝，以無水乳糖（與青黛比例為1∶1）為輔料制備出了親水性與沉降性均佳的改性青黛粉末[11]。因此，本研究選用改性青黛為口腔潰瘍散原料之一，采用溶劑澆鑄法制備由含藥膜和空白保護膜組成的單向釋藥口腔潰瘍雙層膜劑，旨在通過改性青黛改善膜劑的均一性；采用保護膜維持藥物局部濃度、控制藥物單向釋放，保證療效的發(fā)揮，同時防止青黛對口腔著色，提高使用的順應(yīng)性。本課題組還以普通口腔潰瘍散、物理混合物口腔潰瘍散（處方見“藥品與試劑”）為原料制備膜劑，將其與青黛改性之后的膜劑進行系統(tǒng)比較，考察青黛改性前后膜劑之間的差異。本研究為口腔潰瘍新制劑的開發(fā)提供了參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UPH-II-10T型優(yōu)普超純水制造系統(tǒng)，成都超純科技有限公司；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；Quintix 35-1CN型賽多利斯電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；ZEISS Gemini SEM 300掃描電子顯微鏡（SEM），德國卡爾·蔡司股份公司；RYJ-6B型藥物透皮擴散試驗儀，上海黃海藥檢儀器有限公司；KQ-500DE型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海凱朗儀器設(shè)備廠；Shimadzu LC-20AT型液相色譜儀，日本島津公司。

1.2 藥品與試劑

青黛，雅安迅康藥業(yè)有限公司，批號20210228；乳糖，山西錦洋藥用輔料有限公司，批號20210303；改性青黛，自制，乳糖與青黛以1∶1的比例于振動磨中共研6 min）；白礬，安徽惠豐國藥有限公司，批號200901；冰片，康美藥業(yè)股份有限公司，批號210101841；口腔潰瘍散，自制，青黛-白礬-冰片（10∶10∶1）；改性口腔潰瘍散，自制，改性青黛、白礬與冰片以20∶10∶1混合；物混潰瘍散，自制，乳糖青黛簡單輕研混合后，與白礬、冰片以20∶10∶1比例混合；聚乙烯醇17-88（PVA 17-88）、聚乙烯吡咯烷酮K30（PVP K30）、丙三醇、殼聚糖、阿拉伯膠、,-二甲基甲酰胺、烏來糖，成都市科隆化學(xué)品有限公司，批號分別為2021090301、2021030901、2021110201、2020120101、2020091801、2022092301、2021050601；HPMC，上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司，批號R011806；明膠，上海麥克林生化科技有限公司，批號2991975；腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA），杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司，批號分別為A38220642、A301B20921、A30620757。

1.3 動物

SPF級雄性SD大鼠，體質(zhì)量180～220 g，購自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，許可證號SCXK（京）2019-0010。所有動物實驗于成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院動物房的SPF級屏蔽環(huán)境內(nèi)，許可證號：SYXK（川）2019-049，動物實驗遵循3R原則并獲得成都中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會同意，動物處理符合倫理委員會及動物保護法相關(guān)規(guī)定。

2 方法與結(jié)果

2.1 評價標準

空白膜以外觀、成膜性、韌性為考察指標，載藥膜以外觀、成膜性能、柔韌性、黏附性為考察指標，評價標準見表1。

表1 綜合評價標準

2.2 空白隔離層制備工藝篩選

空白隔離層可保護藥膜層不受口腔唾液的影響，從而保證藥物單向釋放，增加藥物療效。分別配制15、20、25、30、35 mg/mL的乙基纖維素乙醇溶液，采用流延成膜法鋪于涂有液體石蠟的光滑玻璃板上，制備空白隔離層。結(jié)果表明，當乙基纖維素質(zhì)量濃度過低時，難以順利成膜，且在脫膜過程中難以揭膜。當質(zhì)量濃度過高時，干燥后表面不平，且厚度增加。由實驗可知，當乙基纖維素乙醇溶液質(zhì)量濃度為25 mg/mL時，制得的空白隔離層性能較優(yōu)良，故選擇隔離層為25 mg/mL的乙基纖維素乙醇溶液。

2.3 載藥膜成膜材料考察與處方初篩

常用的成膜材料有PVA 17-88、HPMC、PVP、阿拉伯膠、明膠、殼聚糖等，課題組前期對成膜材料種類進行了大量的初篩，優(yōu)選出PVA 17-88為主要的成膜材料，同時為了改進外觀以及黏附性，將PVA 17-88與其他成膜材料混合，最終確定PVA 17-88、PVP K30、明膠為復(fù)合膜材，所制備的膜劑外觀、成膜性、韌性、黏附性較好。

2.4 單因素實驗設(shè)計

選擇PVA 17-88、PVP K30、明膠以及甘油為膜材進行單因素實驗，參數(shù)分別選擇：PVA 17-88用量（20、40、60、80、100 mg/mL）、PVP K30用量（10、20、40、60、100 mg/mL）、明膠用量（1.0、2.5、4.0 mg/mL）、甘油用量（0.01、0.02、0.05、0.08 mL/mL）。PVA 17-88單因素實驗結(jié)果表明，當PVA 17-88質(zhì)量濃度過低時，膜劑外觀、韌性以及黏附性均較差；當PVA 17-88質(zhì)量濃度過高時，雖韌性和黏附性較好，然外觀形態(tài)不佳，表面不平整，PVA 17-88質(zhì)量濃度為60 mg/mL時綜合評分最高，為（96.3±2.9）分，故選擇初步篩選PVA 17-88質(zhì)量濃度為60 mg/mL；PVP K30單因素實驗結(jié)果表明，當PVP K30質(zhì)量濃度過低時，膜劑外觀與黏附性稍差，當質(zhì)量濃度過高時，膜劑外觀形態(tài)差，當PVP K30質(zhì)量濃度為60 mg/mL時，綜合評分最高（96.0±2.6）分，故選擇PVP K30質(zhì)量濃度為60 mg/mL；明膠以及甘油單因素實驗表明，當明膠用量為2.5 mg/mL，甘油用量為0.05 mL/mL時，膜劑的外觀與韌性最佳，因此選擇2.5 mg/mL為明膠用量，0.05 mL/mL為甘油用量。

2.5 響應(yīng)面優(yōu)化法優(yōu)選載藥膜最優(yōu)處方

2.5.1 響應(yīng)面實驗設(shè)計及結(jié)果 根據(jù)單因素實驗結(jié)果，分析PVA 17-88用量（1）、PVP K30用量（2）、明膠用量（3）、甘油用量（4）對膜劑質(zhì)量的影響。以綜合評價（）為響應(yīng)值，采用Box-Behnken設(shè)計-響應(yīng)面法（Box-Behnken design-response surface method，BBD-RSM）優(yōu)化口腔潰瘍膜劑處方，各因素水平、實驗方案及結(jié)果見表2。

2.5.2 響應(yīng)面法回歸方程及方差分析 對實驗數(shù)據(jù)進行多元回歸擬合，得到以綜合評分結(jié)果為響應(yīng)值的二次回歸方程：＝97.200＋1.5801－0.8332＋0.916 73－0.5004－0.25012－0.75013＋0.75014＋0.25024－8.31012－3.18022－1.06032－2.68042?；貧w模型的方差分析及顯著性結(jié)果見表3。由表3可知，1、2、3、12、22、42為顯著影響因素，失擬項＝0.144 6，差異不顯著，說明實驗誤差小，模型擬合程度好。

表2 響應(yīng)面實驗方案及實驗結(jié)果

2.5.3 響應(yīng)曲面分析 響應(yīng)面圖直觀體現(xiàn)了響應(yīng)值受各因素和交互作用的影響。響應(yīng)面圖曲線彎曲程度越大，表明因素對響應(yīng)值的影響越大。結(jié)果如圖1所示，各等高線圖均呈橢圓形，表明因素間相互作用顯著。利用Design Expert 11軟件得到最優(yōu)條件為63 mg/mL PVA 17-88、55 mg/mL PVP K30、3.0 mg/mL明膠、0.047 mL/mL甘油。在該條件下制備膜劑，得到的膜劑綜合評分結(jié)果為96.7，與預(yù)測值接近，表明由該響應(yīng)面設(shè)計所得的膜劑處方工藝具有一定的可行性。

表3 回歸模型方差分析結(jié)果

圖1 各因素對膜劑綜合評分影響的響應(yīng)面圖

2.6 3種口腔潰瘍膜劑的制備

配制3份25 mg/mL乙基纖維素乙醇溶液，取12 mL鋪于預(yù)先涂有液體石蠟的光滑玻璃板上（10 cm×10 cm）上，制成空白隔離層。取3份63 mg/mL PVA 17-88、55 mg/mL PVP K30、3.0 mg/mL明膠和0.047 mL/mL甘油溶解于20 mL蒸餾水中，后分別加入6 g改性口腔潰瘍散（改性青黛∶白礬∶冰片20∶10∶1）、6 g物混潰瘍散（青黛-乳糖物理混合物∶白礬∶冰片20∶10∶1）、4 g普通口腔潰瘍散（青黛∶白礬∶冰片10∶10∶1），混勻后靜置脫氣泡。將脫氣泡后的溶液鋪于預(yù)先制備的空白隔離層上，于40 ℃下烘干得到藥膜，將藥膜裁剪為1 cm×1 cm，即得對應(yīng)的膜劑。

2.7 口腔潰瘍膜劑質(zhì)量評價

2.7.1 表面形貌觀察 3種膜劑藥物層見圖2-A，可見3種膜劑均呈現(xiàn)深藍色，其中普通口腔潰瘍膜劑表面十分不平整，凹凸不平；物理混合物口腔潰瘍膜劑（下稱物混膜劑）表面平整程度較普通膜劑好，但表面浮有少量藥物顆粒；改性口腔潰瘍膜劑表面光滑，有光澤。膜劑隔離層見圖2-B，可見3種膜劑的隔離層相似，光澤感強。3種膜劑藥物層SEM圖見圖2-C，可見普通膜劑表面凹凸不平，厚薄不均一；物混膜劑表面稍有不平，而青黛改性之后的膜劑表面光滑，較平整。這可能是因為普通口腔潰瘍膜劑含有疏水性的青黛，使得藥物難以在基質(zhì)中分散均勻。且青黛的不溶性與重力因素使其在靜置脫氣泡時沉降至底部，涂膜不均。青黛改性后親水性增加，且粒度降低，在基質(zhì)中分散均勻且減緩了靜置脫氣泡時的沉降速度，故制成的膜劑表面均一，外觀形態(tài)較好。

圖2 雙層膜劑的藥物層(A)、空白隔離層(B)和SEM圖(C)

2.7.2 pH值測定 膜劑的pH值對口腔黏膜的刺激性有重要影響。取膜劑置于裝有5 mL pH值為6.8的磷酸鹽緩沖液（PBS）的離心管中，后將pH計置于膜劑表面，讀數(shù)穩(wěn)定后測定pH值。平行3次實驗。由表4可知，3種膜劑pH值在6.93～7.02，無刺激性，接近于口腔中的pH值。3種膜劑的表面pH值無顯著性差異。

2.7.3 黏附性能 剪下大鼠頰黏膜，將其固定于燒杯內(nèi)側(cè)，取潤濕后的膜劑粘貼于黏膜組織上，燒杯中加入生理鹽水，用磁力攪拌器在37 ℃下以150 r/min轉(zhuǎn)速攪拌，記錄膜劑從黏膜組織上脫落的時間。結(jié)果如表4所示，普通口腔潰瘍膜劑的平均黏附時間為142.67 min左右，改性口腔潰瘍膜劑的平均黏附時間在149.33 min左右，物混口腔潰瘍膜劑平均黏附時間在146.67 min左右，3者黏附時間相差不大。

表4 普通膜劑、改性膜劑和物混膜劑的表面pH值、黏附時間、抗拉強度(, n = 3)

與物混膜劑比較：*＜0.05

*< 0.05physical mixed film

2.7.4 抗張強度 采用質(zhì)構(gòu)儀對不同膜劑的機械性能進行測定，質(zhì)構(gòu)儀選擇拉伸模式，探頭距離30 mm，測試速度為1 mm/s，記錄抗拉力和拉伸長度，計算3種膜劑的抗拉強度，結(jié)果如表4所示。改性膜劑和普通膜劑抗拉強度接近，為1.06 MPa左右，而物混膜劑抗張強度最低，為0.93 MPa左右。

2.7.5 含量測定

（1）色譜條件：色譜柱為Welchrom-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 mm）；流動相為甲醇-水（70∶30）；體積流量為1 mL/min；柱溫30 ℃；進樣量10 μL；檢測波長289 nm。

（2）對照品溶液的制備：精密稱取靛藍對照品、靛玉紅對照品適量，分別置于25 mL棕色量瓶中，加入,-二甲基甲酰胺（DMF）超聲30 min并定容，制得155.6 μg/mL靛藍對照品溶液和126.4 μg/mL靛玉紅對照品溶液，作為儲備液。

（3）供試品溶液制備：取青黛改性之后的膜劑于10 mL量瓶中，加入DMF超聲30 min，過0.22 μm微孔濾膜后，即得。

（4）線性關(guān)系考察：將上述靛藍、靛玉紅對照品儲備液稀釋制成6個不同質(zhì)量濃度的對照品溶液，以峰面積為縱坐標（），質(zhì)量濃度為橫坐標（）進行線性回歸，結(jié)果表明靛藍、靛玉紅回歸方程分別為＝6×107－678.83（＝0.999 9），＝5×107＋905.05（＝0.999 6），靛藍在31.12～38 900.00 ng/mL、靛玉紅在50.56～3 160.00 ng/mL線性關(guān)系良好。

（5）精密度考察：取靛藍、靛玉紅對照品溶液，按“色譜條件”項下方法連續(xù)進樣6次，結(jié)果表明靛藍峰面積RSD為0.24%，靛玉紅峰面積RSD為0.60%，表明儀器精密度良好。

（6）重復(fù)性考察：取6份改性膜劑按“供試品溶液的制備”項下方法制備樣品，測定靛藍、靛玉紅質(zhì)量分數(shù)，結(jié)果表明靛藍RSD為2.82%，靛玉紅RSD為2.49%，表明方法重復(fù)性良好。

（7）穩(wěn)定性考察：取1份改性膜劑按“供試品溶液的制備”項下方法制備樣品，于0、2、4、8、12、24 h后測定靛藍、靛玉紅峰面積，計算靛藍RSD為1.06%、靛玉紅RSD為0.44%，表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

（8）加樣回收率考察：取已測定靛藍和靛玉紅含量的供試品按1∶1加入靛藍、靛玉紅對照品溶液，測定含量，結(jié)果表明靛藍、靛玉紅的平均加樣回收率分別為100.31%、93.72%。

（9）含量均勻性測定：分別取3種口腔潰瘍膜劑置于10 mL棕色量瓶中，加入DMF超聲30 min并定容，過0.22 μm微孔濾膜后進樣測定，每種膜劑平行測量10次。結(jié)果如表5所示，普通口腔潰瘍膜劑靛藍和靛玉紅質(zhì)量分數(shù)分別為0.429%、0.043%；改性口腔潰瘍膜劑靛藍和靛玉紅質(zhì)量分數(shù)分別為0.335%、0.030%；物混口腔潰瘍膜劑靛藍、靛玉紅質(zhì)量分數(shù)分別為0.247%、0.022%。改性口腔潰瘍膜劑中靛藍和靛玉紅的RSD（分別為3.18%、2.38%）均小于普通膜劑（分別為0.429%、0.043%）和物混膜劑（8.76%、9.54%），表明改性口腔潰瘍膜劑含量均勻性高于普通膜劑和物混膜劑。

表5 普通、改性、物混口腔潰瘍膜劑含量均勻性(, n = 10)

2.7.6 體外藥物釋放 采用Franz擴散池研究口腔潰瘍膜劑的體外藥物釋放。將0.22 μm的醋酸纖維素膜在pH值為6的PBS緩沖液中水化12 h，然后將其固定于擴散池，將1 cm×1 cm的雙層膜劑固定在醋酸纖維素膜上，以pH值為7.4的PBS為接受介質(zhì)，37 ℃恒溫水浴加熱，接收池內(nèi)的磁力攪拌子轉(zhuǎn)速為300 r/min。分別于0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h的時間點取樣（同時加入同體積的空白接收介質(zhì)），采用HPLC法測定接收液中的靛藍含量。結(jié)果如圖3所示，僅改性口腔潰瘍雙層膜劑測出了靛藍含量，其余膜劑未測出。改性口腔潰瘍膜劑靛藍溶出量隨時間的增加而增加。體外藥物釋放證明了改性雙層膜劑有效成分滲透量高于未改性膜劑，這可能是因為青黛經(jīng)改性后，粒度的降低使有效成分滲透量增多[11]。

2.8 口腔潰瘍膜劑藥效學(xué)評價

2.8.1 口腔潰瘍模型的建立、動物分組與給藥 56只SD雄性大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，用20%烏來糖（1 g/kg）ip麻醉，暴露大鼠下唇黏膜，將浸潤50%冰醋酸的脫脂棉球置于大鼠下唇黏膜上燒灼60 s，24 h后觀察潰瘍面形成情況。潰瘍表面呈白色類橢圓形，水腫，邊緣充血。將大鼠分為7組，空白組、模型組、陽性組（蜂膠口腔膜）、口腔潰瘍散劑組，普通口腔潰瘍膜劑組、改性口腔潰瘍膜劑組、物混口腔潰瘍膜劑組。每天給藥3次，1次1片（普通口腔潰瘍膜給藥劑量為40 mg/片，改性口腔潰瘍膜與物混口腔潰瘍膜給藥劑量為60 mg/片，三者含藥量相同，均為40 mg/片），間隔4 h。

2.8.2 各組大鼠潰瘍形態(tài)比較 大鼠第1、3、5、7天的口腔潰瘍圖像如圖4所示，潰瘍面積用黃色線條勾勒出。從圖中可看出，50%冰醋酸處理第1天后各組大鼠均表現(xiàn)出口腔潰瘍，即黏膜周圍紅腫，表面覆蓋白色假膜。各給藥組在7 d后的口腔潰瘍嚴重程度均有所減輕，潰瘍面積逐漸減小，其中陽性藥組與改性膜劑給藥組愈合過程更快，表現(xiàn)出最佳的治療效果。

圖3 改性口腔潰瘍膜劑體外靛藍釋放度(, n = 3)

圖4 各組大鼠口腔潰瘍形態(tài)

2.8.3 潰瘍組織病理學(xué)考察 組織病理學(xué)HE染色結(jié)果如圖5所示，空白組大鼠口腔黏膜結(jié)構(gòu)正常，黏膜上皮、固有層以及黏膜下層結(jié)構(gòu)完整，較少炎癥細胞浸潤；模型組大鼠口腔黏膜組織上皮破損并脫落嚴重，有較多炎癥細胞浸潤；口腔潰瘍散劑組大鼠稍有黏膜組織上皮層破損；普通膜劑組與物混膜劑組黏膜結(jié)構(gòu)完整，然普通膜劑組黏膜角化層稍有脫落現(xiàn)象，物混膜劑組棘層松散；改性膜劑組、陽性藥組與模型組相比，結(jié)構(gòu)完整，減少了炎癥細胞的浸潤。

2.8.4 潰瘍組織中TNF-α、IL-β、IL-6水平 潰瘍組織炎癥指標檢測結(jié)果如表6所示。結(jié)果表明，模型組潰瘍組織中TNF-α、IL-1β、IL-6含量顯著增加（＜0.01），表明造模成功。與模型組相比，陽性給藥組顯著減少了口腔潰瘍組織中TNF-α、IL-1β的含量（＜0.05）、顯著減少了IL-6的含量（＜0.01）；改性膜劑組的TNF-α、IL-1β、IL-6的含量低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.05）；普通膜劑組較模型組顯著減少了IL-1β的含量（＜0.05）。

圖5 各組大鼠口腔潰瘍組織病理切片

表6 各組大鼠口腔潰瘍組織中TNF-α、IL-1β、IL-6含量(, n = 8)

與模型組比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01model group

3 討論

青黛具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫、抗菌和抗病毒作用[14]；冰片可抗菌、鎮(zhèn)痛抗炎[15]；白礬能收斂消炎、止血抗菌[16]。3者合用，可有效緩解潰瘍病灶處的痛感，促進創(chuàng)面的愈合[17]。因此，本研究選擇口腔潰瘍散作為模型藥物制備口腔潰瘍膜劑。課題組前期將口腔潰瘍散制成單層膜劑，發(fā)現(xiàn)由于膜劑中有青黛的存在，手指在取用以及口腔在貼膜時易被染色，因此課題組設(shè)計制備雙層膜劑，空白隔離層不僅避免手指和口腔染色，提高了患者用藥的依從性，還控制了藥物單向釋放，提高療效。

本課題組在前期成膜材料處方篩選預(yù)實驗中發(fā)現(xiàn)，阿拉伯膠成膜性和韌性差，CMC-Na不能與改性青黛混合均勻，HPMC雖成膜性較好，然而韌性欠佳。通過處方篩選與優(yōu)化，最終選擇PVA 17-88、PVP K30、明膠、甘油為膜劑處方。對比青黛改性前后所制備的膜劑，從肉眼觀察以及SEM結(jié)果可看出，青黛改性之后的膜劑具有更光滑均一的外觀，這是因為青黛經(jīng)改性后，一方面親水性增加，均勻分散在成膜材料溶液中，另一方面粒徑降低，減緩了藥物在靜置脫氣泡時的沉降速率，從而在鋪膜過程中均勻分布，這也使改性膜劑具有更高的含量均勻性。本課題組在膜劑體外藥物釋放度實驗中發(fā)現(xiàn)，青黛改性之后的膜劑靛藍滲透量低且標準差較大，這可能與靛藍性質(zhì)有關(guān)。靛藍是一種結(jié)構(gòu)對稱的非極性平面分子，表面自由能非極性分量高，疏水性強[18]，在接受液中不能形成均勻分散體系，故取樣時難以保證均一性。然而青黛未改性膜劑未檢測出靛藍，說明青黛改性之后的膜劑有效成分釋放量增加，這與課題組前期在改性青黛工藝研究中的發(fā)現(xiàn)較為一致，即乳糖增加了靛藍的釋放率，這可能是由于青黛改性之后粒度減小，比表面積增加，導(dǎo)致有效成分釋放更多。

綜上，本研究制備的口腔潰瘍雙層膜劑，表面光滑平整，色澤均一，藥物含量均勻，對口腔潰瘍有較好的治療效果，克服了口腔潰瘍散給藥量不準確，難以保持有效濃度等問題，為提高口腔潰瘍散的臨床適用性提供了依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Effects of surface modification ofon quality and drug efficacy of oral ulcer bilayer film

HUANG Sheng-jie1, ZHONG Jing-ping1, XIE Jin1, HE Ya-nan1, GUO Zhi-ping2, LIU Xue-mei1, YANG Ming3, ZHANG Ding-kun1, HAN Li1

1. State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China 2. Sichuan Houde Pharmaceutical Technology Co., Ltd., Chengdu 610041, China 3. State Key Laboratory of Modern Chinese Medicine Preparations, Ministry of Education, Jiangxi University of Chinese Medicine, Nanchang 330004, China

To prepare the bilayer film for oral ulcer by solvent casting method, and study the effect of surface modification on film quality and efficacy of Qingdai ().The optimal formulation of the film was optimized by single-factor experimental design and response surface optimization method, and the properties of the film such as surface morphology, adhesion time, tensile strength, content determination and drug releasewere evaluated. A rat oral ulcer model was further established by the chemical burning method, and the effects of film preparations on tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β), IL-6 and oral ulcer tissue morphology were investigated.The blank isolation layer was determined to be 25 mg/mL ethyl cellulose ethanol solution, and the best formulation of the drug-loaded film was as follow: 63 mg/mL PVA17-88, 55 mg/mL PVP K30, 3.0 mg/mL gelatin and 0.047 mL/mL glycerin. After the surface modification of, the double-layer film preparation had a smoother and more uniform appearance, higher content uniformity and release rate of active ingredient indigo than the unmodifieddouble-layer film preparation. The pharmacodynamic results showed that compared with the model group, the contents of TNF-α, IL-1β, and IL-6 (< 0.05) were significantly reduced in the positive group and the modified film group and the infiltration of inflammatory cells was reduced, and the healing degree of ulcer tissue was higher.The double-layer film for oral ulcers of modifiedhas better quality and curative effect, and has a better application prospect.

; powder surface modification; mouth ulcer powder; double-layer film formulation; evaluation of drug efficacy; indigo; indirubin

R283.6

A

0253 - 2670(2023)13 - 4118 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.13.005

2022-12-21

國家自然科學(xué)基金面上項目（82173976）；國家自然科學(xué)基金面上項目（81773918）

黃勝杰，女，碩士研究生，研究方向為中藥新制劑、新技術(shù)、新劑型。E-mail: 2398931073@qq.com

通信作者：韓 麗，女，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向為中藥制劑工藝原理與品質(zhì)優(yōu)化。E-mail: hanliyx@163.com

張定堃，男，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向為中藥制劑與品質(zhì)評價新技術(shù)。E-mail: zhangdingkun@cdutcm.edu.cn

[責任編輯 鄭禮勝]